Agilent6410串聯(lián)質(zhì)譜培訓(xùn)

Agilent6410作的條狀圖就是我們常見的質(zhì)譜圖。質(zhì)譜的特點(diǎn)1Ⅰ進(jìn)樣系統(tǒng)-1200由上至下依次為溶劑瓶箱、在線脫氣裝置、泵LC-1200PumAutosampler)；柱溫箱(Oven)。泵狀態(tài)指示燈黃色：說明未預(yù)備就緒。在等待到達(dá)或完成一個特別條件，或正在運(yùn)行自測程序。留意(例如，滲漏，不合格的內(nèi)部元件等產(chǎn)生的出錯狀況)，出錯狀況常會干擾分析。閃耀黃色：說明組件處于駐留狀態(tài)。閃耀紅色：說明組件啟動過程中消滅嚴(yán)峻錯誤。2Ⅱ質(zhì)譜局部1、毛細(xì)管 —— 增加去溶劑化，從而使化學(xué)噪聲最小。2、skimmer與八極桿—— 高效率的離子捕獲，使寬質(zhì)量帶寬離子傳輸最大化。3、lens1和lens2 —— 大大提高高質(zhì)量離子的傳輸。41〔MS1〕——雙曲線的四極桿優(yōu)化離子傳輸和質(zhì)譜區(qū)分率。5、RF四極桿段 ——增加離子進(jìn)出碰撞池時的傳輸。6、碰撞池 ——高壓具有線性加速度的碰撞池優(yōu)化質(zhì)譜/質(zhì)譜分裂，從而在一個短的停留時間仍可消退穿插干擾。六極桿設(shè)計有助于捕獲碎片離子。72〔MS2〕——雙曲線的四極桿優(yōu)化離子傳輸和質(zhì)譜區(qū)分率。8、打拿極 ——允許快速電極轉(zhuǎn)換，高增益，壽命長，噪音低。離軸設(shè)計允許中性物質(zhì)穿過而不會遇到檢測器。9、電子倍增器 ——壽命長，由于離子從不接觸其外表，只有電子接觸。一、ESI樣品溶液中發(fā)生靜電噴霧，在枯燥氣流中〔大氣壓下通過離子蒸發(fā)等機(jī)制，生成氣態(tài)離子。通常小分子得到[M+H]+]+,[M+Na]+或[M-H]由于質(zhì)譜儀測定質(zhì)/荷比，因此質(zhì)量范圍只有幾千質(zhì)量數(shù)的質(zhì)譜儀可測定質(zhì)量數(shù)十幾萬的生物大分子。電噴霧電離是最軟的電離技術(shù)，通常只產(chǎn)生分子離子峰，因此可直接測定混合物，并可測定熱不穩(wěn)定的極性化合物；其易形成多電荷離子的特性可分析蛋白質(zhì)和DNA等生物大分子；通過調(diào)整離子源電壓把握離子的碎裂〔源內(nèi)CID〕測定化合物構(gòu)造。3直角噴霧離子源產(chǎn)生最大的離子化效率。高電壓電極：毛細(xì)管帽、半圓形電極和對電極和噴霧擋蓋組成。1.噴霧針不帶電，透鏡部件帶負(fù)壓〔正離子模式，透鏡部件帶正壓〔負(fù)離子模式〕二、前端離子光學(xué)組件毛細(xì)管：內(nèi)徑0.6mm，毛細(xì)管電壓值取決于毛細(xì)管電壓設(shè)置、溶劑流速和溶劑導(dǎo)電性。毛細(xì)管電流真實(shí)反映離子流的狀態(tài)。毛細(xì)管電流小，離子化效率低，說明霧化效果不好。使用時間長或清洗缺乏，毛細(xì)管頂端殘留物增加，形成絕緣層，削減了ESI操作時所必需的電場能量，降低靈敏度和信號穩(wěn)定性。進(jìn)一步，毛細(xì)管內(nèi)壁污染，降低離子傳輸，特別是低質(zhì)量離子，污染再嚴(yán)峻，可能從高電壓端〔進(jìn)口〕到低電壓端〔出口〕產(chǎn)生泄漏電流，這會導(dǎo)致毛細(xì)管電流增加并產(chǎn)生波動的毛細(xì)管電流。4ESI①溶液中的電離：樣品的pKa和溶液的pH②噴霧：外表張力和粘度；氣動關(guān)心③形成帶電小液滴：由于毛細(xì)管被加高壓，造成氧化復(fù)原反響，形成帶電液滴。④去溶劑：溶劑蒸發(fā)和小液滴碎裂：溶劑蒸發(fā)，離子向液滴外表移動，液滴外表的離子密度越來越大，當(dāng)?shù)竭_(dá)Rayleigh(瑞利〕極限時，即液滴外表電荷產(chǎn)生的庫侖排斥力于液滴更小的液滴進(jìn)入穩(wěn)定態(tài)，然后再重復(fù)蒸發(fā)、電荷過剩和液滴分裂這一系列過程<10nm的液滴,液滴外表形成的電場足夠強(qiáng)，離子間的不是液滴的分裂毛細(xì)管進(jìn)入質(zhì)譜。lens1：電子靜態(tài)透鏡：聚焦離子。lens2：RF2域。八極桿射頻離子向?qū)В阂粋€對于離子束的格外有效的聚焦單元。5三、第一組四級桿〔MS1〕四極桿分析器及其特點(diǎn)：因其由四根平行的棒狀電極組成而得名。離子束在與棒狀電極平行的軸上聚焦，一個直流固定電壓〔DC〕和一個射頻電壓〔RF〕作用在棒狀電極上，兩對電極之間的電位相反。對于給定的直流和射頻電壓，特定質(zhì)荷比的離子在軸向穩(wěn)定運(yùn)動，DC和RF。四極桿分析器對選擇離子分析具有較高的靈敏度。四、碰撞池在串聯(lián)質(zhì)譜中承受碰撞活化分解(Collisionactivateddissociation,CAD)技術(shù)把離子“打碎”。碰撞活化分解也稱為碰撞誘導(dǎo)分解(CollisionInduceddissociation,CID)，〔高純氮〕的分子或原子發(fā)生碰撞，離子發(fā)生碎裂。五、其次組四級桿〔MS2〕三重四極質(zhì)譜儀有三組四極桿，第一組四級桿用于質(zhì)量分別(MS1)，其次組四極桿用于碰撞活化(CAD(MS2)。常用的工作方式有四種(見表)。數(shù)據(jù)采集MS2scanMS2SIMProductionMRM

MS1TTITTISIMSIM

MS2ScanSIMScanSIM

得到的質(zhì)譜圖母離子質(zhì)譜圖SIM離子圖子離子質(zhì)譜圖MRMMS2scan：為母離子掃描方式，在這種工作方式，由MS2的是選定的離子，即母離子譜。MS2SIM：為母離子檢測方式，這種工作方式由MS2ProductIon：子離子掃描方式，MS1選擇一個特定的母離子，子離子掃描，檢測器得到68的是選定母離子產(chǎn)生的子離子，即子離子譜。MRM：是多反響監(jiān)測方式,由MS1選擇一個〔或幾個〕特定離子，經(jīng)碰撞碎裂之后,由其子離子中選出一特定離子，只有同時滿足MS1MS2掃描方式的好處是增加了選擇性，即便是兩個質(zhì)量一樣的離子同時通過了MS1，但仍可以依靠其子離子的不同將其分開。這種方式格外適合于從很多簡潔的體系中選擇某特定質(zhì)量,常常用于微小成分的定量分析。Ⅲ檢測器包括打拿級和電子倍增管。Ⅳ真空系統(tǒng)條件下通過質(zhì)量分析器進(jìn)入電子倍增器放大記錄下來為避開產(chǎn)生不必要的離子一分子反響〔空氣中〕和削減本底的干擾，質(zhì)譜的整個過程必需在真空腔的高真空條件下工作。真空范圍：粗真空：1.8~2.0torr 高真空：2.7~3.3×10-5torr機(jī)械泵和渦輪分子泵機(jī)械泵一般前級真空輪分子泵，以保護(hù)分子泵。所以儀器從大氣壓到真空適宜的狀態(tài)一般要經(jīng)過一段時間的〔3小時。三種工作狀態(tài)ModeModeONStandbyOFF儀器狀態(tài)枯燥氣流速，霧化氣壓力和溫度區(qū)按設(shè)置值閥toMSMS高壓關(guān)閉〔如毛細(xì)管、打拿極等。質(zhì)量分析器電壓關(guān)閉。300℃〔默認(rèn)〕霧化氣壓力15psi枯燥氣〔氮?dú)狻?.0L/min閥towasteMS高壓關(guān)閉〔如毛細(xì)管、打拿極等。質(zhì)量分析器電壓關(guān)閉。枯燥氣加熱關(guān)閉霧化氣壓力15psi枯燥氣〔氮?dú)狻?.0L/min閥towaste短期不用〔如晚上或周末，standbyon或standby0，而枯燥氣的流速、霧化氣的壓力和質(zhì)譜切換閥的位置不變。當(dāng)合上離子源時，溫度回到設(shè)定值。在standby時翻開離子源。名詞解釋：質(zhì)荷比:離子質(zhì)量(以相對原子量單位計)與它所帶電荷(以電子電量為單位計)的比值,寫作m/Z.峰:質(zhì)譜圖中的離子信號通常稱為離子峰或簡稱峰.離子豐度:檢測器檢測到的離子信號強(qiáng)度.基峰:在質(zhì)譜圖中，指定質(zhì)荷比范圍內(nèi)強(qiáng)度最大的離子峰稱作基峰.準(zhǔn)分子離子：指與分子存在簡潔關(guān)系的離子，通過它可以確定分子量.液質(zhì)中最常見的準(zhǔn)分子離子峰是[M+H]+或[M-H]-.在ESI中,往往生成質(zhì)量大于分子量的離子如M+1,M+23,M+39,M+18.稱準(zhǔn)分子離子,表示為:[M+H]+,[M+Na]+等碎片離子：準(zhǔn)分子離子經(jīng)過一級或多級裂解生成的產(chǎn)物離子.碎片峰的數(shù)目及其豐度則與分子構(gòu)造有關(guān),數(shù)目多表示該分子較簡潔斷裂,豐度高的碎片峰表示該離子較穩(wěn)定,也表示分子比較簡潔斷裂生成該離子。多電荷離子：2荷離子是絕大多數(shù),只有那些不簡潔碎裂的基團(tuán)或分子構(gòu)造-如共軛體系構(gòu)造-才會形成多電荷離子.它的存在說明樣品是較穩(wěn)定的.承受電噴霧的離子化技術(shù),可產(chǎn)生帶很多電荷的離子,最終經(jīng)計算機(jī)自動換算成單質(zhì)/荷比離子。Agilent64101、開機(jī)前的檢查需認(rèn)真檢查液質(zhì)聯(lián)用儀各模塊的電源連接狀況以及液氮罐的液氮量和連接狀況N2發(fā)生器的輸出壓力為0.56-0.69MP〔80-100ps0.1-0.2MPa0.15MPa10-30Psi)。儀器的啟動LC1200G6410AQQQ的電源開關(guān)，此時聽到一聲電磁閥的聲音，前級泵啟動，然后渦輪泵開頭工作，等待或許3min左右待QQQ上的SmartCard4通訊板完成初始化，質(zhì)譜檢測器局部的啟動完畢。工作站的連接翻開計算機(jī),進(jìn)入Windowsxp畫面,啟動桌面上的通訊連接，點(diǎn)擊桌面上的DataAcquisition圖標(biāo)〔紅色，此時MassHunter表示儀器通訊正常，進(jìn)入工作站。4、參數(shù)的設(shè)置〔R〔M〕和編輯工作表界面〔W〕四個局部。儀器狀態(tài)界面：表示儀器狀態(tài)〔包括前級真空、高真空、枯燥氣流量和壓力及毛細(xì)管電流等重要參數(shù)的實(shí)時狀態(tài)顯示。實(shí)時繪圖界面：包括色譜圖和質(zhì)譜圖的實(shí)時顯示。方法編輯界面：包括液相和質(zhì)譜方法的編輯。編輯工作表界面進(jìn)樣器連續(xù)進(jìn)樣的參數(shù)設(shè)置。1〕自動進(jìn)樣器參數(shù)設(shè)定〔“方法編輯界面〔M〕”中的ALS〕A、進(jìn)樣模式的選擇：在RunInjection選擇Injectionwithneedlewash(可Standardinjection〔只能輸入進(jìn)樣體積，此方式無洗針功〕CHighThroughoutDisableoverlappedInjection〔不提前吸樣。Startoverlapafter(提前吸樣)，在minutes2min。B、吸樣針的設(shè)定：在Options設(shè)定界面AuxiliaryDrawSpeed選200μl/min；EjectSpeed200μl/min；DrawPostion2mm〔為離瓶底的高度〕C、在OptionsStopTime選擇Aspump/Injector。PostTimeOff。2〕泵參數(shù)設(shè)定〔“方法編輯界面〔M〕”QuatPump〕A、流速的設(shè)定：在QuatPump界面中的“Flow”1ml/min。910BABCD四個通道輸入各自的比例，設(shè)定為流淌相組成，A通道為B通道設(shè)為50%，以四元流淌相為例，A=100%-B-C-D，并在各自通道后面的空格內(nèi)輸入說明信息以說明各自通道的溶劑名稱。一般A瓶放流淌相，B瓶放甲醇，C瓶放乙腈，DC、停針時間的設(shè)定：在StopTime5min。D“PressureLimits”〔一般最小值設(shè)為0ba，最大值設(shè)為400ba。E、平衡時間的設(shè)定：在PostTime中設(shè)定平衡時間〔梯度洗脫時用于平衡色譜柱。3〕柱溫箱參數(shù)設(shè)定〔“方法編輯界面〔M〕”中的Left〕在RunTemperature(Left在Temperature(Right),選中”Sameasleft”,StopTime選擇Aspump/InjectorPostTime選擇Off。質(zhì)譜參數(shù)設(shè)定〔“方法編輯界面〔M〕”MSQQQ〕A、離子源的選擇：在RunIonsourceESI；B、停趕忙間的選擇：StopTimeNolimit/Aspump；C、調(diào)諧文件的選擇：Tunefile選擇恰當(dāng)?shù)恼{(diào)諧文件〔默認(rèn)為；filteringPeakwidth0.07min。D、時間段的選擇：在TimeSegmentsSegmentsScanType7MS2Scan、MS2SIM、MRM、ProductIon、PrecursorIon、NeutralLossNeutralGain，可按需要選擇；FIonPolarity選擇正離子Positiv〕或負(fù)離子模式G、靈敏度的選擇：DeltaEMV200400。Time0DataStoredTimeSegments時間段。檢測物參數(shù)的設(shè)定方法編輯界面中的AcquisitionACompoundName一欄輸入樣品名字，在內(nèi)標(biāo)的“ISID?”一欄打√BPrecursorIonProductIon下輸入子離子的質(zhì)荷比，CMS1MS2(MsResolutionunit，widewidest，依據(jù)需要選擇，widewidestD在DwellSIM或MRM等模式一般選200m，Scan模式選500mE在Fragmentor下輸入電壓值〔默認(rèn)13，范圍0-40，摸索時一般用默認(rèn)值1320。FCollisionEnergy〔00-250〕205。6〕電離源參數(shù)的設(shè)定在方法編輯界面中可設(shè)置QQQ儀器的電離源參數(shù)。方法編輯界面中的SourceAGasTemp300-350℃，B:GasFlow8-13L/min，C、霧化器壓力的選擇：Nebulizer30-60Psi，D、毛細(xì)管電壓：Capillary3500-4000V。Diagnostics5、數(shù)據(jù)采集方法編輯建方法并保存方法：從MassHunter軟件的“File”菜單中選擇“New”，“Method”。建立的樣品采集方法；再從“File”菜單中選擇“SaveAs”，再選擇“Method”，輸入方法名稱和存盤路徑。〔一〕運(yùn)行單個樣品編輯方法信息(“方法編輯界面〔M〕”中的Properties)在“Properties”設(shè)定界面中的Methodpath中輸入方法的路徑名和文件名?？梢栽凇癉escription”中輸入對方法的描述。樣品信息設(shè)定(“方法編輯界面〔M〕”Sample)A、樣品名稱：在SampleSampleNameB、進(jìn)樣品位置：SamplePositionC、文件名稱和存盤路徑：在DataFile設(shè)定界面中，Name輸入樣品的存盤文件名，Path輸入樣品的存盤路徑，Auto-incrementDInjectionVolume〔如5μlwash中輸入瓶號E、方法的描述：可以在“Description”中輸入對方法的描述。F、樣品信息設(shè)定:(“方法編輯界面〔M〕”中的Sample)輸入樣品描述G、運(yùn)行單個樣品：使用工具欄的StartSampleRun圖標(biāo)開頭運(yùn)行?！捕尺\(yùn)用Worklist排針進(jìn)樣1〕自動進(jìn)樣序列設(shè)定〔編輯工作表界面〔W〕中的worklist〕使用工作列表〔Worklist〕運(yùn)行多個樣品?？梢酝ㄟ^offlineonlineWorklist。依次點(diǎn)擊File＞New＞W(wǎng)orklist創(chuàng)立一個的Worklist從工作列表菜單中選擇AddSample。工作列表表格就添加了一行的樣品。2〕樣品信息的輸入：①單個樣品：直接在工作列表表格輸入以下樣品信息：樣品名稱Samplenam，樣品位置Sample采集方法Metho，數(shù)據(jù)文件名稱Data樣品類型SampleTyp，級別名稱Levelnam。②添加多于一個的樣品：在工作列外表板點(diǎn)擊左鍵選擇AddMultipleSamples表菜單項選擇擇AddMultipleSamples。消滅AddMultipleSamplesSampleInformatio〕、Samplenam〔如Blank，Numberofdigit〔數(shù)字位數(shù)如Blank-0，2位，BDataFilenam〔如Blank，Numberofdigit〔數(shù)字位數(shù)如Blank-0，2位C、數(shù)據(jù)文件保存路徑〔如E:\MassHunter\Data\Mesalamine\Run\Run-0，D、采集方法路徑〔如E:\MassHunter\Data\Mesalamine\MethoOKSamplePositionECtrl鍵向下并點(diǎn)擊選擇獨(dú)立的位置；使用Shift+Ctrl在一樣地方選擇多個樣品。點(diǎn)擊OK按鈕，關(guān)閉AddMultipleSamples1213F、在排針表中選擇樣品類型〔SampleType〕如：QC,級別名稱〔Levelname〕6。G、保存和運(yùn)行：使用工具欄的保存工作列表工具或者File-Saveas-Worklist菜單保存工作列表。使用工具欄的StartWorklistRun圖標(biāo)開頭工作列表〔在工作列表中所選擇的樣品前打√。6、運(yùn)行從“方法編輯界面〔M〕”中完成全部的方法編輯。包括六個局部，分別是Sample(設(shè)置文件名和樣品信息等參數(shù))、Properties(設(shè)置方法的路徑等)、QuatPump〔輸入流淌相、流速等泵參數(shù)、ALS(設(shè)置自動進(jìn)樣器的參數(shù))、Column〔設(shè)置柱溫箱參數(shù)、MSQQQ〔設(shè)置質(zhì)譜參數(shù)。1〕把流淌相放入溶劑瓶中，翻開Purge〔M〕”中的QuatPumpFlow：5ml/min，單擊ApplyPurge，直到管線內(nèi)〔由溶劑瓶到泵入口PurgeFlow：0ml/minApplyPurgevalveFlow：0.6ml/min。液相平衡時將管路連接到廢液瓶，不進(jìn)質(zhì)譜，為節(jié)約氮?dú)赓|(zhì)譜先不用翻開，保持待機(jī)狀態(tài)。2〕等液相平衡一段時間后，將管路連接到質(zhì)譜并將質(zhì)譜翻開，儀器均預(yù)備就緒后，開頭進(jìn)樣。7、運(yùn)行狀態(tài)的觀看可以通過掃瞄在每個界面上的條目來判定QQQ和HPLC模塊的狀態(tài)。顏色說明目前模塊的狀態(tài)。綠色說明模塊或儀器“Ready”。黃色說明“NotReady”。紅色說明模塊中有“Error”。藍(lán)色說明系統(tǒng)正在運(yùn)行。粉紅色說明儀器等待注射?？梢詸z查日志LogBook瀏覽錯誤信息。8、關(guān)機(jī)1〕首先將質(zhì)譜standby2)關(guān)機(jī)前，假設(shè)是有緩沖鹽的系統(tǒng)，先用水：甲醇〔90：10〕0.5ml/min至少沖洗系統(tǒng)30分鐘，然后用有機(jī)溶劑至少沖洗系統(tǒng)30分鐘〔如甲醇，然后點(diǎn)擊Pump0，然后再次點(diǎn)擊選擇Off，依次點(diǎn)擊柱溫箱和進(jìn)樣器選擇Off。關(guān)機(jī)。9、質(zhì)譜的放空質(zhì)譜檢測器局部的關(guān)閉：確認(rèn)前級泵的氣鎮(zhèn)閥〔GasBlastValve〕處于關(guān)閉狀態(tài)。在無流淌相進(jìn)入質(zhì)譜檢測器的狀態(tài)下，在MassHunterMSQQQ圖標(biāo)，Vent，執(zhí)行放空步驟，消滅下述提示OncetheQQQisvented,itwilltakesometimetostabilizeitagaintorunsamplesoptimally.Youmustalsoallowtheturbopumpstospindowncompletelyandthenturnoffthemaincircuitbreakertocompletetheventoperation.Doyouwishtocontinueventing?假設(shè)確認(rèn)要放空，選擇Yes。觀看渦輪泵轉(zhuǎn)速，以及四極桿和枯燥氣的溫度，等待或許20-30min左右，等待渦輪泵轉(zhuǎn)速完全降下來，且枯燥氣溫度和四極桿溫度下降到確定程度〔四極桿溫度50℃以下，關(guān)閉前級泵。退出MassHunter軟件，然后點(diǎn)擊桌面AcqSystemLauncher圖標(biāo)，然后選擇Shutdown〔shutdownMSQQQ和LC1200各模塊電源開關(guān)。假設(shè)很長時間不使用則還需關(guān)閉碰撞氣〔高純氮?dú)狻澈鸵旱揲_關(guān)閥。1516Agilent6410串聯(lián)質(zhì)譜常見故障的處理與離線工作站的使用一、數(shù)據(jù)定性分析方法編輯啟動桌面上的QualitativeAnalysis圖標(biāo)，運(yùn)行“AgilentMassHunterQualitativeAnalysis”軟件〔綠色，進(jìn)入數(shù)據(jù)分析畫面。選擇菜單項File中的OpenDataFile，翻開目標(biāo)文件夾下的目標(biāo)文件，在色譜圖位置點(diǎn)擊右鍵，選擇ExtractChromatogramsTypeMRMAdvanced一欄中的FragmentorAny”.積分參數(shù)的設(shè)置和積分1〕在積分欄中選擇Integrator則自動積分，使用默認(rèn)參數(shù)。假設(shè)要手動積分，則選擇GeneralIntegrator,在Startthreshold輸入開頭斜率，在Stopthreshold輸入完畢斜率。在Peaklocation選擇顯示峰位置〔峰頂或中心〕2〕峰過濾可以選擇峰面積過濾和峰高過濾，選擇PeakareaPeakarea則為確定峰面積過濾，輸入想設(shè)置的數(shù)值；點(diǎn)擊Relativearea則為最大峰面積的百分比，輸入想設(shè)置的數(shù)值。PeakheighPeakheighRelativeheighe參數(shù)設(shè)置完畢后點(diǎn)擊積分，積分完成后，點(diǎn)擊不同通道的色譜圖，在右下角查看峰面積。4．要退出所選擇的圖譜文件，點(diǎn)擊“CloseDataFile”選中要退出的文件，點(diǎn)擊“Close”則退出；假設(shè)要退出全部的文件，則點(diǎn)擊“CloseAll”.5.假設(shè)要恢復(fù)主窗口為默認(rèn)設(shè)置，點(diǎn)擊菜單項ViewRestoreDefaultLayout。二、數(shù)據(jù)定量分析方法編輯軟件啟動：啟動桌面上的QuantitativeAnalysis圖標(biāo)〔藍(lán)色，運(yùn)行AgilentQuantitativeAnalysisBatch〔批處理〕的建立或編輯1)Batch〔批處理〕的建：單擊菜單項File中的NewBatch〔留意：每個分析批的全部數(shù)據(jù)應(yīng)存放在同一個文件夾中Open一個的批處理文件。2)添加數(shù)據(jù)：單擊菜單項FileAddSample，在AddSample對話框，單擊選擇全部“SelectAll”按鈕或選定需要添加的圖譜名稱然后單擊OK按鈕，添加樣品圖譜文件。應(yīng)檢查和核對批處理表Sample欄中的Name(樣品名)，Type(類型)、Level(濃度級別)、Acq.Date-Time〔采集時間〕和DataFile(文件名)等具體信息是否正確，并顯示色譜圖。3〕Batch〔批處理〕的翻開：如想需要翻開已經(jīng)存在的Batch，選擇菜單項FileOpenBatch，選擇相應(yīng)的文件夾,翻開其中的已經(jīng)存在的Batch。定量分析方法〔Method〕的建立和編輯MRM經(jīng)編輯保存過的分析方法進(jìn)展定量批處理。MRM單擊菜單Method中的New，選擇MethodfromAcguiredMRMData〔通常選用標(biāo)準(zhǔn)曲線的中間濃度點(diǎn)樣品圖譜文件OpenMRMMethodSetupTasks中參數(shù)進(jìn)展設(shè)定。A、樣品采集參數(shù)的設(shè)置B、保存時間的設(shè)置單擊保存時間設(shè)置RetentionTimeSetup檢查確認(rèn)導(dǎo)入的參數(shù)。軟件會自動在保存時間向前〔LeftRTDelta〕和向后〔RightRTDelta〕的時間范圍內(nèi)查找色譜峰，RTDeltaUnitspercent〔按百分比〕minutes〔按時間。選擇minutes〔按時間。軟件自動將待測組分保存時間在RT5%以內(nèi)的色譜峰認(rèn)為是正常峰。MRMMRMCompoundSetupB、保存時間的設(shè)置單擊保存時間設(shè)置RetentionTimeSetup檢查確認(rèn)導(dǎo)入的參數(shù)。軟件會自動在保存時間向前〔LeftRTDelta〕和向后〔RightRTDelta〕的時間范圍內(nèi)查找色譜峰，RTDeltaUnitspercent〔按百分比〕minutes〔按時間。選擇minutes〔按時間。軟件自動將待測組分保存時間在RT5%以內(nèi)的色譜峰認(rèn)為是正常峰。假設(shè)一個分析批的保存時間變動較大，需要將LeftRTDeltaRightRTDelta大一些。C、內(nèi)標(biāo)參數(shù)的設(shè)置單擊ISTDSetup進(jìn)展參數(shù)設(shè)定，首先在ISTDFlag項選定內(nèi)標(biāo)物，然后從ISTDCompoundName的下拉菜單中為待測物指定內(nèi)標(biāo)化合物IST，并在ISTDConc相應(yīng)內(nèi)標(biāo)的體內(nèi)濃度。TimeReferenceFlag〔時間參考〕不選，由于此選項是用于預(yù)期目標(biāo)峰的保存時間建立在時間參考峰〔內(nèi)標(biāo)峰〕漂移根底上。D、線性濃度的設(shè)置單擊方法設(shè)置任務(wù)MethodSetupTasks里的ConcentrationSetup，輸入線性最高點(diǎn)的體內(nèi)藥物濃度值Dil.HighCon〕和稀釋模式Dil.Patter。稀釋模式是以體內(nèi)最高濃度為1，逐級按稀釋倍數(shù)〔與上一級的濃度〕的比值依次排列，例100、5020，則稀釋模式為1：2：2.5，如比例是循環(huán)數(shù)，循環(huán)位數(shù)保存四位以上。點(diǎn)擊CreateLevels計算濃度，看是否和計算器計算的結(jié)果全都，假設(shè)不全都則增加循環(huán)小數(shù)的位數(shù)至全都。E、校正曲線的設(shè)置單擊方法設(shè)置任務(wù)-校正曲線設(shè)置MethodSetupTasks里的CalibrationCurveSetup，從CF曲線擬合CurveFi〕選項中選擇LineaCFOrigi”的菜單中選擇Ignor〔無視CFWeig”的下拉菜單中選定權(quán)重系數(shù)為1/。F、檢查單擊GlobalsSetu〔全面設(shè)置，檢查有無錯誤。單擊Validate確則此方法設(shè)定成立，如提示有錯誤，則依據(jù)提示進(jìn)展方法修改。G、方法的保存和應(yīng)用單擊“SaveAs”進(jìn)展方法設(shè)置保存。單擊Exit，然后選擇Yes應(yīng)用方法到此批處理表。H、最小峰面積的設(shè)置：Advanced中的IntegrateParameterSetupIntParmsPeakFilterPeakArea〔%〕選擇適宜數(shù)值即可?？梢韵似渌〉纳V峰積分干擾。留意:使用同一方法〔只是不同的內(nèi)標(biāo)濃度〕分析同一批次樣品，結(jié)果是線性的方程不至和計算器計算結(jié)果全都。留意:使用同一方法〔只是不同的內(nèi)標(biāo)濃度〕分析同一批次樣品，結(jié)果是線性的方程不同，但樣品的分析結(jié)果是一樣的。不同分析批使用同一方法進(jìn)展時，需留意不同分析批的同，但樣品的分析結(jié)果是一樣的。不同分析批使用同一方法進(jìn)展時，需留意不同分析批的樣品色譜保存時間會有很大差異，應(yīng)相應(yīng)修改保存時間的設(shè)置。假設(shè)重稱樣則應(yīng)相應(yīng)修樣品色譜保存時間會有很大差異，應(yīng)相應(yīng)修改保存時間的設(shè)置。假設(shè)重稱樣則應(yīng)相應(yīng)修改標(biāo)線濃度的設(shè)置。保存時間設(shè)置不當(dāng)會導(dǎo)致色譜峰積分不完全，所以范圍應(yīng)設(shè)置盡量寬并檢查核對積分是否合理。調(diào)用已經(jīng)編輯保存過的分析方法分析方法可以單獨(dú)保存在方法文件中，也可以保存在batch中，因此，翻開已有的分析方法有兩種方式。①單擊菜單Method中的Open，選擇OpenMethodfromExistingFile②OpenMethodfromExistingBatchbatch名，點(diǎn)擊Open按鈕，導(dǎo)入MRMMethod中的Edit，切換到方法編輯模式。使用定量方法分析數(shù)據(jù)分析：在工具欄上單擊分析批處理〔AnalyzeBatch〕圖標(biāo)啟動批處理分析。2)檢查檢查Batch表中化合物項下的RT〔保存時間〕和Resp.〔峰面積響應(yīng)〕Exp.Conc〔理論濃度、Calc.Conc〔回代濃度〕和RT〔保存時間、Accuracy〔準(zhǔn)確度、Resp.〔峰面積響應(yīng)〕等有無特別，可以右鍵點(diǎn)擊選擇Add/RemoveColumn，添加其它的具體信息〔如WidthHeight〕進(jìn)展查看。留意:定量結(jié)果中尤其應(yīng)留意準(zhǔn)確度值是否符合線性回代和QC19203)3)數(shù)據(jù)的輸出①選擇Batch表中的內(nèi)容，點(diǎn)擊Edit里的Copy，在翻開的Excel應(yīng)內(nèi)容。②也可以將BatchExcelFileExportExportTablet，存為相應(yīng)的文件xls格式，再用Excel4、BatchFile→SaveBatch,則保存Batch，單擊File→SaveBatchAs,則另存Batch，要退出所選擇的圖譜文件，點(diǎn)擊“Close”三、日常維護(hù)流淌相配制1〕液相-質(zhì)譜聯(lián)用儀的流淌相所需的有機(jī)溶劑〔如甲醇和乙腈等〕要求為進(jìn)口色譜級試劑，其他試劑如甲酸、乙酸、氨水、甲酸銨和乙酸銨等要求HPLC級。2〕含甲酸〔或乙酸〕＜2％。含三乙胺＜l％。含醋酸銨＜10mmol/l。含鈉和鉀的成分必需＜lmmol/l〔鹽分太高會抑制離子源的信號和堵塞噴霧針及污染儀器〕3〕嚴(yán)禁使用不揮發(fā)性的磷酸鹽、硼酸鹽、含氯的緩沖液等；制止使用鹽酸、硫酸等無機(jī)酸。沖洗色譜柱每天進(jìn)完樣品后，應(yīng)對色譜柱進(jìn)展沖洗。假設(shè)流淌相為不含緩沖鹽的系統(tǒng)〔腈-水等系統(tǒng)〕，可以直接用甲醇對色譜柱進(jìn)展沖洗，應(yīng)保證流速在0.5ml/min下沖洗至少30假設(shè)流淌相為含緩沖鹽的系統(tǒng)〔如含乙酸銨等〕，應(yīng)先用甲醇-水(10:90)保證流速在0.5ml/min300.5ml/min30在線清洗HPLC用緩沖鹽時，由于泵頭內(nèi)的緩沖鹽溶液存在高壓析鹽現(xiàn)象，析出的細(xì)小鹽粒格外堅硬，10%異丙醇在線清洗。清洗液配制:90%水+10%異丙醇.該混合液可抑制菌類生長和減小水的外表張力。以2-3/min噴霧室清潔：操作者每天應(yīng)用50%異丙醇水溶液清潔噴霧室，用棉簽或?qū)Ｓ们鍧嵅剂粢猓呵鍧嵾^程中不要接觸到噴霧針頭，以免針頭受損!清潔噴霧室的半圓形電極、對電極、毛細(xì)管帽和噴霧擋蓋等部位。留意：清潔過程中不要接觸到噴霧針頭，以免針頭受損!液氮罐狀態(tài)：操作者每天使用前應(yīng)檢查液氮罐中的液氮量和液氮罐內(nèi)壓力狀況，在液氮八級桿等局部很簡潔臟.(如不是連續(xù)進(jìn)樣可以等到機(jī)器質(zhì)譜局部變紅,自動停機(jī)再更換氮?dú)?.充氮之前將質(zhì)譜檢測器的狀態(tài)選擇為“待機(jī)〔standby〕”,在使用過程中應(yīng)先翻開氮?dú)忾y,再將增壓閥翻開。檢查前置真空泵〔逆時針旋轉(zhuǎn)2-3圈〕1小時。留意：氣震后確定記得關(guān)閉氣震閥，以免意外停電，泵油流向真空腔!泵油的更換通常是連續(xù)使用3000h更換一次，但假設(shè)覺察油的顏色變深或液面下降至1/2之下，需要準(zhǔn)時更換。留意：氣震后確定記得關(guān)閉氣震閥，以免意外停電，泵油流向真空腔!毛細(xì)管清洗及鈍化1〕關(guān)機(jī)：質(zhì)譜放空約3050度以下后，關(guān)閉質(zhì)譜電源。假設(shè)質(zhì)譜不提前關(guān)機(jī)，毛細(xì)管則無法拔出，強(qiáng)行拔出易使毛細(xì)管斷裂。2〕拆卸毛細(xì)管：留神將離子源和圓形電極拆卸下來，擰開毛細(xì)管帽，留神地將毛細(xì)管沿著轉(zhuǎn)，否則易刮花毛細(xì)管兩頭的鉑金涂層。50cm左右長的毛細(xì)管清潔鎳絲，將線的兩頭穿過毛細(xì)管〔從里端穿向外端，取少量脫脂棉用50壞毛細(xì)管。最好每完畢一個工程清洗一次毛細(xì)管。安裝毛細(xì)管：依次安裝毛細(xì)管，圓形電極和離子源，翻開質(zhì)譜電源開頭抽真空。鈍化：1)把清洗好的、枯燥的毛細(xì)管垂直放入盛有1MNaOH溶液的聚丙烯燒杯內(nèi)。使用吸耳球或膠帽把NaOH吸入毛細(xì)管〔不要超過1小時〕。移開吸耳球，讓NaOH自