用了條件性基因敲除小鼠就能發(fā)高分文章首先你得跨過這些坑

用了條件性基因敲除小鼠就能發(fā)高分文章首先你得跨過這些坑在學(xué)習(xí)跨坑之前，先來了解一下條件性基因敲除小鼠真身。條件性基因敲除CKO條件性基因敲除ConditionalKnockout）是指將某個(gè)基因的修飾限制于小鼠某些特定類型的細(xì)胞或發(fā)育的某一特定階段，實(shí)現(xiàn)對小鼠基因組的時(shí)空特異性修飾。用胚胎致死性基因的研究研究靶基因在特定組織或細(xì)胞中的功能研究靶基因在特定時(shí)期或階段發(fā)用優(yōu)勢多功能的基因敲除模型可與不同工靈活搭配使用明確了目的基因缺失的型或缺失發(fā)生的特定時(shí)間客觀而系統(tǒng)地研究目的基因在不同組織器官發(fā)生發(fā)育疾病發(fā)生治療過程中的作用與機(jī)制克服了因完全敲除后的死或過早死亡表明約有1/3的基因純合敲除后會(huì)導(dǎo)致小鼠胚胎期死亡或出生期死亡避免由于全敲除目的可能引發(fā)的其它基因的導(dǎo)致基因敲除后沒有明顯表型改變?yōu)槭裁磽碛袟l件性基因敲除小鼠模型更容易發(fā)高分文一篇好文章，意味著我要一個(gè)好故事。時(shí)間地點(diǎn)故事的三本要素自然是不可！簡單的說故事的主就是我研究的基因而CKO除了可以明確目的基因的特定組織或細(xì)胞中發(fā)生可以制發(fā)生的特定時(shí)間。與普通的KO相比CKO無疑提供了更精準(zhǔn)確鑿的不在場證明。這樣的故事當(dāng)然也就更有說服不怕reviwer質(zhì)疑啦！完美！不過，如果你看到這里就滿心歡喜，小編只能說：TOOYOUNGTOOSIMPLE!條件性基因敲除美麗的背后可是暗藏玄機(jī)呢！條件性基因敲除的這些坑，你踩過幾個(gè)？組織特異性e其實(shí)沒那么特異？我用的GFAP-Cre和你用的GFAP-Cre不一樣？原來Cre小鼠用雌鼠和用雄鼠還不一樣？我的CKO小鼠為什么基因還沒被敲除？Cre小鼠也會(huì)不育？廣泛表達(dá)的Cre在所有組織表達(dá)不一樣高？誘導(dǎo)型Cre其實(shí)會(huì)漏？下面就讓小編來給你填土埋坑！文末有彩蛋哦可別等不及直接拉到最后看錯(cuò)過面的干貨就可惜了～組織特異性Cre真的那么特異嗎？師兄應(yīng)該是肝臟特異表達(dá)的Cre怎么好像在腦里也達(dá)？唉，理想是豐滿的，而現(xiàn)實(shí)往的。其實(shí)，Cre的非特異性表達(dá)是普遍存在的?。〈蟛糠諧re品系在其它組織中也有Cre活性。由于Cre的非特異性表達(dá)導(dǎo)致基因敲除的脫靶，有可能在你不自知的直接影響到你的數(shù)據(jù)。比如，受神經(jīng)元特異性Emx1（emptyspiracleshomolog1）啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)的Cre小鼠除了在新皮質(zhì)和海馬中高表達(dá)re以外在腎臟和胸腺中也會(huì)表達(dá)Cr圖.e（A（、（圖片來自jaxla）如果Cre的脫靶發(fā)生在生殖以Emx1-Cre為例，研究發(fā)現(xiàn)在一小部分生殖細(xì)胞中也有Cre表達(dá)，并且雄性與雌性都可能出現(xiàn)這樣的脫靶怎么知道有沒有發(fā)生生殖系脫靶？我們可以通過PCR方法發(fā)現(xiàn)是否發(fā)生了全身敲除。只需要在x區(qū)域的上下游分別設(shè)計(jì)一條上游引物和一條下游引物（下圖橙色箭頭如果發(fā)生了全身敲那么在做基因型鑒定PCR時(shí)會(huì)出現(xiàn)一的GFAP-Cre和你用的GFP-re不一樣？我和文獻(xiàn)里用的明明都是GFAP-Cr為什么表別這么大？看看你買的GFP-re全名叫啥？從哪來的？不同機(jī)構(gòu)構(gòu)建的Cre品系，Cre的表達(dá)譜都不一樣！雖然Cre都受gllfraciicproteinpromoter驅(qū)動(dòng)，但Tg(GFAP-cre)8Gtm主要在星形膠質(zhì)細(xì)胞中表達(dá)Cre；而Tg(GFAP-cre)25Mes除了在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中的星形膠質(zhì)細(xì)胞少神達(dá)Cre內(nèi)皮細(xì)胞、肝臟門靜脈周細(xì)胞、附睪管中有Cre表達(dá)。這差別可不是一點(diǎn)半點(diǎn)呢。圖2.CrerecombinaseexpressionnGfap-remieoccursintheendocardium(p),pulmonaryvascularendothelium(q),endothelialcellsoftheliverportalsystem(r),ductusepididymis(s),isletsofLangerhan’sandpancreaticductendothelium(arrowheads)(,aswellasendometrialandglandularendometrialcellsoftheuterus(arrowheads)(u).（圖片來自at..么有這差異呢？與Cre鼠的構(gòu)建方式有很大的關(guān)系。目前用的比較多的Cre品系都還是以隨機(jī)整合轉(zhuǎn)基因的方式構(gòu)建的。也就是將啟動(dòng)子連同CrecDNA序列通過顯微注入小鼠受精卵，在小鼠體中隨機(jī)整合。易被沉默或發(fā)生異位表達(dá)等。另外人源或大鼠啟動(dòng)子在小鼠體內(nèi)的表達(dá)也可能存在差異啟動(dòng)子長度及區(qū)域也會(huì)影響啟動(dòng)子。所以導(dǎo)致了最終Cre表達(dá)譜的諸多差異看來購買Cre工具鼠可得小慎。是啊，所以期的文獻(xiàn)工作很呢！通過已發(fā)表的文獻(xiàn)可以知道在哪些組織或細(xì)胞中表達(dá)Cre。如果找不到Cre的相關(guān)文獻(xiàn)那么保險(xiǎn)起見還是將Cre小鼠與報(bào)告基因工具鼠交配一下看子代雙陽性小哪些組報(bào)告基因的表達(dá)，那么就可以大致判斷這種Cre小鼠是否合適了。那如果我買不到合適的Cre工具鼠怎么辦？如果沒有現(xiàn)成適合的Cre小鼠的話，那么可以定制你的Cre工具鼠。為了避免轉(zhuǎn)基因品系的那些缺點(diǎn)，將Cre定點(diǎn)敲入（Knocki）到你指定的小鼠內(nèi)源基因里讓Cre受內(nèi)源基因天然啟動(dòng)子的調(diào)控，表達(dá)成功率更高而且也更穩(wěn)定。聽說上海南方模式生物最近有一個(gè)工具鼠眾籌項(xiàng)目可以花小錢定制工具鼠你可以留意哦掃這個(gè)二維碼就行太好了謝謝師兄！對了，剛剛你那張表格是在哪里查到的？是MGI的Reobse(re)Actvity數(shù)據(jù)庫哦。http://binase可以按你想查詢的類型或特殊的子名稱來查詢相關(guān)的re工具鼠品系很方便呢原來Cre小鼠用雌鼠和用雄鼠還不一樣？師兄，我應(yīng)該用雄性Cre配雌性flox小鼠還是用雌性Cre配雄性lox小鼠呢？個(gè)問題你使用的是哪種Cre的