微生物的培養(yǎng)和分離

浙江省6次選考中選修1微生物培養(yǎng)和分離考頻情況時(shí)間考點(diǎn)內(nèi)容15年10月植物組培、細(xì)菌的培養(yǎng)16年10月分離產(chǎn)尿酶的細(xì)菌和酶的固定化17年4月泡菜及亞硝酸鹽的測(cè)定、細(xì)菌分離18年4月果汁的制取、酶的固定化、微生物的分離18年11月微生物的培養(yǎng)和分離、果醋的制作19年4月果膠和果膠酶、微生物的分離（一）(18年11月）回答與微生物培養(yǎng)及應(yīng)用有關(guān)的問(wèn)題：（l）對(duì)培養(yǎng)基進(jìn)行高壓蒸汽滅菌時(shí)，滅菌時(shí)間應(yīng)從達(dá)到設(shè)定的溫度或壓力值時(shí)開始計(jì)時(shí)。對(duì)于不耐熱的液體培養(yǎng)基，一般可將其轉(zhuǎn)入G6玻璃砂漏斗中，采用

抽濾方式可較快地進(jìn)行過(guò)濾滅菌。（2）與釀造果醋相比，利用大米、高粱等富含淀粉的原料制醋，需增加將淀粉分解成糖的過(guò)程。某醋化醋桿菌培養(yǎng)基由蛋白胨、酵母提取物和甘露醇組成，其中甘露醇的主要作用是作為碳源。（3）為篩選胞外α-淀粉酶分泌型菌種，一般從C

（A．果園樹下 B．肉類加工廠周圍 C．米酒廠周闈 D．枯樹周闈）獲得土樣，用無(wú)菌水稀釋，涂布到含有淀粉的選擇培養(yǎng)基上培養(yǎng)，一段時(shí)間后在培養(yǎng)基表面滴加碘液，可在菌落周圍觀察到透明的水解圈。若要篩選酶活性較高的菌種，需挑選若干個(gè)水解圈直徑與菌落直徑比值大的菌落，分別利用液體培養(yǎng)基振蕩培養(yǎng)進(jìn)行擴(kuò)增。然后將培養(yǎng)液離心，取上清液

用于檢測(cè)酶活性。一、制備二、滅菌三、接種四、培養(yǎng)五、分離六、保存應(yīng)對(duì)策略：全面精讀選修一抓住主線，構(gòu)建知識(shí)網(wǎng)絡(luò)圖種類成分步驟調(diào)PH后分裝，（包扎后）滅菌消毒/滅菌常用方法滅菌徹底否的檢測(cè)滅菌后用具放于菌種來(lái)源菌種特點(diǎn)操作場(chǎng)所常用方法設(shè)備條件結(jié)果影響實(shí)驗(yàn)因素單菌落分離方法分離所用的工具操作場(chǎng)所保存場(chǎng)所保存條件操作場(chǎng)所所需培養(yǎng)基一、制備培養(yǎng)基3、不同的微生物往往需要采用不同的培養(yǎng)基配方（細(xì)菌喜葷，霉菌喜素）1、培養(yǎng)基的種類(根據(jù)物理狀態(tài)分)：2、成分：水、碳源、氮源、無(wú)機(jī)鹽、生長(zhǎng)因子固體培養(yǎng)基(加入瓊脂作為凝固劑）（菌種保存、分離純化、鑒定、活菌計(jì)數(shù)）液體培養(yǎng)基（菌種擴(kuò)大培養(yǎng)和發(fā)酵工業(yè)）平板培養(yǎng)基斜面培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基大腸桿菌脲酶細(xì)菌

LB：蛋白胨、酵母提取物、氯化鈉、水

LB全營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基:尿素固體培養(yǎng)基：葡萄糖、NaCl、K2HPO4、酚紅、瓊脂糖蛋白胨、酵母提取物、氯化鈉瓊脂糖NaCl：提供無(wú)機(jī)營(yíng)養(yǎng)，維持細(xì)胞內(nèi)外滲透壓平衡一般用無(wú)機(jī)物配制或添加蔗糖的豆芽汁即可霉菌步驟、滅菌、調(diào)PH、溶化計(jì)算、稱量、倒平板一、制備培養(yǎng)基K2HPO4

的作用是？提供無(wú)機(jī)營(yíng)養(yǎng)、保持PH穩(wěn)定注意：調(diào)PH是在滅菌前1.無(wú)菌操作的概念

滅菌的原因是：為了獲得純凈的培養(yǎng)物，關(guān)鍵是防止外來(lái)雜菌的污染。二、無(wú)菌操作技術(shù)_________必須無(wú)菌的、_________也必須要無(wú)菌的、___________時(shí)不能帶入其他雜菌無(wú)菌操作的條件是：2.消毒與滅菌的概念及兩者的區(qū)別

消毒：使用較溫和理化因素，僅殺死物體表面或內(nèi)部的一部分對(duì)人體有害的微生物的過(guò)程。不能殺死芽孢和孢子。滅菌：使用強(qiáng)烈的理化因素消滅物體內(nèi)外所有微生物，包括芽孢和孢子。各種器皿各種培養(yǎng)基細(xì)菌轉(zhuǎn)移操作問(wèn)：1.常用的滅菌和消毒的方法有哪些？

2.高壓蒸汽滅菌鍋的使用時(shí)應(yīng)該注意什么呢？滅菌方法：高壓蒸汽滅菌灼燒滅菌干熱滅菌培養(yǎng)基、無(wú)菌水、各種耐高溫的玻璃金屬器具接種環(huán)等金屬器具需要保持干燥耐高溫的玻璃金屬器皿高壓蒸汽滅菌鍋1kg/cm2

、121℃下維持15min.過(guò)濾滅菌消毒方法：煮沸消毒法巴氏消毒法化學(xué)藥劑消毒法（酒精、氯氣等）紫外線消毒法4.如何驗(yàn)證培養(yǎng)基的制作是否合格滅菌從什么時(shí)候開始計(jì)時(shí)？什么時(shí)候可以打開滅菌鍋蓋？尿素溶液3.如果培養(yǎng)基中有葡萄糖，應(yīng)該怎么滅菌？菌落單個(gè)或少數(shù)細(xì)菌在固體培養(yǎng)基上大量繁殖時(shí)，就會(huì)形成一個(gè)肉眼可見(jiàn)的，具有一定形態(tài)結(jié)構(gòu)的子細(xì)胞群體。大多數(shù)細(xì)菌、酵母菌以及許多真菌能在固體培養(yǎng)基上形成孤立的菌落，采用適宜的平板分離法容易得到純培養(yǎng)5.如何接種？（根據(jù)菌種的來(lái)源和特點(diǎn)選擇分離的方法）3.何時(shí)制備固體平板/斜面？劃線分離涂布分離工具操作特點(diǎn)選用的提示語(yǔ)接種環(huán)、保存、斜面、簡(jiǎn)單等玻璃刮刀、計(jì)數(shù)、稀釋、易分開等接種環(huán)（三次灼燒的目的是？）玻璃刮刀滅菌、取液、（劃線、滅菌）稀釋、移液器、0.1ml、涂布整個(gè)平面方法簡(jiǎn)單，劃線末端出現(xiàn)單菌落單菌落更易分開，但操作復(fù)雜三、微生物分離培養(yǎng)技術(shù)（接種）問(wèn)：1.單菌落分離的方法有哪些？它們都有哪些優(yōu)缺點(diǎn)？4.倒平板為什么需要使錐形瓶的瓶口通過(guò)火焰？操作場(chǎng)所：超凈臺(tái)的使用？分離純化菌種保存擴(kuò)大培養(yǎng)劃線分離法涂布分離法固體培養(yǎng)基（平板）固體培養(yǎng)基（平板）斜面固體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基接種環(huán)玻璃刮刀接種環(huán)接種環(huán)接種環(huán)滅菌→試管口滅菌→挑取菌種→劃線接種（連續(xù)性、交叉性）→倒置培養(yǎng)稀釋制細(xì)菌懸液→倒入平板→玻璃刮刀去酒精→涂布到整個(gè)平面→倒置培養(yǎng)挑取單菌落→劃線法接種→在適宜的溫度下培養(yǎng)一段時(shí)間→4℃保存接種環(huán)滅菌→試管口滅菌→挑取菌種→放入液體→搖床振蕩培養(yǎng)形成菌落形成菌落形成菌落渾濁菌液分離方法簡(jiǎn)單單菌落更易分開，可用于計(jì)數(shù)獲得相當(dāng)數(shù)量代謝旺盛并滿足一定生理要求的微生物細(xì)胞三、微生物分離培養(yǎng)技術(shù)（接種）固體平板：菌落培養(yǎng)三角瓶：液體擴(kuò)大培養(yǎng)倒置大腸桿菌：37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)12~24h(劃線分離）脲酶細(xì)菌：37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)12~24h（涂布分離）37℃搖床振蕩培養(yǎng)12hPH：中性偏堿結(jié)果：獲得單菌落（消除污染雜菌，篩選高表達(dá)量菌株）不倒置：水分形成的水滴落入培養(yǎng)基，導(dǎo)致無(wú)法

形成單菌落，達(dá)不到分離的目的四、微生物分離培養(yǎng)技術(shù)（培養(yǎng)）實(shí)驗(yàn)結(jié)束后,使用過(guò)的培養(yǎng)基應(yīng)該進(jìn)行滅菌

處理后,才能倒掉。五、微生物分離培養(yǎng)技術(shù)（保存）問(wèn):如何從土壤中篩選蛋白酶產(chǎn)生菌菌株？可以在培養(yǎng)基中添加牛奶或酪素（酪蛋白水解得到）制備培養(yǎng)基平板，微生物生長(zhǎng)時(shí)若產(chǎn)生蛋白酶則會(huì)水解牛奶或酪素，在平板上形成透明的蛋白質(zhì)水解圈。通過(guò)蛋白質(zhì)水解圈就可以對(duì)產(chǎn)酶菌株進(jìn)行篩選。例

剛果紅可以與纖維素形成紅色復(fù)合物,但并不與纖維素降解產(chǎn)物纖維二糖和葡萄糖發(fā)生這種反應(yīng)。研究人員在剛果紅培養(yǎng)基平板上