本科生創(chuàng)新實驗項目申請書

...wd......wd......wd...附件：工程編號：附件：廣州中醫(yī)藥大學本科生創(chuàng)新實驗工程申請書工程名稱葛花治療酒精性脂肪肝大鼠的實驗研究工程負責人〔學生〕吳向維所在學院班級中藥學院2007級中藥學專業(yè)指導教師李政木、龍泳伶單位中藥學院電請日期2009-3-2廣州中醫(yī)藥大學教務處二OO七年九月說明學生參與學生創(chuàng)新實驗工程，均須填寫《廣州中醫(yī)藥大學本科生創(chuàng)新實驗工程申請書》。填寫表格前必須認真閱讀《廣州中醫(yī)藥大學本科生創(chuàng)新實驗工程實施與管理暫行方法》，并根據(jù)教務處發(fā)布的工程招標公告和工程指南的要求認真填寫。指導教師必須保證確有時間和精力在查閱資料、設計課題、實驗操作、分析結果與撰寫論文等環(huán)節(jié)對學生給予全程指導，并簽署意見。有關實驗室要按照實驗室開放的原則為學生提供完成創(chuàng)新實驗工程的必要條件，并由實驗室負責人簽署意見。如果個別工程是以教研室或我校其他實踐教學基地為主實施完成的，需要相應部門簽署意見，保證提供必要的條件支持。工程申請人須為入學以來平均學分積點在3.0以上的在讀二年級及以上本科生，由學生所在學院負責審核。研究工程工程名稱葛花治療酒精性脂肪肝大鼠的實驗研究學科名稱中藥學院申請金額2000元起止時間2009年3月至2010年3月工程負責人姓名吳向維學院中藥學院平均學分積點3.5性別男年級2007導教師姓名李政木職稱教別男單位中藥學院Emaillongyongling@工程小組成員姓名性別學院年級班別平均學分積點林順粦男第一臨床醫(yī)學院2004級中醫(yī)學七年制3.5鐘成培男中藥學院2007級中藥學〔營銷與物流〕3.4戚伯成男中藥學院2007信息管理學院3.2吳文瀚男中藥學院2007級中藥學〔營銷與物流〕3.0胡奕榮男中藥學院2007級制藥工程3.5研究內容和意義簡介(400~500字)隨著我國社會經(jīng)濟的快速開展和人民生活水平的提高，酗酒、暴飲者明顯增多，與之相關的酒精性脂肪肝(AFLD)患者也逐年增多。據(jù)悉，約75%～95%慢性嗜酒者有不同程度的肝脂肪浸潤。AFLD屬酒精性肝病(ALD)的早期表現(xiàn)，病癥不明顯，很多患者在初次診斷為AFLD時，往往存在不重視或不相信心理，缺乏對AFLD危害的了解，延誤早期治療的時機，導致本來可緩解甚至治愈的疾病不能得到有效控制，進而開展至酒精性肝炎、肝纖維化、肝硬化、甚至肝癌，嚴重影響了患者的生活質量和壽命，故尋找安全有效的治療脂肪肝的中藥研究越來越引起人們的重視。因此，現(xiàn)用葛花對酒精性脂肪肝的大鼠模型進展實驗研究，找出對酒精性脂肪肝更有效的防治方法。立論依據(jù)1.選題依據(jù)：1.1提出問題及其意義：隨著我國社會經(jīng)濟的快速開展和人民生活水平的提高，酗酒、暴飲者明顯增多，與之相關的酒精性脂肪肝(AFLD)患者也逐年增多。據(jù)悉，約75%～95%慢性嗜酒者有不同程度的肝脂肪浸潤[1]。AFLD屬酒精性肝病(ALD)的早期表現(xiàn)，病癥不明顯，很多患者在初次診斷為AFLD時，往往存在不重視或不相信心理，缺乏對AFLD危害的了解，延誤早期治療的時機，導致本來可緩解甚至治愈的疾病不能得到有效控制，進而開展至酒精性肝炎、肝纖維化、肝硬化、甚至肝癌，嚴重影響了患者的生活質量和壽命[2]，故尋找安全有效的治療脂肪肝的中藥研究越來越引起人們的重視。因此，現(xiàn)用葛花對酒精性脂肪肝的大鼠模型進展實驗研究，找出對酒精性脂肪肝更有效的防治方法。1.2國內外的研究現(xiàn)狀述評1.2.1文獻資料來源筆者通過CKNI-KNS4.0全文期刊數(shù)據(jù)庫和維普數(shù)據(jù)庫,使用“篇名/關鍵詞/摘要〞模糊匹配的方法,對1995年以來關于對酒精性脂肪肝大鼠的預防及治療的文獻進展了檢索，通過對這些文獻的初步整理和分析,可以看出在文獻中均以選取AFLD的特異性指標的形式來得出結論的定量研究。文獻的思路是：所有的研究者都主要通過實驗分組，設立病理模型進展比照分析的實驗方法來初步得出藥物對酒精性脂肪肝的防治作用。在文獻中,研究者的研究對象為通過建模所人為形成的酒精肝大鼠模型;以對照實驗的方法，實驗大多數(shù)采用血清谷丙轉氨酶(ALT)和堿性磷酸酶(ALP)活性以及總蛋白(TP)及白蛋白(ALB)的含量作為檢測指標，對數(shù)據(jù)處理應用SPSS12．0統(tǒng)計軟件。1.2.2關于酒精性脂肪肝的研究成果 酒精性脂肪肝的研究 乙醇水溶性極強，極易為消化道吸收，飲酒后5分鐘便可從血液中檢出，30—60分鐘血中濃度達頂峰。吸收后的乙醇98％通過生物氧化被去除，少量可由呼吸道及尿液排出。主要在肝臟代謝，在生理條件下經(jīng)乙醇脫氫酶(ADH)代謝為乙醛，進而轉化為乙酸，進入體循環(huán)。此外，肝臟中還存在微粒體乙醇氧化酶系(MEOS)等代謝系統(tǒng)，MEOS的米氏常數(shù)(Km=86mmol/L)比ADH(2mmol/L)大數(shù)倍，主要在攝取高劑量乙醇時發(fā)揮作用[3]。乙醇在代謝過程中誘發(fā)自由基的產(chǎn)生，對肝臟等多個器官造成損害。乙醇脂溶性較大，可透過血腦屏障入腦[4]。酒精性脂肪肝的發(fā)生與以下因素有關：(1)TG合成增多，這是酒精損傷肝臟引致脂肪肝的主要原因；(2)肝臟分解脂肪的能力下降；(3)肝臟輸出TG的能力下降[5]。 明蘭茂(滇南本草>載：“葛花解酒醒脾；酒毒酒痢，吐血嘔血。消熱，解酒毒。〞據(jù)此，說明葛花(FlosPuerariae)是中國傳統(tǒng)醫(yī)學中最具代表性的解酒藥物[6]。文獻通過每日予大鼠白酒灌胃方法復制大鼠酒精性肝損傷模型。觀察中藥葛花對大鼠酒精性肝損傷的預防作用。110只雄性Wistar大鼠隨機分為6組：空白組、模型組、葛花醇提物低劑量組、葛花醇提物中劑量組、葛花醇提物高劑量組和陽性對照藥東寶甘泰片組。在造模的同時灌胃葛花醇提物及東寶甘泰片水溶液。連續(xù)灌胃8周，8周末取材觀察：血清谷丙轉氨酶(ALT)、谷草轉氨酶(AST)、堿性磷酸酶(ALP)活性。總蛋白(TP)及白蛋白(ALB)含量；肝組織超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量、復原型谷胱甘肽(GSH)含量；肝組織病理變化。結果顯示，模型組大鼠出現(xiàn)肝組織脂肪變性和炎性浸潤，血清ALT、AST、ALP活性較空白組顯著增加。TP、ALB含量較空白組顯著降低；且肝組織中SOD活性顯著降低。MDA含量顯著升高。葛花醇提物組大鼠的肝組織脂肪變性和炎性浸潤均較模型組有所減輕。血清ALT、AST活性較模型組顯著降低，TP、ALB含量較模型組顯著升高肝組織SOD活性較模型組顯著升高。MDA含量顯著低于模型組。GSH含量較模型組也明顯升高。研究說明，葛花醇提物具有明顯預防酒精性肝損傷的作用[7]。中藥葛花解酒的作用機制葛花主要作用為解酒和保肝。葛花中的異黃酮可使血中乙醇、乙醛濃度下降，以及降低BUN的升高，從而起到解酒作用；異黃酮及三萜皂苷對CCl4所致小鼠肝損傷，可使AST、ALT顯著下降[8]。葛花能夠在乙醇的腸胃吸收及代謝兩個環(huán)節(jié)發(fā)揮作用。其水提取物通過激活乙醇脫氫酶活性來降低乙醇的濃度，從而有效地降低血中乙醇濃度，對酒精引起的肝細胞損害有保護作用[9~11]。葛花中的有效成分對酒精代謝障礙及肝功能有改善作用；對酒精引起的臟器障礙及消化道功能障礙也有一定的改善作用[12]。此外，葛花異黃酮還能擴張腦血管、心血管和外周血管，使血壓驟降、心輸出量銳減，使腦組織缺血缺氧，異黃酮還能解除平滑肌痙攣[13]。葛花解酲湯可降低酒精所致小鼠ALT、HI升高。減輕肝臟損害，有明確的保肝作用，也是治療酒精性肝病的有效方藥[13]。2．研究方案：2.1研究目標：用葛花對酒精性脂肪肝大鼠模型進展治療研究，找出對酒精性脂肪肝更有效的防治方法。2.2材料與方法2.2.1動物及飼料安康雄性Wistar大鼠40只，體重200±20g，二級動物〔由學校實驗動物中心提供〕。普通飼料喂養(yǎng)，動物室溫度(25±2)℃2.2.2藥物高度白酒(北京釀酒總廠生產(chǎn)的紅星二鍋頭酒，56度)；玉米油(華北制藥康欣生產(chǎn))；葛花〔購自杏園春藥材〕；谷丙轉氨酶(ALT)和谷草轉氨酶(AST)測定試劑盒〔北京化工生產(chǎn)〕。2.2.3將40大鼠正常飼養(yǎng)1周后，隨機取10只作為空白組正常飼養(yǎng)，其余30只動物為造模組。造模8周后隨機分為模型組、葛花水煎液組、葛花粉末組，每組10只動物。按照厲有名[14]等的造模方法，給予根基飼料加1％膽固醇、5％豬油、10％玉米油做成的混合飼料，另外結合孫怡寧[15]等白酒灌胃的方法，按白酒劑量為1mL/100g／次，每日上午9時灌胃。2.2.4除正常喂養(yǎng)外，每日上午按1mL/100g分別灌胃：空白組以生理鹽水灌胃；葛花水煎液組按0.16g/mL葛花水煎液灌胃，葛花粉末組按1.4g/kg粉末喂食。3h后模型組和葛花水煎液以及粉末組分別灌一樣量的白酒，持續(xù)8周。2.3測試指標于第8周末，所有大鼠均禁食12h，取全血以2500rpm低溫離心15分鐘別離血清，血清ALT、AST采用改進賴氏法檢測；取出大鼠肝臟觀察，并取肝右葉距肝臟邊緣0.5cm處組織一小塊，放入10％甲醛固定，常規(guī)石蠟包埋，切片，HE染色，光鏡下觀察。 2.4統(tǒng)計學方法應用SPSS12.0軟件進展錄入和統(tǒng)計分析，組間比擬統(tǒng)計方法為一般性描述性統(tǒng)計，單因素方差分析、相關和回歸分析等。 2.5預期結果 至第8周末，模型組大鼠的體重較空白組大鼠體重明顯減輕(P<0．01)，葛花水煎液以及粉末組大鼠體重與模型組無顯著差異。至第8周末．模型組大鼠肝指數(shù)與空白組相比顯著增加(P<0．01)。葛花的兩組組肝指數(shù)與模型組相比均有顯著下降(P<0．05)。模型組肝細胞的變態(tài)及炎性浸潤程度要比空白組以及葛花兩組大。2.6技術路線討論定題主要是我們?yōu)g覽了各類期刊后再針對社會醫(yī)學的研究的熱點和近年來出現(xiàn)頻率越來越高的疾病現(xiàn)象確定我們要研究的方向和定下課題主題。查找撰寫定好題目后我們分工合作查找相關資料，主要通過上校園網(wǎng)檢索，或其它網(wǎng)站搜索還有利用學校圖書館的文獻資源，撰寫好綜述。實驗設計參考文獻的實驗，針對實際情況，設計出屬于自己的實驗方案。討論分析針對實驗中出現(xiàn)的與預期目標不符合或相反的情況進展分析，找出其原因所在。2.7擬解決的重要問題及難點 本課題的難度在于實驗過程中取血以及肝臟的處理，因為本人對該實驗還沒完全熟練，故需要老資格的師兄協(xié)助完成。2.8創(chuàng)新性 2.8.1選題的切入點恰當，采用標準的實驗分析方法對數(shù)據(jù)進展分析匯總 研究進度 第一階段：在四月初到四月中旬購置研究需要材料。 第二階段：在四月中旬到五月中旬進展對大鼠的喂養(yǎng)。 第三階段：五月中旬到六月初進展實驗。 第四階段：六月初將實驗得到的數(shù)據(jù)進展處理及匯總完成論文。3.可行性分析此次研究是在別人研究工作的根基上進展的，有前人的大量工作可供借鑒，吸取其中的優(yōu)點，防止其中的缺點，從而此次研究的有據(jù)可尋，有理可依。本課題組成員理論知識扎實，有很好的獨立思考問題能力和團隊合作精神，有過屢次實驗的經(jīng)歷，熟悉有關的步驟。我校的師資隊伍和科研力量都比擬強大，有相關經(jīng)歷的師兄師姐也表示會支持我們的課題和提供建議和幫助，這也將很有助于我們的課題的開展。參考文獻[1][2]張秀芬。酒精性脂肪肝患者的安康指導。中國誤診學雜志2008年8月第8卷第23期[3]戴德銀．酒的代謝生理及對藥效和安康的影響[J]．華西藥學雜志，1991，6(4)：231-235．[4]AlfonsoV，CristinaL，Karo-iS．eta1．SilymarinprotectionFlagainsthepticlipidpemxidatloninducedbyacuteethanolintoxlcatio[J]．BiochemPharmacol，1985，34：2209～2212．[5]歐明．漢英常用中醫(yī)處方手冊[M]．廣州：廣東科學技術出版社，1991．208．[6]孫衛(wèi)勝，馬駿等．解酒方藥研究概況．甘肅中醫(yī)，1998，11(3)：47～48[7]苗彥妮，鐘贛生.葛花對大鼠酒精性肝損傷的預防作用研究.科技導報2008，26(15)61[8]田代華．實用中藥辭典(下卷)[M]．北京：人民衛(wèi)生出版社.2002．1897[9]江蘇新醫(yī)學院．中藥學大辭典(下冊)[M]．上海：上?？茖W技術出版社，1994．230[10]蘆潔，李文哲，倪亞明．中藥水提取物對乙醇脫氫酶活性影響的初步研究[J]．同濟大學學報醫(yī)學版，2002。23(1)：23[11]王東坡，譚學林．葛花解醒湯對酒精性肝病防治作用研究[J]．貴陽中醫(yī)學院學報，2002，24(2)：55[12]中島嘉次郎．葛花對消化道的影響[J]．國外醫(yī)學·中醫(yī)中藥分冊，2002，24(4)：250[13]王東坡，譚學林．葛花解醒湯對酒精性肝病防治作用研究[J]．貴陽中醫(yī)學院學報，2002，24(2)：5[14]厲有名，夏維新．脂肪肝現(xiàn)代診療[M]．江蘇：江蘇科學技術出版社，2003．65．[15]孫怡寧，尚榮軍．白酒灌胃法建設大鼠早期酒精性肝病模型[J]．陜西醫(yī)學雜志，2002，6(32)：565．教師與學生承當?shù)墓ぷ骷柏熑谓處熢谠撗芯抗こ讨谐挟數(shù)墓ぷ骷柏熑危褐笇Ш捅O(jiān)視課題的進展學生在該研究工程中承當?shù)墓ぷ骷柏熑危贺撠熣n題實驗的進展、數(shù)據(jù)統(tǒng)計、論文撰寫預期成果類別：社科類社會調查報告及學術論文自然科學類學術論文經(jīng)費預算序號經(jīng)費開支科目經(jīng)費預算金額〔元〕1雄性Wistar大鼠30.00元*40只1200.002白酒28元*15瓶420.003葛花150.004ALT、AST試劑盒ALT、AST試劑盒各一瓶84.005顯微鏡用品50.006玉米油30元*2L一瓶30.007常規(guī)石蠟20.008以上科目預算