核酸分子雜交

核酸研究中基本的實(shí)驗(yàn)技術(shù)核酸分子雜交01簡(jiǎn)介探針雜交的雙方應(yīng)用目錄030204基本信息核酸分子雜交（簡(jiǎn)稱雜交，hybridization）是核酸研究中一項(xiàng)最基本的實(shí)驗(yàn)技術(shù)。互補(bǔ)的核苷酸序列通過(guò)Walson-Crick堿基配對(duì)形成穩(wěn)定的雜合雙鏈DNA或RNA分子的過(guò)程稱為雜交。雜交過(guò)程是高度特異性的，可以根據(jù)所使用的探針已知序列進(jìn)行特異性的靶序列檢測(cè)。簡(jiǎn)介簡(jiǎn)介雜交過(guò)程是高度特異性的，可以根據(jù)所使用的探針已知序列進(jìn)行特異性的靶序列檢測(cè)。其基本原理就是應(yīng)用核酸分子的變性和復(fù)性的性質(zhì)，使來(lái)源不同的DNA（或RNA）片段，按堿基互補(bǔ)關(guān)系形成雜交雙鏈分子（heteroduplex）。雜交雙鏈可以在DNA與DNA鏈之間，也可在RNA與DNA鏈之間形成。使雙螺旋解開(kāi)成為單鏈，因此，變性技術(shù)也是核酸雜交的一個(gè)環(huán)節(jié)。

雜交的雙方雜交的雙方雜交的雙方是所使用探針和要檢測(cè)的核酸。該檢測(cè)對(duì)象可以是克隆化的基因組DNA，也可以是細(xì)胞總DNA或總RNA。根據(jù)使用的方法被檢測(cè)的核酸可以是提純的，也可以在細(xì)胞內(nèi)雜交，即細(xì)胞原位雜交。探針必須經(jīng)過(guò)標(biāo)記，以便示蹤和檢測(cè)。使用最普遍的探針標(biāo)記物是同位素，但由于同位素的安全性，近年來(lái)發(fā)展了許多非同位素標(biāo)記探針的方法。

探針探針若雜交的目的是識(shí)別靶DNA中的特異核苷酸序列，這需要牽涉到另一項(xiàng)核酸操作的基本技術(shù)─探針（probe）的制備。探針是指帶有某些標(biāo)記物（如放射性同位素32P，熒光物質(zhì)異硫氰酸熒光素等）的特異性核酸序列片段。若我們?cè)O(shè)法使一個(gè)核酸序列帶上32P，那么它與靶序列互補(bǔ)形成的雜交雙鏈，就會(huì)帶有放射性。以適當(dāng)方法接受來(lái)自雜交鏈的放射信號(hào)，即可對(duì)靶序列DNA的存在及其分子大小加以鑒別。在現(xiàn)代分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中，探針的制備和使用是與分子雜交相輔相成的技術(shù)手段。核酸分子雜交作為一項(xiàng)基本技術(shù)，已應(yīng)用于核酸結(jié)構(gòu)與功能研究的各個(gè)方面。

應(yīng)用應(yīng)用核酸分子雜交作為一項(xiàng)基本技術(shù)，已應(yīng)用于核酸結(jié)構(gòu)與功能研究的各個(gè)方面。核酸分子雜交具有很高的靈敏度和高度的特異性，因而該技術(shù)在分子生物學(xué)領(lǐng)域中已廣泛地使用于克隆基因的篩選、酶切圖譜的制作、基因組中特定基因序列的定性、定量檢測(cè)和疾病的診斷等方面。因而它不僅在分子生物學(xué)領(lǐng)域中具有廣泛地應(yīng)用，而且在臨床診斷上的應(yīng)用也日趨增多。在醫(yī)學(xué)上，目前已用于多種遺傳性疾病的基因診斷（genediagnosis