藥物定量分析詳解演示文稿

藥物定量分析詳解演示文稿當(dāng)前第1頁\共有90頁\編于星期日\14點(diǎn)（優(yōu)選）藥物定量分析當(dāng)前第2頁\共有90頁\編于星期日\14點(diǎn)一．有機(jī)藥物中金屬或鹵素的結(jié)合狀態(tài)二．不經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法三．經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法當(dāng)前第3頁\共有90頁\編于星期日\14點(diǎn)1．含金屬的有機(jī)藥物金屬原子不直接與碳原子相連

----結(jié)合不牢固有機(jī)酸及酚的金屬鹽或配位化合物。金屬原子直接與碳原子以共價(jià)鍵相連

----結(jié)合牢固

有機(jī)金屬藥物一．有機(jī)藥物中金屬或鹵素的結(jié)合狀態(tài)當(dāng)前第4頁\共有90頁\編于星期日\14點(diǎn)2．含鹵素的有機(jī)藥物鹵素和芳環(huán)相連：

結(jié)合牢固鹵素和脂肪鏈的碳原子相連：

結(jié)合不牢固當(dāng)前第5頁\共有90頁\編于星期日\14點(diǎn)（一）直接測定法適用于：水溶液中可以電離的藥物二．不經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法金屬原子不直接與碳原子相連的含金屬藥物某些C-M鍵結(jié)合不牢固的有機(jī)金屬藥物如富馬酸亞鐵的含測當(dāng)前第6頁\共有90頁\編于星期日\14點(diǎn)直接回流后測定法：適用于鹵素原子結(jié)合不牢固的含鹵素有機(jī)藥物

三氯叔丁醇的含測/六氯對(duì)二甲苯硫酸水解后測定法：

適用于金屬原子不直接與碳原子相連的含金屬的有機(jī)藥物。

硬脂酸鎂的含測（二）經(jīng)水解后測定法當(dāng)前第7頁\共有90頁\編于星期日\14點(diǎn)1．堿性還原后測定適用于鹵素原子和芳環(huán)結(jié)合的含鹵素有機(jī)藥物。生成的無機(jī)鹵化物用銀量法測定.2．酸性還原后測定同上3．利用藥物中可游離的金屬離子的氧化性測定含量含Sb5+藥物，含F(xiàn)e3+藥物（三）經(jīng)氧化還原后測定法當(dāng)前第8頁\共有90頁\編于星期日\14點(diǎn)

適用于結(jié)合狀態(tài)牢固的有機(jī)金屬藥物和含鹵素有機(jī)藥物（一）濕法破壞利用強(qiáng)氧化劑將有機(jī)金屬轉(zhuǎn)變成金屬離子。1．硝酸-高氯酸法適用于血、尿、組織等生物樣品的破壞。破壞后的金屬離子以高價(jià)態(tài)存在。對(duì)含氮雜環(huán)藥物的破壞不夠完全。三．經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法當(dāng)前第9頁\共有90頁\編于星期日\14點(diǎn)2．硝酸-硫酸法適用于大多數(shù)有機(jī)藥物的破壞，但不適用于含堿土金屬有機(jī)藥物的破壞。（生成硫酸鹽沉淀）破壞后的金屬離子以高價(jià)態(tài)存在。３．硫酸-硫酸鹽法常用于含砷或銻有機(jī)藥物的破壞，得到低價(jià)態(tài)的三價(jià)砷或銻離子。當(dāng)前第10頁\共有90頁\編于星期日\14點(diǎn)（二）干法破壞

----將有機(jī)物灼燒灰化適用于濕法不易破壞完全的有機(jī)藥物及某些不能用硫酸破壞的有機(jī)藥物不適用于含易揮發(fā)金屬有機(jī)藥物的破壞（砷、汞）常加入無水碳酸鈉或輕質(zhì)氧化鎂助灰化當(dāng)前第11頁\共有90頁\編于星期日\14點(diǎn)

-----是一種能將有機(jī)化合物中的待測元素定量分解成離子的快速有機(jī)破壞方法應(yīng)注意的有關(guān)問題：氧氣要充足，確保燃燒完全燃燒產(chǎn)生的煙霧應(yīng)被完全定量吸收（三）氧瓶燃燒法

oxygenflaskcombustionmethod當(dāng)前第12頁\共有90頁\編于星期日\14點(diǎn)樣品點(diǎn)燃放入燃燒瓶后，應(yīng)用手按緊瓶塞（最好用少量水封閉瓶口），直到火焰熄滅，以防燃燒產(chǎn)生的熱氣將瓶塞頂動(dòng)；測定氟化物，應(yīng)用石英燃燒瓶。生成的HF腐蝕玻璃，且與玻璃中的硼生成BF3(BF3在水溶液中僅部分解離成氟離子，使氟的測定結(jié)果偏低)；燃燒瓶洗凈；防爆。當(dāng)前第13頁\共有90頁\編于星期日\14點(diǎn)當(dāng)前第14頁\共有90頁\編于星期日\14點(diǎn)第二節(jié)

定量分析方法特點(diǎn)當(dāng)前第15頁\共有90頁\編于星期日\14點(diǎn)一．容量分析法二．光譜分析法三．色譜分析法當(dāng)前第16頁\共有90頁\編于星期日\14點(diǎn)一．容量分析法1．方法：2．關(guān)鍵：

準(zhǔn)確地確定等當(dāng)點(diǎn)3．滴定誤差：滴定終點(diǎn)與等當(dāng)點(diǎn)之間的誤差

將已知濃度的滴定液由滴定管加到待測藥物的溶液中，直到所加滴定液與被測藥物按化學(xué)計(jì)量反應(yīng)完全為止，然后根據(jù)滴定液的濃度和消耗的體積，就可以計(jì)算出被測藥物的含量滴定液與被測藥物完全作用，反應(yīng)達(dá)到化學(xué)計(jì)量點(diǎn)即等當(dāng)點(diǎn)當(dāng)前第17頁\共有90頁\編于星期日\14點(diǎn)4．特點(diǎn)：簡便，快速，精密、準(zhǔn)確專屬性、靈敏度較差

常用于測定高含量或中含量組分

1%以上的含量當(dāng)前第18頁\共有90頁\編于星期日\14點(diǎn)5．計(jì)算問題滴定度T：指每ml某摩爾濃度的滴定液所相當(dāng)?shù)谋粶y藥物的重量

aA+bB?cC+dDT=M×(b/a)×B（mg/ml）

M:滴定液的毫摩爾濃度(mmol/ml)；

B:被測藥物的毫摩爾質(zhì)量(mg/mmol)當(dāng)前第19頁\共有90頁\編于星期日\14點(diǎn)百分含量計(jì)算：直接滴定：含量%=F=滴定液的實(shí)際摩爾濃度/滴定液的規(guī)定摩爾濃度當(dāng)前第20頁\共有90頁\編于星期日\14點(diǎn)剩余滴定（做空白實(shí)驗(yàn)）：先加入定量過量的滴定液A,當(dāng)與被測藥物反應(yīng)完全后,再用另一滴定液B回滴剩余的滴定液A

含量%=

V0：空白試驗(yàn)消耗滴定液B的體積

VB：樣品測定試驗(yàn)消耗滴定液B的體積當(dāng)前第21頁\共有90頁\編于星期日\14點(diǎn)二．光譜分析法1．Lambert-Beer定律ε：摩爾吸收系數(shù)：百分吸收系數(shù)

ε=×(M/10)（一）UV-Vis分光光度法當(dāng)前第22頁\共有90頁\編于星期日\14點(diǎn)2．儀器校正和檢定波長校正：儀器使用前校正吸收度準(zhǔn)確度的檢定：用重鉻酸鉀的硫酸溶液檢定雜散光的檢查：當(dāng)前第23頁\共有90頁\編于星期日\14點(diǎn)3.對(duì)溶劑的要求溶劑在所選波長附近的吸收度應(yīng)不超過一定值空氣為空白當(dāng)前第24頁\共有90頁\編于星期日\14點(diǎn)4．測定法核對(duì):

供試品的實(shí)際吸收峰波長是否與藥典給出的波長一致(±1nm)

如果不一致，可能與試樣的真?zhèn)?、純度及儀器波長的準(zhǔn)確度有關(guān).當(dāng)前第25頁\共有90頁\編于星期日\14點(diǎn)選擇合適的定量方法測定校正曲線法對(duì)照法吸收系數(shù)法:

儀器應(yīng)仔細(xì)校對(duì)、檢定計(jì)算分光光度法以配制供試品溶液的同批溶劑為空白當(dāng)前第26頁\共有90頁\編于星期日\14點(diǎn)1．特點(diǎn)應(yīng)在低濃度溶液中進(jìn)行

高濃度：產(chǎn)生內(nèi)濾光效應(yīng)和自吸收現(xiàn)象線性偏離內(nèi)濾光效應(yīng)：溶液中存在能吸收激發(fā)光和熒光的物質(zhì)，使熒光強(qiáng)度減少。干擾多，需做空白試驗(yàn)（二）熒光分析法當(dāng)前第27頁\共有90頁\編于星期日\14點(diǎn)校正儀器靈敏度：供試品對(duì)激發(fā)光穩(wěn)定：可用樣品的對(duì)照品溶液校正供試品對(duì)激發(fā)光不穩(wěn)定：

采用發(fā)射光譜與供試品近似的物質(zhì)校正藍(lán)色熒光---硫酸奎寧的稀硫酸溶液黃綠色熒光---熒光素鈉水溶液紅色熒光---羅丹明B水溶液當(dāng)前第28頁\共有90頁\編于星期日\14點(diǎn)2．含量測定

Cx=×Cs

熒光強(qiáng)度與藥物濃度成正比關(guān)系當(dāng)前第29頁\共有90頁\編于星期日\14點(diǎn)1．HPLC法最常用固定相：

octadecylsilane-bondedsilicagel

十八烷基硅烷鍵合硅膠（ODS或C18）柱溫、檢測器：

室溫、紫外檢測器三.色譜分析法當(dāng)前第30頁\共有90頁\編于星期日\14點(diǎn)藥典正文中各品種項(xiàng)下規(guī)定的條件除固定相種類、流動(dòng)相組分和檢測器類型不得任意改變外，其余條件如色譜柱內(nèi)經(jīng)、長度、固定相牌號(hào)、流動(dòng)相流速及各組分比例等可適當(dāng)改變，以適應(yīng)具體樣品品種及達(dá)到系統(tǒng)適用性試驗(yàn)的要求。當(dāng)前第31頁\共有90頁\編于星期日\14點(diǎn)

系統(tǒng)適用性試驗(yàn)色譜柱的理論塔板數(shù)分離度重復(fù)性拖尾因子當(dāng)前第32頁\共有90頁\編于星期日\14點(diǎn)色譜柱的理論塔板數(shù)N=5.54(tR/W1/2)2=16(t/W)2

改變柱長、內(nèi)徑、固定相牌號(hào)、固定相顆粒粒徑等

當(dāng)前第33頁\共有90頁\編于星期日\14點(diǎn)定量峰與其它峰或內(nèi)標(biāo)峰之間的分離度R應(yīng)大于1.5分離度當(dāng)前第34頁\共有90頁\編于星期日\14點(diǎn)取各品種項(xiàng)下的對(duì)照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣5次，其峰面積測量值的RSD不應(yīng)大于2.0%配制相當(dāng)于80%，100%，120%的對(duì)照品溶液，加入規(guī)定量的內(nèi)標(biāo)溶液，配成3種不同濃度的溶液，分別進(jìn)樣3次，計(jì)算平均校正因子，其RSD不應(yīng)大于2.0%重復(fù)性當(dāng)前第35頁\共有90頁\編于星期日\14點(diǎn)

T=W0.05h/2AW0.05h：0.05峰高處的峰寬

A：峰前沿與色譜峰頂點(diǎn)至基線的垂線之間的距離峰高法定量：T應(yīng)在之間拖尾因子當(dāng)前第36頁\共有90頁\編于星期日\14點(diǎn)藥物分析中常用的HPLC定量方法：內(nèi)標(biāo)法：

內(nèi)標(biāo)校正曲線法內(nèi)標(biāo)一點(diǎn)法：對(duì)照法內(nèi)標(biāo)校正因子法外標(biāo)法：

標(biāo)準(zhǔn)曲線法外標(biāo)一點(diǎn)法：對(duì)照法當(dāng)前第37頁\共有90頁\編于星期日\14點(diǎn)2．氣相色譜法藥典正文中各品種項(xiàng)下規(guī)定的條件除固定液品種、檢測器類型及特殊指定的色譜柱材料不得任意改變外，其余條件如色譜柱內(nèi)經(jīng)、長度、載體牌號(hào)、載氣流速等可適當(dāng)改變，以適應(yīng)具體品種及系統(tǒng)適用性試驗(yàn)的要求。當(dāng)前第38頁\共有90頁\編于星期日\14點(diǎn)系統(tǒng)適用性試驗(yàn)：同HPLC定量方法：手動(dòng)進(jìn)樣：內(nèi)標(biāo)法消除較大的進(jìn)樣誤差留針時(shí)間、氣化室高溫自動(dòng)進(jìn)樣：內(nèi)標(biāo)法、外標(biāo)法頂空進(jìn)樣：標(biāo)準(zhǔn)溶液加入法(內(nèi)加法)

消除基質(zhì)效應(yīng)的影響供試品和對(duì)照品處于不完全相同的基質(zhì)中當(dāng)前第39頁\共有90頁\編于星期日\14點(diǎn)標(biāo)準(zhǔn)溶液加入法精密稱取待測成分對(duì)照品適量，配制成適當(dāng)濃度的對(duì)照品溶液，取一定量，精密加入到供試品溶液中，根據(jù)外標(biāo)法或內(nèi)標(biāo)法測定主成分含量，再扣除加入的對(duì)照品溶液含量，即得供試品溶液中主成分含量。當(dāng)前第40頁\共有90頁\編于星期日\14點(diǎn)外標(biāo)法按下述公式進(jìn)行計(jì)算：加入對(duì)照品溶液前、后校正因子應(yīng)相同，即：Cx和Ax：供試品中組分X的濃度和色譜峰面積；△Cx：所加入的已知濃度的待測組分對(duì)照品的濃度；Ais：加入對(duì)照品后組分X的色譜峰面積。當(dāng)前第41頁\共有90頁\編于星期日\14點(diǎn)第三節(jié)

藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法

驗(yàn)證當(dāng)前第42頁\共有90頁\編于星期日\14點(diǎn)

需驗(yàn)證的分析項(xiàng)目：鑒別試驗(yàn)雜質(zhì)限度或定量檢查原料藥或制劑中有效成分的含量測定制劑中其它成分的含量測定溶出度、釋放度測定方法當(dāng)前第43頁\共有90頁\編于星期日\14點(diǎn)

需驗(yàn)證的內(nèi)容：準(zhǔn)確度精密度專屬性檢測限定量限線性線性范圍耐用性當(dāng)前第44頁\共有90頁\編于星期日\14點(diǎn)一．準(zhǔn)確度高、中、低三個(gè)濃度，每個(gè)濃度3份1．原料藥：

用已知純度的對(duì)照品測定。當(dāng)前第45頁\共有90頁\編于星期日\14點(diǎn)2．制劑：用含已知量被測物（對(duì)照品）的各組分混合物進(jìn)行測定－－回收率若不能得到制劑的全部組分，可向已測定含量的制劑中加入已知量待測物（對(duì)照品）進(jìn)行測定。

－－加樣回收率當(dāng)前第46頁\共有90頁\編于星期日\14點(diǎn)1．表示方法

標(biāo)準(zhǔn)偏差SD

相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差

relativestandarddeviationRSD

即變異系數(shù)

coefficientofvariationCV二．精密度當(dāng)前第47頁\共有90頁\編于星期日\14點(diǎn)2.重復(fù)性在相同條件下，由同一個(gè)分析人員測定同一種樣品所得結(jié)果的精密度。

日內(nèi)精密度測定高、中、低3個(gè)不同濃度的樣品，每個(gè)濃度測定3-5份樣本?；蛞环N濃度的溶液連續(xù)測定6次。當(dāng)前第48頁\共有90頁\編于星期日\14點(diǎn)3．中間精密度在同一個(gè)實(shí)驗(yàn)室、不同時(shí)間由不同分析人員用不同儀器測定結(jié)果的精密度。常做日間精密度

由于測定持續(xù)時(shí)間長，往往在同一天內(nèi)不能完成，故樣品測定時(shí)使用的儀器性能、試劑、標(biāo)準(zhǔn)曲線及環(huán)境條件等都可能發(fā)生變化，而使測定結(jié)果發(fā)生變化。當(dāng)前第49頁\共有90頁\編于星期日\14點(diǎn)４．重現(xiàn)性在不同實(shí)驗(yàn)室，由不同分析人員測定結(jié)果的精密度。若分析方法作為法定標(biāo)準(zhǔn)，應(yīng)做當(dāng)前第50頁\共有90頁\編于星期日\14點(diǎn)指樣品中有其他成分存在時(shí)，分析方法能準(zhǔn)確測定出待測藥物的特性鑒別、雜質(zhì)檢查和含量測定：均考察專屬性對(duì)鑒別反應(yīng)：不含被測藥物的樣品，應(yīng)呈負(fù)反應(yīng)三．專屬性當(dāng)前第51頁\共有90頁\編于星期日\14點(diǎn)對(duì)雜質(zhì)檢查和含量測定：待測成分應(yīng)能與其它成分分離給出代表性圖譜，說明專屬性若無雜質(zhì)和降解產(chǎn)物，可用強(qiáng)光照射、高溫、高濕、酸破壞、堿破壞、氧化破壞的方法，產(chǎn)生雜質(zhì)和降解產(chǎn)物．當(dāng)前第52頁\共有90頁\編于星期日\14點(diǎn)指待測物能被檢測出的最低濃度或量。反映：分析方法與儀器的靈敏度、儀器的噪音大小、

樣品經(jīng)處理后空白值的高低。

四．檢測限

limitofdetection,LOD當(dāng)前第53頁\共有90頁\編于星期日\14點(diǎn)１．UV-Vis和熒光分光光度法做多次空白試驗(yàn)，求背景響應(yīng)值的標(biāo)準(zhǔn)偏差SD，則:LOD=3SD有時(shí)用校正系數(shù)進(jìn)行校正：UV-Vis：

LOD=f×3SD=（C樣

/A樣）×3SD熒光分析：

LOD=f×3SD=[C樣

/（F樣-F空）]×3SD當(dāng)前第54頁\共有90頁\編于星期日\14點(diǎn)2．色譜法

S/N=2或3時(shí)的對(duì)應(yīng)濃度或注入儀器的量當(dāng)前第55頁\共有90頁\編于星期日\14點(diǎn)指待測物能被定量測定的最低濃度或量。能滿足一定準(zhǔn)確度和精密度的要求S/N=10時(shí)，待測物濃度或注入儀器的量五．定量限limitofquantitation,LOQ當(dāng)前第56頁\共有90頁\編于星期日\14點(diǎn)在一定濃度范圍內(nèi)，測試結(jié)果與樣品中待測物濃度或量直接呈正比關(guān)系的程度。UV法：C~A色譜法：C~HorA數(shù)據(jù)要求：回歸方程、相關(guān)系數(shù)和線性圖。至少5個(gè)點(diǎn)六．線性當(dāng)前第57頁\共有90頁\編于星期日\14點(diǎn)達(dá)到一定精密度、準(zhǔn)確度和線性，測試方法適用的高、低限濃度或量的區(qū)間。通常指線性范圍七．范圍當(dāng)前第58頁\共有90頁\編于星期日\14點(diǎn)

當(dāng)測定條件有小的變動(dòng)時(shí)，測定結(jié)果不受影響的承受程度。常見變動(dòng)因素：被測溶液的穩(wěn)定性；樣品提取次數(shù)、時(shí)間等；HPLC中：流動(dòng)相組成和pH，色譜柱的廠牌、批號(hào)，柱溫，流動(dòng)相流速等；GC中：色譜柱的廠牌、批號(hào)，固定相和載體的類型，柱溫等。八．耐用性當(dāng)前第59頁\共有90頁\編于星期日\14點(diǎn)

驗(yàn)證分析方法的具體內(nèi)容

鑒別雜質(zhì)檢查含量測定及溶出度測定定量限度準(zhǔn)確度－＋－＋重復(fù)性精密度中間精密度－－＋＋*－－＋＋*專屬性＋＋＋＋檢測限－－**＋－定量限－＋－－線性－＋－＋范圍－＋－＋耐用性＋＋＋＋*已有重現(xiàn)性驗(yàn)證，則不需**視具體情況予以驗(yàn)證當(dāng)前第60頁\共有90頁\編于星期日\14點(diǎn)第四節(jié)

生物樣品分析概述

當(dāng)前第61頁\共有90頁\編于星期日\14點(diǎn)一．常用樣品的種類、采集和貯藏二．生物樣品分析預(yù)處理技術(shù)三．定量分析方法驗(yàn)證當(dāng)前第62頁\共有90頁\編于星期日\14點(diǎn)常用品種：血液、尿液、唾液其次：可用乳汁、淚液、腦脊液、膽汁等。（一）生物樣品一．常用樣品的種類、采集和貯藏當(dāng)前第63頁\共有90頁\編于星期日\14點(diǎn)

1．血樣

血細(xì)胞血漿（plasma）血小板血清（serum）血細(xì)胞測定血樣中平均分布于細(xì)胞內(nèi)和細(xì)胞外的藥濃抗凝自然全血（加抗凝劑）血液當(dāng)前第64頁\共有90頁\編于星期日\14點(diǎn)采樣與保存采樣：保存：血樣（血漿、血清）及時(shí)分離→冷藏或-70℃，有時(shí)加入穩(wěn)定劑

穩(wěn)定劑：酶抑制劑（NaF、三氯醋酸），抗氧劑解凍方法：

當(dāng)前第65頁\共有90頁\編于星期日\14點(diǎn)2．尿樣目的：藥物劑量回收，藥物清除率，藥物代謝和生物利用度特點(diǎn)：濃度高，易于收集，體內(nèi)代謝研究，應(yīng)作水解處理保存：立即測定（尿中含水、無機(jī)鹽、尿素等）；4℃保存；放置較長時(shí)間需冷凍；加入防腐劑（1%甲苯；飽和氯仿）或改變pH當(dāng)前第66頁\共有90頁\編于星期日\14點(diǎn)1、預(yù)處理的目的存在形式的多樣性：游離、結(jié)合物、代謝物濃度低，雜質(zhì)多出現(xiàn)渾濁和沉淀影響色譜柱壽命二．生物樣品分析預(yù)處理技術(shù)當(dāng)前第67頁\共有90頁\編于星期日\14點(diǎn)藥物理化性質(zhì)：

pKa親脂性揮發(fā)性溶解度穩(wěn)定性光譜特征與蛋白的結(jié)合程度濃度范圍：

測定目的：定性定量母體代謝生物樣品的種類：樣品處理與分析方法的選擇

①專一性②靈敏性2、預(yù)處理方法選擇的一般原則當(dāng)前第68頁\共有90頁\編于星期日\14點(diǎn)3、生物樣品中蛋白質(zhì)的處理（1）目的：去除蛋白質(zhì)，使結(jié)合型藥物和代謝物釋放出來，便于測定總濃度；預(yù)防提取過程中蛋白質(zhì)發(fā)泡，減少乳化的形成；保護(hù)儀器性能。當(dāng)前第69頁\共有90頁\編于星期日\14點(diǎn)（2）方法：蛋白質(zhì)沉淀劑法與水相混溶的有機(jī)溶劑：乙腈，甲醇，乙醇，丙酮，THF中性鹽：飽和硫酸銨，硫酸鈉，磷酸鹽，

NaCL，

枸櫞酸鹽強(qiáng)酸：三氯醋酸，高氯酸，硫酸-鎢酸混合液含鋅鹽和酮鹽的沉淀劑：

CuSO4-Na2WO4,ZnSO4-NaOH當(dāng)前第70頁\共有90頁\編于星期日\14點(diǎn)酶解法適用于遇酸不穩(wěn)定及與蛋白質(zhì)結(jié)合牢固的藥物常用蛋白水解酶中的枯草菌溶素（細(xì)菌性堿性蛋白分解酶）微孔濾膜法用于測定樣品中的游離藥物或代謝物與蛋白質(zhì)結(jié)合的藥物不能濾過。當(dāng)前第71頁\共有90頁\編于星期日\14點(diǎn)4、生物樣品中綴合物的水解（1）目的：使綴合物中的藥物或代謝物游離，便于用有機(jī)溶劑提取綴合物的極性較大當(dāng)前第72頁\共有90頁\編于星期日\14點(diǎn)（2）方法酸水解法：鹽酸酶解法：

β-葡萄糖醛酸苷酶，芳基硫酸酯酶，二者的混合酶；

溶劑解某些藥物的硫酸酯，往往加入提取溶劑時(shí)發(fā)生分解，同時(shí)提取到有機(jī)溶劑中當(dāng)前第73頁\共有90頁\編于星期日\14點(diǎn)5、生物樣品中藥物或代謝物的萃取液-液提取提取率在有機(jī)相與水相中溶解度的比值；一般少量多次，提取率高對(duì)生物樣品：樣品量少、樣品數(shù)多、藥物含量低，一般一次萃?。ㄖ炼鄡纱危?，提取率一般應(yīng)>50%

當(dāng)前第74頁\共有90頁\編于星期日\14點(diǎn)影響提取率的因素水相pH：堿性藥物在堿性pH，酸性藥物在酸性pH提取溶劑：相似相溶原理。沸點(diǎn)低，不影響檢測，性質(zhì)穩(wěn)定，不起化學(xué)反應(yīng)離子強(qiáng)度：加入中性鹽，增加離子強(qiáng)度，與水結(jié)合強(qiáng)，便于有機(jī)溶劑提取提取次數(shù)：提取-反提取當(dāng)前第75頁\共有90頁\編于星期日\14點(diǎn)離子對(duì)提取適用于離子性特強(qiáng)，水溶性極大的藥物藥物含陰離子：-COO--SO3-

離子對(duì)試劑：烷基季銨鹽藥物含陽離子：-NH+

離子對(duì)試劑：烷基或芳基磺酸鹽

當(dāng)前第76頁\共有90頁\編于星期日\14點(diǎn)乳化問題預(yù)防措施：

①輕緩振搖；

②不溶物應(yīng)過濾掉

③避免在高pH條件下，從水中提取藥物

④避免使用易發(fā)生乳化的溶劑對(duì)：如水-苯，水-己烷

⑤萃取前水相中加入少量NaCl

當(dāng)前第77頁\共有90頁\編于星期日\14點(diǎn)乳化問題破乳方法：

①機(jī)械法

②加乙醇或少量高級(jí)脂肪醇,改變表面張力

③改善混合溶劑比例，增加分散相的百分?jǐn)?shù)當(dāng)前第78頁\共有90頁\編于星期日\14點(diǎn)液-固提取操作步驟：①固相柱選擇：依據(jù)樣品體積、被測物的量及理化性質(zhì)②固相柱處理反相C18：固定相的6-10倍體積甲醇洗柱，使溶劑化；6-10倍緩沖液沖洗達(dá)分離狀態(tài)③上樣④分離：用適當(dāng)?shù)娜跞軇┫礈煜慈ルs質(zhì)，通N2干燥固相柱⑤洗脫待測物：改變洗脫劑pH或極性當(dāng)前第79頁\共有90頁\編于星期日\14點(diǎn)影響液-固提取的因素流速

上樣流速快：按觸不充分，樣品流失,回收率低裝樣：過載樣品突破性試驗(yàn)：一系列體積的已知濃度樣品液上樣，洗脫后，求回收百分率；當(dāng)回收率下降時(shí)為過載