植物組培實驗室設(shè)置條件及器具課件

植物組培實驗室設(shè)置條件及器具一、實驗室組成二、基本設(shè)備三、培養(yǎng)器皿及實驗用具四、無菌條件及創(chuàng)設(shè)五、無菌操作六、組培的環(huán)境條件和營養(yǎng)條件

組織培養(yǎng)實驗室布局的總體要求

便于隔離便于操作便于滅菌便于觀察一、實驗室組成基本實驗室輔助實驗室實驗室組成準(zhǔn)備室緩沖室無菌操作室培養(yǎng)室細胞生物學(xué)實驗室溫室生化分析實驗室基本實驗室布局平面圖實驗臺擱架培養(yǎng)架培養(yǎng)架培養(yǎng)架培養(yǎng)架藥品及儀器柜無菌臺無菌臺擱架拉窗冰箱擱架水槽電爐門4.5m3.0m3.5m4.0m準(zhǔn)備室緩沖室無菌室培養(yǎng)室組織培養(yǎng)準(zhǔn)備實驗室緩沖室培養(yǎng)室無菌室（一）無菌室（二）二、儀器與設(shè)備1、基本設(shè)備

冰箱、電爐、酸度計、純水器、天平、培養(yǎng)基分裝器、攪拌器等。冰箱酸度計電爐天平純水器培養(yǎng)基分裝器攪拌器2、滅菌設(shè)備

蒸汽壓力滅菌鍋、干熱消毒柜、過濾滅菌裝置、噴霧消毒器、紫外燈。蒸汽壓力滅菌鍋干熱消毒柜無菌瓶頂過濾裝置噴霧消毒器（參考圖）（參考圖）3、無菌操作設(shè)備

超凈工作臺無菌接種箱4、細胞培養(yǎng)設(shè)備

搖床培養(yǎng)架HZC-250恒溫振蕩培養(yǎng)箱150C

250D

光照培養(yǎng)箱5、細胞學(xué)鑒定設(shè)備光學(xué)研究顯微鏡、實體顯微鏡、倒置顯微鏡倒置顯微鏡光學(xué)顯微鏡1、玻璃器皿三、培養(yǎng)器皿及實驗用具培養(yǎng)皿三角瓶培養(yǎng)瓶2、金屬材質(zhì)用具鑷子解剖刀接種針無菌條件物理方法：物理滅菌干熱、濕熱、射線處理、物理除菌、過濾、離心、沉淀等化學(xué)方法：消毒劑、抗菌素滅菌1、滅菌方法2、滅菌（1）培養(yǎng)基滅菌：高溫高壓濕熱滅菌法壓力在9.8×104—10.8×104Pa

溫度在121℃

滅菌20—30min（2）玻璃器皿滅菌：蒸汽高壓消毒滅菌干熱消毒滅菌（3）塑料器皿滅菌：多采用高壓蒸汽消毒滅菌（4）金屬用具滅菌：灼燒滅菌浸入95%酒精，后置于酒精火焰上灼燒，冷卻后使用（5）接種室滅菌空氣消毒滅菌接種室超凈工作臺紫外燈照射70%—75%的酒精擦洗培養(yǎng)材料的接種紫外燈照射（6）外植體滅菌流水沖洗10—20min或更長時間70%—75%酒精中浸泡30s0.1%—0.2%氯化汞液中浸泡10min左右蒸餾水沖洗4—5次在10%的次氯酸鈉、飽和漂白粉浸泡30min左右備用六、無菌操作實驗員消毒實驗室、無菌臺滅菌實驗器材的滅菌無菌接種消毒實驗臺衛(wèi)生培養(yǎng)室培養(yǎng)1、消毒，更換實驗服、帽子與鞋子，進入接種室。2、打開超凈工作臺和無菌操作室的紫外燈，照射40min左右，后關(guān)閉。3、開啟過濾室風(fēng)機，使無菌風(fēng)吹拂工作臺面和四周的臺壁。4、用70%—75%的酒精擦拭工作臺和雙手。5、用沾有70%—75%酒精的紗布擦拭盛培養(yǎng)基的培養(yǎng)器皿，放進工作臺。6、把解剖刀、剪刀、鑷子等器械浸泡在95%的酒精中，再在火焰上消毒，放在器械架上。7、在酒精燈火焰附近切割備用的接種材料。8、打開瓶口，用火焰燒瓶口，轉(zhuǎn)動瓶口使瓶口各部分都燒到。9、取下接種器械，在火焰上消毒。10、把培養(yǎng)材料放入培養(yǎng)瓶，蓋上瓶口。11、接種結(jié)束后，清理和關(guān)閉超凈工作臺。注意：操作期間應(yīng)經(jīng)常用70%—75%的酒精擦拭工作臺和雙手；接種器械應(yīng)反復(fù)在95%的酒精中浸泡和在火焰上消毒。溫度光照濕度氣體培養(yǎng)基的滲透壓pH值植物材料一般最適溫度在25±2℃之間環(huán)境條件最常用的光周期是光照16h，黑暗8h一般情況下，培養(yǎng)器內(nèi)相對濕度應(yīng)達100%，培養(yǎng)室內(nèi)環(huán)境的相對濕度在70%—80%氧氣是愈傷組織生長所必需的

調(diào)節(jié)滲透壓常常從糖入手

植物組織培養(yǎng)時培養(yǎng)基的pH值大多在5.0—6.5第二節(jié)植物組織培養(yǎng)所需的環(huán)境條件1.大量營養(yǎng)元素：2.微量營養(yǎng)元素：3、碳源4、維生素類5、肌醇6、氨基酸7、天然復(fù)合物如：水解酪蛋白、玉米胚乳、酵母提取物8、瓊脂9、活性炭10、抗生素11、生長素類12、細胞分裂素類13、赤霉素類和脫落酸植物組織培養(yǎng)的營養(yǎng)條件因地制宜，創(chuàng)設(shè)實驗

上述是正規(guī)的組培條件，很多學(xué)校并不具備這樣的條件。但因為組培實驗在課標(biāo)中是應(yīng)用要求，最好創(chuàng)設(shè)條件做一下。比如做一個組培的實驗最低要求就是要有一個滅菌鍋和一個超凈臺，這個就能滿足潔凈的要求。如果沒有滅菌鍋可用高壓鍋代替，進行細菌的滅菌；