細(xì)胞分選技術(shù)

細(xì)胞分選技術(shù)第一頁(yè)，共三十五頁(yè)，編輯于2023年，星期三細(xì)胞分選和基本原理細(xì)胞分選是把一種細(xì)胞從多細(xì)胞樣品中分離出來(lái)用抗體標(biāo)記細(xì)胞，同時(shí)被用的抗體被螢光標(biāo)記或連接免疫磁珠或其它利用螢光和免疫磁珠的特性來(lái)分離細(xì)胞第二頁(yè)，共三十五頁(yè)，編輯于2023年，星期三細(xì)胞分選常用方法密度梯度離心(Ficoll)離心抗體標(biāo)記分離免疫密度離心免疫磁珠流式第三頁(yè)，共三十五頁(yè)，編輯于2023年，星期三正選和負(fù)選正選需要得細(xì)胞標(biāo)記需要得細(xì)胞需要得細(xì)胞標(biāo)記不需要得細(xì)胞負(fù)選第四頁(yè)，共三十五頁(yè)，編輯于2023年，星期三正選只需要一種抗體分離出的細(xì)胞純度高對(duì)于比例小的細(xì)胞群，正選容易得到高純度正選和負(fù)選的比較優(yōu)點(diǎn)負(fù)選需要的細(xì)胞沒(méi)有被抗體等標(biāo)記對(duì)需要的細(xì)胞，不需要特異性的細(xì)胞標(biāo)記缺點(diǎn)需要多種抗體標(biāo)記不需要的細(xì)胞需要特異性的靶細(xì)胞標(biāo)記可能引起細(xì)胞活化第五頁(yè)，共三十五頁(yè)，編輯于2023年，星期三細(xì)胞分選產(chǎn)品第六頁(yè)，共三十五頁(yè)，編輯于2023年，星期三StemCellTechnologiesInc.

的細(xì)胞分選原理利用抗體四聚體(TetramericAntibodyComplex,TAC)來(lái)分選細(xì)胞TACCell磁珠直接標(biāo)記TACCell磁珠間接標(biāo)記第七頁(yè)，共三十五頁(yè)，編輯于2023年，星期三適用于人的全血細(xì)胞樣品是一種負(fù)選方法基本原理：抗體標(biāo)記和免疫密度離心法需要的儀器：離心機(jī)第八頁(yè)，共三十五頁(yè)，編輯于2023年，星期三DirectLabelingofHumanCells不需要的細(xì)胞第九頁(yè)，共三十五頁(yè)，編輯于2023年，星期三離心把細(xì)胞樣品置于密度分離液上分選的過(guò)程標(biāo)記把RosetteSep?抗體混合液加入細(xì)胞樣品中室溫下20分鐘用緩沖液稀釋收集第十頁(yè)，共三十五頁(yè)，編輯于2023年，星期三的密度分離液DM-L為了最大限度回收淋巴細(xì)胞，StemCell專(zhuān)門(mén)研制了一種適合RosetteSep?的密度分離液——DM-LDM-L的密度：1.081g/mLDM-L的滲透壓與人外周血的滲透壓相同(iso-osmolar)適用于以下的淋巴細(xì)胞分選:CD3+Tcells - CD8+TcellsCD4+Tcells - Bcells第十一頁(yè)，共三十五頁(yè)，編輯于2023年，星期三DensityofFreshLeukocytesFrom:“CentrifugationTechniquesIII”,NycomedAmersham

MonocytesLymphocytesBasophilsNeutrophilsEosinophilsErythrocytes1.060 1.070 1.080 1.090 1.100Densitying/mLDM-L:1.081g/mLFicoll:1.077g/mL第十二頁(yè)，共三十五頁(yè)，編輯于2023年，星期三低溫冷藏的外周血單個(gè)核細(xì)胞人和小鼠脾細(xì)胞第十三頁(yè)，共三十五頁(yè)，編輯于2023年，星期三負(fù)選,只需要離心機(jī)可以同時(shí)分選多份樣品取決于離心機(jī)的容量分選的細(xì)胞量在106

cellsinEppendorf-109cellsin50mLtube適用于低溫冷藏的人外周血單個(gè)核細(xì)胞(PBMC)和小鼠脾細(xì)胞的特點(diǎn)Sep第十四頁(yè)，共三十五頁(yè)，編輯于2023年，星期三直接標(biāo)記人的細(xì)胞Anti-cellAnti-particleTetramericAntibodyComplex(TAC)DenseParticle(1mm)UnwantedCell第十五頁(yè)，共三十五頁(yè)，編輯于2023年，星期三間接標(biāo)記小鼠的細(xì)胞

TetramericAntibodyComplex(TAC)BiotinylatedAntibodyAnti-Anti-BiotinParticleDenseParticle(1mm)UnwantedCell第十六頁(yè)，共三十五頁(yè)，編輯于2023年，星期三SpinSep的分選過(guò)程LabelLayer&SpinCollectAntibodyCocktailAnti-BiotinTAC(mouseonly)DenseParticles4. LayeroverSpinSep?DensityMediumSpin10-20minat1200xgCollectalmostentirevolume7.WashtoremoveDensityMedium第十七頁(yè)，共三十五頁(yè)，編輯于2023年，星期三的細(xì)胞分選資料人的外周血細(xì)胞(PBMC)小鼠的脾細(xì)胞Valuesarethemean±SD第十八頁(yè)，共三十五頁(yè)，編輯于2023年，星期三新型，高效，易行的免疫磁珠分選技術(shù)新：不用柱子，只需用磁極，所用的磁珠很小高效：效率-分選過(guò)程不用洗細(xì)胞(省時(shí)省力);效果-分選的細(xì)胞純度高易：操作過(guò)程簡(jiǎn)單易行廣：可做正選和負(fù)選適應(yīng)性強(qiáng)：在理論上可以分選任何一種細(xì)胞第十九頁(yè)，共三十五頁(yè)，編輯于2023年，星期三

Anti- Anti-CellParticleTetramericAntibodyComplex(TAC)MagneticNanoparticle(160nm)直接標(biāo)記人的細(xì)胞Cell第二十頁(yè)，共三十五頁(yè)，編輯于2023年，星期三MagneticNanoparticle(160nm)TetramericAntibodyComplex(TAC)Biotin/FluoAntibodyAnti-Anti-biotin/FluoParticle間接標(biāo)記小鼠細(xì)胞Cell第二十一頁(yè)，共三十五頁(yè)，編輯于2023年，星期三RelativeSizesofMagneticParticlesusedinCellSeparationCell第二十二頁(yè)，共三十五頁(yè)，編輯于2023年，星期三的細(xì)胞分選過(guò)程

Ab(TAC)(人)

Abbiotinanti-biotinTAC(小鼠)標(biāo)記放置磁極中倒出未標(biāo)記的細(xì)胞分選結(jié)合磁珠加入免疫磁珠孵育后稀釋第二十三頁(yè)，共三十五頁(yè)，編輯于2023年，星期三正選資料人的外周血細(xì)胞(PBMC)小鼠脾或骨髓細(xì)胞第二十四頁(yè)，共三十五頁(yè)，編輯于2023年，星期三負(fù)選資料人的外周血細(xì)胞(PBMC)小鼠脾細(xì)胞第二十五頁(yè)，共三十五頁(yè)，編輯于2023年，星期三可正選或去除任何一種細(xì)胞PE標(biāo)記的抗體分選KitFITC標(biāo)記的抗體分選KitBiotin標(biāo)記的抗體分選KitCell第二十六頁(yè)，共三十五頁(yè)，編輯于2023年，星期三細(xì)胞分選常見(jiàn)的問(wèn)題分選方法的選擇樣品種類(lèi)樣品數(shù)量每次需要分選的細(xì)胞數(shù)第二十七頁(yè)，共三十五頁(yè)，編輯于2023年，星期三常見(jiàn)問(wèn)題樣品的前處理Ficoll離心機(jī)全血和單采的細(xì)胞細(xì)胞計(jì)數(shù)稀釋液細(xì)胞數(shù)第二十八頁(yè)，共三十五頁(yè)，編輯于2023年，星期三常見(jiàn)問(wèn)題分選過(guò)程中細(xì)胞濃度緩沖液細(xì)胞混勻動(dòng)作要點(diǎn)第二十九頁(yè)，共三十五頁(yè)，編輯于2023年，星期三CalculatingPurityandRecovery%Purity = #desiredcellsinenrichedfractionx100

#totalnucleatedcellsinenrichedfraction = %oftotaleventsinthedesiredcellgate(FACSprofile)%Recovery = #desiredcellsinenrichedfractionx100

#desiredcellsinstart

= (%purityinenriched)x(totalnucleatedcellsinenriched)x100 (%purityinstart)x(totalnucleatedcellsinstart)第三十頁(yè)，共三十五頁(yè)，編輯于2023年，星期三FACSGate第三十一頁(yè)，共三十五頁(yè)，編輯于2023年，星期三panNK+SelectedfromMoSpleenStartNK+Selected第三十二頁(yè)，共三十五頁(yè)，編輯于2023年，星期三Dataanalysis第三十三頁(yè)，共三十五頁(yè)，編輯于2023年，星期三的技術(shù)要領(lǐng)細(xì)胞稀釋后，用吸管混勻細(xì)胞（不要倒置試管）倒出未標(biāo)記的細(xì)胞時(shí)，讓液體連續(xù)流淌，