分子生物學實驗室儀器操作簡介

關于分子生物學實驗室儀器操作簡介第1頁，講稿共33頁，2023年5月2日，星期三1.微量移液器第2頁，講稿共33頁，2023年5月2日，星期三

微量移液器有數字可調式和固定式兩種型號，是計量和轉移液體的專用儀器，其裝有直接讀數容量計?！涛⒘恳埔浩饔卸喾N規(guī)格，在移液器量程范圍內能連續(xù)調節(jié)讀數?！獭獭獭痰?頁，講稿共33頁，2023年5月2日，星期三量液的操作步驟：第一停點第二停點A保持微量移液器垂直，將按鈕壓至第一停點；B微量移液器頭尖端浸入溶液，緩慢釋放按鈕；C保持微量移液器垂直，將微量移液器頭與容器壁接觸，慢慢壓下按鈕至第一停點；D壓至第二停點把溶液完全釋放出；E釋放按鈕回原狀。第4頁，講稿共33頁，2023年5月2日，星期三1．未裝吸嘴的微量移液器絕對不可用來吸取任何液體。

2．一定要在允許量程范圍內設定容量，千萬不要將讀數的調節(jié)超出其適用的刻度范圍，否則會造成損壞。

3．不要橫放或倒拿帶有殘余液體吸嘴的移液器。

4．不要用大量程的移液器移取小體積樣品。

5.移液器使用完后，將刻度調到最大刻度，收藏。

量液操作注意問題：第5頁，講稿共33頁，2023年5月2日，星期三2.臺式高速離心機離心機的分類

低速：每分鐘幾千轉

高速：每分鐘1~3萬轉

超速：每分鐘3萬轉以上第6頁，講稿共33頁，2023年5月2日，星期三低速：細胞等大分子

高速：DNA，蛋白等

超速:

病毒，蛋白，細胞器等基因片段的分離、酶蛋白的沉淀和回收以及其它生物樣品的分離制備實驗中都離不開低溫離心技術離心機的功能：分離純化第7頁，講稿共33頁，2023年5月2日，星期三1、把離心機放置于平面桌或平面臺上，檢查離心機是否放置平穩(wěn)。2、將離心管對稱放入轉子內，且要事先平衡。3、鎖緊門蓋。4、插上電源插座，按下電源開關。5、設置轉子號、轉速、時間.注意：對應的轉子不可超速使用，否則對試管或轉子有損壞。6、當轉子停轉后，打開門蓋取出離心管，關斷電源開關。臺式高速離心機使用步驟第8頁，講稿共33頁，2023年5月2日，星期三注意事項：1、離心機在運轉時，不得移動離心機，不要打開門蓋。2、安放離心機的臺面應堅實平整，四只橡膠機腳都應與臺面接觸和均勻受力，以免產生振動。3、離心管加液要平衡，若加液差異過大運轉時會產生大的振動，此時應停機檢查，使加液符合要求，離心試管必須對稱放入。4、若運轉時有離心試管破裂，會引起較大振動應立即停機處理。5、離心機徹底停止后，才可開蓋，取樣。第9頁，講稿共33頁，2023年5月2日，星期三低溫冷凍離心機1.把離心機水平安放于地面2.使用前開機預冷3.對應轉子重量要平衡4.按操作規(guī)程操作第10頁，講稿共33頁，2023年5月2日，星期三3.PCR儀第11頁，講稿共33頁，2023年5月2日，星期三PCR儀主要應用于基礎研究和應用研究等許多領域，如基因分析、序列分析、進化分析、臨床診斷、法醫(yī)學等。PCR儀，也稱DNA熱循環(huán)儀、基因擴增儀，能使一對寡核苷酸引物結合到正負DNA鏈上的靶序列兩側，從而酶促合成拷貝數為百萬倍的靶序列DNA片段，它的每一循環(huán)包括DNA變性、復性、延伸三個反應。第12頁，講稿共33頁，2023年5月2日，星期三操作程序:1）開機：打開電源，顯示主界面；2）創(chuàng)建程序：使用”create”輸入新程序（包括PCR循環(huán)數，預變性、變性、復性、延伸的時間和溫度），保存程序（包括用戶名和方法名）;3）放入樣品，蓋上蓋子;4）在所建用戶名下按“run”鍵，找到設定的程序，按“start”鍵啟動程序;5）運行結束后按“stop”鍵停止運行，取出樣品，關閉電源。第13頁，講稿共33頁，2023年5月2日，星期三

1、預變性：可用94～95℃，2～10min,一般用5min。

2、變性：一般用94℃，30s~2min,一般45s~1min。

3、退火：溫度自定，30s~2min。

4、延伸：72℃，對于(1kb=1min,每增加1kb加1min)。

5、循環(huán)數：一般25～35個循環(huán)(2,3,4步循環(huán)）。

6、最終延伸：72℃，5～15min。

7、保存：4℃，時間設為0-60min。

8、END。如何設置PCR程序：第14頁，講稿共33頁，2023年5月2日，星期三4.電泳圖像分析系統第15頁，講稿共33頁，2023年5月2日，星期三第16頁，講稿共33頁，2023年5月2日，星期三系統簡介：系統可以通過紫外/可見光分析裝置及透光掃描儀直接獲得核酸、蛋白質凝膠電泳圖像。系統配置有SmartView生物電泳圖像分析軟件，可以進行密度掃描、密度定量、分子量計算等電泳分析。此外，該系統含有多種圖像濾波器，可降低圖像的噪音，從而獲得較清晰的圖像。第17頁，講稿共33頁，2023年5月2日，星期三操作步驟：1）將電泳樣品放入分析裝置中2）打開電腦，運行SmartView軟件，單擊“Import”鍵進入

圖像獲取項目欄，選擇“獲取視頻圖像”鍵，進行圖像采集3）選

擇紫外或可見光源，在圖像采集窗口中調節(jié)好圖像大

小、亮度及焦距4）單擊“采集圖像”鍵，根據圖像質量選擇好優(yōu)化攝影時間

（一般情況下在12秒左右），即開始采集。1、圖像采集第18頁，講稿共33頁，2023年5月2日，星期三第19頁，講稿共33頁，2023年5月2日，星期三2、圖像保存

單擊“System鍵”選擇“另保存圖像為”鍵，出現一個“圖像文件登記”窗口，輸入標題，實驗人，實驗日期，實驗摘要等信息，按“保存”鍵完成圖像文件登記，同時出現“另保存圖像為”窗口，輸入圖像名，保存圖像至桌面。3、關閉操作系統（1）關閉紫外/可見光。（2）退出軟件界面。（3）關閉紫外與可見分析裝置的電源。第20頁，講稿共33頁，2023年5月2日，星期三注意事項：1、不要戴“臟”手套觸摸電腦鼠標、鍵盤及其它位置；

2、不要戴“臟”手套觸摸倉門和燈箱電源開關；

3、不要戴“臟”手套觸摸外接電源開關；

4、在圖像獲取過程中，若通過軟件打開紫外/可見光，則必須再通過軟件關閉，若通過紫外與可見分析裝置上打開紫外/可見光，則從分析裝置上關閉，嚴禁互用，導致紫外燈長亮。第21頁，講稿共33頁，2023年5月2日，星期三5.電泳儀DYY-12型電腦三恒多用電泳儀（北京六一儀器廠）第22頁，講稿共33頁，2023年5月2日，星期三操作程序：1）電泳槽的兩個電極與電泳儀的直流輸出端連接（極性不要接反）；2）打開電源，設置參數（選擇穩(wěn)壓穩(wěn)流方式及電壓電流范圍）；3）按“啟動”啟動程序（輸出為高電壓，注意安全）；4）電泳結束，按“停止”鍵終止程序。第23頁，講稿共33頁，2023年5月2日，星期三注意事項1、電泳儀工作時，禁止人體接觸電極、電泳物及其它可能帶電部分，也不能到電泳槽內取放東西，以免觸電，同時要求儀器有良好接地端，以防漏電。2、儀器通電后，不要臨時增加或撥除輸出導線插頭，以防短路。3、由于不同介質支持物的電阻值不同，電泳所通過的電流量也不同，其泳動速度及泳至終點所需時間也不同，故不同介質支持物的電泳不要同時在同一電泳儀上進行。4、使用過程中發(fā)現異?，F象，如較大噪音、放電或異常氣味，須立即切斷電源，進行檢修，以免發(fā)生意外。

第24頁，講稿共33頁，2023年5月2日，星期三使用及性能：搖床（振蕩器）廣泛用于對溫度和振蕩頻率有較高要求的細菌培養(yǎng)、發(fā)酵、雜交、生物化學反應以及酶和組織研究等。實驗室常用的液體搖勻，微生物、細菌和細胞培養(yǎng)。

6.恒溫氣浴搖床SHK-99-Ⅱ型臺式空氣恒溫搖床第25頁，講稿共33頁，2023年5月2日，星期三1）樣品瓶牢固放入彈簧夾中；2）接通電源開關，設定參數（溫度、時間、轉速等）；3）按啟動鍵啟動儀器，按暫停鍵可暫停托盤的旋轉；4）按下控制面板的電源鍵兩秒，顯示屏顯示消失，關閉電源總開關。操作程序：第26頁，講稿共33頁，2023年5月2日，星期三7.超凈工作臺使用及性能：超凈工作臺為分子生物學無菌操作提供可能，分為垂直送風和水平送風兩種。第27頁，講稿共33頁，2023年5月2日，星期三超凈臺由三相電機作鼓風動力，空氣通過由特制的微孔泡沫塑料片層疊合組成的“超級濾清器”后吹送出來，形成連續(xù)不斷的無塵無菌的超凈空氣層流，即所謂“高效的特殊空氣”，能夠防止附近空氣可能襲擾而引起的污染，同時也不會妨礙采用酒精燈或本生燈對器械等的灼燒消毒。工作人員就在這樣的無菌條件下操作，可以保持無菌材料在轉移接種過程中不受污染。第28頁，講稿共33頁，2023年5月2日，星期三臺面清潔消毒紫外燈滅菌30分鐘進行無菌操作清理工作臺面紫外消毒30分鐘關閉紫外燈、電源操作程序：1）工作臺面上，不要存放不必要的物品，以保持工作區(qū)內的潔凈氣流不受干擾。2）操作時一定注意關掉紫外燈，防止對實驗人員造成傷害。注意事項：第29頁，講稿共33頁，2023年5月2日，星期三8.滅菌鍋使用及性能：細菌和細胞培養(yǎng)以及核酸等有關實驗所用的試劑、器皿及實驗用具，應嚴格滅菌；對于經過導入DNA重組分子的菌株，操作后必須進行嚴格的高壓消毒滅活處理。第30頁，講稿共33頁，2023年5月2日，星期三1）開蓋：轉動手輪，使鍋蓋離開密封圈，添加蒸餾水剛沒至板上；2）通電：打開控制面板上電源開關，若水位低則紅燈亮；3）堆放物品：需包扎的滅菌物品，體積不宜過大，各包裝之間留有間隙，利于蒸汽穿透，提高滅菌效果；3）密封高壓鍋：推橫梁入立柱內，旋轉手輪，壓緊鍋蓋；4）滅菌：121℃，20min；如為液體，液體必須裝在可耐高溫的玻璃器皿中，不宜超過2/3；5）滅菌結束，所有東西放入干燥箱干燥，排盡水氣。操作