血液細(xì)胞分析儀原理及應(yīng)用

血液細(xì)胞分析儀原理及應(yīng)用第一頁，共三十一頁，編輯于2023年，星期三人類生理和病理變化，往往會引起血液組分的變化，所以及時(shí)了解血液組分的變化，可以為醫(yī)生提供診斷與治療疾病的重要依據(jù)。第二頁，共三十一頁，編輯于2023年，星期三紅細(xì)胞雙凹圓盤無核紅細(xì)胞的直徑在6～9μm之間，平均為7.2μm。成年男子的紅細(xì)胞個(gè)數(shù)為(4.6～6.2)×1012個(gè)/L成年女子的紅細(xì)胞個(gè)數(shù)為(4.2～5.4)×1012個(gè)/L第三頁，共三十一頁，編輯于2023年，星期三白細(xì)胞有核球形直徑為7～25μm。正常人的白細(xì)胞數(shù)目為(4～10)×109個(gè)/L第四頁，共三十一頁，編輯于2023年，星期三血小板兩面微凹的圓盤，受刺激時(shí)伸出偽足正常人的血小板值為(100～300)×109個(gè)/L，直徑為2～4μm。第五頁，共三十一頁，編輯于2023年，星期三血紅蛋白（血色素或血紅素）血紅蛋白存在于紅細(xì)胞中，是一種含鐵的色蛋白成年男子為120～160g/L成年女子為110～150g/L第六頁，共三十一頁，編輯于2023年，星期三血液細(xì)胞分析儀測量參數(shù)紅細(xì)胞RBC白細(xì)胞WBC血小板PLT血紅蛋白HGB紅細(xì)胞比容HCT平均紅細(xì)胞容量MCB平均血紅蛋白量MCH平均血紅蛋白濃度MCHC第七頁，共三十一頁，編輯于2023年，星期三一、血液細(xì)胞分析儀的發(fā)展簡史1956年美國科學(xué)家W.H.Coulter將電阻法計(jì)數(shù)粒子的專利技術(shù)應(yīng)用于血細(xì)胞計(jì)數(shù)獲得成功其原理是根據(jù)血細(xì)胞非傳導(dǎo)的性質(zhì)，以電解質(zhì)溶液中懸浮血細(xì)胞在通過計(jì)數(shù)小孔時(shí)引起的電阻變化進(jìn)行檢測為基礎(chǔ)，進(jìn)行血細(xì)胞計(jì)數(shù)和體積測定，這種方法稱為電阻法或庫爾特原理。第八頁，共三十一頁，編輯于2023年，星期三國外廠商：日本SYSMEX美國beckman-coulter日本KOHDEN美國DANAM瑞典BOULE美國BAYER美國ABBOTT國內(nèi)廠商：南昌特康南昌百特深圳邁瑞桂林百利特第九頁，共三十一頁，編輯于2023年，星期三二、血細(xì)胞計(jì)數(shù)檢測原理庫爾特計(jì)數(shù)原理白細(xì)胞分類及計(jì)算方法紅細(xì)胞計(jì)數(shù)核紅細(xì)胞比容測定原理血紅蛋白測定原理血小板計(jì)數(shù)原理其它參數(shù)計(jì)算方法五分類血液分析儀原理及應(yīng)用機(jī)型第十頁，共三十一頁，編輯于2023年，星期三1.庫爾特計(jì)數(shù)原理庫爾特原理（coulterprinciple）：二、血細(xì)胞計(jì)數(shù)檢測原理第十一頁，共三十一頁，編輯于2023年，星期三庫爾特原理懸浮在電解液中的顆粒/細(xì)胞，隨電解液通過小孔管時(shí)，因取代了相同體積的電解液，在恒電流設(shè)計(jì)的電路中導(dǎo)致小孔管內(nèi)外兩電極間電阻發(fā)生瞬時(shí)變化，而產(chǎn)生了電位脈沖。脈沖信號的大小和次數(shù)與顆粒的大小和數(shù)目成正比。

二、血細(xì)胞計(jì)數(shù)檢測原理第十二頁，共三十一頁，編輯于2023年，星期三2.白細(xì)胞分類及計(jì)算方法根據(jù)脈沖的大小，即可人為地將血內(nèi)地白細(xì)胞分成幾群（二分群或三分群）三分類：淋巴細(xì)胞LY，單核細(xì)胞MO，粒細(xì)胞GI。五分類：淋巴細(xì)胞LY，單核細(xì)胞MO，粒細(xì)胞GI（中性細(xì)胞，嗜酸性細(xì)胞，嗜堿性細(xì)胞）電阻抗法白細(xì)胞“分類”不能代替顯微鏡涂片檢查二、血細(xì)胞計(jì)數(shù)檢測原理第十三頁，共三十一頁，編輯于2023年，星期三在進(jìn)行血細(xì)胞測定之前，全血標(biāo)本必須用稀釋液在儀器外部或內(nèi)部進(jìn)行一定比例的稀釋，一般用1：251的稀釋倍數(shù)來測量白細(xì)胞儀器將從白細(xì)胞計(jì)數(shù)池中測量到體積>35fl顆粒產(chǎn)生的電子脈沖的數(shù)量作為白細(xì)胞計(jì)數(shù)，根據(jù)細(xì)胞稀釋倍數(shù)進(jìn)行計(jì)算，得到正確的白細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果。二、血細(xì)胞計(jì)數(shù)檢測原理第十四頁，共三十一頁，編輯于2023年，星期三儀器是如何進(jìn)行細(xì)胞分群的呢？儀器除給出細(xì)胞數(shù)據(jù)結(jié)果外，同時(shí)提供出細(xì)胞體積分布圖形，這些可以表示出細(xì)胞群體分布情況的圖形被稱為直方圖它可以顯示出某一特定細(xì)胞群的平均細(xì)胞體積、細(xì)胞分布情況和是否存在明顯的異常細(xì)胞群直方圖是由測量通過感應(yīng)區(qū)的每個(gè)細(xì)胞脈沖累積得到的，根據(jù)庫爾特原理可以在計(jì)數(shù)的同時(shí)進(jìn)行分析測量。二、血細(xì)胞計(jì)數(shù)檢測原理第十五頁，共三十一頁，編輯于2023年，星期三直方圖與脈沖信號的關(guān)系二、血細(xì)胞計(jì)數(shù)檢測原理第十六頁，共三十一頁，編輯于2023年，星期三在進(jìn)行白細(xì)胞分析時(shí)，儀器的計(jì)算機(jī)部分可以將白細(xì)胞體積從35～450fl分為256個(gè)通道，每個(gè)通道約為1.64fl，細(xì)胞根據(jù)其體積大小被分別放在不同通道中，從而得到白細(xì)胞體積分布的直方圖二、血細(xì)胞計(jì)數(shù)檢測原理第十七頁，共三十一頁，編輯于2023年，星期三二、血細(xì)胞計(jì)數(shù)檢測原理第十八頁，共三十一頁，編輯于2023年，星期三經(jīng)過溶血?jiǎng)┨幚砗蟮陌准?xì)胞根據(jù)體積大小可以初步確認(rèn)其相應(yīng)的種類：第一亞群（小細(xì)胞群）是淋巴細(xì)胞LYM；第二個(gè)亞群是單個(gè)核細(xì)胞群MONO，也被稱為中間細(xì)胞MID；相當(dāng)于粒細(xì)胞的細(xì)胞群GRAN位于第三亞群（大細(xì)胞群）。二、血細(xì)胞計(jì)數(shù)檢測原理第十九頁，共三十一頁，編輯于2023年，星期三二、血細(xì)胞計(jì)數(shù)檢測原理第二十頁，共三十一頁，編輯于2023年，星期三儀器根據(jù)各細(xì)胞群占總體積的比例計(jì)算出各細(xì)胞群的百分比，如果與該標(biāo)本為的白細(xì)胞總數(shù)相乘，即得到各項(xiàng)的絕對值注意，由于各廠家血細(xì)胞分析儀使用的稀釋液和溶血?jiǎng)┏煞植煌耆嗤瑢Π准?xì)胞膜的作用程度不同，所以儀器對各類白細(xì)胞區(qū)分界限的規(guī)定有所不同，在使用時(shí)不應(yīng)隨意更換生產(chǎn)廠家試劑，防止造成錯(cuò)誤報(bào)告。二、血細(xì)胞計(jì)數(shù)檢測原理第二十一頁，共三十一頁，編輯于2023年，星期三3.紅細(xì)胞計(jì)數(shù)和紅細(xì)胞比容測定原理大多數(shù)血細(xì)胞分析儀使用庫爾特法進(jìn)行紅細(xì)胞計(jì)數(shù)核紅細(xì)胞比容測定，其原理同白細(xì)胞檢測一樣。

紅細(xì)胞通過小孔時(shí)，形成大小相應(yīng)的脈沖，脈沖的多少即紅細(xì)胞的數(shù)目，脈沖的高度代表單個(gè)脈沖細(xì)胞的體積脈沖高度疊加，經(jīng)過換算可得到紅細(xì)胞的比容HCT二、血細(xì)胞計(jì)數(shù)檢測原理第二十二頁，共三十一頁，編輯于2023年，星期三紅細(xì)胞比容的測定方法：紅細(xì)胞比容指紅細(xì)胞在全血中所占的容積百分比是用來檢測紅細(xì)胞數(shù)量的一個(gè)比值。先以單個(gè)脈沖細(xì)胞的高度計(jì)算紅細(xì)胞的平均體積MCV，再乘以紅細(xì)胞的數(shù)，得出紅細(xì)胞比容正常成年人的紅細(xì)胞比容,男性為40%-50%,女性為37%-48%。二、血細(xì)胞計(jì)數(shù)檢測原理第二十三頁，共三十一頁，編輯于2023年，星期三4.血紅蛋白測定原理一般采取比色法加入溶血?jiǎng)?，釋放血紅蛋白用HiCN生成氰化血紅蛋白，或是用SLS，光譜最大吸收在540nm附近。二、血細(xì)胞計(jì)數(shù)檢測原理第二十四頁，共三十一頁，編輯于2023年，星期三二、血細(xì)胞計(jì)數(shù)檢測原理第二十五頁，共三十一頁，編輯于2023年，星期三雙波長法測量血紅蛋白含量二、血細(xì)胞計(jì)數(shù)檢測原理第二十六頁，共三十一頁，編輯于2023年，星期三設(shè)在540nm處為λ1，690nm處為λ2，則在λ1時(shí)的吸光度為：式中，Aλ1為在λ1時(shí)的吸光度；Kλ1為在λ1時(shí)的吸光系數(shù)；C為待測物質(zhì)濃度；L為吸收池厚度。AS1為光散射和背景吸光度。同樣對于λ2也有：二、血細(xì)胞計(jì)數(shù)檢測原理第二十七頁，共三十一頁，編輯于2023年，星期三因540nm和690nm相差不遠(yuǎn)，可以吧AS1和AS2視為相等。因此透過比色皿的參考信號和樣品信號的吸光度之差ΔA為：二、血細(xì)胞計(jì)數(shù)檢測原理第二十八頁，共三十一頁，編輯于2023年，星期三5.血小板計(jì)數(shù)原理血小板隨紅細(xì)胞一起在一個(gè)系統(tǒng)中進(jìn)行檢測，由于血小板體積與紅細(xì)胞體積有明顯的差異，儀器設(shè)定了特定的閾值，將高于閾值者定于紅細(xì)胞，反之為血小板。二、血細(xì)胞計(jì)數(shù)檢測原理第二十九頁，共三十一頁，編輯于2023年，星期三血小板分別貯存于64個(gè)通道內(nèi)，直方圖范圍為2-30fl。為了使血小板計(jì)數(shù)更準(zhǔn)確，有些儀器專門設(shè)置了增加血小板準(zhǔn)確性的計(jì)數(shù)，如鞘流計(jì)數(shù)、浮動界標(biāo)、擬合曲線等二