北中大中藥鑒定學實驗指導01基本實驗-1中藥顯微鑒定基本技術

中藥鑒定學實驗指導內(nèi)容提要《中藥鑒定學實驗指導》是21世紀全國高等中醫(yī)藥院校的配套教材。為了加強其適用性，全書按基本實驗和選做實驗兩大部分撰寫，對教育發(fā)展不平衡和教學計劃的調(diào)整可起到彈性調(diào)節(jié)作用。實驗教學內(nèi)容均結(jié)合中藥研究、生產(chǎn)和臨床應用的需要設計，以方法學為基本理念，尤其強調(diào)中藥品種和質(zhì)量鑒定方法的基本原理、基本技能、基本技術，并注重實驗用單味中藥的代表性和指導性，首次在該教材中體現(xiàn)了中藥材及其制劑鑒定指標的相關性和整體觀的科學思路，具有較大的知識涵蓋面和創(chuàng)新性。本教材的實驗教學部分共28個實驗，參考教學時數(shù)為128學時，其中基本實驗76學時、選做實驗52學時，各院?？筛鶕?jù)實際教學條件和教學計劃的調(diào)整選擇授課。附錄部分收載了部分鑒定方法的關鍵技術，并附有重點講授和掌握的97種重點中藥材的彩色圖譜，供學生課前預習和課后復習參考。本教材是中藥類專業(yè)本科教育的教學用書，亦可作為藥學類、制藥類等相關專業(yè)各個層次教學的選用教材，也是從事中藥工作各類專業(yè)人員必備的參考書。前言為適應我國高等中醫(yī)藥教育改革和發(fā)展的需要，根據(jù)教育部《關于“十五”期間普通高等教育教材建設與改革的意見》精神，組織編寫了本教材。在全國高等中醫(yī)藥院校21世紀課程教材編寫的基本原則指導下，本教材的編寫以全面推進素質(zhì)教育為綱，力求體現(xiàn)了以下特點：即突出中醫(yī)藥理論體系的特色、反映中醫(yī)藥教學改革和學術發(fā)展的成果、注重教材整體內(nèi)容的優(yōu)化、體現(xiàn)方法學的創(chuàng)新性、實踐性和課程體系改革的方向?！吨兴庤b定學實驗指導》是21世紀全國高等中醫(yī)藥院校的配套教材。根據(jù)中醫(yī)藥現(xiàn)代化人才培養(yǎng)、中藥國際化和產(chǎn)業(yè)化快速發(fā)展的需要，本教材增加了生物鑒定法等新方法、新技術、新知識。為了加強其適用性，全書按基本實驗和選做實驗兩大部分撰寫，對教育發(fā)展不平衡和教學計劃的調(diào)整可起到彈性調(diào)節(jié)作用。實驗教學內(nèi)容均結(jié)合中藥研究、生產(chǎn)和臨床應用的需要設計，以方法學為基本理念，尤其強調(diào)中藥品種和質(zhì)量鑒定方法的基本原理、基本技能、基本技術，并注重實驗用單味中藥的代表性和指導性，首次在該教材中體現(xiàn)了中藥材及其制劑鑒定指標的相關性和整體觀的科學思路。教學內(nèi)容由淺入深、重點突出、詳略得當，全面系統(tǒng)，具有較大的知識涵蓋面和創(chuàng)新性，體現(xiàn)了培養(yǎng)學生分析問題和解決實際問題能力的教學特點。本教材的實驗教學部分包括基原鑒定法、性狀鑒定法、顯微鑒定法、理化鑒定法、生物鑒定法的28個實驗，參考教學時數(shù)為128學時，其中基本實驗76學時、選做實驗52學時，各院校可根據(jù)實際教學條件和教學計劃的調(diào)整選擇授課。附錄部分收載了部分鑒定方法的關鍵技術，并附有重點講授和掌握的97種重點中藥材的彩色圖譜，供學生課前預習和課后復習參考。為了提高本教材內(nèi)容的科學性、先進性、適用性和準確性，本書收載了20世紀末中藥鑒定的最新方法與技術成果，為了達到優(yōu)勢互補、增強教教材內(nèi)容成的熟性，特聘請了國內(nèi)部分知名專家對某些章節(jié)和品種的有關內(nèi)容進行了執(zhí)筆和審校。特聘專家編委有：張繼副主任藥師（中國生物藥品檢定所），陳代賢主任藥師（大連市藥品檢驗所）、蔡少青教授（北京大學）、肖永慶教授（中國中醫(yī)研究院）、張思巨教授（中國中醫(yī)研究院）、孫素琴副教授（清華大學）、屠鵬飛教授（北京大學）、徐秉玖教授（北京大學）、鄭毅男教授（吉林農(nóng)業(yè)大學）、馬小軍研究員（中國醫(yī)學科學院中國協(xié)和醫(yī)科大學）、肖小河主任藥師（中國人民解放軍總醫(yī)院）、徐鴻華教授（廣州中醫(yī)藥大學）、丁平副教授（廣州中醫(yī)藥大學）、李守拙教授（承德醫(yī)學院）、孫靜蕓教授（浙江中醫(yī)中藥研究院）、楊書斌教授（山東中醫(yī)藥研究所）、劉延澤教授（河南中醫(yī)學院）、白根本副教授（北京中醫(yī)藥大學）等。在編寫過程中，還得到了各位編委所在單位的支持和幫助，在此一并致以衷心地感謝。本教材是中藥類專業(yè)本科教育的教學用書，亦可作為藥學類、制藥類等相關專業(yè)各個層次教學的選用教材，也是從事中藥工作各類專業(yè)人員必備的參考書。由于時間倉促和水平有限，教材中難免存在有缺點和錯誤，敬請各位專家和讀者提出寶貴意見，以便重修并臻于完善。北京中醫(yī)藥大學目錄1基本實驗…………1.1中藥顯微鑒定基本技術…………………1.2中藥的化學定性鑒別…………1.3中藥的薄層色譜鑒定…………1.4根及根莖類中藥材性狀及顯微鑒定……………1.4.1雙子葉和蕨類植物根及根莖類中藥………………1.4.2雙子葉植物根及根莖類中藥……1.4.3單子葉植物根及根莖類中藥……1.5莖、木類中藥材的性狀及顯微鑒定………………1.6皮類中藥材的性狀及顯微鑒定…………………1.7葉及花類中藥材的性狀及顯微鑒定……………1.8果實類中藥材的性狀及顯微鑒定…………………1.9種子類中藥材的性狀及顯微鑒定…………………1.10全草類中藥材的性狀及顯微鑒定…………………1.11藻菌、地衣、樹脂及其他類中藥材的性狀及顯微鑒定…………1.12動物類中藥材的性狀及顯微鑒定…………1.13礦物類中藥材的性狀及顯微鑒定………………1.14粉末性中成藥的顯微鑒定…………………1.15注射用雙黃連的鑒定……………2選做實驗……………………2.1中藥的光譜鑒定…………………2.1.1熒光鑒定…………………2.1.2可見-紫外光譜鑒定………………2.1.3紅外光譜鑒定…………………2.2中藥的電泳鑒定…………………2.3鹿茸的特異PCR鑒定……………2.4中藥的常規(guī)檢測………………2.4.1水分測定………………2.4.2灰分測定………………2.4.3浸出物的含量測定………………2.4.4揮發(fā)油的含量測定………………2.5中藥有害物質(zhì)檢測………………2.5.1農(nóng)藥殘留量的檢測………………2.5.2重金屬的檢查………………2.5.3砷鹽的檢查………………2.6大黃中蒽醌成分的含量測定—高效液相色譜法…2.7紫草中羥基萘醌總色素的含量測定—可見分光光度法………………2.8大青葉中靛玉紅的含量測定—薄層掃描法……………2.9淫羊藿中總黃酮的含量測定—紫外分光光度法…………2.10斑蝥中斑蝥素的含量測定—氣相色譜法…………………2.11朱砂中硫化汞的含量測定…………………2.12未知粉末中藥顯微鑒定………………2.13中藥質(zhì)量標準的制訂…………………實驗課時分配表1.基本實驗76學時1.1中藥顯微鑒定基本技術6學時1.2中藥的化學定性鑒別4學時1.3中藥的薄層色譜鑒定4學時1.4根及根莖類中藥材性狀及顯微鑒定18學時1.5莖、木類中藥材的性狀及顯微鑒定4學時1.6皮類中藥材的性狀及顯微鑒定4學時1.7葉及花類中藥材的性狀及顯微鑒定4學時1.8果實類中藥材的性狀及顯微鑒定4學時1.9種子類中藥材的性狀及顯微鑒定4學時1.10全草中藥材的性狀及顯微鑒定4學時1.11藻菌、地衣、樹脂及其他類中藥材的性狀及顯微鑒定4學時1.12動物類中藥材的性狀及顯微鑒定4學時1.13礦物類中藥材的性狀及顯微鑒定4學時1.14粉末性中成藥的顯微鑒定4學時1.15注射用雙黃連的鑒定4學時2選做實驗52學時2.1中藥的光譜鑒定6學時2.2中藥的電泳鑒定4學時2.3鹿茸的特異PCR鑒定4學時2.4中藥的常規(guī)檢測6學時2.5中藥有害物質(zhì)檢測6學時2.6大黃中蒽醌成分的含量測定—高效液相色譜法2學時2.7紫草中羥基萘醌總色素的含量測定—可見分光光度法2學時2.8大青葉中靛玉紅的含量測定—薄層掃描法2學時2.9淫羊藿中總黃酮的含量測定—紫外分光光度法2學時2.10斑蝥中斑蝥素的含量測定—氣相色譜法2學時2.11朱砂中硫化汞的含量測定2學時2.12未知粉末中藥顯微鑒定4學時2.13中藥質(zhì)量標準的制訂10學時

1基本實驗1.1中藥顯微鑒定基本技術內(nèi)容提要本實驗包括顯微測量、顯微制片的基本技術、顯微化學反應和顯微特征描述的基本方法。通過實驗掌握顯微測量、顯微制片、顯微化學反應的一般方法與技術，掌握常見顯微特征描述的一般方法。原理（1）顯微測量使用標定的目鏡測微尺，測定顯微目的物的大小（以μm為計量單位）。目鏡測微尺是放在目鏡內(nèi)的直徑為2cm的圓形玻片，其上有100等分格的刻度尺，每一小格表示的實際長度隨不同的顯微鏡、不同放大倍數(shù)的物鏡而不同。鏡臺測微尺是在載玻片上封固有精細刻度的標尺，標尺的長度是1mm，分為100等分小格（每小格的長度為10μm），用于目鏡量尺的標定。使用標定的目鏡測微尺，才能測量顯微鏡下目的物的大?。?）顯微制片根據(jù)鑒定工作的需要，采用徒手制片和機械制片等手段，制備各種顯微制片供顯微特征的觀察和描述。根據(jù)制作方法和保存的需要，分為半永久制片、永久制片和臨時制片3大類。根據(jù)觀察的目的和對供試品采取的制片方法也不同，分切片標本片、解離組織標本片、表面標本片、粉末標本片和磨片等；其中橫切片多用于觀察組織的排列特征；縱切片多用于觀察莖、木類中藥的某些細胞組織，如射線的特征；解離組織片用于觀察某些細胞的形狀，如纖維、石細胞等；表面片多用于觀察葉、花、全草、果實和種子等的表面特征，一般取某一部分制片；粉末片多用于觀察組織碎片、細胞、內(nèi)含物或某些中藥顆粒的特征；磨片用于堅硬藥材，如骨類、貝殼類及礦石類顯微特征的觀察。（3）顯微化學反應顯微化學反應是指在藥材的臨時切片(新鮮的材料效果尤佳)或粉末片上滴加某種化學試劑，觀察細胞壁、細胞內(nèi)含物以及所含化學成分的反應。（4）顯微描繪器

（5）顯微特征的描述顯微特征的描述是在觀察顯微特征的基礎上，對顯微特征進行的形態(tài)描述。描述的內(nèi)容主要有組織排列、細胞形狀、細胞的大小和數(shù)量、顏色等。粉末顯微特征的描述應遵循先多數(shù)后少數(shù)、先特殊后一般、先感觀后測試的原則進行。儀器、材料與試劑(1)儀器與材料1)儀器生物顯微鏡，目鏡測微尺，鏡臺測微尺，顯微描繪器，鑷子，解剖針，載玻片，蓋玻片，酒精燈，剃須刀片，粉碎機，繪圖板，鉛筆等。2)材料粉末：艾葉，巴戟天，半夏，穿心蓮，黃芪，木香，肉桂，石韋，洋金花。綿馬貫眾葉柄永久制片（2）試劑α-萘酚濃硫酸試液，碘試液，間苯三酚試液，水合氯醛試劑，蘇丹Ⅲ試液，稀甘油試劑，鹽酸，硝酸，碘化鉍鉀試劑，氯化鋅碘試液，硫酸，釕紅試液，硝酸汞試液，乙醚，石油醚，90%乙醇，70%乙醇，α-萘酚乙醇溶液，稀鹽酸，稀醋酸等。操作步驟（1）顯微測量1）顯微目鏡測微尺的標化取下顯微鏡的目鏡，將目鏡測微尺的刻度面向上放入目境內(nèi)的視場光闌上，再旋上上透鏡。將鏡臺測微尺蓋片面朝上放在再載物臺上，用低倍鏡觀察，調(diào)節(jié)焦距看清楚鏡臺測微尺的刻度。移動鏡臺測微尺，同時轉(zhuǎn)動目鏡，使目鏡測微尺與鏡臺測微尺平行靠近，并將兩尺的“0”點刻度線或某刻度線對齊，然后從左向右察看兩尺刻度線另一重合線，記錄重合線間目鏡測微尺和鏡臺測微尺的格數(shù)（參見附錄顯微測量）。用下列公式計算目鏡測微尺每小格的實際長度。鏡臺測微尺的格數(shù)×10μm目鏡測微尺每小格的實際長度=目鏡測微尺的格數(shù)2）物體的測量移去鏡臺測微尺，換上標本片（選取顯微特征描述用粉末制片），用目鏡測微尺測量顯微鏡下細胞或內(nèi)含物所占小格數(shù)并乘以目鏡測微尺每小格代表的實際長度，即為被測物體的實際長度。（2）顯微制片1）徒手切片取材、固定與切片：取較細小的牛膝和麥冬藥材，用水浸軟，選擇適當部位，切割成長2~3cm的小段，用拇解離組織制片及滑走切片、冷凍切片、石蠟切片等機械制片略，參見附錄。（3）顯微化學反應選擇顯微特征描述使用的標本片，滴加規(guī)定顯微化學試劑，在顯微鏡下觀察細胞壁或細胞內(nèi)含物的顏色變化。1）細胞壁性質(zhì)的鑒定木栓化或角質(zhì)化細胞壁：2）細胞內(nèi)含物的鑒定淀粉粒：3）組織或細胞內(nèi)化學成分的鑒定略。參見1.2中藥的化學定性鑒別。(4)描繪器的使用及繪圖方法1）取下顯微鏡的接目鏡，按說明書裝上描繪器（或描繪目鏡）。2）裝上顯微標本片，調(diào)節(jié)物像清晰度。3）調(diào)整繪圖板的角度與描繪器的角度相一致，用顯微描繪器上的濾光片調(diào)節(jié)光線強度，使視野中的物象及繪圖紙上鉛筆均較清晰，選定描繪的目的物（使用描繪目鏡可省略繪圖板）。4）用目鏡側(cè)微尺測量描繪的目的物的大小，然后繪圖。5）繪圖時，先用HB型鉛筆輕輕依物像描出細胞或組織的輪廓，確定無誤后，移開描繪器，用H型鉛筆按要求的線條表示方法繪圖，用橡皮擦去草圖的鉛筆痕。繪圖的線條要流暢、粗細均勻。5）放大倍數(shù)的計算按下列公式計算：繪圖紙上描繪的圖像長度放大倍數(shù)=被描繪目的物的實際長度也可以在描繪目的物的一側(cè)畫出目鏡側(cè)微尺每個小格（或幾個小格）長度的線段，再測其實際長度后計算?；蛟谒嫵瞿跨R側(cè)微尺每個小格（或幾個小格）長度的線段上標注實際長度即可，如1個小格的線段標注10mμ，2個小格的線段標注20mμ。（5）顯微特征的描述分取牛膝、麥冬的徒手切片和各供試品藥材粉末少許，分別用水制片或制水合氯醛透化標本片，置顯微鏡下觀察。根據(jù)觀察的對象和目的物，可進行必要的顯微化學反應（參見顯微化學反應項下的要求）。1）組織特征取綿馬貫眾葉柄、牛膝、麥冬橫切面永久制片或徒手切片，由外向內(nèi)依次觀察其木栓層（或表皮、厚壁組織）、皮層、維管束等組織的排列情況及其特征。2）粉末特征淀粉粒：取半夏水制片，淀粉粒的類型、形狀，測量淀粉粒的大小，觀察臍點的形狀、位置，層紋的有無。草酸鈣針晶：取半夏粉末少許，制水合氯醛透化片或用水制片，觀察并描述草酸鈣晶體的類型、存在狀態(tài)，測量草酸鈣針晶的長度。石細胞：取巴戟天粉末少許，制水合氯醛透化片，觀察并描述石細胞的形狀、顏色，測量石細胞的大小、觀察細胞壁及孔溝的特征。用間苯三酚-濃鹽酸制片，觀察和描述石細胞壁的木化情況。韌皮纖維：取肉桂粉末少許，制水合氯醛透化片，觀察并描述韌皮纖維的分布狀態(tài)、形狀、顏色、細胞壁的特征，測量細胞的長度和直徑。用間苯三酚-濃鹽酸制片，觀察和描述細胞壁的木化情況。碳酸鈣晶體（鐘乳體）：取穿心蓮粉末少許，制水合氯醛透化片，觀察并描述碳酸鈣晶體的分布狀態(tài)、形狀、顏色，測量鐘乳體的大小。在制片邊緣滴加少許鹽酸，觀察鐘乳體的變化和產(chǎn)生的現(xiàn)象。木栓細胞：取黃芪粉末少許，制水合氯醛透化片，觀察并描述木栓細胞的存在狀態(tài)、切面觀和表面觀的形狀、顏色，用間苯三