肺炎支原體抗體IgG金標檢測試劑盒作業(yè)指導書

肺炎支原體抗體IgG金標檢測試劑盒作業(yè)指導書1目的建立肺炎支原體抗體IgG金標檢測試劑盒作業(yè)指導書，確保生產(chǎn)過程處于受控狀態(tài)。2范圍適用于肺炎支原體抗體IgG金標檢測試劑盒相關工序的操作者。3職責3.1操作人員應嚴格執(zhí)行本作業(yè)指導書。3.2生產(chǎn)主管負責監(jiān)督檢查。3.3質(zhì)檢部質(zhì)檢員負責抽查執(zhí)行情況。4工作內(nèi)容4.1生產(chǎn)工藝流程圖※膠體金制備膠體金制備★抗體檢測膠體金反應膜檢測膠體金標記抗體檢測膠體金反應膜檢測膠體金標記單克隆抗體制備進單克隆抗體制備進★貼板產(chǎn)品檢測裝卡分包質(zhì)量檢測切貼板產(chǎn)品檢測裝卡分包質(zhì)量檢測切條NC反應膜檢測NC膜包被★NC反應膜檢測NC膜包被抗原檢測肺炎支原體重組抗原的表達NC膜處理NC膜檢測※NC膜處理NC膜檢測入庫入庫抗體檢測兔抗鼠IgG抗體制備抗體檢測兔抗鼠IgG抗體制備注：※關鍵過程★特殊過程4.2作業(yè)內(nèi)容4.2.1膠體金制備（檸檬酸三鈉還原法）氯金酸（HAuCl4）水溶液放入三角瓶內(nèi)加熱至沸騰→加熱檸檬酸三鈉溶液→混勻，攪拌煮沸10至15分鐘→待膠體金溶液顏色由藍→紫→紅，冷卻即可。4.2.2金標抗體（反應膜）制備以0.1M碳酸鉀溶液調(diào)膠體金溶液pH8.0-9.0→加入抗人IgG單抗，15分鐘后加入聚乙二醇→離心，調(diào)532nm測OD值5～10，方陣滴定法選定標記工作濃度→用無紡布浸濕膠體金溶液，干燥、平整，檢測。4.2.3金標抗體反應膜質(zhì)檢將制備好的金標抗體反應膜按5‰比例抽檢，與標準反應膜匹配組裝成品，同時與標準成品作如下對照檢測：a)符合率：樣品稀釋液、陰性質(zhì)控血清無假陽性，陽性質(zhì)控血清均呈陽性；b)反應強度：+/+++（陽性反應線/陰性反應線）；c)反應時間：30s～5min。確認合格后才能轉入下一工序。4.2.4NC反應膜制備親和性高分子硝酸纖維素膜→活化處理12小時→用水洗5次，每次20分鐘→室溫干燥后→取純化Cpn重組肺支抗原和兔鼠IgG抗體溶于10%CS中，濃度均為2mg/ml，用Cpn重組肺支抗原在NC膜上包被肺支抗體陽性檢測線→用兔抗鼠IgG抗體在NC膜上包被對照線→干燥后，用BS液封閉，H2O清洗后，室溫干燥，備用。4.2.5NC反應膜質(zhì)檢4.2.5.1常規(guī)圖形模式檢測：將制備好的反應膜按5‰比例抽檢，與標準金標抗體反映膜匹配組裝成品，同時與標準成品對照檢測；觀察陽性、陰性包被線及本底，要求圖形規(guī)則程度均勻，無遺漏或重復包被。4.2.5.2均一性、符合率篩選：按3%比例/批，隨機取樣，每張5～10人份，作陰性質(zhì)控品和肺支陽性血清的陽性質(zhì)控品檢測，無假陽性和假陰性，均一性≥98%4.2.6反應體系組裝組裝材料材料規(guī)格（mm）組裝方式反應膜（S1）20見圖1無紡布（S2）25，30吸水紙（S3）30金標反應膜（S4）10雙面膠帶（S5）29，48塑料墊板S678單面膠帶S7154.2.6.1反應體組裝程序：a)在S6塑料基板上貼雙面膠帶S5（29，48mm）二條；b)在S5上貼反應膜S1（20mm），S1上下緣距S6上下緣各29mm；c)在S6上貼吸水紙S3（30mm），吸水紙下緣與S1上緣交接1mm,上緣與S5的上邊緣對齊；d)在S5下端貼無紡布S2-1，其上緣壓住S1下緣1mm；e)在S2-1上平放金標抗體反應膜S4（10mm）上緣對齊；f)在S4上平放無紡布S2-2（30mm）上下緣分別S4、S6對齊；g)將組裝成型的反應體系用電腦可調(diào)式切割機切成4.2mm測試條，裝入干燥器，待包裝。4.2.6.2成品包裝：每支成品先裝聚苯乙烯塑料外殼，再用鍍鋁膜包裝加干燥劑，附說明書，打批號入庫，每批留樣100人份，以備復檢．4.2.7參比品制備4.2.7.1肺支Ig-G陽性血清質(zhì)控品取臨床確診肺衣病人（臨床癥狀明顯、肺炎衣原體培養(yǎng)陽性）血清15份，間接ELISA測定肺炎衣原體IgM抗體陽性，0D492≥0.3，混合血清加防腐劑,分裝-70℃保存。4.2.7.2肺支Ig-G陰性血清質(zhì)控品取健康人血清（體查健康，培養(yǎng)法和間接ELISA測定肺炎支原體IgG抗體均陰性，0D492＜0.10）15份，混合血清加防腐劑,分裝-70℃保存。4.3成品檢測產(chǎn)品技術要求應符合《肺炎支原體抗體IgG金標檢測試劑盒》產(chǎn)品注冊標要求。4.3.1外觀4.3.1.1要求檢測條：表面應平整、無劃傷、開裂、變形及污漬；檢測卡各組分附著牢固、內(nèi)容齊全；b)檢測卡：外殼應平整，上下蓋應均勻合攏，無明顯間隙；反應芯試條在外殼內(nèi)應附著牢固；4.3.1.2檢驗在自然光線下，用手感和目力觀察方法進行檢驗。4.3.2符合率4.3.2.1陰性符合率4.3.2.1.1要求試劑卡測試肺炎支原體IgG抗體陰性質(zhì)控血清10份，假陽性判斷結果不多于1份，符合率應≥90%。4.3.2.1.2測試a)試劑1)樣品稀釋液；2)測定樣品液：肺炎支原體IgG抗體陰性質(zhì)控血清。b)測定方法隨機從同批待測試劑盒中抽取10個檢測卡，測定陰性質(zhì)控血清10份。測定時取10μl陰性質(zhì)控血清加在檢測卡加樣孔中，再加100μl樣品稀釋液，平放，等待3～5分鐘觀察檢測卡中部檢視窗的結果，但不可超過20分鐘讀結果。c)結果以下結果為合格：檢測線不顯色，只有對照線顯色。4.3.2.2陽性性符合率4.3.2.2.1要求試劑卡測試肺炎支原體IgG抗體陽性質(zhì)控血清10份，假陰性判斷結果不多于1份，符合率應≥90%。4.3.2.2.2測試a)試劑1)樣品稀釋液；2)測定樣品液：肺炎支原體IgG抗體陽性質(zhì)控血清。b)測定方法隨機從同批待測試劑盒中抽取10個檢測卡，測定陽性質(zhì)控血清10份。測定時取10μl陰性質(zhì)控血清加在檢測卡加樣孔中，再加100μl樣品稀釋液，平放，等待3～5分鐘觀察檢測卡中部檢視窗的結果，但不可超過20分鐘讀結果。c)結果以下結果為合格：檢測線和對照線均顯色。4.3.3重復性4.3.3.1陰性重復率4.3.3.1.1要求使用試劑盒檢測同一份陰性質(zhì)控血清10次，同一份質(zhì)控血清的陰性判定結果應基本一致，假陽性判定結果不多于1份，陰性重復率應≥90%。4.3.3.1.2測定隨機從同批待測試劑盒中抽取10個檢測卡，測定時取10μl陰性質(zhì)控血清加在檢測卡加樣孔中，再加100μl樣品稀釋液，平放，等待3～5分鐘觀察檢測卡中部檢視窗的結果，但不可超過20分鐘讀結果。4.3.3.2陽性重復率4.3.3.2.2要求使用試劑盒檢測同一份陽性質(zhì)控血清10次，同一份質(zhì)控血清的陽性判定結果應基本一致，假陰性判定結果不多于1份，陰性重復率應≥90%。4.3.3.2.2測定隨機從同批待測試劑盒中抽取10個檢測卡，測定時取10μl陽性質(zhì)控血清加在檢測卡加樣孔中，再加100μl樣品稀釋液，平放，等待3～5分鐘觀察檢測卡中部檢視窗的結果，但不可超過20分鐘讀結果。4.3.4精密性4.3.4.1要求每批試劑盒隨機抽取10個檢測卡樣品，用同一份陽性質(zhì)控血清進行檢測，要求各檢測卡的顯色應均一。4.3.4.2測定隨機從同批待測試劑盒中抽取10個檢測卡進行檢測。測定時取10μl陽性質(zhì)控血清加在檢測卡加樣孔中，再加100μl樣品稀釋液，平放，等待3～5分鐘觀察檢測卡中部檢視窗的結果，但不可超過20分鐘讀結果。4.3.5穩(wěn)定性4.3.5.1要求a）在37C條件下加速破壞試驗放置1