中醫(yī)藥逆轉(zhuǎn)腫瘤多藥耐藥性的研究進展

中醫(yī)藥逆轉(zhuǎn)腫瘤多藥耐藥性的研究進展

【關(guān)鍵詞】抗藥性，多藥;抗藥性，腫瘤;抗腫瘤藥，植物;綜述文獻

腫瘤誘導(dǎo)化療不易緩解或緩解后極易復(fù)發(fā)，重要原因是腫瘤細胞的耐藥現(xiàn)象———多藥耐藥性。多藥耐藥性是指腫瘤細胞對一種抗腫瘤藥物產(chǎn)生抗藥性的同時，對結(jié)構(gòu)和作用機制不同的抗癌藥物產(chǎn)生交叉耐藥性。MDR的形成機制十分復(fù)雜，腫瘤細胞可通過不同途徑導(dǎo)致MDR的產(chǎn)生。同時，單個MDR細胞可同時存在多種抗藥性的機制，一種或幾種聯(lián)合作用均可導(dǎo)致MDR的產(chǎn)生。MDR是腫瘤化療急需解決的難題，對其發(fā)生機制的研究和開發(fā)逆轉(zhuǎn)多藥耐藥性的藥物是當(dāng)前腫瘤研究中的重要課題。隨著中醫(yī)藥對腫瘤化療減毒增效及逆轉(zhuǎn)腫瘤多藥耐藥性研究的深入，尋找開發(fā)逆轉(zhuǎn)腫瘤多藥耐藥性的高效、低毒中醫(yī)藥已成目前中醫(yī)腫瘤內(nèi)科研究的重要課題［1］。現(xiàn)對近年來中醫(yī)在開發(fā)逆轉(zhuǎn)腫瘤多藥耐藥性方面的研究綜述如下。

1多藥耐藥性產(chǎn)生機制

腫瘤多藥耐藥性產(chǎn)生的原因和機制十分復(fù)雜，細胞可通過多種機制產(chǎn)生多藥耐藥性，與細胞膜有關(guān)的主要因素有P-糖蛋白、多藥抗藥性相關(guān)蛋白、肺多藥抗藥性相關(guān)蛋白、乳癌耐藥性相關(guān)蛋白等;與細胞質(zhì)有關(guān)的主要因素有拓撲異構(gòu)酶Ⅱ、蛋白激酶C、谷胱苷肽氧化還原系統(tǒng)等。但最重要的為P-gp介導(dǎo)的多藥耐藥性，即典型MDR［2，3］。

抗凋亡機制在腫瘤細胞發(fā)生發(fā)展及多藥耐藥性中起很重要作用［4］?；瘜W(xué)結(jié)構(gòu)和作用靶點各異的抗腫瘤藥物均可誘導(dǎo)腫瘤細胞凋亡，細胞對化療藥物多藥耐藥性的產(chǎn)生部分是凋亡受抑制的結(jié)果。已發(fā)現(xiàn)30多種基因?qū)毎蛲銎鸫龠M或抑制作用，如腫瘤抑制p53基因、抗腫瘤凋亡蛋白bcl-2家族、凋亡蛋白抑制因子IAP家族，但其發(fā)生機制仍不完全清楚。另外，癌基因C-jun編碼轉(zhuǎn)錄激活因子AP-1激活，謂之。該產(chǎn)物可識別特異基因的啟動子，與C-fos基因產(chǎn)物形成異源二聚體后，即可與基因結(jié)合并激活其轉(zhuǎn)錄，激活的PKC可持續(xù)活化，且其活性增強，對基因轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生正向調(diào)節(jié)［5］。有研究表明MDR細胞株具有凋亡抗性，P-gp能延緩凋亡“瀑布”的出現(xiàn)。P-gp除了作為藥物外排泵外，能抑制Caspase-3和Caspase-8的激活，抑制大多數(shù)抗腫瘤藥物誘導(dǎo)細胞凋亡的核心通路———Caspase依賴性細胞凋亡［6］。

腫瘤多細胞球體是由多個腫瘤細胞組成的球狀聚集體，組織結(jié)構(gòu)與實體瘤相似，和腫瘤單細胞相比，多細胞球體對化療MDR增加，滲透機制不足以完全解釋多細胞球體細胞的多藥耐藥現(xiàn)象?？赡軝C制有:①多細胞球體細胞周期特異性敏感的細胞數(shù)減少;②細胞接觸或黏附介導(dǎo)的生存機制，化療多藥耐藥部分是凋亡受抑制的結(jié)果，細胞接觸或黏附可抑制細胞凋亡的發(fā)生，這也可能是多細胞球體細胞化療多藥耐藥的原因之一;③多細胞球體的生長微環(huán)境引起多藥耐藥相關(guān)基因活性變化［7］。逆轉(zhuǎn)MDR主要有2種途徑，開發(fā)對MDR細胞不具有多藥耐藥性的新抗腫瘤藥物及尋找MDR逆轉(zhuǎn)劑與抗腫瘤藥物合用，恢復(fù)MDR細胞對抗腫瘤藥物的敏感性，后者目前已在以下方面開展研究以克服MDR:①使用免疫治療藥物，如單克隆抗體;②使用能抑制P-gp功能的藥物;③抑制多藥耐藥基因表達;④逆轉(zhuǎn)MDR中醫(yī)藥的開發(fā)研究。

2中藥復(fù)方及臨床研究

1中藥方劑R1的無細胞毒濃度可完全逆轉(zhuǎn)人乳腺癌細胞系.阿霉素的MDR［8］。中藥R3的無細胞毒濃度可增加對ADM的敏感性，且與異搏定具有協(xié)同作用，可完全抑制P-gp的表達，呈時間依賴性，48h后P-gp表達完全消失。提示中藥R3可能通過抑制P-gp功能，增加ADM在細胞中濃度，調(diào)控的MDR［9］。

中醫(yī)藥對MDR腫瘤細胞有誘導(dǎo)凋亡作用。研究4種中藥提取物GLYC、DLEN、SPES、PC-SPES的提取液對小細胞肺癌H69、H69VP、正常肺上皮細胞BEAS-2作用表明，4種中藥提取物組方對腫瘤細胞的細胞毒作用強于對BEAS-2，不同中藥組方對細胞作用不同，在GLYC中細胞表現(xiàn)為壞死;在DLEN、SPES、PC-SPES中有凋亡表現(xiàn)，且用原位末端標(biāo)記法分析確認后三者的表達為細胞凋亡［10］。

康萊特注射液對耐藥人白血病細胞和的作用實驗結(jié)果顯示:①人白血病耐藥細胞對KLT有輕度抗性;②KLT能明顯增強MDR細胞對化療藥物的敏感性，其逆轉(zhuǎn)作用呈劑量依賴關(guān)系;③KLT能誘導(dǎo)人白血病細胞凋亡［11］。

2晚期惡性腫瘤大多出現(xiàn)轉(zhuǎn)移和MDR。中醫(yī)學(xué)通過辨證論治對晚期惡性腫瘤治療有獨特優(yōu)勢。為觀察急性白血病中醫(yī)辨證分型與P-gp表達及臨床療效關(guān)系的研究，蘇偉等［12］對146例急性白血病患者進行了分析總結(jié)。結(jié)果表明:氣血兩虛型患者P-gp表達較低，臨床緩解率較高，而氣陰兩虛型與溫毒瘀血型患者P-gp表達較高，臨床緩解率較低。此研究為今后通過辨證論治改善與MDR相關(guān)的中醫(yī)證候提供了理論依據(jù)。

中藥制劑拮新康對34例白血病患者進行體外細胞毒性試驗，結(jié)果顯示:長春新堿+拮新康組較長春新堿組細胞毒性明顯增加，其中20例為難治與復(fù)發(fā)的白血病患者對長春新堿已耐藥，但加拮新康后細胞毒性作用增強，同時拮新康本身對白血病細胞也有一定的抗腫瘤作用［13］。

3單味藥

1人參已證實人參對一些腫瘤細胞有增殖抑制作用，人參中的人參皂甙可抑制腫瘤血管形成及腫瘤轉(zhuǎn)移。人參皂甙Rg3對耐順鉑人肺腺癌細胞系A(chǔ)549DDP逆轉(zhuǎn)呈劑量依賴性、時間依賴性。以Rg3預(yù)處理癌細胞A549DDP12、24、36及48h后，耐藥相關(guān)蛋白MDR1、MRP、mRNA表達減弱，呈時間依賴性，而LRP表達無明顯時間依賴性［14］。人參皂甙Rb1對人肝癌的BEL-7402細胞-天然長春新堿耐藥對VCR的體外增敏作用有類似維拉帕米逆轉(zhuǎn)MDR的作用［10］。

人參皂苷Rb2的濃度、時間依賴性可抑制子宮內(nèi)膜癌細胞向再構(gòu)筑基底膜的浸潤?；|(zhì)金屬蛋白酶-2與基底膜浸潤有關(guān)，進一步研究發(fā)現(xiàn)人參皂苷Rb2可抑制MMP-2的活性［15］。

2八角金盤八角金盤具有DNATopo異構(gòu)酶抑制劑作用。2種MDR的KB細胞系均對從八角金盤提取物中的提取物產(chǎn)生的細胞毒高敏感。但對已知的3種成分體外單獨研究既不是Topo異構(gòu)酶Ⅱ抑制劑，又不能產(chǎn)生細胞毒活性。3種成分的混合物似乎通過阻礙細胞對藥物聚集的選擇性發(fā)揮作用。也可能是其他成分或混合物具有抗DNATopo異構(gòu)酶Ⅰ的活性［16］。

3砷劑砷劑主要是指雄黃［主要成分為硫化砷］和砒霜［有效成分為三氧化二砷］。砷化合物能與組織蛋白質(zhì)中的巰基結(jié)合，使多種酶失活。谷胱苷肽S-轉(zhuǎn)移酶酶的催化活性部位有巰基參與，砷劑還可與次巰基結(jié)合，部分逆轉(zhuǎn)耐藥。三氧化二砷對阿霉素耐藥的體外有逆轉(zhuǎn)作用。三氧化二砷在非毒性劑量可增加細胞內(nèi)ADM的含量，逆轉(zhuǎn)倍數(shù)為倍;非毒性、低毒性劑量作用前后CST-π酶活性有顯著改變，CST-πmRNA的表達水平也呈不同程度的下調(diào)［17］。

4中藥粗制劑

3種中藥“扶正祛邪”類制劑Ams-11、Fw-13、Tul-17臨床長期大量使用無毒副作用，在無細胞毒性的劑量范圍內(nèi)，該3種中藥粗制劑均能明顯增強人卵巢癌多藥耐藥性細胞株SKVLB對抗癌藥物VCR的敏感性，且其逆轉(zhuǎn)作用呈劑量依賴關(guān)系。Ams-11與細胞SKVLB作用72h在1～的劑量范圍內(nèi)對細胞SKVLB幾乎無毒性，μ可致15%細胞死亡，中藥Ams-11加入VCR后細胞死亡率提高，二者有顯著性差異;Ams-11生藥逆轉(zhuǎn)作用與5μ相當(dāng);Fw-13在～

對細胞SKV-LB幾乎無毒性，F(xiàn)w-13生藥逆轉(zhuǎn)作用與5μ相當(dāng);Tul-17在3～100μ對細胞SKVLB幾乎無毒性，60μTul-17生藥逆轉(zhuǎn)作用與5μVRP接近。SKVLB細胞P-gp高表達，考慮此3種中藥粗制劑能逆轉(zhuǎn)其他腫瘤細胞由P-gp介導(dǎo)的MDR［18］。

5中藥單體

1具有鈣通道阻滯作用的中藥單體漢防己甲素、巴馬汀、小檗堿、丹皮酚、人參皂苷Rb1、蝙蝠葛堿、蓮心堿、左旋四氫巴馬汀、延胡索乙素、左旋千金藤立定、川芎嗪。因鈣通道阻滯劑能逆轉(zhuǎn)P-gp介導(dǎo)的MDR，故從中藥中篩選多類MDR調(diào)變劑具有廣闊前景。

上述藥物都有類似VRP的增效作用，尤其是漢防己甲素、蝙蝠葛堿、蓮心堿、左旋四氫巴馬汀、人參皂苷Rb1在人肝癌的BEL-7402細胞對VCR的體外增敏作用，有類似VRP逆轉(zhuǎn)MDR的作用。TTD和DRC能明顯增加阿霉素對耐阿霉素人乳腺癌細胞的細胞毒作用，并能增加ADR在的細胞內(nèi)的積累，提示TTD和DRC能夠阻斷MDR細胞的藥物外排過程而逆轉(zhuǎn)MDR［19］。TTD對中國倉鼠細胞系的MDR具逆轉(zhuǎn)作用，可完全逆轉(zhuǎn)阿霉素耐藥株的人乳腺癌細胞及VCR耐藥株人口腔上皮癌KBv200細胞對阿霉素或長春新堿的抗藥性，且對有明顯的選擇性［20］。漢防己甲素對細胞周期有明顯的作用，能消除DNA損傷誘導(dǎo)的G2期關(guān)卡，明顯提高化療、放療的效果［21］。川芎嗪能顯著增加阿霉素耐受性K562對阿霉素的敏感性。在非細胞毒性劑量下能使對阿霉素和VCR的IC50降低，使細胞內(nèi)阿霉素的濃度升高，但對細胞表面的P-gp卻沒有影響［22］。

2姜黃素、天花粉蛋白與內(nèi)酯類Cur是從姜科植物姜黃中提取的一種酚性色素，具有抗氧化、抗突變、抗促癌等作用。目前對其抗癌作用的研究主要集中在腫瘤化學(xué)預(yù)防方面，美國國立腫瘤研究所已將其列為第3代癌化學(xué)預(yù)防藥。姜黃素誘導(dǎo)CA46細胞凋亡，使CA46細胞c-myc、bcl-2突變型、p53蛋白和mRNA表達水平顯著下降，而Fas蛋白和Mrna表達水平上升［23］。研究姜黃素～μ與長春新堿合用對KB和KBv200細胞均有增敏作用［24］。天花粉蛋白對胃癌MDR細胞也有細胞毒和誘導(dǎo)凋亡作用［25］。MDR腫瘤對番荔枝總內(nèi)酯、番荔枝內(nèi)酯單體如Bullata-cin、Atemoyacin和AatemoyacinB十分敏感，Bullatacin不僅對ADM的細胞株NADH氧化酶具有同非耐藥HL-60細胞同樣抑制作用，番荔枝內(nèi)酯主要作用是抑制線粒體NADH氧化還原酶，抑制線粒體呼吸鏈傳遞，使細胞產(chǎn)生能量迅速減少，從而影響P-gp功能。因此，番荔枝內(nèi)酯有望成為逆轉(zhuǎn)腫瘤MDR的藥物［26］。

3蒽醌類化合物大黃酸.大黃素、馬藺子素。大黃酸.大黃素與阿霉素、柔紅霉素等抗癌藥同屬蒽醌類化合物，有親脂性，需通過主動運輸進入細胞內(nèi)。對阿霉素、柔紅霉素耐藥的細胞在理論上講對大黃酸.大黃素也應(yīng)耐藥。但胡凱文等［27］的實驗結(jié)果恰好相反，對阿霉素、柔紅霉素耐藥的3個瘤株、、對大黃酸.大黃素仍然敏感。大黃酸.大黃素對所選耐藥細胞及其對應(yīng)敏感細胞的殺傷活性幾乎是一樣的，說明大黃酸.大黃素殺傷腫瘤細胞的機制與阿霉素、柔紅霉素可能不同，可能存在重要的理論和臨床應(yīng)用價值。

馬藺子素是乏氧細胞放射增敏劑，且其具有逆轉(zhuǎn)MDR作用。耐順鉑A549細胞對ANKA不耐受，ANKA無毒或低毒濃度明顯增加對順鉑的敏感性，無劑量依賴。ANKA可降低耐藥細胞谷胱苷肽水平及GST-π蛋白表達，干預(yù)MRP合成，對TopoⅡ型酶有顯著抑制作用［28］。

4雙芐基異喹啉生物堿輪環(huán)藤堿、海島輪環(huán)藤堿、海島輪環(huán)藤酚堿、千金藤素和小檗胺，均為雙芐基異喹啉生物堿，其化學(xué)結(jié)構(gòu)與某些P-gp的光親和標(biāo)記物的結(jié)構(gòu)類似，均有膜調(diào)節(jié)作用，故其逆轉(zhuǎn)MDR的機制很可能與其干擾膜的功能，直接與P-gp結(jié)合有關(guān)。BBI類藥物CYC、Insr、Insn能顯著逆轉(zhuǎn)阿霉素在及VCR在KBv200細胞內(nèi)的耐藥，且具有劑量依賴性，它們能通過增加耐藥細胞內(nèi)的ADM積累而調(diào)節(jié)MDR，且CYC、Insr優(yōu)于VRP的逆轉(zhuǎn)作用，Insn類似VRP的逆轉(zhuǎn)作用［29］。漢防己堿和去甲粉防己堿也是雙芐基異喹啉生物堿。TET和FAN均可使P-gp表達陽性的細胞系HCT-15中若丹明123的蓄積量增加2～倍，但對P-gp表達陰性的細胞SKOV3不起作用，可提高對由P-gp介導(dǎo)的MDR藥物的細胞毒性［30］。TET能顯著逆轉(zhuǎn)MDR細胞的凋亡抗性，蝙蝠葛堿也為雙芐基異喹啉生物堿，千金藤素和小檗堿也有逆轉(zhuǎn)MDR的作用，且毒性較?。?1］。

6展望

腫瘤MDR的機制是多因素、多水平、多方面的，是機體和腫瘤細胞及腫瘤生長微環(huán)境在機體不同的生理病理狀態(tài)下共同作用的結(jié)果。一方面通過近年來分子生物學(xué)發(fā)展起來的基因芯片技術(shù)、比較基因組雜交技術(shù)及蛋白組學(xué)和功能基因組學(xué)在耐藥與非耐藥細胞株中進行大規(guī)模高通量的比較分析，從中尋找到腫瘤MDR基因是大有希望的。另一方面，充分發(fā)揮我國中醫(yī)藥治療腫瘤的優(yōu)勢，立足于辨證論治，從中藥尤其是中藥復(fù)方中篩選MDR逆轉(zhuǎn)劑，在內(nèi)可改善、糾正機體病理狀態(tài)下異常的功能基因及蛋白組學(xué)，在外可改善腫瘤生物特性，逆轉(zhuǎn)耐藥，增強抗病能力。走中西醫(yī)結(jié)合道路，根據(jù)患者具體情況、腫瘤病理學(xué)及生物學(xué)特性、轉(zhuǎn)移傾向性，合理地、有計劃地制定綜合治療方案，在提高腫瘤治愈率、延長生存期、提高患者生存質(zhì)量方面，相信會開辟一條異于西醫(yī)學(xué)的新路，促進腫瘤診治水平的提高。

【參考文獻】

［1］劉秀云，王恩忠，孫成棟，等.中醫(yī)藥防治腫瘤機制研究進展［J］.山東中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報，2002，26:396-398

［2］張覃沐，許長江，張予.多藥抗藥性產(chǎn)生機理［J］.中國藥理學(xué)通報，1994，10:246-249

［3］AvendanoC，Menendezofmultidrugresistancetoantitumoragents［J］.CurrMed，9:159-193

［4］張殊.卵巢腫瘤化療耐藥機制及逆轉(zhuǎn)研究的進展［J］.國外醫(yī)學(xué):婦產(chǎn)科學(xué)分冊，2002，29:198-201

［5］RatnasingheD，DaschnerPJ，AnverMR，et，P-glycoprotein-170anddrugresistance;ischemopreven-tionagainstmultidrugresistancepossible?［J］.AnticancerRes，2001，21:2141-2147

［6］JohnstoneRW，CretneyE，Smythglycoproteinprotectsleukemiacellsagainstcaspase-dependent，butnotcaspase-in-dependent，celldeath［J］.Blood，1999，93:1075-1085

［7］SakamotoM，KondoA，KawasakiK，etofgeneexpressionprofilesassoci-atedwithcisplatinresistanceinhumanovariancancercelllinesandtissuesusingcDNAmicroarray［J］.HumCell，2001，14:305-315

［8］張文卿，劉敘儀，劉海英，等.中藥R1對耐阿霉素人乳腺癌細胞系多藥耐受的逆轉(zhuǎn)作用［J］.中藥藥理與臨床，1994，10:16-21

［9］劉敘儀，孟松娘，楊敬賢，等.中藥R3對耐阿霉素人乳腺癌細胞MCF7adr多藥耐藥的逆轉(zhuǎn)［J］.中國腫瘤臨床，1997，24:325-330

［10］SadavaD，AhnJ，ZhanM，etoffourChineseherbalextractsondrug-sensitiveandmultidrug-resistantsmall-celllungcarcinomacells［J］.CancerChemotherPharmacol，2002，49:261-266

［11］董慶華

，鄭樹，呂慶華.康萊特注射液對多藥耐藥人白血病細胞株作用的實驗研究［J］.實用腫瘤雜志，2002，17:24-26

［12］蘇偉，李偉，梁冰.急性白血病中醫(yī)證候分型與P170表達及臨床療效關(guān)系的研究［J］.北京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報，2001，24:55-57

［13］謝兆霞，譚達人，謝俊明，等.中藥拮新康抗白血病細胞與免疫機能的研究［J］.湖南醫(yī)科大學(xué)學(xué)報，1999，24:245-247

［14］張偉，劉敘儀，王潔，等.人參皂甙Rg3對耐順鉑人肺腺癌細胞系A(chǔ)549DDP逆轉(zhuǎn)作用及其機理的研究［J］.中國呼吸與危重監(jiān)護雜志，2002，1:100-103

［15］坂口英樹，藤本次良，青木生美，等.產(chǎn)婦人科漢方研究的ぁゆみ［J］.2000，17:55-57

［16］KitanakaS，YasudaI，KashiwadaY，etagents，assaysforidentifyingnovelDNAtopoi-someraseinhibitors:studiesonthecon-stituentsofFatsiajaponica［J］.JNatProd，1995，58:1647-1654

［17］王秀麗，孔力，趙瑾瑤，等.三氧化二砷逆轉(zhuǎn)人乳腺癌細胞耐藥的機制研究［J］.中華腫瘤雜志，2002，24:339-343

［18］李大成，屈藝，劉柏林，等.三種中藥制劑Ams-11、Fw-13、Tul-17逆轉(zhuǎn)腫瘤細胞多藥耐藥性的研究［J］.華西醫(yī)科大學(xué)學(xué)報，1998，29:16-20

［19］潘啟超，田暉.多種中藥單體逆轉(zhuǎn)腫瘤多藥耐藥性［J］.科學(xué)通報，1995，40:1901-1904

［20］葉祖光，孫愛續(xù)，李蘭芳，等.漢防己甲素對阿霉素或長春新堿耐藥株人癌細胞的逆轉(zhuǎn)抗藥性作用［J］.1996，21:369-371

［21］邵榮光.基于細胞周期關(guān)卡調(diào)控的腫瘤治療［C］..2002年中國腫瘤學(xué)術(shù)大會