五味子有效成分提取分離方法的研究進(jìn)展

五味子有效成分提取分離方法的研究進(jìn)展【摘要】五味子為我國(guó)傳統(tǒng)的中藥之一，具有多種藥用功效，該文對(duì)近些年來五味子多種有效成分的提取分離方法做一綜述，以利進(jìn)一步的研究與開發(fā)利用。

【關(guān)鍵詞】五味子有效成分提取與分離

AdvancesontheExtractionandSeparationTechnologiesofEfficientComponentsinSchisandrachinensis(Turcz.)Baill

Abstract:Schisandrachinensis(Turcz.)BaillisoneoftraditionalChinesemedicines.Ithasbeenfoundtopossesssomebeneficialpharmacologicaleffects.Forfurtherresearchandapplication,thispaperreviewedthedevelopmentoftheextractionandseparationtechnologiesofefficientcomponentsinSchisandrachinensis(Turcz.)Baill.

Keywords:Schisandrachinensis(Turcz.)Baill;Efficientcomponents;Extractionandseparation

五味子Schisandrachinensis(Turcz.)Baill為木蘭科多年生落葉植物，因果實(shí)具有甘、酸、辛、苦、咸五味而得名，具有斂肺生津、益胃養(yǎng)心、收斂固澀、滋補(bǔ)、強(qiáng)壯等功效，是常用中藥之一［1］。五味子中含有木脂素、多糖和三萜酸等多種有效成分，其中木脂素類具有保肝、降酶、抗艾滋病等多種活性。本文對(duì)近些年來五味子及其莖葉中有效成分的提取和分離方法的研究進(jìn)展做一綜述，以利進(jìn)一步的研究與開發(fā)利用。

1五味子中木脂素成分的提取分離方法

五味子中總木脂素的含量約為2%～8%，其成分大多具有聯(lián)苯環(huán)辛二烯母核，是一類低極性小分子化合物，如五味子甲素、五味子乙素，五味子醇甲等。近年來常用的提取方法有回流提取法、超臨界CO2萃取法，超高壓提取法等。

溶劑提取法是根據(jù)中藥中各種成分在溶劑中的溶解性質(zhì)，選用對(duì)有效成分溶解度大，對(duì)不需要溶出成分溶解度小的溶劑，而將有效成分從藥材內(nèi)溶解出來的方法。常用浸漬法、滲漉法、煎煮法、回流法及連續(xù)回流提取法等。袁海龍等［2］以五味子甲素的含量作為考察指標(biāo),采用均勻設(shè)計(jì)法優(yōu)選出五味子的最佳提取工藝：乙醇濃度為90%，回流時(shí)間為1h，固液比為1∶5。王茹等［3］采用正交設(shè)計(jì)安排實(shí)驗(yàn)，以五味子乙素、五味子醇甲的含量和出膏率為指標(biāo)，優(yōu)選出合理的提取工藝為：以生藥重量10倍的乙醇回流提取兩次，每次提取4h。李奉勤等［4］考察了溶劑濃度、溶劑用量、回流時(shí)間和pH值對(duì)五味子中五味子乙素提取效果的影響，采用正交實(shí)驗(yàn)法優(yōu)選出五味子乙素的最佳提取條件：提取溶劑為85%乙醇、液固比為5∶1，pH值為，回流時(shí)間為2h，五味子乙素含量為mg/100g。

超高壓提取法超高壓提取法(ultra-highpressureextractiontechnique,UHPE)是在常溫或較低溫度(通常低于100℃)的條件下，對(duì)原料液迅速施加100～1000MPa的流體靜壓力，保壓一定時(shí)間，溶劑在超高壓作用下迅速滲透到固體原料內(nèi)部，有效成分溶解在溶劑中，并在短時(shí)間內(nèi)達(dá)到溶解平衡，然后迅速卸壓，在超高滲透壓差下，有效成分迅速擴(kuò)散到組織周圍的提取溶劑中；同時(shí)在超高壓作用下，細(xì)胞的細(xì)胞壁、細(xì)胞膜以及細(xì)胞內(nèi)液泡等結(jié)構(gòu)發(fā)生變化，細(xì)胞內(nèi)溶物和提取溶劑充分接觸，從而達(dá)到快速、高效地提取目的［5］。劉長(zhǎng)姣等［6］超高壓提取法提取五味子總木脂素，利用均勻設(shè)計(jì)方法確定最優(yōu)提取工藝：提取壓力為350MPa，溶劑為70%乙醇水溶液，固液比為1∶90，總木脂素得率為%，常規(guī)回流提取方法的總木脂素得率為%，可見超高壓提取方法更有利于總木脂素的提取。

超臨界CO2萃取法超臨界流體萃取技術(shù)是以超臨界流體為溶劑，可應(yīng)用于多種液態(tài)或固態(tài)混合物中待分離組分的萃取。因?yàn)镃O2具有無毒、不易燃易爆、價(jià)廉、臨界壓力和溫度較低、易于安全地從混合物中分離出來等優(yōu)點(diǎn)，所以CO2是中藥有效成分提取與分離過程中最常用的一種超臨界流體。程康華等［7］應(yīng)用超臨界CO2萃取五味子中五味子醇甲，在溫度為45℃，壓力為、時(shí)間為180min的條件下，五味子醇甲的超臨界提取率為%，原藥材中五味子醇甲的得率為%，而乙醇萃取物原料藥材中五味子醇甲的得率為%，前者得率比后者高出1倍多。聶江力等［8］通過正交設(shè)計(jì)的實(shí)驗(yàn)方法，探討了超臨界CO2法萃取五味子果實(shí)中木脂素的工藝條件,確定了最佳工藝條件：萃取壓力為30Mpa、萃取溫度為50℃、萃取時(shí)間為120min，總木脂素得率為%。劉本等［9］考察了不同溫度和壓力對(duì)超臨界CO2提取五味子甲素的提取效率的影響。結(jié)果表明,在溫度為60℃，壓力為的條件下,有最快的提取速度,最大提取量達(dá)90%以上，并且提取率和夾帶10%甲醇的超臨界CO2有相近(約%,w/w)。田明等［10］對(duì)五味子傳統(tǒng)水提取、80%乙醇提取和超臨界CO2萃取進(jìn)行了對(duì)比研究，不同提取工藝提取物出率分別為%，%，%，五味子總木脂素提出率分別為68%，%，%，五味子乙素提出率分別為0%，%，%，證明,SFE-CO2提取法適用于五味子有效成分的提取。

微波提取法微波提取技術(shù)(microwaveextractiontechnique，MWE)應(yīng)用于提取天然植物中的有效成分始于20世紀(jì)90年代，是微波和傳統(tǒng)溶劑提取法相結(jié)合，利用微波能來提高萃取率的一項(xiàng)新技術(shù)。黃惠華等［11］采用乙醇和水作為萃取劑,研究了用微波輔助萃取的方法從五味子果實(shí)中萃取五味子醇甲。以不同的萃取時(shí)間、萃取功率、萃取溶劑/基質(zhì)比作為參數(shù)進(jìn)行實(shí)驗(yàn),利用高效液相色譜(HPLC)作為五味子醇甲的檢測(cè)手段，確定了以乙醇和水作為溶劑的最優(yōu)微波輔助萃取條件：溫度為接近溶劑的沸點(diǎn)(乙醇設(shè)為72℃,水設(shè)為95℃)、微波功率為350W，萃取時(shí)間為5～8min，萃取液固比為12∶1，在萃取產(chǎn)率上,乙醇的萃取效果優(yōu)于水(乙醇的萃取產(chǎn)率%,水的萃取產(chǎn)率%)，但是在萃取選擇性方面，水作為萃取劑優(yōu)于乙醇；同時(shí)發(fā)現(xiàn)萃取時(shí)間的延長(zhǎng)和微波功率的增加都會(huì)導(dǎo)致五味子醇甲的萃取產(chǎn)率下降。

法多索溶劑提取法法多索溶劑是一類新的溶劑系統(tǒng),主要有1,1,1,2-四氯乙烷組成，具有不破壞臭氧層,無污染,耗能低且能在常溫等優(yōu)點(diǎn),可作為五味子甲素這類化合物的提取溶劑。劉本等［12］以法多索洛劑(phytosolA,B和D)提取五味子甲素，結(jié)果表明法多索溶劑能有效地提取五味子甲素，提取率為%(W/W)，與10%甲醇調(diào)節(jié)的超臨界CO2的提取率(%)接近。

高速逆流色譜技術(shù)高速逆流色譜技術(shù)(high-speedcounter-currentchromatographytechnique,HSCCC)，是一種不用任何固態(tài)載體或支撐體的液-液分配色譜技術(shù)，目前已成功地開發(fā)出分析型、生產(chǎn)型兩大類高速逆流色譜儀，可分別用于中藥有效成分的分離制備和定量分析。JinyongPeng等［13］應(yīng)用高速逆流色譜技術(shù)分離純化五味子中五味子醇甲和五味子醇乙。在應(yīng)用D101大孔樹脂進(jìn)行初步純化后，應(yīng)用高速逆流色譜技術(shù)，以正己烷-醋酸乙酯-甲醇-水(1∶∶∶1,v/v)為兩相溶劑系統(tǒng)，從400mg初純物中分離得到107mg五味子醇甲和36mg五味子醇乙，純度分別為%和%，且用時(shí)少于3h。TianhuiHuang等［14］應(yīng)用高速逆流色譜分離純化五味子甲素和五味子乙素，以正己烷-甲醇-水(35∶30∶3,v/v)為溶劑系統(tǒng)，從100mg五味子石油醚提取物中分離得到五味子甲素8mg，五味子乙素12mg，純度分別在98%和96%以上。

2五味子多糖的提取分離方法

多糖具有調(diào)節(jié)免疫功能、抗腫瘤、抗病毒病菌、降血糖等作用，在抗腫瘤、抗病毒等藥物的研究中占有一定的地位，所以多糖成分的提取分離也是比較活躍的研究領(lǐng)域。目前五味子多糖的提取分離研究主要集中在初步的提取分離，對(duì)其具體成分的結(jié)構(gòu)組成仍需進(jìn)一步的深入研究。張?zhí)m杰等［15］對(duì)北五味子果實(shí)的多糖進(jìn)行了研究，經(jīng)提取、醇析、Savage法脫蛋白、脫脂、活性碳脫色、DEAE纖維素柱色譜等步驟，確定北五味子中粗多糖含量為%，3次提取率分別為：%，%，%,Savage法脫蛋白粗多糖損失率為%，得到兩種純多糖的含量分別為%和%。李巧云等［16］對(duì)五味子中可溶性粗多糖的提取工藝進(jìn)行了研究，通過單因素實(shí)驗(yàn)和正交實(shí)驗(yàn)確定了最佳工藝：料液比為1∶25，溫度為100℃、時(shí)間為4h，此時(shí)五味子多糖提取率為%。并應(yīng)用Sevag法結(jié)合酶法除蛋白對(duì)多糖進(jìn)行純化，大大縮短了除蛋白時(shí)間。韓學(xué)忠等［17］研究了五味子多糖的乙醇分級(jí)純化，結(jié)果證明，對(duì)五味子多糖水溶液可直接用40%的乙醇溶液分成兩部分,藥理實(shí)驗(yàn)證明有藥效作用的多糖多集中在乙醇40%(V/V)沒有沉淀下來的多糖中。

3五味子中揮發(fā)油的提取分離方法

五味子莖葉、果實(shí)以及種子均含有豐富的揮發(fā)性成分，種子中揮發(fā)性成分約占種子的%［18］，有明顯的辛辣、芳香氣味。譚曉梅等［19］對(duì)超臨界CO2萃取法和水蒸氣蒸餾法提取的北五味子揮發(fā)油化學(xué)成分進(jìn)行比較研究。GC-MS法進(jìn)行成分分析，供鑒定了80個(gè)成分，超臨界CO2萃取法提取物被鑒定了55個(gè)成分，水蒸氣蒸餾法提取物被鑒定了70個(gè)成分，兩者共有成分達(dá)45個(gè)。兩種提取方法的提取物得率分別為%和%，后者提取物中除了揮發(fā)油，還含有木脂素等脂溶性成分，但兩種提取方法的揮發(fā)油主要成分基本一致。王炎等［20］運(yùn)用GC-MS技術(shù),結(jié)合計(jì)算機(jī)檢索對(duì)五味子揮發(fā)油化學(xué)成分進(jìn)行分離和鑒定,并對(duì)五味子種子和果實(shí)中的揮發(fā)油成分進(jìn)行對(duì)比。證明五味子種子中揮發(fā)油成分主要為各種萜類化合物，單萜類如蒎烯、月桂烯、松油烯等相對(duì)分子質(zhì)量為136的物質(zhì)；倍半萜類如金合歡烯、欖香烯、異石竹烯、依蘭烯等分子量為204的物質(zhì)。此外,揮發(fā)油中還有少量的醇、酯、醛、酮以及苯和萘的衍生物等；同時(shí)發(fā)現(xiàn)，五味子種子中的成分與以往報(bào)道過的果實(shí)揮發(fā)性成分差別較大,其中某些成分未見報(bào)道,如δ-芹子烯和較為少見的吉馬烯B，吉馬烯D等,說明種子本身與果肉揮發(fā)油的組成成分不同，應(yīng)分別加以研究利用。

4五味子中其他成分的提取分離方法

五味子中有效成分的研究除上述木脂素、多糖、揮發(fā)油成分外，其它一些具有生物活性的成分也取得了一定的研究進(jìn)展。徐林峰等［21］從中藥五味子中提取分離α-葡萄糖苷酶抑制劑，利用浸提、超濾、柱層析、醋酸鉛沉淀等方法進(jìn)行純化，初步分離得到α-葡萄糖苷酶抑制劑。并確定該抑制劑成分為大分子糖苷類物質(zhì),相對(duì)分子量在5萬以上，抑制類型為非競(jìng)爭(zhēng)性抑制。盧山等［22］考察了浸提用溶劑、溫度、時(shí)間、添加劑及固液比對(duì)五味子紅色素提取率的影響，應(yīng)用正交實(shí)驗(yàn)確定五味子紅色素的浸提條件：浸提溫度為40℃，溶劑為60%乙醇、固液比為1:6。RadekSladkovsky等［23］應(yīng)用反相液相色譜，研究了不同年份五味子莖葉提取物中槲皮素、山奈酚和(E)-苯乙烯酸的含量。并通過優(yōu)化方法確定了可以同時(shí)測(cè)定此3種成分的流動(dòng)相為acetonitrile-aqueous%ortho-phosphoricacid(40∶60v∶v)，測(cè)得的不同年份五味子葉中槲皮素的含量分別為%，%，；山奈酚的含量分別為%，%，%；(E)-苯乙烯酸的含量的分別為%，%，；五味子莖提取物中槲皮素的含量分別為%，%，%；(E)-苯乙烯酸的含量的分別為%，%，%；莖提取物中沒有發(fā)現(xiàn)山奈酚。

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