高三生物復(fù)習(xí)真題分類匯編：考點(diǎn)20生物技術(shù)實(shí)踐含答案

知識(shí)點(diǎn)20生物技術(shù)實(shí)踐

1.（2014?江蘇高考?T16）下列關(guān)于“DNA的粗提取與鑒定”實(shí)驗(yàn)敘述,錯(cuò)誤的是

（）

A.酵母和菜花均可作為提取DNA的材料

B.DNA既溶于2mol/LNaCl溶液也溶于蒸儲(chǔ)水

C.向雞血細(xì)胞液中加蒸儲(chǔ)水?dāng)嚢?可見(jiàn)玻棒上有白色絮狀物

D.DNA溶液加入二苯胺試劑沸水浴加熱,冷卻后變藍(lán)

【解題指南】關(guān)鍵知識(shí):DNA在0.14mol/LNaCl溶液中溶解度最低，隨著NaCl溶液濃度增大

或降低,DNA在其中的溶解度增大。

選C。本題考查“DNA的粗提取和鑒定”實(shí)驗(yàn)的選材、步驟和鑒定。原則上含DNA的生物材料

都能作為提取DNA的材料，但是DNA含量高的材料,實(shí)驗(yàn)成功的可能性更大,所以酵母和菜花可

作為提取DNA的材料,故A正確;DNA在2mol/LNaCl溶液和蒸儲(chǔ)水中，溶解度較大,故B正確；

向雞血細(xì)胞液中加蒸偏水?dāng)嚢?，雞血細(xì)胞會(huì)破裂，因DNA在蒸儲(chǔ)水中溶解度較大，故不會(huì)析

出,C項(xiàng)錯(cuò)誤;DNA溶液加入二苯胺試劑沸水浴加熱,冷卻后變藍(lán),故D正確。

2.（2014?江蘇高考?T18）下列關(guān)于加酶洗衣粉的敘述,正確的是（）

A.高溫易使酶失活,因此冷水洗滌去污效果應(yīng)該比溫水好

B.洗衣粉中表面活性劑對(duì)堿性蛋白酶活性有一定的促進(jìn)作用

C.在pH低于7.0的自來(lái)水中,堿性蛋白酶依然能起作用

D.洗衣粉中酶主要是通過(guò)快速分解溶在水里的污漬發(fā)揮作用

【解題指南】關(guān)鍵知識(shí)：（1）加酶洗衣粉適宜的洗滌溫度和pHo

（2）加酶洗衣粉去污原理是利用酶的催化作用使污漬分解成可溶物。

選C。本題考查加酶洗衣粉的使用。加酶洗衣粉中的酶在水溫45?

60℃時(shí)，能充分發(fā)揮洗滌作用。水溫高于60℃時(shí),堿性蛋白酶失去活性，水溫低于15℃時(shí),酶的

活性迅速下降,影響洗滌效果,所以A錯(cuò)誤;表面活性劑能影響堿性蛋白酶的活性,可能會(huì)使酶

失活,因此B錯(cuò)誤;堿性蛋白酶適宜的pH為6.0~8.5,故C正確;洗衣粉中的酶能把衣物上的

油脂、蛋白質(zhì)等分解成可溶性的小分子物質(zhì)，從而使其很容易被洗去，因而D錯(cuò)誤。

3.（2014?江蘇高考?T24）某同學(xué)設(shè)計(jì)了如圖所示的發(fā)酵裝置，下列有關(guān)

敘述正確的是（多選）（）心入

A.該裝置可阻止空氣進(jìn)入,用于果酒發(fā)酵水

B.該裝置便于果酒發(fā)酵中產(chǎn)生的氣體排出

二葡萄汁

C.去除彎管中的水，該裝置可滿足果醋發(fā)酵時(shí)底層發(fā)酵液中大量醋酸菌的呼吸

D.去除彎管中的水后,該裝置與巴斯德的鵝頸瓶作用相似

【解題指南】（1）圖示信息:彎管沒(méi)有插入葡萄汁的液面下,且未通入無(wú)菌空氣,所以不能給底

層的微生物提供氧氣。

（2）關(guān)鍵知識(shí)：果酒和果醋發(fā)酵的原理、條件。

選A、B、D?本題考查果酒、果醋的制備。該裝置中注水的彎曲部分可阻止空氣進(jìn)入，能用于

果酒發(fā)酵,A正確；果酒發(fā)酵產(chǎn)生的CO?可溶解在彎管的水中，進(jìn)一步通過(guò)水排出，B正確;醋酸

菌是好氧菌，因彎管沒(méi)有插入裝置底部,且未通入無(wú)菌空氣，去除彎管中的水后也不能滿足底

層發(fā)酵液中醋酸菌的呼吸需求,C錯(cuò)誤;去除彎管中的水后,該裝置的彎管部分也能防止空氣中

的微生物進(jìn)入,與巴斯德的鵝頸瓶作用類似,D正確。

4.（2014?廣東高考?T4）下列敘述錯(cuò)誤的是（）

A.醋酸菌在無(wú)氧條件下利用乙醇產(chǎn)生醋酸

B.酵母菌在無(wú)氧條件下利用葡萄汁產(chǎn)生酒精

C.泡菜腌制利用了乳酸菌的乳酸發(fā)酵

D.腐乳制作利用了毛霉等微生物的蛋白酶和脂肪酶

【解題指南】（1）關(guān)鍵知識(shí):細(xì)胞呼吸原理和生物技術(shù)在食品加工方面的應(yīng)用。

（2）隱含信息:有氧呼吸和無(wú)氧呼吸的產(chǎn)物應(yīng)用。

選A。本題考查細(xì)胞呼吸原理和生物技術(shù)在生產(chǎn)應(yīng)用中的相關(guān)知識(shí)。A項(xiàng)中，醋酸菌釀醋時(shí)需

要持續(xù)通氣，即利用醋酸菌的有氧呼吸，故錯(cuò)誤。B項(xiàng)中，酵母菌是單細(xì)胞真核生物，在有氧條

件下進(jìn)行有氧呼吸,無(wú)氧條件下進(jìn)行無(wú)氧呼吸,可以將有機(jī)物不徹底分解生成酒精和二氧化碳,

并釋放少量的能量,從而可利用葡萄汁產(chǎn)生酒精，故正確。C項(xiàng)中，乳酸菌屬于厭氧型細(xì)菌，進(jìn)

行無(wú)氧呼吸產(chǎn)生乳酸,可用于泡菜腌制,故正確。D項(xiàng)中,腐乳是豆腐在毛霉等微生物的作用下

形成的，由于毛霉等微生物能產(chǎn)生蛋白酶和脂肪酶，可將豆腐中的蛋白質(zhì)和脂肪分解成肽、氨

基酸和甘油、脂肪酸等小分子物質(zhì)，故正確。

5.（2014?山東高考?T35）玉米是重要的糧食作物，經(jīng)深加工可生產(chǎn)酒精、玉米胚芽油和果糖

等。流程如下：

(1)玉米秸稈中的纖維素經(jīng)充分水解后的產(chǎn)物可被酵母菌利用發(fā)酵生產(chǎn)酒精。培養(yǎng)酵母菌時(shí),

該水解產(chǎn)物為酵母菌的生長(zhǎng)提供_____________________________

。發(fā)酵過(guò)程中檢測(cè)酵母菌數(shù)量可采用法或稀釋涂布平板法計(jì)數(shù)。

⑵玉米胚芽油不易揮發(fā),宜選用法或法從玉米胚芽中提取。

(3)玉米淀粉經(jīng)酶解形成的葡萄糖可在葡萄糖異構(gòu)酶的作用下轉(zhuǎn)化成果糖。利用

技術(shù)可使葡萄糖異構(gòu)酶重復(fù)利用，從而降低生產(chǎn)成本。

(4)利用PCR技術(shù)擴(kuò)增葡萄糖異構(gòu)酶基因時(shí),需用耐高溫的催化。PCR一般要經(jīng)歷

三十次以上的循環(huán),每次循環(huán)包括變性、和三步。

【解題指南】(1)題干關(guān)鍵詞：“玉米秸稈”“玉米胚芽”和“玉米淀粉”。

(2)關(guān)鍵知識(shí):①所有微生物生長(zhǎng)繁殖均需要培養(yǎng)基，其含有碳源、氮源、無(wú)機(jī)鹽、水等；

②PCR技術(shù)與細(xì)胞內(nèi)DNA復(fù)制的最大區(qū)別是需要耐高溫的DNA聚合酶。

本題主要考查微生物的培養(yǎng)和PCR技術(shù)。

(1)玉米秸稈中的纖維素經(jīng)水解后的產(chǎn)物為葡萄糖,葡萄糖可為酵母菌的生長(zhǎng)提供碳源。酵母

菌可用顯微鏡直接計(jì)數(shù)法或稀釋涂布平板法計(jì)數(shù)。

(2)玉米胚芽油不易揮發(fā)，因此不宜選用蒸播法提取,可用壓榨法或萃取法提取。

(3)利用固定化酶技術(shù)可使酶重復(fù)利用，從而降低生產(chǎn)成本。

(4)PCR技術(shù)中應(yīng)選用耐高溫的DNA聚合酶催化,PCR的每次循環(huán)包括變性、復(fù)性和延伸三步。

答案：(1)碳源顯微鏡直接計(jì)數(shù)

(2)壓榨萃取(注:兩空可顛倒)

⑶固定化酶(4)(Taq)DNA聚合酶(低溫)復(fù)性(或退火)(中溫)延伸

6.(2014?浙江?自選模塊?T17)“生物技術(shù)實(shí)踐”模塊

下面是關(guān)于固定化酶和細(xì)菌培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)的問(wèn)題，請(qǐng)回答：

(1)某興趣小組欲利用固定化酶進(jìn)行酶解淀粉的實(shí)驗(yàn),分組見(jiàn)下表。

組另U固定化酶柱長(zhǎng)度(cm)淀粉溶液的流速(mL?min1)

甲100.3

乙100.5

丙150.3

T150.5

將吸附了a-淀粉酶的石英砂裝入柱中后，需用蒸儲(chǔ)水充分洗滌固定化酶柱，以除

去0按上表分組,將配制好的淀粉溶液加入到固定化酶柱中，然后取

一定量的流出液進(jìn)行KI-L檢測(cè)。若流出液呈紅色,表明有

生成,若各組呈現(xiàn)的顏色有顯著差異，則流出液中淀粉水解產(chǎn)物濃度最高的

是組。

(2)下列關(guān)于上述固定化酶實(shí)驗(yàn)的敘述,錯(cuò)誤的是o

A.固定化酶柱長(zhǎng)度和淀粉溶液流速?zèng)Q定了酶柱中酶的含量

B.淀粉溶液流速過(guò)快會(huì)導(dǎo)致流出液中含有淀粉

C.各組實(shí)驗(yàn)所用的淀粉溶液濃度應(yīng)相同

D.淀粉溶液的pH對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果有影響

(3)現(xiàn)有一份污水樣品,某興趣小組欲檢測(cè)其中的細(xì)菌數(shù),進(jìn)行以下實(shí)驗(yàn)。將一定量的污水樣品

進(jìn)行濃度梯度稀釋。取適量不同稀釋度的稀釋液，用

法分別接種于固體平面培養(yǎng)基上，經(jīng)培養(yǎng)后進(jìn)行計(jì)數(shù)。該實(shí)驗(yàn)應(yīng)注意，接種前，從盛有

的容器中將玻璃刮刀取出，放在酒精燈火焰上灼燒,冷卻后待用；分組時(shí)，需用作

為對(duì)照。

(4)在上述細(xì)菌培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)中進(jìn)行計(jì)數(shù)時(shí),應(yīng)計(jì)數(shù)的是接種了o

A.各個(gè)稀釋度樣品的培養(yǎng)基上的細(xì)菌數(shù)

B.合理稀釋度樣品的培養(yǎng)基上的細(xì)菌數(shù)

C.各個(gè)稀釋度樣品的培養(yǎng)基上的菌落數(shù)

D.合理稀釋度樣品的培養(yǎng)基上的菌落數(shù)

【解題指南】(1)題干關(guān)鍵詞：“固定化酶”“細(xì)菌培養(yǎng)”“接種”“計(jì)數(shù)”。

(2)隱含信息:酶濃度對(duì)淀粉水解反應(yīng)的影響、pH等環(huán)境因素對(duì)酶活性的影響、底物淀粉與酶

接觸面積對(duì)反應(yīng)速率的影響、微生物培養(yǎng)時(shí)防止雜菌污染的方法等。

本題主要考查固定化酶應(yīng)用的相關(guān)知識(shí)。

⑴題表中固定化酶柱長(zhǎng)度代表所用固定化酶濃度的大小，長(zhǎng)度越大酶柱中所含酶越多；淀粉

溶液的流速?zèng)Q定了反應(yīng)物與酶柱中酶相互接觸的時(shí)間長(zhǎng)短,流速越小,淀粉與酶越能充分接觸

而反應(yīng)。淀粉遇KI-L試劑顯藍(lán)色,而流出液中顯示紅色,說(shuō)明大分子淀粉在酶的作用下水解。

從表中可知,丙中酶柱較長(zhǎng),淀粉流速較小,最適合酶促反應(yīng),反應(yīng)速率最快。

(2)設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)應(yīng)遵循對(duì)照原則、單因子變量原則，所以每組實(shí)驗(yàn)中淀粉溶液濃度應(yīng)相同、溶液

的pH均應(yīng)保持在淀粉酶的最適pH條件下,所以C、D項(xiàng)正確。淀粉溶液流速過(guò)快,酶與底物不

能充分反應(yīng)，流出的可能是沒(méi)有水解的淀粉，故B項(xiàng)正確。酶柱中酶的含量由酶柱長(zhǎng)度決定,

但是酶在反應(yīng)前后保持不變,所以淀粉溶液流速不能決定酶的含量,因此A項(xiàng)錯(cuò)誤。

(3)本實(shí)驗(yàn)所接種細(xì)菌為不同稀釋度的菌液,而不是挑取菌落接種,應(yīng)用涂布分離法。微生物培

養(yǎng)為防止雜菌污染需在無(wú)菌條件下進(jìn)行，常用的消毒滅菌方法有①消毒法:煮沸、巴氏消毒法、

化學(xué)試劑消毒法(70%酒精)；②滅菌法:灼燒滅菌、干熱滅菌、高壓蒸汽滅菌。

(4)測(cè)定微生物數(shù)量的方法:①直接計(jì)數(shù)法,此法利用特定細(xì)菌計(jì)數(shù)板或血細(xì)胞計(jì)數(shù)板，在顯微

鏡下計(jì)算一定容積的樣品中微生物數(shù)量，但不能區(qū)分細(xì)菌死活;②間接計(jì)數(shù)法，常用的是稀釋

平板計(jì)數(shù)法,此法在含菌數(shù)較少的情況下，也可計(jì)數(shù),但需將待測(cè)樣品制成均勻的系列稀釋液,

盡量使樣品中微生物細(xì)胞分散開(kāi),為防止偶然性,應(yīng)計(jì)數(shù)合理稀釋度樣品培養(yǎng)基上的菌落數(shù),

菌落易于觀察。通過(guò)以上分析，故D項(xiàng)正確。

答案：(1)未吸附的a-淀粉酶糊精丙

(2)A(3)涂布分離70%酒精未接種的培養(yǎng)基(4)D

7.［生物一一選修1:生物技術(shù)實(shí)踐］(2014?新課標(biāo)全國(guó)卷I?T39)

植物秸稈中的纖維素可被某些微生物分解。回答下列問(wèn)題：

(1)分解秸稈中纖維素的微生物能分泌纖維素酶，該酶是由3種組分組成的復(fù)合酶，其中的葡

萄糖甘酶可將分解成。

(2)在含纖維素的培養(yǎng)基中加入剛果紅(CR)時(shí),CR可與纖維素形成色復(fù)合物。用含

有CR的該種培養(yǎng)基培養(yǎng)纖維素分解菌時(shí)，培養(yǎng)基上會(huì)出現(xiàn)以該菌的菌落為中心

的。

(3)為從富含纖維素的土壤中分離獲得纖維素分解菌的單菌落，某同學(xué)設(shè)計(jì)了甲、乙兩種培養(yǎng)

基(成分見(jiàn)下表)：

纖維CR

酵母膏無(wú)機(jī)鹽淀粉瓊脂水

素粉溶液

培養(yǎng)

++++-++

基甲

培養(yǎng)

+4-+-+++

基乙

注：“+”表示有，表示無(wú)。

據(jù)表判斷，培養(yǎng)基甲(填“能”或“不能”)用于分離和鑒別纖維素分解菌，原因

是；培養(yǎng)基乙(填“能”或“不能”)用于分離和鑒別纖維素

分解菌，原因是

【解題指南】(1)題干關(guān)鍵詞：“纖維素酶”“剛果紅”。

(2)隱含信息:兩種培養(yǎng)基中有瓊脂的為固體培養(yǎng)基,無(wú)瓊脂的為液體培養(yǎng)基;淀粉是微生物的

碳源,不含纖維素粉不能作為分離和鑒別纖維素分解菌實(shí)驗(yàn)的選擇培養(yǎng)基。

(3)關(guān)鍵知識(shí):土壤中某些微生物的分解作用和篩選纖維素分解菌的方法。

本題主要考查纖維素酶的作用、剛果紅染色法、分離和鑒別纖維素分解菌的方法。

(1)纖維素是一種由葡萄糖首尾相連而成的高分子化合物，是含量最豐富的多糖類物質(zhì)。纖維

素能被纖維素酶分解為葡萄糖,如圖：

纖維素f夠g匕纖維二糖葡萄糖普味葡萄糖

(2)剛果紅與纖維素形成紅色復(fù)合物，當(dāng)纖維素被纖維素酶分解后，紅色復(fù)合物無(wú)法形成，出現(xiàn)

以纖維素分解菌為中心的透明圈,可以通過(guò)是否產(chǎn)生透明圈來(lái)篩選纖維素分解菌。

(3)分離和鑒別纖維素分解菌的培養(yǎng)基為固體培養(yǎng)基，且需要以纖維素為唯一碳源。

答案：(1)纖維二糖葡萄糖

⑵紅透明圈

(3)不能液體培養(yǎng)基不能分離單菌落不能培養(yǎng)基乙中沒(méi)有纖維素，不會(huì)形成CR-纖維素

紅色復(fù)合物，即使出現(xiàn)單菌落也不能確定其為纖維素分解菌

8.［生物——選修1:生物技術(shù)實(shí)踐］(2014?新課標(biāo)全國(guó)卷II-T39)

為了調(diào)查某河流的水質(zhì)狀況,某研究小組測(cè)定了該河流水樣中的細(xì)菌含量,并進(jìn)行了細(xì)菌分離

等工作?；卮鹣铝袉?wèn)題：

(1)該小組采用稀釋涂布平板法檢測(cè)水樣中細(xì)菌含量。在涂布接種前,隨機(jī)取若干滅菌后的空

白平板先行培養(yǎng)了一段時(shí)間，這樣做的目的是；然后,

將1mL水樣稀釋100倍,在3個(gè)平板上用涂布法分別接入0.1mL稀釋液;經(jīng)適當(dāng)培養(yǎng)后,3個(gè)

平板上的菌落數(shù)分別為39、38和37,據(jù)此可得出每升水樣中的活菌數(shù)為o

(2)該小組采用平板劃線法分離水樣中的細(xì)菌。操作時(shí)，接種環(huán)通過(guò)

滅菌，在第二次及以后的劃線時(shí)，總是從上一次劃線的末端開(kāi)始劃線，這樣做的目的

是O

⑶示意圖A和B中,表示的是用稀釋涂布平板

法接種培養(yǎng)后得到的結(jié)果。

(4)該小組將得到的菌株接種到液體培養(yǎng)基中并混勻，一部分進(jìn)

行靜置培養(yǎng),另一部分進(jìn)行振蕩培養(yǎng)。結(jié)果發(fā)現(xiàn):振蕩培養(yǎng)的細(xì)AB

菌比靜置培養(yǎng)的細(xì)菌生長(zhǎng)速度快。分析其原因是:振蕩培養(yǎng)能提高培養(yǎng)液中

的含量，同時(shí)可使菌體與培養(yǎng)液充分接觸,提高的利用率。

【解題指南】(1)題干關(guān)鍵詞：“先行培養(yǎng)”“振蕩培養(yǎng)”。

(2)隱含信息:A圖中菌落是采用平板劃線法培養(yǎng)的結(jié)果,B圖中菌落分布相對(duì)均勻，為稀釋涂

布平板法接種培養(yǎng)的結(jié)果。

(3)關(guān)鍵知識(shí):稀釋涂布平板法檢測(cè)細(xì)菌含量、平板劃線法分離細(xì)菌。

本題考查微生物培養(yǎng)、細(xì)菌分離的相關(guān)知識(shí)。

⑴為了確定培養(yǎng)基的滅菌是否合格，微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)一般會(huì)設(shè)置空白對(duì)照：隨機(jī)取若干滅菌后

的空白平板培養(yǎng)一段時(shí)間，觀察培養(yǎng)基上是否有菌落生成;利用平板菌落計(jì)數(shù)法的計(jì)算公式估

算水樣中的活菌數(shù)：

(■Yu,我脖U教結(jié)出下內(nèi)軟3薊］

—麗麗-----x卻儕數(shù))

3.NX10：I.

(2)接種時(shí)接種環(huán)需要灼燒滅菌;在第二次及以后劃線時(shí)，總是從上一次劃線的末端開(kāi)始劃線,

這樣做的目的是通過(guò)劃線次數(shù)的增加，使每次劃線時(shí)菌體的數(shù)目逐漸減少，以便得到單個(gè)菌

落。

(3)根據(jù)示意圖A和B中生長(zhǎng)出的菌落形態(tài),判定B圖中為稀釋涂布平板法接種培養(yǎng)的結(jié)果(菌

落分布相對(duì)均勻)。

(4)振蕩培養(yǎng)可以增加液體培養(yǎng)基溶解氧的含量,促進(jìn)好氧型微生物的生長(zhǎng)；另外振蕩培養(yǎng)還

可以使菌體與培養(yǎng)液充分接觸,提高營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的利用率。

答案：(1)檢測(cè)培養(yǎng)基平板滅菌是否合格3.8X107

(2)灼燒將聚集的菌體逐步稀釋以便獲得單個(gè)菌落

(3)B

(4)溶解氧營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)

9.(2014?四川高考?T10)有機(jī)農(nóng)藥苯磺隆是一種除草劑，長(zhǎng)期使用會(huì)污染環(huán)境。研究發(fā)現(xiàn),

苯磺隆能被土壤中某些微生物降解。分離降解苯磺隆的菌株和探索其降解機(jī)制的實(shí)驗(yàn)過(guò)程如

圖甲、乙所示。

蛋白酶溶液

取10mL加入測(cè)定苯磺

—隆降解率

選擇培養(yǎng)劃線純化菌種上清液苯磺隆溶液

圖甲圖乙

(1)微生物生長(zhǎng)繁殖所需的主要營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)有碳源、水、四類,該實(shí)驗(yàn)所用的選擇培

養(yǎng)基只能以苯磺隆作為唯一碳源,其原因是

⑵與微生物培養(yǎng)基相比,植物組織培養(yǎng)的培養(yǎng)基常需添加生長(zhǎng)素和,這些植物激

素一般需要事先單獨(dú)配制成保存?zhèn)溆谩?/p>

(3)純化菌株時(shí),通常使用的劃線工具是。劃線的某個(gè)平板培養(yǎng)后,第一劃線區(qū)域的

劃線上都不間斷地長(zhǎng)滿了菌,第二劃線區(qū)域所劃的第一條線上無(wú)菌落,其他劃線上有菌落。造

成劃線無(wú)菌落可能的操作失誤有

(4)為探究苯磺隆的降解機(jī)制,將該菌種的培養(yǎng)液過(guò)濾離心,取上清液做圖乙所示實(shí)驗(yàn)。該實(shí)驗(yàn)

的假設(shè)是,該實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)是否合理？為什

么？。

【解題指南】(1)圖示信息:利用選擇培養(yǎng)基分離降解苯磺隆的菌株，取菌株產(chǎn)生的蛋白酶分解

苯磺隆。

⑵關(guān)鍵知識(shí):微生物的培養(yǎng)基成分、植物組織培養(yǎng)、微生物的接種、對(duì)照原則。

本題考查微生物的培養(yǎng)及對(duì)照實(shí)驗(yàn)的設(shè)計(jì)原則。

(1)微生物的培養(yǎng)基主要含有水、碳源、氮源和無(wú)機(jī)鹽四類營(yíng)養(yǎng);選擇培養(yǎng)基只允許特定種類

的微生物生長(zhǎng)，又要抑制或阻止其他種類微生物生長(zhǎng)，因而必須以苯磺隆為唯一碳源，只讓目

的菌株生長(zhǎng)繁殖。

(2)植物組織培養(yǎng)中啟動(dòng)細(xì)胞分裂、脫分化和再分化的關(guān)鍵性激素是生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素,為

了避免每次配制時(shí)都要稱量,可將植物激素先配成母液。

⑶接種環(huán)在平板內(nèi)的第二次劃線起，都要先灼燒滅菌冷卻后劃線，而且要從上一次劃線末端

而非空白處劃線,不冷卻會(huì)燙死上一次劃線末端的菌株,從空白處劃線會(huì)無(wú)菌株。

(4)從圖乙上清液中加入蛋白酶溶液可知，蛋白酶是用于水解上清液中的某蛋白質(zhì)的，由此可

判定實(shí)驗(yàn)假設(shè)是目的菌株能分泌降解苯磺隆的蛋白質(zhì)，但是還需設(shè)計(jì)不加入蛋白酶的對(duì)照組。

答案：(1)氮源和無(wú)機(jī)鹽只有能利用苯磺隆的微生物能正常生長(zhǎng)繁殖

(2)細(xì)胞分裂素母液

(3)接種環(huán)①接種環(huán)灼燒后未冷卻;②劃線未從第一區(qū)域末端開(kāi)始劃線

(4)目的菌株能分泌降解苯磺隆的蛋白質(zhì)不合理，缺少空白對(duì)照

10.(2014?江蘇高考?T29)為了獲得植物次生代謝產(chǎn)物,先用植物外植體獲得愈傷組織,然后

在液體培養(yǎng)基中懸浮培養(yǎng)。請(qǐng)回答下列問(wèn)題：

(1)外植體經(jīng)誘導(dǎo)后形成愈傷組織的過(guò)程稱為o

(2)在愈傷組織懸浮培養(yǎng)時(shí)，細(xì)胞干重、蔗糖濃度和pH的變化如下圖所示。細(xì)胞干重在12d

后下降的原因有;培養(yǎng)液中蔗糖的作用

⑶多倍體愈傷組織細(xì)胞產(chǎn)生的次生代謝產(chǎn)物量常高于二倍體。二倍體愈傷組織細(xì)胞經(jīng)

處理，會(huì)產(chǎn)生染色體加倍的細(xì)胞。為檢測(cè)愈傷組織細(xì)胞染色體數(shù)目，壓片前常用纖維素酶和

酶解離愈傷組織。若愈傷組織細(xì)胞(2n)經(jīng)誘導(dǎo)處理后，觀察到染色體數(shù)為8n的細(xì)胞,合理的解

釋是、o

(4)為了更好地獲得次生代謝產(chǎn)物,生產(chǎn)中采用植物細(xì)胞的固定化技術(shù),其原理與酵母細(xì)胞固

定化類似。下列說(shuō)法正確的有(填序號(hào))。

①選取旺盛生長(zhǎng)的愈傷組織細(xì)胞包埋②必須在光照條件下培養(yǎng)

③培養(yǎng)過(guò)程中需通空氣④固定化后植物細(xì)胞生長(zhǎng)會(huì)變慢

【解題指南】(1)題干中有文字“在愈傷組織懸浮培養(yǎng)時(shí)，細(xì)胞干重、蔗糖濃度和pH的變化”，

從而推斷圖中曲線的含義。

(2)關(guān)鍵知識(shí):植物組織培養(yǎng)、染色體變異及細(xì)胞固定化。

本題考查植物組織培養(yǎng)、誘導(dǎo)染色體加倍、有絲分裂、酶的固定化技術(shù)。

(1)外植體在人工、無(wú)菌條件下,經(jīng)脫分化可形成愈傷組織。

⑵由圖蔗糖濃度下降可知，外植體離體培養(yǎng)過(guò)程中需要消耗蔗糖，12天后蔗糖濃度較低;pH

下降會(huì)影響酶的活性，愈傷組織細(xì)胞對(duì)物質(zhì)的合成少于分解,細(xì)胞干重下降。植物組織培養(yǎng)過(guò)

程中,蔗糖既能維持一定的滲透壓,又能提供植物細(xì)胞生命活動(dòng)必須的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)(能量)。

⑶一定濃度的秋水仙素或低溫都可抑制紡錘體的形成,使子染色體不能移向兩極,從而使細(xì)

胞中染色體數(shù)目加倍。植物細(xì)胞壁的成分主要是纖維素和果膠，可通過(guò)纖維素酶、果膠酶破壞

細(xì)胞壁，從而使愈傷組織細(xì)胞分離。在用秋水仙素或低溫處理后，會(huì)出現(xiàn)染色體為2n、4n、8n

等的細(xì)胞,4n的細(xì)胞在有絲分裂后期著絲點(diǎn)分裂,染色體數(shù)目加倍至8n;8n的細(xì)胞在有絲分裂

中期能清晰看出8n條染色體。

(4)為了更好地獲得次生代謝產(chǎn)物,應(yīng)選用生長(zhǎng)旺盛的愈傷組織細(xì)胞。愈傷組織不能進(jìn)行光合

作用，因此要通入無(wú)菌空氣確保其正常的生命活動(dòng)。細(xì)胞的固定化通常使用包埋法，由于包埋

材料的影響，營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)和氧氣的擴(kuò)散都受到一定的限制,所以固定化細(xì)胞生長(zhǎng)速度會(huì)變慢。

答案：(1)脫分化

(2)蔗糖濃度下降,pH降低提供能源調(diào)節(jié)滲透壓

⑶秋水仙素(低溫)果膠經(jīng)加倍到4n的細(xì)胞處于有絲分裂后期經(jīng)加倍到8n的細(xì)胞處于

有絲分裂中期

(4)①③④

11.(2014?江蘇高考?T30)為了獲得胡蘿卜素產(chǎn)品，某小組開(kāi)展了產(chǎn)B-胡蘿卜素酵母的篩

選與色素提取實(shí)驗(yàn)。請(qǐng)回答下列問(wèn)題：

⑴實(shí)驗(yàn)用的培養(yǎng)皿常用的兩種滅菌方法是;為了減少滅菌后器皿被污染，滅

菌前應(yīng)該.

(2)為了篩選出酵母菌，培養(yǎng)基中添加了青霉素，其目的是o

⑶下圖是滅菌鍋及其局部剖面示意圖，圖中甲、乙、丙指示的依次是o(填序號(hào))

乙

丙

①安全閥、放氣閥、壓力表

②放氣閥、安全閥、壓力表

③安全閥、放氣閥、溫度表

④放氣閥、安全閥、溫度表

(4)為了將分離到的菌株純化,挑取了菌落在3塊相同平板上劃線，結(jié)果其中一塊平板的各劃

線區(qū)均未見(jiàn)菌生長(zhǎng),最可能的原因是

⑸為增加B-胡蘿卜素提取量，在研磨酵母細(xì)胞時(shí)，添加石英砂的目的

是;研磨時(shí)（填“需要”或“不需要”）添加

CaCO3）理由是o

【解題指南】（1）圖示信息:滅菌鍋及其局部剖面示意圖，從而推斷甲、乙、丙指示的結(jié)構(gòu)名稱。

（2）關(guān)鍵知識(shí):微生物的培養(yǎng)與分離純化、色素的提取。

本題考查微生物培養(yǎng)中的滅菌、接種技術(shù)、滅菌鍋的構(gòu)造、色素提取的操作。

（1）滅菌常用方法有高壓蒸汽滅菌、干熱滅菌、灼燒滅菌等,培養(yǎng)皿常用高壓蒸汽滅菌、干熱

滅菌。將培養(yǎng)皿放入滅菌鍋之前通常用牛皮紙或報(bào)紙包扎避免滅菌后的再次污染。

（2）青霉素能破壞細(xì)菌的細(xì)胞壁并在細(xì)菌的繁殖期起殺菌作用，因此添加青霉素可抑制細(xì)菌的

生長(zhǎng)。

⑶乙連接軟管為排（放）氣閥，甲為安全閥,丙是壓力表。

（4）3塊平板有兩塊平板長(zhǎng)有菌落，說(shuō)明含有菌株并可在培養(yǎng)基上生長(zhǎng);而其中一塊未見(jiàn)菌落,

說(shuō)明菌株死亡,最可能的原因是接種過(guò)程中接種環(huán)灼燒后未冷卻或未足夠冷卻，使菌株因溫度

過(guò)高被殺死。

⑸石英砂有助于研磨充分。CaCOs用于中和酸性物質(zhì)，B-胡蘿卜素較耐酸，因此不需添加

CaC03o

答案：（1）干熱滅菌和濕熱滅菌（高壓蒸汽滅菌）用牛皮紙（報(bào)紙）包扎器皿

（2）抑制細(xì)菌（放線菌）生長(zhǎng)

（3）①（4）接種環(huán)溫度過(guò)高,菌被殺死

（5）有助于研磨充分不需要B-胡蘿卜素較耐酸

12.（2014?海南高考?T30）［生物一一選修1:生物技術(shù)實(shí)踐］已知泡菜中亞硝酸鹽含量與泡制

時(shí)間有關(guān)。為了測(cè)定不同泡制天數(shù)泡菜中亞硝酸鹽的含量,某同學(xué)設(shè)計(jì)了一個(gè)實(shí)驗(yàn),實(shí)驗(yàn)材料、

試劑及用具包括:刻度移液管、比色管、不同濃度的亞硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液、亞硝酸鹽的顯色劑、

不同泡制天數(shù)的泡菜濾液等?；卮鹣嚓P(guān)問(wèn)題：

（1）請(qǐng)完善下列實(shí)驗(yàn)步驟。

①標(biāo)準(zhǔn)管的制備:用和顯色劑制成顏色深淺不同的系列標(biāo)準(zhǔn)管。

②樣品管的制備:用刻度移液管分別吸取一定量的,加到不同的比色管中，然后在各

個(gè)比色管中加入等量的顯色劑進(jìn)行顯色,得到樣品管。

③將每個(gè)分別與系列標(biāo)準(zhǔn)管進(jìn)行比較，找出與樣品管顏色深淺

的標(biāo)準(zhǔn)管,該管中亞硝酸鈉含量即代表樣品管中的亞硝酸鹽含量,記錄各樣品管亞硝酸鹽的含

量。

⑵下圖表示的是泡菜中趨勢(shì)。

（3）泡菜制作過(guò)程中產(chǎn)酸的細(xì)菌主要是（填“醋酸桿菌”或“乳酸菌”）o

【解題指南】（1）題干關(guān)鍵詞：“泡菜中亞硝酸鹽含量與泡制時(shí)間有關(guān)”。

（2）關(guān)鍵知識(shí):亞硝酸鹽含量的測(cè)定、泡菜的制作原理。

本題主要考查泡菜制作原理及亞硝酸鹽含量測(cè)定的相關(guān)知識(shí)。

（1）在亞硝酸鹽的含量測(cè)定中，用不同濃度的亞硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液和顯色劑制成顏色深淺不同的

系列標(biāo)準(zhǔn)管;用刻度移液管分別吸取一定量的不同泡制天數(shù)的泡菜濾液，加到不同的比色管中,

然后在各個(gè)比色管中加入等量的顯色劑進(jìn)行顯色，得到樣品管;將每個(gè)樣品管分別與系列標(biāo)準(zhǔn)

管進(jìn)行比較，找出與樣品管顏色深淺相近的標(biāo)準(zhǔn)管,該管中亞硝酸鈉含量即代表樣品管中的亞

硝酸鹽含量，記錄各樣品管亞硝酸鹽的含量。

（2）據(jù)圖可知，該圖表示亞硝酸鹽的含量隨發(fā)酵時(shí)間的變化曲線。

（3）制泡菜時(shí)使用的微生物是乳酸菌。

答案：（1）①不同濃度的亞硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液②不同泡制天數(shù)的泡菜濾液③樣品管相同

（相近）

（2）亞硝酸鹽含量的變化（3）乳酸菌

知識(shí)點(diǎn)20生物技術(shù)實(shí)踐

1.（2015?廣東高考?T3）關(guān)于DNA的實(shí)驗(yàn),敘述正確的是（）

A.用兔的成熟紅細(xì)胞可提取DNA

B.PCR的每個(gè)循環(huán)一般依次經(jīng)過(guò)變性一延伸一復(fù)性三步

C.DNA溶液與二苯胺試劑混合,沸水浴后生成藍(lán)色產(chǎn)物

D.用甲基綠對(duì)人的口腔上皮細(xì)胞染色,細(xì)胞核呈綠色,細(xì)胞質(zhì)呈紅色

【解題指南】（1）題干關(guān)鍵詞:提取DNA、PCR、二苯胺試劑、甲基綠。

⑵關(guān)鍵知識(shí):DNA的提取與檢測(cè)方法、PCR反應(yīng)過(guò)程、甲基綠的作用。

選C。本題主要考查了實(shí)驗(yàn)的原理、選材以及試劑的使用。兔為哺乳動(dòng)物，其成熟的紅細(xì)胞中

無(wú)細(xì)胞核,不能從中提取DNA,故A項(xiàng)錯(cuò)誤;PCR每次循環(huán)都可以分為變性一復(fù)性一延伸三步,

故B項(xiàng)錯(cuò)誤;在沸水浴的條件下,DNA遇二苯胺變成藍(lán)色,故C項(xiàng)正確；甲基綠使DNA呈現(xiàn)綠色,

不論是細(xì)胞核還是細(xì)胞質(zhì)，只要含有DNA,都會(huì)呈綠色,故D項(xiàng)錯(cuò)誤。

2.（2015?江蘇高考?T11）下列關(guān)于固定化酶和固定化細(xì)胞的敘述，錯(cuò)誤的是

（）

A.固定化酶的主要目的是實(shí)現(xiàn)酶的重復(fù)利用

B.溶解氧交換受阻是固定化酶應(yīng)用的重要限制因素

C.固定化細(xì)胞用于生產(chǎn)能分泌到細(xì)胞外的產(chǎn)物

D.凝膠與被包埋細(xì)胞之間不是通過(guò)共價(jià)鍵結(jié)合

選Bo本題主要考查固定化酶和固定化細(xì)胞。固定化酶制作的目的是能夠順利從發(fā)酵產(chǎn)物中

把酶分離出來(lái),并能夠使酶反復(fù)使用，故A項(xiàng)正確;溶解氧交換受阻會(huì)影響細(xì)胞呼吸,是固定化

細(xì)胞應(yīng)用的重要限制因素,故B項(xiàng)錯(cuò)誤；固定化細(xì)胞用于生產(chǎn)、獲得細(xì)胞的代謝產(chǎn)物,故C項(xiàng)正

確;將細(xì)胞包埋在多孔載體內(nèi)部而制成固定化細(xì)胞，細(xì)胞并不與凝膠通過(guò)共價(jià)鍵結(jié)合，故D項(xiàng)

正確。

3.（2015?江蘇高考?T17）關(guān)于“腐乳的制作”實(shí)驗(yàn),下列敘述錯(cuò)誤的是（）

A.將腐乳坯堆積起來(lái)會(huì)導(dǎo)致堆內(nèi)溫度升高,影響毛霉生長(zhǎng)

B.腐乳坯若被細(xì)菌污染,則腐乳坯表面會(huì)出現(xiàn)黏性物

C.勤向腐乳坯表面噴水,有利于毛霉菌絲的生長(zhǎng)

D.裝壇階段加入料酒,可有效防止雜菌污染

選Co本題主要考查腐乳制作的過(guò)程和材料處理的方法及目的。將腐乳坯堆積起來(lái)會(huì)導(dǎo)致微

生物大量繁殖，堆內(nèi)溫度升高,影響毛霉生長(zhǎng)，故A項(xiàng)正確；正常情況下毛霉等菌種，會(huì)使豆腐

表面長(zhǎng)出一層菌絲,被細(xì)菌污染,腐乳坯表面會(huì)出現(xiàn)黏性物,故B項(xiàng)正確;適于做腐乳的豆腐含

水量為70%左右,適于毛霉菌絲生長(zhǎng),再加水不利于腐乳成形,故C項(xiàng)錯(cuò)誤;裝壇時(shí)加入料酒,可

抑制雜菌生長(zhǎng)，故D項(xiàng)正確。

4.（2015?江蘇高考?T19）做“微生物的分離與培養(yǎng)”實(shí)驗(yàn)時(shí)，下列敘述正確的是（）

A.高壓滅菌加熱結(jié)束時(shí),打開(kāi)放（排）氣閥使壓力表指針回到零后,開(kāi)啟鍋蓋

B.倒平板時(shí),應(yīng)將打開(kāi)的皿蓋放到一邊，以免培養(yǎng)基濺到皿蓋上

C.為了防止污染,接種環(huán)經(jīng)火焰滅菌后應(yīng)趁熱快速挑取菌落

D.用記號(hào)筆標(biāo)記培養(yǎng)皿中菌落時(shí),應(yīng)標(biāo)記在皿底上

【解題指南】關(guān)鍵知識(shí):培養(yǎng)基的滅菌方法、倒平板的方法和接種的過(guò)程。

選D。本題主要考查微生物的分離與培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)。高壓蒸汽滅菌加熱結(jié)束后，讓其自然冷卻后再

慢慢打開(kāi)排氣閥以排除余氣,然后才能開(kāi)蓋取物,故A項(xiàng)錯(cuò)誤;倒平板時(shí)左手拿培養(yǎng)皿,右手拿

錐形瓶,左手將培養(yǎng)皿打開(kāi)一條稍大于瓶口的縫隙，倒入培養(yǎng)基后立即蓋上培養(yǎng)皿皿蓋，故B

項(xiàng)錯(cuò)誤;灼燒接種環(huán)之后，要冷卻后才能伸入菌液，以免溫度太高殺死菌種，故C項(xiàng)錯(cuò)誤;皿底

的標(biāo)記不會(huì)因?yàn)樯w子混淆而混淆,故D項(xiàng)正確。

5.（2015?四川高考?T3）下列是以酵母菌為材料進(jìn)行的實(shí)驗(yàn)，有關(guān)敘述錯(cuò)誤的是

（）

A.探究酵母菌的呼吸方式,可用澳麝香草酚藍(lán)檢測(cè)產(chǎn)生的C02

B.用酵母菌發(fā)酵釀制果酒,選擇酸性重格酸鉀檢測(cè)產(chǎn)生的酒精

C.探究酵母菌種群數(shù)量變化,應(yīng)設(shè)空白對(duì)照排除無(wú)關(guān)變量干擾

D.用稀釋涂布平板法培養(yǎng)計(jì)數(shù),應(yīng)選擇有30~300菌落數(shù)的平板

【解題指南】（1）題干關(guān)鍵詞：“酵母菌”“錯(cuò)誤”。

（2）關(guān)鍵知識(shí):酵母菌無(wú)氧呼吸產(chǎn)物的鑒定原理、探究酵母菌種群數(shù)量變化的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)原則及

計(jì)數(shù)方法。

選C。本題考查酵母菌細(xì)胞呼吸方式探究及種群數(shù)量變化研究。A項(xiàng)，酵母菌呼吸作用產(chǎn)生的

C0,可使澳麝香草酚藍(lán)水溶液由藍(lán)變綠再變黃,故正確。B項(xiàng),橙色的酸性重鋁酸鉀與酒精發(fā)生

化學(xué)反應(yīng),變成灰綠色,故正確。C項(xiàng),探究酵母菌種群數(shù)量變化,不同時(shí)間的取樣即為對(duì)照,不

必設(shè)空白對(duì)照,故錯(cuò)誤。D項(xiàng),菌落數(shù)若太少的話不準(zhǔn)確,太多的話不好計(jì)數(shù),一般選擇有30?

300菌落數(shù)的平板計(jì)數(shù),故正確。

6.（2015?江蘇高考?T24）下圖為蘋(píng)果酒的發(fā)酵裝置示意圖，下列敘述錯(cuò)誤的是（多選）（）

A.發(fā)酵過(guò)程中酒精的產(chǎn)生速率越來(lái)越快

B.集氣管中的氣體是酵母菌無(wú)氧呼吸產(chǎn)生的CO2

C.發(fā)酵過(guò)程中酵母菌種群呈“J”型增長(zhǎng)

D.若發(fā)酵液表面出現(xiàn)菌膜,最可能原因是發(fā)酵瓶漏氣

選A、B、C。本題主要考查果酒的制作原理、步驟和注意事項(xiàng)。發(fā)酵后期，底物減少、酒精濃

度增加等因素，都會(huì)造成酒精生產(chǎn)速率減慢，故A項(xiàng)錯(cuò)誤;發(fā)酵初期，由于發(fā)酵瓶中有氧氣，酵

母菌能進(jìn)行有氧呼吸產(chǎn)生C021故B項(xiàng)錯(cuò)誤「酵母菌種群數(shù)量先增加后減少,故C項(xiàng)錯(cuò)誤;發(fā)酵瓶

漏氣,會(huì)使醋酸菌等大量繁殖,從而形成表面可以觀察到的菌膜,故D項(xiàng)正確。

7.（2015?山東高考?T35）乳糖酶能夠催化乳糖水解為葡萄糖和半乳糖,具有重要應(yīng)用價(jià)值。

乳糖酶的制備及固定化步驟如下：

產(chǎn)乳糖酶微生產(chǎn)乳糖酶微生乳糖酶的

物L(fēng)的篩選物L(fēng)的培養(yǎng)提取純化

__乳糖酶

一|的固定化

（1）篩選產(chǎn)乳糖酶的微生物L(fēng)時(shí),宜用作為培養(yǎng)基中的唯一碳源。培養(yǎng)基中瓊脂

的作用是。從功能上講，這種培養(yǎng)基屬于。

（2）培養(yǎng)微生物L(fēng)前,宜采用方法對(duì)接種環(huán)進(jìn)行滅菌。

（3）純化后的乳糖酶可用電泳法檢測(cè)其分子量（相對(duì)分子質(zhì)量）大小。在相同條件下，帶電荷相

同的蛋白質(zhì)電泳速度越快,說(shuō)明其分子量（相對(duì)分子質(zhì)量）越。

（4）乳糖酶宜采用化學(xué)結(jié)合法（共價(jià)鍵結(jié)合法）進(jìn)行固定化，可通過(guò)檢測(cè)固定化乳糖酶的

確定其應(yīng)用價(jià)值。除化學(xué)結(jié)合法外，酶的固定化方法還包

括、、離子吸附法及交聯(lián)法等。

（1）已知乳糖酶能夠催化乳糖水解為葡萄糖和半乳糖，篩選產(chǎn)乳糖酶的微生物L(fēng)時(shí)，宜用乳糖

作為培養(yǎng)基中的唯一碳源，培養(yǎng)基中瓊脂的作用是凝固劑，從功能上講,這種培養(yǎng)基屬于選擇

培養(yǎng)基。

（2）為了避免雜菌污染,在培養(yǎng)微生物前,對(duì)接種環(huán)應(yīng)采用灼燒滅菌。

（3）用電泳法純化乳糖酶時(shí),若在相同條件下分離帶電荷相同的蛋白質(zhì)，則其分子量（相對(duì)分子

質(zhì)量）越小，電泳速度越快。

（4）固定化酶的應(yīng)用價(jià)值與酶的活性（或活力）有關(guān)，因此用化學(xué)結(jié)合法固定化乳糖酶時(shí)，可通

過(guò)檢測(cè)固定化乳糖酶的活性（或活力）來(lái)確定其應(yīng)用價(jià)值。固定化酶的方法包括化學(xué)結(jié)合法、

包埋法、物理吸附法、離子吸附法及交聯(lián)法等。

答案：（1）乳糖凝固劑選擇培養(yǎng)基（2）灼燒（3）小

（4）（酶）活性［或（酶）活力］包埋法物理吸附法（注:后兩空可顛倒）

8.（2015?全國(guó)卷I?T39）已知微生物A可以產(chǎn)生油脂，微生物B可以產(chǎn)生脂肪酶。脂肪酶和

油脂可用于生物柴油的生產(chǎn)?；卮鹩嘘P(guān)問(wèn)題：

（1）顯微觀察時(shí),微生物A菌體中的油脂通?？捎萌旧?。微生物A產(chǎn)生的油脂不易

揮發(fā),可選用（填“萃取法”或“水蒸氣蒸儲(chǔ)法”）從菌體中提取。

（2）為了從自然界中獲得能產(chǎn)生脂肪酶的微生物B的單菌落,可從含有油料作物種子腐爛物的

土壤中取樣，并應(yīng)選用以為碳源的固體培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)。

（3）若要測(cè)定培養(yǎng)液中微生物B的菌體數(shù)，可在顯微鏡下用直接計(jì)數(shù);若要

測(cè)定其活菌數(shù)量,可選用法進(jìn)行計(jì)數(shù)。

（4）為了確定微生物B產(chǎn)生的脂肪酶的最適溫度,某同學(xué)測(cè)得相同時(shí)間內(nèi)，在

35℃、40℃、45℃溫度下降解10g油脂所需酶量依次為4mg、Img、6mg,則上述三個(gè)溫度

中,℃條件下該酶活力最小。為了進(jìn)一步確定該酶的最適溫度,應(yīng)圍繞C設(shè)

計(jì)后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

【解題指南】（1）題干關(guān)鍵詞:不易揮發(fā)、直接計(jì)數(shù)、活菌數(shù)量。

（2）關(guān)鍵知識(shí):提取油脂的方法、分解油脂的微生物的分離、測(cè)定微生物數(shù)量的方法和探究酶

的最適溫度的方法。

（1）脂肪可被蘇丹IH（IV）染液染成橘黃色（紅色），題干中說(shuō)明微生物A產(chǎn)生的油脂不易揮發(fā),

則可以采用萃取法提取微生物A中的油脂。

（2）油脂為有機(jī)化合物,富含碳元素,故為了從自然界獲得能夠分解油脂的單菌落，應(yīng)以油脂為

唯一碳源來(lái)配制培養(yǎng)基。在該培養(yǎng)基上，能分解油脂的微生物可以正常生長(zhǎng)，其他微生物不能

正常生長(zhǎng)。

⑶可利用血細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)法測(cè)定菌液中的微生物數(shù)量,活菌和死亡的細(xì)菌都會(huì)被計(jì)數(shù),所

以測(cè)定培養(yǎng)液中的活菌數(shù)應(yīng)采用稀釋涂布平板法。

（4）在45c下，降解10g油脂所需酶量最多，則該溫度下酶活性最低；由題干信息可知,40C下

降解10g油脂所需的酶量最少。應(yīng)圍繞40℃設(shè)置不同溫度梯度來(lái)探究酶的最適溫度。

答案：（1）蘇丹11（或蘇丹IV）萃取法（2）油脂（其他合理答案也可）

（3）血細(xì)胞計(jì)數(shù)板稀釋涂布平板（其他合理答案也可）（4）4540

9.（2015?全國(guó)卷H?T39）回答與胡蘿卜素有關(guān)的問(wèn)題：

⑴胡蘿卜含有的胡蘿卜素中，最主要的是（填“a-胡蘿卜素”“B-胡蘿卜素”或“丫

-胡蘿卜素”），該胡蘿卜素在人體內(nèi)可以轉(zhuǎn)變成兩分子，后者缺乏會(huì)引起人在弱光下

視物不清的病癥，該疾病稱為o胡蘿卜素是（填“揮發(fā)性”或“非

揮發(fā)性”）物質(zhì)。

（2）工業(yè)生產(chǎn)上,用養(yǎng)殖的巖藻作為原料提取胡蘿卜素時(shí),

（填“需要”或“不需要”）將新鮮的巖藻干燥。

⑶現(xiàn)有乙醇和乙酸乙酯兩種溶劑,應(yīng)選用其中的作為胡蘿卜素的萃取劑，不選

用另外一種的理由是________________________________________

【解題指南】(1)題干關(guān)鍵信息：“弱光下視物不清”“萃取劑”。

(2)關(guān)鍵知識(shí):胡蘿卜素不溶于水;一分子胡蘿卜素可被氧化成兩分子維生素A;含水量影響

胡蘿卜素的萃取效果。

本題考查胡蘿卜素的提取。

(1)根據(jù)雙鍵的數(shù)目可以將胡蘿卜素劃分a、B、丫三類，胡蘿卜素是其中最主要的組成成

分。一分子胡蘿卜素在人或動(dòng)物的小腸、肝臟等器官被氧化成兩分子維生素A。胡蘿卜素

可以用來(lái)治療因缺乏維生素A而引起的各種疾病，如夜盲癥等。胡蘿卜素的化學(xué)性質(zhì)比較穩(wěn)定,

不溶于水,是非揮發(fā)性物質(zhì)。

(2)萃取的效果受到含水量、溫度等條件的影響,要保證好的萃取效果,需要將巖藻進(jìn)行粉碎和

干燥。

⑶萃取胡蘿卜素的有機(jī)溶劑應(yīng)不與水混溶,而乙醇為水溶性有機(jī)溶劑，乙酸乙酯為水不溶性

有機(jī)溶劑，故選乙酸乙酯。

答案：(1)B-胡蘿卜素維生素A夜盲癥非揮發(fā)性

(2)需要(3)乙酸乙酯萃取胡蘿卜素的有機(jī)溶劑應(yīng)不與水混溶，而乙醇為水溶性有機(jī)溶劑

10.(2015?廣東高考?T29)泡菜是我國(guó)的傳統(tǒng)食品之一，但制作過(guò)程中產(chǎn)生的亞硝酸鹽對(duì)人體

健康有潛在危害，某興趣小組準(zhǔn)備參加“科技創(chuàng)新大賽”，查閱資料得到下圖。

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⑴制作泡菜時(shí)，泡菜壇一般用水密封，目的是。乳酸菌發(fā)酵第一階段的產(chǎn)物

有。

(2)據(jù)題圖，與第3天相比,第8天后的泡菜更適于食用，因?yàn)楹笳?pH值呈下降

趨勢(shì),原因是。

⑶該小組得到一株“優(yōu)選”乳酸菌(亞硝酸鹽還原酶活力比普通乳酸菌高5倍)，擬參照資料

的實(shí)驗(yàn)方案和食鹽濃度(蜴?10酚，探究與普通乳酸菌相比用“優(yōu)選”乳酸菌制作泡菜過(guò)程中

亞硝酸鹽含量的高低,并確定其最適條件,請(qǐng)你設(shè)計(jì)一個(gè)實(shí)驗(yàn)結(jié)果記錄表,并推測(cè)實(shí)驗(yàn)結(jié)論。

【解題指南】(1)圖示信息:pH隨乳酸菌數(shù)量的增加而降低，隨乳酸菌數(shù)量的減少下降速率減

慢;亞硝酸鹽的含量超過(guò)一定時(shí)間會(huì)降低。

(2)關(guān)鍵知識(shí):乳酸發(fā)酵原理、實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)與分析。

本題考查泡菜制作原理及實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)方法。

(1)乳酸菌是嚴(yán)格厭氧微生物,制作泡菜時(shí)用水密封泡菜壇，其目的是為了保持無(wú)氧的環(huán)境。乳

酸菌進(jìn)行乳酸發(fā)酵,其第一階段的物質(zhì)變化與有氧呼吸的第一階段相同,均為葡萄糖分解產(chǎn)生

丙酮酸、［H］、少量ATP。

(2)亞硝酸鹽對(duì)人體的危害比較大，泡菜制作后一段時(shí)間才能食用，從圖中曲線可看出第8天

后亞硝酸鹽含量與之前相比含量較低。在此過(guò)程中乳酸菌進(jìn)行了乳酸發(fā)酵,產(chǎn)生了乳酸導(dǎo)致泡

菜壇內(nèi)pH下降。

(3)設(shè)計(jì)的記錄表中要包含乳酸菌類型、食鹽濃度和發(fā)酵時(shí)間等自變量,因變量為亞硝酸鹽的

含量。通過(guò)相互對(duì)照確定用“優(yōu)選”乳酸菌制作泡菜過(guò)程中亞硝酸鹽含量的高低,并確定最適

發(fā)酵條件。

答案：(1)隔絕空氣,創(chuàng)造無(wú)氧環(huán)境，有利于乳酸菌發(fā)酵丙酮酸、［H］、ATP

(2)亞硝酸鹽含量較低乳酸菌發(fā)酵產(chǎn)生的乳酸增多

(3)兩種乳酸菌在泡菜腌制過(guò)程中亞硝酸鹽含量變化表

\乳酸菌

亞硝鼠類型及

鹽含量、食鹽普通乳酸菌“優(yōu)選”乳酸菌

0ng/kg)\^度

發(fā)酵標(biāo)、\

4%5%...1.0.%4%5%...1.0.%

間(天)

1

2

3

.......

10

推測(cè)實(shí)驗(yàn)結(jié)論:與普通乳酸菌相比，“優(yōu)選”乳酸菌制作泡菜時(shí),相同條件下產(chǎn)生的亞硝酸鹽含

量低。

11.(2015-江蘇高考?T31)人工瘤胃模仿了牛羊等反芻動(dòng)物的胃，可用來(lái)發(fā)酵處理秸稈,提高

秸稈的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值。為了增強(qiáng)發(fā)酵效果,研究人員從牛胃中篩選纖維素酶高產(chǎn)菌株,并對(duì)其降解

纖維素能力進(jìn)行了研究。請(qǐng)回答下列問(wèn)題:

⑴在樣品稀釋和涂布平板步驟中，下列選項(xiàng)不需要的是.（填序號(hào)）。

①酒精燈②培養(yǎng)皿③顯微鏡④無(wú)菌水

液量不宜過(guò)多的原因

，需要用酒精棉球擦凈的原因

（4）剛果紅可以與纖維素形成紅色復(fù)合物，但并不與纖維素降解產(chǎn)物纖維二糖和葡萄糖發(fā)生這

種反應(yīng)。研究人員在剛果紅培養(yǎng)基平板上,篩選到了幾株有透明降解圈的菌落（見(jiàn)上圖）。圖中

降解圈大小與纖維素酶的有關(guān)。圖中降解纖維素能力最強(qiáng)的菌株是（填

圖中序號(hào)）。

⑸研究人員用篩選到的纖維素酶高產(chǎn)菌株J1和J4,在不同溫度和pH條件下進(jìn)行發(fā)酵,測(cè)得

發(fā)酵液中酶活性的結(jié)果見(jiàn)下圖，推測(cè)菌株更適合用于人工瘤胃發(fā)酵，理由

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本題主要考查微生物的分離和培養(yǎng)。（1）樣品稀釋和涂布平板的操作過(guò)程不需要顯微鏡。（2）

涂布平板時(shí)，若培養(yǎng)基表面的菌懸液過(guò)多會(huì)出現(xiàn)積液，造成菌體堆積，影響分離效果。（3）試管

口粘附的培養(yǎng)基,需要用酒精棉球擦凈,避免培養(yǎng)基污染棉塞。（4）菌株產(chǎn)生的降解纖維素酶的

量越多、活性越高，會(huì)使降解圈越大。降解纖維素能力最強(qiáng)的菌株是①，因其菌株菌落小，但降

解圈大。（5）分析圖中曲線可知,J4菌株在較高溫度和酸性環(huán)境下酶的活性更高，而發(fā)酵過(guò)程

會(huì)產(chǎn)熱和產(chǎn)酸,所以J4菌株更適合用于人工瘤胃發(fā)酵。

答案：(1)③(2)培養(yǎng)基表面的菌懸液會(huì)出現(xiàn)積液，導(dǎo)致菌體堆積,影響分離效果

⑶避免培養(yǎng)基污染棉塞(4)量與活性①

(5)J4發(fā)酵過(guò)程會(huì)產(chǎn)熱和產(chǎn)酸,J4菌株在較高溫度和酸性環(huán)境下酶的活性更高

12.(2015?浙江高考?T17)“生物技術(shù)實(shí)踐”模塊

某工廠為了生產(chǎn)耐高溫植酸酶飼料添加劑,開(kāi)展了產(chǎn)該酶菌株的篩選、酶的固定化及其特性分

析研究，其流程如下圖所示。

土樣中的菌種篩選一菌株鑒定一優(yōu)良菌株擴(kuò)大培養(yǎng)一植酸酶提純一

植酸酶固定化一植酸酶特性分析

請(qǐng)回答：

(1)土壤懸液首先經(jīng)80℃處理15分鐘，其目的是篩選出

⑵在無(wú)菌條件下,將經(jīng)過(guò)處理的土壤懸液進(jìn)行,然后涂布于含有植酸鈉的固體培養(yǎng)基

上。培養(yǎng)后觀察到，其周?chē)霈F(xiàn)透明水解圈，圈的直徑大小與強(qiáng)弱相關(guān)。

⑶篩選獲得的菌株經(jīng)鑒定后,將優(yōu)良菌株進(jìn)行液體擴(kuò)大培養(yǎng)。培養(yǎng)時(shí)需要振蕩，其主要目的

是。液體培養(yǎng)基與固體培養(yǎng)基相比,不含有的成分是o

(4)在合適條件下,將提純的植酸酶與海藻酸鈉混合后,滴加到一定濃度的鈣離子溶液中，使液

滴形成凝膠固體小球。該過(guò)程是對(duì)酶進(jìn)行O

A.吸附B.包埋C.裝柱D.洗滌

(5)溫度與植酸酶相對(duì)酶活性的關(guān)系如圖所示。下列敘述錯(cuò)誤的是。

(

％

)

裁

電

牌