酶免疫分析儀-2015-11

23六月20231臨床免疫檢驗(yàn)儀器23六月20232免疫分析法：以抗原抗體相互結(jié)合的免疫學(xué)反應(yīng)作為基礎(chǔ)的分析法稱(chēng)為免疫分析法。免疫分析法標(biāo)記免疫分析非標(biāo)記免疫分析酶免疫分析發(fā)光免疫分析放射免疫分析免疫金(銀)標(biāo)記技術(shù)免疫濁度分析技術(shù)有無(wú)標(biāo)記物熒光免疫分析23六月20233第一節(jié)酶免疫分析儀第二節(jié)發(fā)光免疫分析儀第三節(jié)放射免疫分析儀第四節(jié)免疫濁度分析儀第五節(jié)時(shí)間分辨熒光免疫分析儀第十一

章第一節(jié)酶免疫分析儀23六月20235酶免疫分析法

enzymeimmunoassay，EIA概念－－是用酶標(biāo)記的抗體（或抗原）用于免疫學(xué)反應(yīng)，并以相應(yīng)底物被酶分解的顯色反應(yīng)，用來(lái)對(duì)樣品中的抗原（或抗體）進(jìn)行定性分析、定位分析和鑒定；亦可根據(jù)酶催化底物顯色的深淺，測(cè)定樣品中待測(cè)抗原或抗體的含量。623六月2023酶免疫分析法根據(jù)抗原抗體反應(yīng)后是否需要分離結(jié)合與游離（未結(jié)合）的酶標(biāo)記物，分類(lèi)如下：

均相：常用于小分子化合物

homogeneousenzymeimmunoassay

非均相：

heterogeneous

enzymeimmunoassay

1.雙抗體夾心法

2.間接法

3.競(jìng)爭(zhēng)法4.IgM抗體捕獲法

5.雙抗原夾心法

ELISA液相酶免疫測(cè)定723六月2023ELISAEnzymeLinkedImmunoSorbent

Assay（酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定）是一種以微孔板為載體的固相酶免疫測(cè)定。常見(jiàn)類(lèi)型：1.雙抗體夾心法2.間接法

3.競(jìng)爭(zhēng)法4.IgM抗體捕獲法5.雙抗原夾心法

823六月202396孔酶標(biāo)板酶標(biāo)板配套試劑ELISA試劑

8孔酶標(biāo)條

一般為聚乙烯材料做成孔底吸附了相應(yīng)的抗原或者抗體923六月2023酶標(biāo)記抗體(Conjugate):酶標(biāo)記的針對(duì)待測(cè)抗原的另一位點(diǎn)的特異性抗體（酶結(jié)合物）YYE檢測(cè)大分子抗原的雙抗體夾心法酶標(biāo)板抗體:

針對(duì)待測(cè)抗原某一位點(diǎn)的特異性抗體包被到固相載體聚苯乙烯孔底底物（Substrate）：本身無(wú)色，酶可以催化其顯色待測(cè)樣本中的抗原1.包被有相應(yīng)抗體的酶標(biāo)板。2.加入樣本，如樣品中含有抗原，則結(jié)合為抗原抗體復(fù)合物。4.再加入酶標(biāo)記抗體，則結(jié)合為抗體-抗原-酶標(biāo)記抗體復(fù)合物。酶抗體待測(cè)抗原抗體酶標(biāo)抗體6.加入底物8.加入終止液終止反應(yīng)7.酶催化底物顯色5.洗板洗去游離物。夾心法測(cè)抗原或抗體此法適用于測(cè)定二價(jià)或二價(jià)以上的大分子抗原或抗體，例如HBsAg、HBeAg、AFP、hCG,HBsAb等。但不適用于測(cè)定半抗原及小分子單價(jià)抗原或抗體，因其不能形成兩位點(diǎn)夾心。9.酶標(biāo)儀讀數(shù)，計(jì)算。3.洗板洗去游離物。1123六月20231223六月2023酶免疫分析儀的類(lèi)型、

工作原理及基本結(jié)構(gòu)1.微孔板固相酶免疫檢測(cè)儀2.管式固相酶免疫測(cè)定儀器3.小珠固相酶免疫測(cè)定儀器4.磁微粒固相酶免疫測(cè)定儀器等微孔板固相酶免疫檢測(cè)儀1.酶標(biāo)儀2.全自動(dòng)化酶免疫分析系統(tǒng)1.酶標(biāo)儀1523六月2023我們把采用酶標(biāo)的方法測(cè)定物質(zhì)含量的設(shè)備稱(chēng)為酶標(biāo)儀。一般簡(jiǎn)單的酶標(biāo)儀只有讀數(shù)、數(shù)據(jù)處理的功能。（全自動(dòng)化酶免疫分析系統(tǒng)集加樣品、加試劑、孵育、震蕩、洗板、讀數(shù)、數(shù)據(jù)處理7大功能于一體。）需要了解的基本概念返回節(jié)目錄1623六月2023酶標(biāo)儀的作用讀取吸光度判斷陰陽(yáng)性畫(huà)標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算濃度1723六月2023酶標(biāo)儀的好處避免肉眼判斷和人工計(jì)算的錯(cuò)誤保留原始數(shù)據(jù)實(shí)驗(yàn)自動(dòng)化的要求(如體檢HIV初篩實(shí)驗(yàn)室)透鏡鹵素?zé)襞軨hopper切光器濾光片微孔杯光電轉(zhuǎn)換器光纖溶液對(duì)光吸收的Lambert－Beer定律A=log10

T=εCL(A吸光度,T透光率,ε對(duì)于吸收物質(zhì)及波長(zhǎng)是一個(gè)常數(shù)，稱(chēng)為吸光系數(shù)

,C為濃度,L為厚度)

光路讀數(shù)原理

1923六月20232023六月2023

酶標(biāo)儀工作原理框圖光源燈微孔板光電檢測(cè)器模擬信號(hào)處理微機(jī)單元顯示器鍵盤(pán)打印機(jī)X方向驅(qū)動(dòng)機(jī)構(gòu)Y方向驅(qū)動(dòng)機(jī)構(gòu)濾光片控制電路2123六月2023臨界值：（Cut-Offvalue）用于陰陽(yáng)性的判斷以此作為判斷結(jié)果陽(yáng)性或陰性的標(biāo)準(zhǔn)。定性結(jié)果判斷一般為NC×2.1(NC<0.05以0.05計(jì)算）夾心法的CutOff值:一般為NC×0.5或(NC+PC)/2等

競(jìng)爭(zhēng)法的CutOff值:需設(shè)置空白孔(BLANK)(只加入底物和終止液,空白消零去本底)

陰性對(duì)照(NC),陽(yáng)性對(duì)照(PC),臨界值質(zhì)控(QC)等判斷公式：>NC×2.1判斷公式：<

NC×0.5

2223六月2023酶標(biāo)儀工作原理總結(jié)酶免疫分析法：是用酶標(biāo)記的抗體（或抗原）用于免疫學(xué)反應(yīng)，根據(jù)酶催化底物顯色的深淺，測(cè)定樣品中待測(cè)抗原或抗體的含量。酶標(biāo)儀可用比色法來(lái)分析抗原或抗體的含量，依照比色原理進(jìn)行工作。以微孔板固相酶免疫測(cè)定儀為例。光源燈發(fā)出的光線經(jīng)過(guò)濾光片或單色器后成為一束單色光。該單色光經(jīng)過(guò)塑料微孔板中的待比色溶液到達(dá)光電檢測(cè)器，把光信號(hào)的強(qiáng)弱轉(zhuǎn)變成電信號(hào)的大小。經(jīng)前置放大、對(duì)數(shù)放大、模數(shù)轉(zhuǎn)換等模擬信號(hào)處理后，送入微處理器進(jìn)行數(shù)據(jù)處理和計(jì)算。從而達(dá)到判斷出抗原或抗體的有無(wú)或計(jì)算含量的目的。2323六月2023

680酶標(biāo)儀中/英文操作界面任選可測(cè)波長(zhǎng)范圍400-750nm濾光片位置:８?jìng)€(gè)。標(biāo)配４個(gè)常用波長(zhǎng)450nm490nm570nm630nm即可進(jìn)行單波長(zhǎng)測(cè)定，又可進(jìn)行雙波長(zhǎng)測(cè)定2423六月2023680酶標(biāo)儀適用板型：平底，Ｕ型底，Ｖ型底．讀板速度：快速讀板模式單波長(zhǎng)6秒；雙波長(zhǎng)10秒逐步讀板模式單波長(zhǎng)15秒；雙波長(zhǎng)30秒有自動(dòng)振板功能2523六月2023BIO-RADModel680芬蘭雷勃MK3CLINBIO128BIO-TEKELX-800AnthosZenyth340TECANSUNRISE產(chǎn)地日本上海金橋奧地利美國(guó)奧地利奧地利操作界面中/英文（寬屏）中文英文（必需連電腦）英文英文英文濾光片4塊（8個(gè)位置）4塊3塊

4塊(5個(gè)位置)

3塊4塊吸光度范圍波長(zhǎng)范圍0.000-3.500400-750nm0.000-3.000400-700nm0.000-3.000500-700nm0.000-3.000400-700nm0.00-3.500340-750nm同左帶振蕩功能有無(wú)有無(wú)有無(wú)帶孵育功能有(選配)無(wú)無(wú)無(wú)無(wú)無(wú)幾種常見(jiàn)酶標(biāo)儀比較表2623六月2023BIO-RADModel680芬蘭雷勃MK3CLINBIO128BIO-TEKELX-800AnthosZenyth340TECANSUNRISE讀板方式步進(jìn)/連續(xù)兩種8個(gè)硅光管連續(xù)8個(gè)硅光管連續(xù)8個(gè)硅光管步進(jìn)1個(gè)硅光及比色連續(xù)1個(gè)硅光管連續(xù)12個(gè)硅光管接電腦工作方式可以單獨(dú)操作，內(nèi)置64個(gè)程序，也可接電腦操作可以單獨(dú)操作，內(nèi)置一個(gè)程序，也可接電腦操作必需連接電腦操作可接電腦操作，但無(wú)中文軟件可以單獨(dú)操作，可接電腦操作同左重復(fù)性很穩(wěn)定一般一般好好好自檢功能自動(dòng)校正程序功能無(wú)無(wú)無(wú)無(wú)無(wú)內(nèi)存?zhèn)浞菸謇镤囯姵責(zé)o無(wú)無(wú)無(wú)無(wú)報(bào)告類(lèi)型9種6種

6種

6種

6種

6種2723六月20232.全自動(dòng)化酶免疫分析系統(tǒng)自動(dòng)化系統(tǒng):加樣系統(tǒng)溫育系統(tǒng)洗板系統(tǒng)判讀系統(tǒng)液路動(dòng)力系統(tǒng)軟件控制系統(tǒng)等1）連體機(jī)2）分體機(jī)：前處理（加樣系統(tǒng)）+后處理開(kāi)放式2823六月2023分體機(jī)之前處理-STAR8ch2923六月2023分體機(jī)之后處理-FAME24/203023六月20233123六月20233223六月20233323六月20233423六月20233523六月20233623六月20233723六月2023酶標(biāo)儀的維護(hù)重點(diǎn)：光學(xué)部分-防止濾光片霉變自己定期校正濾光片濾光片波長(zhǎng)精度測(cè)定：對(duì)濾光片進(jìn)行掃描，其檢測(cè)值與校定值之差為濾光片波長(zhǎng)精度。通道差與孔間差檢測(cè)：固定檢測(cè)杯，換不同通道測(cè)定OD值，以極差表示；固定通道，測(cè)定各孔200μl甲基橙溶液的OD值，誤差大小用±1.96s衡量。全自動(dòng)廠家一年一次校準(zhǔn)3.微粒固相酶免疫測(cè)定儀聚苯乙烯微粒固相吸附在玻璃纖維膜上液體濾出，用過(guò)濾方式洗滌反應(yīng)在膜上進(jìn)行堿性磷酸酶、四甲基傘形酮熒光測(cè)定4.磁微粒固相酶免疫測(cè)定磁微粒固相磁鐵吸引與液相分離親和素-生物素間接包被堿性磷酸酶4023六月2023酶免疫測(cè)定出現(xiàn)假陽(yáng)性的原因操作及儀器因素