免疫濁度分析儀－2015-11

第四節(jié)免疫濁度分析儀

第十一章抗原抗體反應類型1)沉淀反應：免疫濁度分析2)凝集反應3)補體參與的反應4)中和反應5)標記免疫抗原抗體反應的特點特異性:可逆性：非共價鍵結合，為可逆反應，可解離最適比例性：比例合適，結合反應強反應的階段性：分特異性結合階段和可見階段第一階段：抗原抗體結合階段速率比濁第二階段：形成大的免疫復合物終點比濁最適比例性免疫濁度測定的自動化原理：光學測量＋自動化分析＋免疫沉淀反應歷史：1.終點法1959年，Schultze建立透射比濁法：光線吸收的量與IC形成的量成正相關。1967年，Ritchie提出了散射比濁法，依照散射光強度求得抗原量。2.速率法1977年，Sternberg提出速率散射比濁法（RateNephelometry)Δ一、免疫濁度分析法概述(一)免疫濁度法基本原理免疫濁度法是可溶性抗原、抗體在液相中特異結合在二者比例合適、并有一定濃度的電介質存在時，產生一定大小的不溶性的復合物顆粒使反應液出現濁度，形成光的折射或吸收測定這種折射和吸收后的光作為計算單位的測定方法。

單色器透射比濁計散射比濁計散射比濁和透射比濁的區(qū)別示意圖θ透射光散射光散射光(二)免疫濁度法的分類按測定形式分：透射比濁測定法

散射比濁測定法按抗原抗體復合物形成的速度分：終點濁度法速率濁度法(二)免疫濁度法的分類透射比濁測定法在光源的光路方向（0°）測量透射光強度和被檢溶液微粒濃度關系的方法稱透射比濁測定法。透射光強度與抗原抗體復合物的量成反比。散射比濁測定法在光路的5°～96°角的方向上測量散射光強度和被測溶液中微粒濃度關系的方法稱散射比濁測定法。散射光的強度與復合物的含量成正比。二、免疫濁度分析儀免疫濁度法的優(yōu)點：校正曲線穩(wěn)定簡便快速易于自動化無放射性核污染兩種常用儀器：IMMAGE系統(tǒng)：速率散射比濁BN系統(tǒng)：定時散射比濁二、免疫濁度分析儀散射免疫比濁的基本原理：散射比濁法（nephelometry）是指一定波長的光沿水平軸照射，通過溶液時遇到抗原抗體復合物粒子，光線被粒子顆粒折射，發(fā)生偏轉，產生散射光。散射光強度與復合物的含量和體積成正比，通過測量散射光的強度，可計算出待測抗原的濃度。利用速率散射比濁分析原理。檢測懸浮于緩沖液中的抗原抗體免疫復合物顆粒。在抗體過量的前體下，懸浮顆粒通過光束時所產生的散射光速率變化強弱與抗原濃度成正比。即速率峰值的高低與抗原的量成正比。代表機型：Beckman-Coulter公司的ARRAY.360(一)ARRAY分析系統(tǒng)－基本原理抗原濃度遞增散射光峰值峰值信號與抗原抗體反應之間的關系圖ABCDFGHIIMMAGE抗原過量檢測系統(tǒng)設計原理：兩次添加抗原若出現兩個速率峰值信號：抗體過量；若出現一個速率峰值信號：抗原過量，需稀釋抗原反應時間（秒）06085散射率抗體過量抗原過量第二峰值信號抗原量檢測速率峰值信號產生(二)BN特定蛋白測定系統(tǒng)定時散射比濁分析（fixedtimenephelometry)德國的Behring

Nephelometer，現為SIEMENS代表機型：DadeBehring公司的BN-Prospec、BN-Ⅱ等BN-Ⅱ可測量三種情況下的散射光：---反應結束后終點測量---在兩個預定時間下的信號差異定時動力學測量*---反應過程中持續(xù)測量VLinIntegral定時散射比濁分析－基本原理采用的是免疫沉淀反應與散射比濁分析相結合的技術。采用抗體過量的原理來保證抗原抗體反應中形成不可溶性小分子顆粒。由于免疫沉淀反應是在抗原抗體相遇后立即開始，在極短的時間內反應介質中散射信號變動很大；此時計算峰值信號而獲得的結果會產生一定誤差，因此在測定散射信號時不與反應開始同步，而是推遲幾秒鐘?？乖^量檢測系統(tǒng)為保證檢測時獲取的信號峰值是由被檢抗原產生，本方法采用雙重保證措施：抗體過量：每一個項目的檢測范圍都預置很大對抗原過量進行閾值限定：設定閾值自動散射免疫分析中應注意的問題偽濁度的影響，產生偽濁度的因素很復雜，主要是：抗血清的質量，會有非特異的交叉反應性抗體成分，污染和變質等。增濁劑濃度和反應時間等掌握不當。樣品本身濁度及處理不當：脂血、灰塵器材（包括比色杯）清晰度等。自動散射免疫分析中應注意的問題鉤狀效應的影響（發(fā)生了抗原過量）樣品稀釋后復測當病人癥狀與檢驗結果明顯不符合時，應懷疑其