酵母菌培養(yǎng)基優(yōu)化

酵母菌培養(yǎng)基優(yōu)化第一頁，共十七頁，編輯于2023年，星期五一、實驗?zāi)康亩嶒炘砣?、實驗器材四、實驗步驟五、實驗結(jié)果第二頁，共十七頁，編輯于2023年，星期五實驗?zāi)康?.掌握發(fā)酵培養(yǎng)基的配制方法2.熟悉用正交試驗優(yōu)化發(fā)酵培養(yǎng)基的方法3.學習比濁法測定發(fā)酵液菌濃的方法第三頁，共十七頁，編輯于2023年，星期五實驗原理一、培養(yǎng)基的配制1.確定培養(yǎng)基的基本組成2.確定所用原材料的種類3.確定所用原材料的濃度配比關(guān)系第四頁，共十七頁，編輯于2023年，星期五二、培養(yǎng)基優(yōu)化原材料種類和濃度配比優(yōu)化1.單因素法(只是考慮單一變量對結(jié)果的影響)2.正交試驗法3.均勻試驗設(shè)計(只考慮試驗點在試驗范圍內(nèi)均勻散布的一種試驗設(shè)計方法,試驗次數(shù)少)第五頁，共十七頁，編輯于2023年，星期五三、正交試驗法1.概念利用已經(jīng)設(shè)計好的表格--正交表--來安排試驗并進行數(shù)據(jù)分析的一種方法。它是從全面試驗中挑選出部分有代表性的點進行試驗，這些有代表性的點具備了“均勻分散，齊整可比”的特點，是一種高效率、快速、經(jīng)濟的實驗設(shè)計方法。第六頁，共十七頁，編輯于2023年，星期五2.基本工具——正交表記號：Ln（tm）L：正交表的符號n：表的行數(shù)（可安排試驗的次數(shù)）t：表中的字碼數(shù)（水平數(shù)）m：表的列數(shù)（最多可安排因素個數(shù)）L8(27)L9(34)L16(45)第七頁，共十七頁，編輯于2023年，星期五3.正交表的特點試驗點分布均勻、整齊可比任何一列中各字碼（水平）都出現(xiàn)，且出現(xiàn)的次數(shù)相等任何兩列中各橫行組成的數(shù)字對，包含著所有可能的數(shù)字對，且各種數(shù)字對出現(xiàn)的次數(shù)相等第八頁，共十七頁，編輯于2023年，星期五四、比濁法測定發(fā)酵液菌濃細菌培養(yǎng)物在生長過程中，由于原生質(zhì)含量的增加，會引起培養(yǎng)物混濁度的增高。細菌懸液的混濁度和透光度成反比、與光密度成正比，透光度或光密度可借助光電比濁計精確測出，因此可用光電比濁計測定細胞懸液的光密度（OD值），表示該菌在特定實驗條件下的細菌相對數(shù)目，進而反映出其相對生長量。第九頁，共十七頁，編輯于2023年，星期五實驗器材移液管、100ml錐形瓶、光電比濁計、滅菌鍋、恒溫搖床葡萄糖、蔗糖、酵母提取粉、KH2PO4酵母菌菌液第十頁，共十七頁，編輯于2023年，星期五實驗步驟一、培養(yǎng)基的配制因素水平A葡萄糖/%B蔗糖/%C酵母提取粉/%DKH2PO4/%11.00.00.50.522.01.01.01.033.02.01.51.51.將葡萄糖、蔗糖、酵母提取粉、KH2PO4作為培養(yǎng)基的主要影響因素，每一因素設(shè)定3個水平，進行四因素三水平的正交試驗，試驗設(shè)計如下表第十一頁，共十七頁，編輯于2023年，星期五因素A葡萄糖/%B蔗糖/%C酵母提取粉/%DKH2PO4/%OD值實驗11(1.0)1(0)1(0.5)1(0.5)實驗21(1.0)2(1)2(1)2(1)實驗31(1.0)3(2)3(1.5)3(1.5)實驗42(2.0)1(0)2(1)3(1.5)實驗52(2.0)2(1)3(1.5)1(0.5)實驗62(2.0)3(2)1(0.5)2(1)實驗73(3.0)1(0)3(1.5)2(1)實驗83(3.0)2(1)1(0.5)3(1.5)實驗93(3.0)3(2)2(1)1(0.5)2.按下表配制9組培養(yǎng)基于100ml錐形瓶中，每瓶25ml，第十二頁，共十七頁，編輯于2023年，星期五錐形瓶培養(yǎng)基：標記，加棉塞、報紙包扎。1ml移液管2支121℃，滅菌20min二、滅菌第十三頁，共十七頁，編輯于2023年，星期五將菌種搖勻后用無菌移液管吸取0.5ml懸液，接到每一組培養(yǎng)基中（接種量要完全一樣）三、接種四、發(fā)酵將三角瓶置于恒溫搖床中，30℃，120rpm培養(yǎng)24h第十四頁，共十七頁，編輯于2023年，星期五五、比濁法測定各發(fā)酵液OD值取下?lián)u瓶，以空白培養(yǎng)基為對照，于560nm處測定各搖瓶中發(fā)酵液的OD值，填入表中。注意：如果OD值過大，需將發(fā)酵液作一定稀釋后再測定。第十五頁，共十七頁，編輯于2023年，星期五實驗結(jié)果填寫正交實驗表，分析數(shù)據(jù)，確定最優(yōu)培養(yǎng)基配方

(1）方法一：直接比較

(2)方法二:直觀分析直觀分析法是通過對每一因素的平均極差來分析問題所謂極差就是平均效果中最大值和最小值的差。有了極差，就可以找到影響指標的主要因素，并可以幫助我們找到最佳因素水平組合。極差的大小反應(yīng)在所選擇的因素水平范圍內(nèi)該因素對測定結(jié)果影響的程度。極差大的因素在所選擇的因素水平范圍內(nèi)對測定結(jié)果的影響最大，在測試過程中必須嚴格控制。第十六頁，共十七頁，編輯于2023年，星期五因素實驗號ABCD結(jié)果123456789111222333123123123123231312123312231X1X2X3X4X5X6X7X8X9k1k2k3

(X1+X2+X3)/3(X4+X5+X6)/3(X7+X8+X9)/3(X1+X4+X7)/3(X2+X5+X8)/3(X3+X6+X9)/3(X1+X6+X8)/3(X2+X4+X9)/3(X3+X5+X7)/3(X1+X5+X9)/3(X2+X6+X7)/3