【課件】動物細胞融合技術和單克隆抗體課件高二下學期生物人教版選擇性必修3

第2節(jié)動物細胞工程課時2動物細胞融合技術與單克隆抗體本節(jié)聚焦動物細胞融合技術單克隆抗體及其應用1.概念：就是使

動物細胞結合形成

的技術。2.結果：形成的

具有原來

的遺傳信息。3.原理：

。4.誘導細胞融合的三種方法(1)物理法：eg

;(2)化學法：eg

;

(3)生物法：eg

。兩個或多個一個細胞細胞膜的流動性電融合法聚乙二醇（PEG)融合法滅活病毒誘導法雜交細胞兩個或多個細胞（動物細胞融合特有的融合方式）一、動物細胞融合技術與植物原生質體融合的方法相同思考：不滅活的病毒能否作為誘導劑？不滅活的病毒會感染細胞，影響細胞正常的生命活動，不能誘導細胞融合。不能1.滅活：是指用物理或化學手段使病毒或細菌失去感染能力，但并不破壞它們的抗原結構。滅活病毒誘導法2.原理：病毒表面含有的糖蛋白和一些酶能夠與細胞膜上的糖蛋白發(fā)生作用，使細胞相互凝集細胞膜上的蛋白質分子和脂質分子重新排布，細胞膜打開，細胞發(fā)生融合。滅活病毒誘導法思考：19世紀30年代，科學家曾在肺結核、天花和麻疹等疾病的病人的病理組織中觀察到多核細胞。如何解釋這一現象？病人體內病毒等誘導多個體細胞融合形成了多核細胞。肺結核病人病理切片滅活病毒誘導法植物體細胞雜交動物細胞融合原理細胞融合前的處理方法誘導細胞融合的方法細胞融合成功的標志結果意義細胞膜具有一定的流動性、植物細胞的全能性細胞膜具有一定的流動性用果膠酶和纖維素酶去除細胞壁用胰蛋白酶或膠原蛋白酶使細胞分散成單個細胞電融合法、離心法；聚乙二醇（PEG）融合法、高Ca2+-高pH融合法PEG融合法、電融合法、滅活病毒誘導法再生出細胞壁細胞核的融合獲得完整的雜種植株形成雜交細胞打破生殖隔離，實現遠緣雜交育種，培育植物新品種突破了有性雜交的局限，使遠緣雜交成為可能植物體細胞雜交與動物細胞融合技術的比較5.融合過程一、動物細胞融合技術細胞膜融合細胞質融合細胞核融合6.動物細胞融合完成的標志：細胞核融合7.意義：突破有性雜交的局限，使遠緣雜交成為可能。8.應用：①研究細胞遺傳、細胞免疫、腫瘤和培育生物新品種等；②利用雜交瘤技術制造單克隆抗體二、單克隆抗體及應用(一)傳統(tǒng)抗體制備的方法缺點：產量低、純度低，而且特異性差反復注射某種抗原漿細胞多種血清抗體多種動物體內產生的特異性抗體的種類超過百萬種，每一個B淋巴細胞只分泌一種特異性抗體單一B淋巴細胞細胞群選擇克隆產生大量的單一抗體特點：體外不能無限增殖科學研究與探索動物體內產生的特異性抗體的種類超過百萬種，每一個B淋巴細胞只分泌一種特異性抗體單一B淋巴細胞選擇科學研究與探索骨髓瘤細胞細胞群克隆產生大量的單一抗體融合細胞(二)單克隆抗體1.概念：由單一B淋巴細胞克隆產生的特異性抗體2.優(yōu)點：特異性強、靈敏度高、可大量制備特點：能無限增殖但不能產生抗體特點：既能無限增殖又能產生抗體動物體內產生的特異性抗體的種類超過百萬種，每一個B淋巴細胞只分泌一種特異性抗體單一B淋巴細胞選擇科學研究與探索骨髓瘤細胞細胞群克隆產生大量的單一抗體融合細胞(二)單克隆抗體動物細胞融合技術動物細胞培養(yǎng)3.制備過程第一次篩選多種雜交瘤細胞(1)動物細胞融合第一次篩選在特定的選擇培養(yǎng)基上，未融合的親本細胞和融合的具有同種核的細胞都會死亡，只有融合的雜交瘤細胞才能生長。多種B淋巴細胞骨髓瘤細胞誘導融合培養(yǎng)骨髓瘤細胞特定抗原脾臟B瘤瘤-瘤瘤-BB-B3.制備過程(2)克隆化培養(yǎng)和抗體檢測（動物細胞培養(yǎng)）抗體檢測第二次篩選雜交瘤細胞(多種)克隆化培養(yǎng)抗體檢測呈陽性的雜交瘤細胞（分泌的抗體能和特定的抗原結合）①克隆化培養(yǎng)原理：細胞增殖②抗體檢測a.取上清液b.原理：抗原-抗體特異性結合③第二次篩選：得到能分泌所需抗體的雜交瘤細胞（含有抗體）3.制備過程(3)體內與體外培養(yǎng)能分泌所需抗體的雜交瘤細胞體外培養(yǎng)體內培養(yǎng)（注射到小鼠腹腔內）從培養(yǎng)液中獲取大量的單克隆抗體從小鼠腹水中獲取大量的單克隆抗體練一練

請用箭頭把以下各步驟的字母按正確順序連接起來。單克隆抗體的應用思考·討論可以有效殺傷腫瘤細胞沒有特異性，在殺傷腫瘤細胞的同時還會對健康細胞造成傷害資料2分析：①細胞毒素類藥物優(yōu)點：組成：②抗體-藥物偶聯(lián)物(ADH)優(yōu)點：缺點：實現了對腫瘤細胞的選擇性殺傷抗體、接頭、藥物單克隆抗體的應用1.ADC的抗體和藥物各具有什么作用？(1)抗體：主要發(fā)揮靶向運輸作用，即通過特異性結合靶細胞表面的抗原，將連接的藥物輸送到靶細胞；(2)藥物：發(fā)揮治療效應，eg殺傷靶細胞。思考·討論討論2.除了細胞毒素，還有哪些物質理論上可以作為ADC偶聯(lián)的藥物？①

可以用放射性同位素標記單克隆抗體進行靶向放療；②

一些作用于細胞信號轉導通路的藥物可以通過阻斷腫瘤細胞的信號通路來抑制其生長，理論上也可以將這些藥物與單克隆抗體結合進行治療提示：單克隆抗體的應用思考·討論3.單克隆抗體診斷試劑盒和ADC在臨床應用上各具有什么優(yōu)勢？①

單克隆抗體診斷試劑盒中的單克隆抗體只與特定的抗原反應，因此檢測的特異性和靈敏度大大提高；生產單克隆抗體的雜交瘤細胞可以傳代培養(yǎng)、冷凍保存和復蘇利用，有利于控制產品的質量和標準化生產診斷試劑盒；②

ADC能夠協(xié)同發(fā)揮抗體特異性識別的靶向作用和細胞毒素對腫瘤細胞的殺傷作用，因此它在臨床上具有靶點清楚、毒副作用小等優(yōu)點。提示：單克隆抗體的應用思考·討論抗原-抗體雜交法抗人絨毛促性腺激素單克隆抗體在妊娠第8天就可以作出診斷，比原來診斷方法提前了10d左右，準確率在90﹪以上。具有準確、高效、簡易、快速特點診斷優(yōu)點：(1)診斷試劑——最廣泛應用4.