第十六抗生素類(lèi)藥物分析演示文稿

第十六抗生素類(lèi)藥物分析演示文稿當(dāng)前第1頁(yè)\共有103頁(yè)\編于星期六\17點(diǎn)優(yōu)選第十六抗生素類(lèi)藥物分析當(dāng)前第2頁(yè)\共有103頁(yè)\編于星期六\17點(diǎn)一、抗生素的定義及特點(diǎn)◆低化學(xué)純度－同系物多、異構(gòu)體多、降解物多◆活性組分的變異性－生產(chǎn)過(guò)程中條件的變化◆不穩(wěn)定性－不穩(wěn)定性結(jié)構(gòu)

是指“生物在其生命活動(dòng)中產(chǎn)生的，能在低微濃度下有選擇地抑制或影響它種生物機(jī)能的化學(xué)物質(zhì)的總稱(chēng)”當(dāng)前第3頁(yè)\共有103頁(yè)\編于星期六\17點(diǎn)抗生素的分類(lèi)β－內(nèi)酰胺類(lèi)抗生素四環(huán)素類(lèi)抗生素氨基糖苷類(lèi)抗生素大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)抗生素多烯大環(huán)類(lèi)抗生素－制菌霉素、兩性霉素多肽類(lèi)抗生素－放線(xiàn)菌素、多黏菌素酰胺醇類(lèi)抗生素－氯霉素抗腫瘤類(lèi)抗生素其他抗生素二、抗生素類(lèi)藥物的分類(lèi)按化學(xué)結(jié)構(gòu)分當(dāng)前第4頁(yè)\共有103頁(yè)\編于星期六\17點(diǎn)三、抗生素類(lèi)藥物的細(xì)菌耐藥性當(dāng)前第5頁(yè)\共有103頁(yè)\編于星期六\17點(diǎn)當(dāng)前第6頁(yè)\共有103頁(yè)\編于星期六\17點(diǎn)當(dāng)前第7頁(yè)\共有103頁(yè)\編于星期六\17點(diǎn)當(dāng)前第8頁(yè)\共有103頁(yè)\編于星期六\17點(diǎn)三、抗生素類(lèi)藥物的細(xì)菌耐藥性◆1、耐藥性的種類(lèi)固有耐藥性：天然耐藥性，由細(xì)菌染色體基因決定獲得性耐藥性：◆2、耐藥的機(jī)制（1）產(chǎn)生滅活酶，使抗菌藥失活如β-內(nèi)酰胺酶（2）抗菌藥物作用靶位改變（3）降低細(xì)菌外膜通透性（4）影響主動(dòng)流出系統(tǒng)當(dāng)前第9頁(yè)\共有103頁(yè)\編于星期六\17點(diǎn)當(dāng)前第10頁(yè)\共有103頁(yè)\編于星期六\17點(diǎn)四、抗生素藥物的質(zhì)量分析鑒別試驗(yàn)㈠1、官能團(tuán)的顯色反應(yīng)－特殊基團(tuán)的反應(yīng)2、光譜法－特征吸收3、色譜法－保留行為4、生物學(xué)方法－抗菌能力當(dāng)前第11頁(yè)\共有103頁(yè)\編于星期六\17點(diǎn)㈡檢查1、影響產(chǎn)品穩(wěn)定性的檢查項(xiàng)目－水份、酸堿度等2、控制有機(jī)和無(wú)機(jī)雜質(zhì)的檢查項(xiàng)目3、與臨床安全性密切相關(guān)的檢查項(xiàng)目－異常毒性、熱原等4、其他檢查項(xiàng)目－其他共存組分當(dāng)前第12頁(yè)\共有103頁(yè)\編于星期六\17點(diǎn)㈢含量或效價(jià)測(cè)定1、微生物檢定法比濁法管碟瓊脂擴(kuò)散法－抑菌圈Potency:是指每ml或每mg中含有某種抗生素有效成分的多少U/mg是以抗生素對(duì)微生物的殺傷或抑制程度為指標(biāo)來(lái)判斷效價(jià)的一種方法方法當(dāng)前第13頁(yè)\共有103頁(yè)\編于星期六\17點(diǎn)靈敏度高、需用量少適用范圍廣－純品、不純品、已知的和新的可一次測(cè)定同類(lèi)型抗生素的總效價(jià)－無(wú)需分離純化與臨床的應(yīng)用要求一致操作繁瑣、費(fèi)時(shí)費(fèi)力誤差較大是結(jié)構(gòu)復(fù)雜和多組分抗生素效價(jià)測(cè)定的首先方法優(yōu)點(diǎn)㈢含量或效價(jià)測(cè)定1、微生物檢定法缺點(diǎn)當(dāng)前第14頁(yè)\共有103頁(yè)\編于星期六\17點(diǎn)2、物理化學(xué)法

HPLCLC-MSUV

容量法準(zhǔn)確可靠、專(zhuān)屬性高、操作簡(jiǎn)單、省時(shí)、樣品用量少1、對(duì)結(jié)構(gòu)已知或提純的抗生素2、需要標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)照儀器分析方法㈢含量或效價(jià)測(cè)定當(dāng)前第15頁(yè)\共有103頁(yè)\編于星期六\17點(diǎn)第二節(jié)β-內(nèi)酰胺類(lèi)抗生素當(dāng)前第16頁(yè)\共有103頁(yè)\編于星期六\17點(diǎn)β-內(nèi)酰胺類(lèi)抗生素6-氨基青霉烷酸（6-APA）；青霉素類(lèi)；7-氨基頭孢菌烷酸（7-ACA）；頭孢菌素類(lèi)；一、結(jié)構(gòu)及分類(lèi)氫化噻嗪環(huán)氫化噻唑環(huán)當(dāng)前第17頁(yè)\共有103頁(yè)\編于星期六\17點(diǎn)青霉素（青霉素鉀、鈉）當(dāng)前第18頁(yè)\共有103頁(yè)\編于星期六\17點(diǎn)氨芐西林

（氨芐青霉素）當(dāng)前第19頁(yè)\共有103頁(yè)\編于星期六\17點(diǎn)阿莫西林

（羥氨芐青霉素）當(dāng)前第20頁(yè)\共有103頁(yè)\編于星期六\17點(diǎn)普魯卡因青霉素當(dāng)前第21頁(yè)\共有103頁(yè)\編于星期六\17點(diǎn)頭孢氨芐當(dāng)前第22頁(yè)\共有103頁(yè)\編于星期六\17點(diǎn)頭孢羥氨芐當(dāng)前第23頁(yè)\共有103頁(yè)\編于星期六\17點(diǎn)㈡理化性質(zhì)1、酸性與溶解性2、旋光性3、紫外吸收特性4、不穩(wěn)定性當(dāng)前第24頁(yè)\共有103頁(yè)\編于星期六\17點(diǎn)酸性一、結(jié)構(gòu)特點(diǎn)與性質(zhì)Na與堿金屬(Na+、K+)成鹽

（一）羧基

易溶于水

當(dāng)前第25頁(yè)\共有103頁(yè)\編于星期六\17點(diǎn)與有機(jī)堿(普魯卡因)成鹽

難溶于水普魯卡因青霉素當(dāng)前第26頁(yè)\共有103頁(yè)\編于星期六\17點(diǎn)（二）手性C

頭孢菌素類(lèi)

C6C7青霉素類(lèi)C3C5C6

旋光性﹡﹡﹡﹡﹡當(dāng)前第27頁(yè)\共有103頁(yè)\編于星期六\17點(diǎn)

（三）共軛體系

頭孢菌素類(lèi)母核有共軛體系

青霉素類(lèi)母核無(wú)明顯UV

多數(shù)有苯環(huán)取代基

UV當(dāng)前第28頁(yè)\共有103頁(yè)\編于星期六\17點(diǎn)（四）β–內(nèi)酰胺環(huán)的不穩(wěn)定性

水溶液

不穩(wěn)定

干燥純凈

穩(wěn)定

不穩(wěn)定性因素四元環(huán)張力大

酰胺鍵易水解

含水量純度

當(dāng)前第29頁(yè)\共有103頁(yè)\編于星期六\17點(diǎn)青霉素類(lèi)

某些氧化劑酸、堿、青霉素酶（某些金屬離子）（溫度）降解失效（四）β–內(nèi)酰胺環(huán)

當(dāng)前第30頁(yè)\共有103頁(yè)\編于星期六\17點(diǎn)與含水量和純度密切相關(guān)青霉素的降解途徑當(dāng)前第31頁(yè)\共有103頁(yè)\編于星期六\17點(diǎn)青霉素的降解產(chǎn)物青霉噻唑酸－青霉素酶青霉酸－強(qiáng)酸性環(huán)境青霉烯酸－弱酸性環(huán)境青霉醛－強(qiáng)酸性-加熱青霉胺－強(qiáng)酸性-加熱/青霉素酶-重金屬降解產(chǎn)物當(dāng)前第32頁(yè)\共有103頁(yè)\編于星期六\17點(diǎn)二、鑒別反應(yīng)（一）顯色反應(yīng)1、異羥肟酸鐵反應(yīng)當(dāng)前第33頁(yè)\共有103頁(yè)\編于星期六\17點(diǎn)2.茚三酮反應(yīng)

α-氨基-氨基茚三酮藍(lán)紫色當(dāng)前第34頁(yè)\共有103頁(yè)\編于星期六\17點(diǎn)3.雙縮脲反應(yīng)（開(kāi)環(huán)分解）-內(nèi)酰胺類(lèi)堿性酒石酸銅紫當(dāng)前第35頁(yè)\共有103頁(yè)\編于星期六\17點(diǎn)當(dāng)前第36頁(yè)\共有103頁(yè)\編于星期六\17點(diǎn)4.與重氮苯磺酸反應(yīng)橙黃色重氮苯磺酸--56OHHC（偶合）酚羥基頭孢哌酮當(dāng)前第37頁(yè)\共有103頁(yè)\編于星期六\17點(diǎn)1.K+、Na+的火焰反應(yīng)（二）各種鹽的反應(yīng)

焰色→鮮黃色

+醋酸氧鈾鋅→↓黃

Na+

焰色→紫色

+0.1%四苯硼鈉→↓白

K+當(dāng)前第38頁(yè)\共有103頁(yè)\編于星期六\17點(diǎn)2.沉淀反應(yīng)（青霉素鹽）遇酸→↓在過(guò)量HCl或有機(jī)溶劑中溶解白青霉素青霉素鈉

青霉素鉀

+H+當(dāng)前第39頁(yè)\共有103頁(yè)\編于星期六\17點(diǎn)3.重氮化-偶合反應(yīng)

重氮化-偶合反應(yīng)芳伯氨基當(dāng)前第40頁(yè)\共有103頁(yè)\編于星期六\17點(diǎn)光譜法（三）1、UV法樣品、分解產(chǎn)物Cu2+頭孢氨芐λmax=262nm青霉素V鈉

A280nm/A264nm=1.30～1.50當(dāng)前第41頁(yè)\共有103頁(yè)\編于星期六\17點(diǎn)當(dāng)前第42頁(yè)\共有103頁(yè)\編于星期六\17點(diǎn)2、IR法3180cm-1N-Hβ–內(nèi)酰胺C=O1690cm-1仲酰胺C=O1250cm-1C-O以阿莫西林為例當(dāng)前第43頁(yè)\共有103頁(yè)\編于星期六\17點(diǎn)色譜法（四）1、TLC法對(duì)照品對(duì)照法2、HPLC法當(dāng)前第44頁(yè)\共有103頁(yè)\編于星期六\17點(diǎn)三、雜質(zhì)檢查

藥物

檢查項(xiàng)目

檢查方法

頭孢他啶聚合物HPLC法

頭孢曲松鈉

頭孢哌酮鈉

頭孢噻肟鈉

頭孢呋辛酯有關(guān)物質(zhì)和異構(gòu)體HPLC法

頭孢氨芐有關(guān)物質(zhì)反相TLC法

青霉素鉀（鈉）吸收度紫外分光光度法

當(dāng)前第45頁(yè)\共有103頁(yè)\編于星期六\17點(diǎn)

1.頭孢他啶聚合物的測(cè)定分子排阻色譜法

固定相：葡聚糖凝膠G-10

流動(dòng)相A：3.5%硫酸銨的0.01mol/L磷酸鹽緩沖液

流動(dòng)相B：0.01%十二烷基硫酸鈉

對(duì)照品溶液：頭孢他啶對(duì)照品100μg/ml

當(dāng)前第46頁(yè)\共有103頁(yè)\編于星期六\17點(diǎn)1）系統(tǒng)適用性試驗(yàn)：理論塔板數(shù)和拖尾因子用1mg/ml藍(lán)色葡聚糖2000、流動(dòng)相A測(cè)定；重復(fù)性用對(duì)照品溶液、流動(dòng)相B測(cè)定。

N不低于900，拖尾因子0.75~1.5，峰面積的RSD應(yīng)小于5.0%

2）測(cè)定方法

進(jìn)樣供試液，用流動(dòng)相A；進(jìn)樣對(duì)照液，用流動(dòng)相B。以外標(biāo)法計(jì)算，含頭孢他啶聚合物以頭孢他啶計(jì)不得超過(guò)0.3%。當(dāng)前第47頁(yè)\共有103頁(yè)\編于星期六\17點(diǎn)2.頭孢呋辛酯中有關(guān)物質(zhì)和異構(gòu)體的檢查

固定相：ODS

流動(dòng)相：0.2mol/L磷酸二氫銨-甲醇（62:38）

1）頭孢呋辛酯Δ2-異構(gòu)體的制備：頭孢呋辛酯對(duì)照品+流動(dòng)相頭孢呋辛酯Δ2-異構(gòu)體。

2）系統(tǒng)適用性試驗(yàn)：各異構(gòu)體之間的R>1.5，以頭孢呋辛酯A異構(gòu)體計(jì)算n>1500。當(dāng)前第48頁(yè)\共有103頁(yè)\編于星期六\17點(diǎn)

3）異構(gòu)體：

相對(duì)保留時(shí)間1--被測(cè)物

2--標(biāo)準(zhǔn)物異構(gòu)體相對(duì)保留時(shí)間判斷B異構(gòu)體0.85供試液譜圖中A異構(gòu)體的峰面積A異構(gòu)體1.0與A、B異構(gòu)體峰面積和之比應(yīng)為0.48~0.55。

異構(gòu)體A異構(gòu)體B頭孢呋辛當(dāng)前第49頁(yè)\共有103頁(yè)\編于星期六\17點(diǎn)3.頭孢氨芐中有關(guān)物質(zhì)的檢查-反相TLC法

固定相：活化后的硅膠G板置5%（V/V）正十四烷的正己烷溶液中，展至頂部，涼干展開(kāi)劑：0.1mol/L枸櫞酸-0.2mol/L磷酸氫二鈉-丙酮（120：80：3）

供試液：本品50mg/ml

對(duì)照液（1）：本品0.5mg/ml

對(duì)照液（2）：α-苯甘氨酸0.5mg/ml

對(duì)照液（3）：7-氨基去乙酰氧基頭孢烷酸

0.5mg/ml當(dāng)前第50頁(yè)\共有103頁(yè)\編于星期六\17點(diǎn)結(jié)果判斷：供試液如顯雜質(zhì)斑點(diǎn)，與對(duì)照液（2）（3）位置相同上所的斑點(diǎn)比較，其顏色不得更深；如顯其他雜質(zhì)斑點(diǎn)，與對(duì)照液（1）所顯的主斑點(diǎn)比較，其顏色不得更深。當(dāng)前第51頁(yè)\共有103頁(yè)\編于星期六\17點(diǎn)4.青霉素鈉（鉀）的吸收度檢查：供試液1.80mg/ml，

結(jié)果判斷：A280不得大于0.10當(dāng)前第52頁(yè)\共有103頁(yè)\編于星期六\17點(diǎn)（一）高效液相色譜法原理：利用青霉素類(lèi)抗生素在一定條件下在反相硅膠上的保留行為的不同而實(shí)現(xiàn)高效分離，并與標(biāo)準(zhǔn)品相對(duì)照，而對(duì)其進(jìn)行定量的一種方法。優(yōu)化色譜分析條件（1）Column-CNODSC18C8-Ben（2）mobilephase/flowrate（3）columntemperature（4）detectionwavelength（5）workstationsamplepreparation四、含量測(cè)定-容量法和儀器分析法當(dāng)前第53頁(yè)\共有103頁(yè)\編于星期六\17點(diǎn)實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)（1）色譜峰要達(dá)到較好的分離－基線(xiàn)分離(baseseparation)（2）需要標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)照，用外標(biāo)法定量（3）可同時(shí)測(cè)定多個(gè)組分的含量（4）需要排除制劑中輔料等雜質(zhì)對(duì)測(cè)定的干擾當(dāng)前第54頁(yè)\共有103頁(yè)\編于星期六\17點(diǎn)（二）生物樣本中β-內(nèi)酰胺類(lèi)抗生素的分析血漿尿樣唾液膽汁生物樣本色譜柱：HypersilODSC18(200mm×4.6mm,I.D.5μm)樣品制備：取血漿200μL，加入內(nèi)標(biāo)5μL，再加入HCLO4，窩旋提取InternalstandardIS當(dāng)前第55頁(yè)\共有103頁(yè)\編于星期六\17點(diǎn)當(dāng)前第56頁(yè)\共有103頁(yè)\編于星期六\17點(diǎn)第三節(jié)氨基糖苷類(lèi)抗生素當(dāng)前第57頁(yè)\共有103頁(yè)\編于星期六\17點(diǎn)第三節(jié)氨基糖苷類(lèi)抗生素鏈霉素雙氫鏈霉素新霉素卡那霉素慶大霉素巴龍霉素當(dāng)前第58頁(yè)\共有103頁(yè)\編于星期六\17點(diǎn)鏈霉素鏈霉胍+鏈霉糖+N-甲基-L-葡萄糖胺

苷元糖鏈霉雙糖胺當(dāng)前第59頁(yè)\共有103頁(yè)\編于星期六\17點(diǎn)鏈霉素：鏈霉胍鏈霉糖N-甲基-L-葡萄糖胺當(dāng)前第60頁(yè)\共有103頁(yè)\編于星期六\17點(diǎn)巴龍霉素D-葡萄糖胺+脫氧鏈霉胺+D-核糖+巴龍霉糖巴龍胺苷元巴龍二糖胺

糖當(dāng)前第61頁(yè)\共有103頁(yè)\編于星期六\17點(diǎn)慶大霉素

糖苷元絳紅糖胺+脫氧鏈霉胺+加洛糖胺

糖當(dāng)前第62頁(yè)\共有103頁(yè)\編于星期六\17點(diǎn)絳紅糖胺紫素胺2-脫氧鏈霉胺加洛糖胺N-甲基-3-去氧-4-甲基戊糖胺當(dāng)前第63頁(yè)\共有103頁(yè)\編于星期六\17點(diǎn)慶大霉素C復(fù)合物慶大霉素C1R=HR1、R2=CH3

慶大霉素C2R=R2=H

R1=CH3

慶大霉素C1aR、R1、R2=H

慶大霉素C2aR=CH3R1=R2=H慶大霉素C2bR=R1=HR2=CH3當(dāng)前第64頁(yè)\共有103頁(yè)\編于星期六\17點(diǎn)一、結(jié)構(gòu)與性質(zhì)多與硫酸成鹽鏈霉素

3個(gè)慶大霉素5個(gè)堿性中心堿性（一）水溶性溶解性（二）當(dāng)前第65頁(yè)\共有103頁(yè)\編于星期六\17點(diǎn)鏈霉素

pH5～7.5慶大霉素

pH2～12

穩(wěn)定穩(wěn)定性（四）UV（三）當(dāng)前第66頁(yè)\共有103頁(yè)\編于星期六\17點(diǎn)坂口反應(yīng)N-甲基葡萄糖胺反應(yīng)麥芽酚反應(yīng)當(dāng)前第67頁(yè)\共有103頁(yè)\編于星期六\17點(diǎn)二、

鑒別

茚三酮反應(yīng)（一）△羥基胺結(jié)構(gòu)當(dāng)前第68頁(yè)\共有103頁(yè)\編于星期六\17點(diǎn)

（2）Molisch反應(yīng)具有五碳糖或六碳糖的氨基糖苷類(lèi)抗生素經(jīng)酸水解后，在鹽酸作用下脫水生成糠醛或羥甲基糠醛，加入α–萘酚（紅紫色）或蒽酮（藍(lán)紫色）當(dāng)前第69頁(yè)\共有103頁(yè)\編于星期六\17點(diǎn)紅紫色當(dāng)前第70頁(yè)\共有103頁(yè)\編于星期六\17點(diǎn)

（3）Elson-Morgan反應(yīng)水解產(chǎn)生的N-甲基-L-葡萄糖胺在堿性溶液中與乙酰丙酮合成吡咯衍生物，再與對(duì)二甲氨基苯甲醛的酸性醇溶液反應(yīng)，生成櫻桃紅色縮合物。藍(lán)紫色當(dāng)前第71頁(yè)\共有103頁(yè)\編于星期六\17點(diǎn)

（4）麥芽酚反應(yīng)－鏈霉素的特征反應(yīng)鏈霉素水解得到的鏈霉糖經(jīng)分子重排使環(huán)擴(kuò)大形成六元環(huán)，然后消除N-甲基葡萄糖胺，再消除鏈霉胍，生成α-甲基-β-羥基-γ-吡喃酮（麥芽酚），該化合物與Fe3+在弱酸性溶液中形成紅紫色配位化合物。當(dāng)前第72頁(yè)\共有103頁(yè)\編于星期六\17點(diǎn)紫紅麥芽酚當(dāng)前第73頁(yè)\共有103頁(yè)\編于星期六\17點(diǎn)（5）坂口反應(yīng)－鏈霉胍的特有反應(yīng)向鏈霉素的水解產(chǎn)物鏈霉胍與NaBrO2反應(yīng)得產(chǎn)物1；8-羥基喹啉也和NaBrO2反應(yīng)得產(chǎn)物2。產(chǎn)物1和產(chǎn)物2再相互作用生成橙紅色化合物。當(dāng)前第74頁(yè)\共有103頁(yè)\編于星期六\17點(diǎn)（八）色譜法（1）TLC法：硫酸慶大霉素的鑒別

點(diǎn)樣：供試液：展開(kāi)、涼干、碘蒸氣中顯色

對(duì)照液

判斷：供試液與對(duì)照液所顯斑點(diǎn)的顏色與位置應(yīng)一致。

點(diǎn)樣：供試液

對(duì)照液①：硫酸鏈霉素標(biāo)準(zhǔn)品

對(duì)照液②：硫酸鏈霉素標(biāo)準(zhǔn)品+硫酸新霉素標(biāo)準(zhǔn)品+硫酸卡那霉素標(biāo)準(zhǔn)品

當(dāng)前第75頁(yè)\共有103頁(yè)\編于星期六\17點(diǎn)判定法：供試液中主斑點(diǎn)的位置、顏色、大小應(yīng)與對(duì)照液①相同，

對(duì)照液②應(yīng)顯示分離清晰的3個(gè)斑點(diǎn)否則試驗(yàn)無(wú)效。

（2）HPLC法：硫酸慶大霉素的鑒別

比較供試液與對(duì)照液各組分的保留時(shí)間。當(dāng)前第76頁(yè)\共有103頁(yè)\編于星期六\17點(diǎn)

特殊雜質(zhì)的檢查（1）鏈霉素中鏈霉素B的檢查－TLC法硅膠G板（使用前需活化）、展開(kāi)劑甲苯-冰乙酸-甲醇（50:25:25）、0.2％二羥萘的乙醇－20％硫酸混合液（2）慶大霉素中組分C的檢查－衍生化后HPLC色譜柱、流動(dòng)相、檢測(cè)波長(zhǎng)、衍生化條件的摸索

組分C的毒副作用和耐藥性與慶大霉素有差異，導(dǎo)致產(chǎn)品的效價(jià)和臨床療效當(dāng)前第77頁(yè)\共有103頁(yè)\編于星期六\17點(diǎn)++410.pH吲哚衍生物巰基醋酸鄰苯二醛氨基λmax=330nm衍生化原理

1.當(dāng)前第78頁(yè)\共有103頁(yè)\編于星期六\17點(diǎn)1-烷基硫代-2-烷基異吲哚衍生物當(dāng)前第79頁(yè)\共有103頁(yè)\編于星期六\17點(diǎn)RP－HPLC方法

2.規(guī)定C125~50%C1a15~40%C2a+C220~50%計(jì)算

3.峰面積歸一化法當(dāng)前第80頁(yè)\共有103頁(yè)\編于星期六\17點(diǎn)當(dāng)前第81頁(yè)\共有103頁(yè)\編于星期六\17點(diǎn)四、

含量測(cè)定微生物檢定法各國(guó)藥典主要采用HPLC法常用于體內(nèi)藥分

返回當(dāng)前第82頁(yè)\共有103頁(yè)\編于星期六\17點(diǎn)第四部分：四環(huán)素類(lèi)抗生素TrtracyclinesTC當(dāng)前第83頁(yè)\共有103頁(yè)\編于星期六\17點(diǎn)

理化特性（1）酸堿兩性－C4（二甲氨基）、C10（酚羥基）（2）旋光性－含有手性中心（一般為左旋）（3）紫外吸收特性－具有共軛雙鍵體系（吸收波長(zhǎng)為長(zhǎng)波方向）（4）與金屬離子的配位化合物反應(yīng)－酚羥基和烯醇基（5）不穩(wěn)定性－對(duì)各種外界條件，包括氧化劑、酸、堿，易形成差向、脫水和異四環(huán)素，顏色加深當(dāng)前第84頁(yè)\共有103頁(yè)\編于星期六\17點(diǎn)弱酸性環(huán)境ETC差向四環(huán)素當(dāng)前第85頁(yè)\共有103頁(yè)\編于星期六\17點(diǎn)強(qiáng)酸性環(huán)境ATC脫水四環(huán)素當(dāng)前第86頁(yè)\共有103頁(yè)\編于星期六\17點(diǎn)堿性環(huán)境EATC異四環(huán)素差向脫水四環(huán)素當(dāng)前第87頁(yè)\共有103頁(yè)\編于星期六\17點(diǎn)二、

鑒別試驗(yàn)

濃H2SO4反應(yīng)（一）黃色朱紅色綠藍(lán)深紫色鹽酸多西環(huán)素鹽酸土霉素鹽酸金霉素鹽酸四環(huán)素42SOH鹽酸美他環(huán)素橙紅色當(dāng)前第88頁(yè)\共有103頁(yè)\編于星期六\17點(diǎn)FeCl3反應(yīng)（二）褐色橙褐色深褐色紅棕色鹽酸多西環(huán)素鹽酸土霉素鹽酸金霉素鹽酸四環(huán)素3FeCl當(dāng)前第89頁(yè)\共有103頁(yè)\編于星期六\17點(diǎn)TLC法（三）鹽酸土霉素的鑒別

HPLC法（五）EDTA

克服痕量金屬造成的拖尾現(xiàn)象比較保留時(shí)間當(dāng)前第90頁(yè)\共有103頁(yè)\編于星期六\17點(diǎn)三、

特殊雜質(zhì)檢查

·

4-差向四環(huán)素（ETC）

·脫水四環(huán)素（ATC）

·差向脫水四環(huán)素（EATC）

·鹽酸金霉素（CTC）

有關(guān)物質(zhì)（一）HPLC法（2000版）鹽酸四環(huán)素當(dāng)前第91頁(yè)\共有103頁(yè)\編于星期六\17點(diǎn)四環(huán)素有關(guān)物質(zhì)TLC圖I.供試液(5mg/ml)ETC(0.2mg/ml)

ATC(0.025mg/ml)IV.EATC(0.025mg/ml)CTC(0.1mg/ml)VI.混合液4％0.5％0.5％2％當(dāng)前第92頁(yè)\共有103頁(yè)\編于星期六\17點(diǎn)吸收度（二）nmmax355268l、鹽酸四環(huán)素當(dāng)前第93頁(yè)\共有103頁(yè)\編于星期六\17點(diǎn)雜質(zhì)吸收度

取供試品配成每10mg/ml的溶液至4cm的吸收池中，在530nm處測(cè)定，其吸收度不得超過(guò)0.12。應(yīng)嚴(yán)格控制溫度和時(shí)間當(dāng)前第94頁(yè)\共有103頁(yè)\編于星期六\17點(diǎn)四、

含量測(cè)定HPLC法

鹽酸四環(huán)素的測(cè)定

系統(tǒng)適用性試驗(yàn)：鹽酸四環(huán)素、有關(guān)物質(zhì)及ATC峰間的分離度均應(yīng)符合要求。

定量方法：外標(biāo)法以