03-LCMS定量分析操作步驟V2

一．外標法1．打開Postrun--------再解析窗口2．打開數(shù)據(jù)文件--------鼠標雙擊數(shù)據(jù)文件3．打開方法編輯器---------將MethodView窗口由View切換到Edit4．積分參數(shù)設置---------在Integration窗口進行基本參數(shù)編輯MaxPeak表示每個通道積分的最大峰數(shù)目，MRM通道中一般設置1；Width表示積分的寬度，一般峰形很窄時，可以適當改小（例如2sec），峰形很寬時，可以適當改大（例如10sec，15sec）；Slope、Drift、T.DBL值采用Auto（Area）模式，不能進行設置，如需設置，需要更改為Advanced；Min.表示設置最小峰面積的閾域值，低于此面積不進行積分。平滑參數(shù)設置方面，通常采用Standard，Counts1，Width1，如在色譜峰毛刺較多，需要適當增大平滑參數(shù)，例如Counts2，Width2。如果MRM通道為多個通道，對每個通道的積分參數(shù)進行編輯，需要將通道狀態(tài)由No（UseDefault）改為Yes，此時這個MRM通道可進行積分參數(shù)的單獨設定，并且可單擊Program按鈕，在彈出的對話框中可進行手動積分，并且可以進行積分關閉和開啟（IntegrationIntergrationOff/On）。5．Identification選項卡標簽用于對保留時間偏差進行定義，此時務必將右邊的UsereferenceIons勾選去除。Identification窗口可以使用Window或者Band，指目標化合物的識別窗口，一般保留時間比較穩(wěn)定，5%的識別窗口即可使用，若色譜峰漂移飄移，需要根據(jù)需要將范圍放寬。注：如果需要設定參比離子定性功能，請確定UseReferenceIons勾選上。6．Quantitative選項卡標簽用于定義定量計算的參數(shù)，例如此處用外標法（ExternalStandardStantard），峰面積計算，校準曲線的點數(shù)（level，即配制的標準品的濃度個數(shù)），曲線的類型等。Zero表示是否強制過原點，建議通過回歸后的標準曲線相關系數(shù)及標準點回讀值準確度（Accuracy%）選擇合適的方式；WeightingMethod表示是否需要使用權重，通常使用1/C和1/C^2，也是通過相關系數(shù)及標準點回讀值準確度來確認。7．編輯Compound表1）輸入化合物的名稱并選擇m/z注：如果無法選出m/z，請確認Event顯示的數(shù)字與采集方法中該化合物的Event號碼一致，如果不一致，請手動修改序號，保證一致。2）鼠標左擊保留時間單元格，然后在ChromatogramView窗口中的色譜圖上，左擊化合物A的色譜峰的峰頂，則保留時間自動添加到Compoundtable中。輸入化合物的濃度參考1）-3）將其他化合物的信息輸入進去（注意??！每個化合物都有自己的Event，務必將其相應的Event輸入正確）所有信息都填寫完畢后，點擊View，應用并保存數(shù)據(jù)。另存方法為數(shù)據(jù)后處理方法，將方法名字可設置為區(qū)別于采集方法的文件名。打開Postrun-------瀏覽器窗口9．選擇助手欄中Main-------QuantBrowserBrower,窗口如下：10．打開方法文件，選擇前面編輯好的方法文件或者已經(jīng)編輯好的定量方法文件；若為初次打開的定量方法文件，打開的窗口如下圖3所圖3,4在圖中沒有標注示；如果此方法文件在瀏覽器窗口打開過，并且定義了標準曲線后保存，再次打開定量方法時，窗口如圖4所示，方法中將包含標準曲線，如果直接使用該標準曲線，后續(xù)直接將數(shù)據(jù)拖入，如果需要更換標準曲線，將QuantitativeResultsView窗口的所有行選中，鼠標右鍵Remove即可。圖3,4在圖中沒有標注將數(shù)據(jù)文件選中并拖入QuantitativeResultsView窗口編輯QuantitativeResultsQuantativeReasultsView窗口參數(shù)。將標準品的Level，濃度從小到大依次填充為1,2,3,4……2）將標準樣品的SampleType修改為standard(Calc.point)，校準曲線自動生成。如果沒有找到SampleType，鼠標右擊，選擇Tablestyle，再在雙擊隱藏項目中的SampleType，OK即可?？稍跇饲鷪D上鼠標右鍵查看CalibrationInformation，可以看到標準曲線方程、相關系數(shù)等。查看標準曲線回讀值的準確度，如下圖，如果有標準點準確度超過接受范圍，可以將Cal.Point上的勾去掉，代表該濃度點不參與回歸。3）如果需要設定Control樣品，將質(zhì)控樣品類型修改為Control，設定對應的Level水平，可由軟件直接計算Control樣品的準確度。

二．內(nèi)標法1.打開Postrun-----再解析窗口2.2）打開數(shù)據(jù)文件--------鼠標雙擊數(shù)據(jù)文件3．打開方法編輯器---------將MethodView窗口由View切換到Edit4．積分參數(shù)設置---------在Integration窗口進行基本參數(shù)編輯MaxPeak表示每個通道積分的最大峰數(shù)目，MRM通道中一般設置1；Width表示積分的寬度，一般峰形很窄時，可以適當改?。ɡ?sec），峰形很寬時，可以適當改大（例如10sec，15sec）；Slope、Drift、T.DBL值采用Auto（Area）模式，不能進行設置，如需設置，需要更改為Advanced；Min.表示設置最小峰面積的閾域值，低于此面積不進行積分。平滑參數(shù)設置方面，通常采用Standard，Counts1，Width1，如在色譜峰毛刺較多，需要適當增大平滑參數(shù)，例如Counts2，Width2。如果MRM通道為多個通道，對每個通道的積分參數(shù)進行編輯，需要將通道狀態(tài)由No（UseDefault）改為Yes，此時這個MRM通道可進行積分參數(shù)的單獨設定，并且可單擊Program按鈕，在彈出的對話框中可進行手動積分，并且可以進行積分關閉和開啟。5．Identification標簽用于對保留時間偏差進行定義，此時務必將右邊的UsereferenceIons勾選去除。Identification窗口可以使用Window或者Band，指目標化合物的識別窗口，一般保留時間比較穩(wěn)定，5%的識別窗口即可使用，若色譜峰漂移飄移，需要根據(jù)需要將范圍放寬。注：如果需要設定參比離子定性功能，請確定UseReferenceIons勾溝選上。6．Quantitative標簽用于定義定量計算的參數(shù)，例如此處用內(nèi)標法（InternalStandardStantard），峰面積計算，校準曲線的點數(shù)（Level，即配制的標準品的德濃度個數(shù)），曲線的類型等。Zero表示是否強制過原點，建議通過回歸后的標準曲線相關系數(shù)及標準點回讀值準確度選擇合適的方式；WeightingMethod表示是否需要使用權重，通常使用1/C和1/C^2，也是通過相關系數(shù)及標準點回讀值準確度來確認。7．編輯Compound表1）輸入化合物的名稱并選擇m/z注：如果無法選出m/z，請確認Event顯示的數(shù)字與采集方法中該化合物的Event號碼一致，如果不一致，請手動修改序號，保證一致。對于內(nèi)標物質(zhì)（在此假設為化合物B為內(nèi)標物質(zhì)，將B的Type修改為ISTD，濃度均設為1）注意?。STDGroup：當存在多個內(nèi)標物質(zhì)的時候，在此將內(nèi)標物質(zhì)和內(nèi)標物質(zhì)進行分組，假設化合物B是化合物A的內(nèi)標,化合物D為化合物C的內(nèi)標，則化合物A,B的ISTDGroup設為1，C和D的設為2.2）鼠標左擊保留時間單元格，然后在ChromatogramView窗口中的色譜圖上，左擊化合物GA8的色譜峰的峰頂，則保留時間自動添加到Compoundtable中。3)輸入化合物的濃度，內(nèi)標濃度輸入14)參考1）-3）將其他化合物的信息輸入進去（注意?。∶總€化合物都有自己的Event，務必將其相應的Event輸入正確）5)所有信息都填寫完畢后，點擊View，應用并保存數(shù)據(jù)。6)另存方法為數(shù)據(jù)后處理方法，將方法名字可設置為區(qū)別于采集方法的文件名。8.打開postrun-------瀏覽器窗口9．選擇助手欄中Main-------QuantBrowserBrower,窗口如下：10．打開方法文件，選擇前面編輯好的方法文件或者已經(jīng)編輯好的定量方法文件；若為初次打開的定量方法文件，打開的窗口如下圖3所示；如果此方法文件在瀏覽器窗口打開過，并且定義了標準曲線后保存，再次打開定量方法時，窗口如圖4所示，方法中將包含標準曲線，如果直接使用該標準曲線，后續(xù)直接將數(shù)據(jù)拖入，如果需要更換標準曲線，將QuantitativeResultsView窗口的所有行選中，鼠標右鍵Remove即可。11.將數(shù)據(jù)文件選中并拖入QuantitativeResultsView窗口12.編輯QuantativeReasultsView窗口參數(shù)。將標準品的Level，濃度從小到大依次填充為1,2,3,4……2）將標準樣品的SampleType修改為Standard(Calc.point)，校準曲線自動生成。如果沒有找到SampleType，鼠標右擊，選擇Tablestyle，在雙擊隱藏項目中的S