北中大中藥鑒定學(xué)實驗指導(dǎo)01基本實驗-3中藥的薄層色譜鑒定

1.3中藥的薄層色譜鑒定內(nèi)容提要本實驗采用薄層色譜法，對大黃、人參、丹參、大青葉、馬錢子、熊膽、萬氏牛黃清心丸等常用中藥進行品種鑒定或質(zhì)量控制。通過實驗掌握含有不同類別化學(xué)成分中藥薄測色譜鑒別的條件關(guān)鍵技術(shù)。掌握熊膽等中藥薄層色譜鑒定的特征和方法。原理薄層色譜鑒定法是選用適當粒度的吸附劑，并將其均勻涂鋪在玻璃板上(或其他支持物上，如鋁制薄板)成一薄層，然后用毛細管或適當?shù)狞c樣器將供試品和對照品溶液分別滴加在薄層的啟始線上，待樣點上的溶劑揮散后，置于密閉的層析缸中，用一定的溶劑展開，當溶劑前沿到達距離另一端2～3cm處，取出，干燥，顯色或直接觀察（有色成分），并與專屬性的化學(xué)對照品或?qū)φ账幉南啾容^，以鑒定品種或質(zhì)量。薄層色譜鑒定法是中藥鑒定應(yīng)用范圍最廣的方法之一。儀器、材料與試劑(1)儀器與材料1)儀器電吹風，硅膠G薄層板，硅膠H-CMC-Na薄層板，容量瓶，三角瓶，燒杯，水浴鍋，索氏提取器，紫外分析燈，層析缸。2)材料粉末：大黃，人參，丹參，大青葉，馬錢子，熊膽，萬氏牛黃清心丸。（2）試劑10%磷鉬酸乙醇溶液，10%硫酸乙醇溶液，2%三氯化鐵乙醇溶液，20%氫氧化鈉溶液，30%硫酸乙醇溶液，pH試紙，氨水，苯，冰醋酸，丙酮，醋酸，醋酸乙酯，碘化鉍鉀試液，丁酮，硅藻土，甲苯，甲醇，甲酸，甲酸，甲酸乙酯，氯仿，石油醚（30～60℃），鹽酸，乙醇，乙醚，異丙醇，異辛烷，蒸餾水，正丁醇，正己烷。（3）對照品大黃對照藥材，大黃酸，丹參對照藥材，丹參酮ⅡA，膽酸，靛藍，靛玉紅，鵝去氧膽酸，士的寧，黃連對照藥材，黃芩苷，馬錢子堿，去氧膽酸，人參皂苷Rg1、Re、Rb1，熊去氧膽酸，鹽酸小檗堿，梔子苷。操作步驟（1）大黃的鑒定1）供試品溶液的制備取大黃粉末0.1g，加甲醇20mL浸漬1h，濾過，取濾液5mL，蒸干,加水10mL，使溶解，再加鹽酸lmL，置水浴上加熱30min，立即冷卻，用乙醚分2次提取，每次20mL，合并乙醚液，蒸干,殘渣加氯仿lmL使溶解。2）對照藥材溶液的制備另取大黃對照藥材按照上法制備。3）對照品溶液的制備取大黃酸對照品，加甲醇制成每lmL含lmg的溶液。4）色譜條件硅膠H-CMC-Na薄層板。展開劑：石油醚（30～60℃）-甲酸乙酯-甲酸（15∶5∶1）的上層溶液。點樣量：3種溶液各4μL。顯色：365nm紫外光燈，或氨氣中熏后在日光下觀察。5）結(jié)果供試品與對照藥材均顯5個橙黃色熒光斑點，對照品顯橙黃色熒光斑點；氨氣熏后斑點均變?yōu)榧t色。（2）人參的鑒定1）供試品溶液的制備取人參粉末1g，加氯仿40mL，加熱回流1h，棄去氯仿液，藥渣揮干溶劑，加水0.5mL拌勻濕潤后，加水飽和的正丁醇10mL，超聲處理30min，吸取上清液，加3倍量的氨試液，搖勻，放置分層，取上層液蒸干，殘渣加甲醇1mL使溶解。2）對照藥材溶液的制備取人參對照藥材1g，同上法制備。3）對照品溶液的制備取人參皂苷Rg1、Re、Rb1為對照品，加甲醇制成1mL中各含2mg的混合液。4）色譜條件硅膠G薄層板（厚500μm）。展開劑：氯仿-醋酸乙酯-甲醇-水（15∶40∶22∶10）10℃以下放置的下層溶液。顯色：10%硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點顯色清晰，日光及365nm紫外光燈下觀察。點樣量：3種溶液各1~2μL。5）結(jié)果供試品與對照品在日光下顯3個相同的紫紅色斑點，紫外光燈（365nm）下顯相同的1個黃色和2個橙色熒光斑點。（3）丹參的鑒定1）供試品溶液的制備取丹參粉末1g，加乙醚5mL，置具塞試管中，振搖，放置1h，濾過，濾液揮干，殘渣加醋酸乙酯1mL使溶解。2）對照藥材溶液的制備取丹參對照藥材，同上法制備。3）對照品溶液的制備取丹參酮ⅡA對照品，加醋酸乙酯制成每1mL含2mg的溶液。4）色譜條件硅膠G薄層板。展開劑：苯-醋酸乙酯(19∶1)。點樣量：上述3種溶液各5μL。展開后直接觀察。5）結(jié)果供試品與對照品顯相同的暗紅色斑點。（4）大青葉的鑒定1）供試品溶液的制備取大青葉粉末0.5g，加氯仿20mL，置水浴上回流提取1h，濾過，濾液濃縮至1mL。2）對照品溶液的制備取靛藍、靛玉紅對照品，加氯仿制成每1mL各含1mg的混合溶液。3）色譜條件硅膠G薄層板。展開劑：苯-氯仿-丙酮(5∶4∶1)。點樣量：上述2種溶液各5μL。展開后直接觀察。4）結(jié)果供試品與對照品顯相同顏色的斑點，靛藍顯藍色、靛玉紅淺紫紅色。（5）馬錢子的鑒定1）供試品溶液的制備取馬錢子粉末0.5g，加氯仿-乙醇（10∶1）混合液5mL，與濃氨試液0.5mL，密塞，振搖5min，放置2h，濾過。2）對照品溶液的制備取士的寧和馬錢子堿對照品，加氯仿制成每1mL各含2mg的溶液。3）色譜條件硅膠G薄層板上。展開劑：甲苯-丙酮-乙醇-濃氨（4∶5∶0.6∶0.4）。顯色：碘化鉍鉀試液。點樣量：上述3種溶液各10μL。4）結(jié)果供試品與對照品顯相同的棕色斑點。（6）熊膽的鑒定1）供試品溶液的制備取熊膽仁0.1g，加甲醇10mL，溫熱使溶解，放冷，濾過，濾液濃縮近干，加20%氫氧化鈉溶液5mL，水浴水解5h，放冷，加鹽酸至pH2～3，加醋酸乙酯萃取2次，合并醋酸乙酯液，濃縮至約5mL。2）對照品溶液的制備取膽酸、熊去氧膽酸、鵝去氧膽酸及去氧膽酸各約1mg，分別加甲醇1mL溶解。3）色譜條件硅膠G薄層板。展開劑：異辛烷-乙醚-冰醋酸-正丁醇-水（10:5:5:3:1）的上層液。展距：16～18cm。顯色：30%硫酸乙醇溶液，105℃烘10min。4）結(jié)果供試品應(yīng)有與熊去氧膽酸相同的斑點。（7）萬氏牛黃清心丸的鑒定1）取萬氏牛黃清心丸3g，剪碎，加硅藻土0.6g，研勻，加氯仿10mL、冰醋酸0.5mL，回流30min，放冷，濾過，濾液蒸干，殘渣加乙醇2mL使溶解，濾過，濾液作為供試品溶液。另取膽酸對照品，加乙醇制成每1mL含1mg的溶液，作為對照品溶液。吸取上述2種溶液各10μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以醋酸乙酯-正己烷-醋酸-甲醇（32∶6∶1∶1）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%磷鉬酸乙醇溶液，在110℃加熱約10min。供試品色譜在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點。2）取萬氏牛黃清心丸3g，剪碎，加硅藻土0.5g，研勻，加甲醇20mL，回流1h，放冷，濾過，濾液作為供試品溶液。另取黃芩苷對照品，加甲醇制成每1mL含1mg的溶液，作為對照品溶液。吸取上述2種溶液各5μL，分別點于同一硅膠G-CMC-Na薄層板上，以醋酸乙酯-丁酮-甲酸-水（5∶3∶1∶1）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以2%三氯化鐵乙醇溶液。供試品色譜在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點。3）取萬氏牛黃清心丸3g，加乙醚15mL，研磨，棄去乙醚。殘渣揮干乙醚，加醋酸乙酯30mL，回流提取1h，放冷，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇3mL使溶解，濾過，濾液作為供試品溶液。另取梔子苷對照品，加甲醇制成每1mL含1mg的溶液，作為對照品溶液。吸取上述2種溶液各5μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以醋酸乙酯-丙酮-甲酸-水（10∶7∶2∶0.5）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加熱約10min。供試品色譜在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點。4）取萬氏牛黃清心丸適量，剪碎，取4g，精密稱定，置索氏提取器中，加鹽酸-甲醇（1∶100）適量，回流提取至提取液無色，提取液移至50mL量瓶中，用鹽酸-甲醇（1∶100）稀釋至刻度，搖勻。取提取液4mL，置水浴上蒸干，殘渣加甲醇溶解，使成1mL，作為供試品溶液。另取黃連對照藥材50mg，加甲醇10mL，置水浴上回流15min，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇1mL使溶解，作為對照藥材溶液。再取鹽酸小檗堿對照品，加甲醇制成每1mL含0.5mg的溶液，作為對照品溶液。吸取上述3種溶液各2μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以苯-醋酸乙酯-甲醇-異丙醇-濃氨試液（12∶6∶3∶3∶1）為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈（365nm）下觀察。供試品色譜在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的黃色熒光斑點；在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的黃色熒光斑點。要點及難點解答（1）各類成分進行薄層色譜鑒定的必備條件供試品的提取方法，吸附劑，展開劑，顯色劑或顯色方法，對照品或?qū)φ账幉?。供試品與對照品或?qū)φ账幉谋仨氃谙嗤V條件下進行展開，展距在無特殊規(guī)定情況下一般為10cm。（2）硅膠H-CMC-Na為硅膠H羧甲基纖維素鈉薄層板。（3）在有對照品的情況下，薄層色譜鑒定可用于測定中藥中有效成分或有害物質(zhì)的近似含量，以控制中藥的質(zhì)量。若對色譜斑點進行薄層掃描，即可較準確地測定其化學(xué)成分的含量。（4）影響薄層色譜鑒定質(zhì)量因素較多，其關(guān)鍵技術(shù)參見附錄。（5）萬氏牛黃清心丸的處方組成為