細(xì)胞技術(shù)方法和傳代方法

關(guān)于細(xì)胞技術(shù)方法和傳代方法第1頁(yè)，講稿共10頁(yè)，2023年5月2日，星期三細(xì)胞的傳代方法培養(yǎng)細(xì)胞的方法主要講2方面問(wèn)題：第2頁(yè)，講稿共10頁(yè)，2023年5月2日，星期三細(xì)胞計(jì)數(shù)培養(yǎng)的細(xì)胞在一般條件下要求有一定的密度才能生長(zhǎng)良好，所以要進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。計(jì)數(shù)結(jié)果以每毫升細(xì)胞數(shù)表示。細(xì)胞計(jì)數(shù)的原理和方法與血細(xì)胞計(jì)數(shù)相同。血細(xì)胞計(jì)數(shù)器：手工計(jì)數(shù)細(xì)胞Coulter計(jì)數(shù)儀：人工計(jì)數(shù)第3頁(yè)，講稿共10頁(yè)，2023年5月2日，星期三細(xì)胞計(jì)數(shù)：

1、將血球計(jì)數(shù)板及蓋片擦拭干凈，并將蓋片蓋在計(jì)數(shù)板上。

2、將細(xì)胞懸液吸出少許，滴加在蓋片邊緣，使懸液充滿蓋片和計(jì)數(shù)板之間。

3、靜置3分鐘。

第4頁(yè)，講稿共10頁(yè)，2023年5月2日，星期三4、鏡下觀察，計(jì)算計(jì)數(shù)板四大格細(xì)胞總數(shù)，壓線細(xì)胞只計(jì)左側(cè)和上方的。然后按下式計(jì)算：

細(xì)胞數(shù)/ml＝4大格細(xì)胞總數(shù)/4×10000

注意：鏡下偶見(jiàn)由兩個(gè)以上細(xì)胞組成的細(xì)胞團(tuán)，應(yīng)按單個(gè)細(xì)胞計(jì)算，若細(xì)胞團(tuán)占10%以上，說(shuō)明分散不好，需重新制備細(xì)胞懸液。

第5頁(yè)，講稿共10頁(yè)，2023年5月2日，星期三根據(jù)細(xì)胞生長(zhǎng)的恃點(diǎn)，傳代方法有3種：1．懸浮生長(zhǎng)細(xì)胞傳代離心法傳代：離心（1000轉(zhuǎn)/分）去上清，沉淀物加新培養(yǎng)液后再混勻傳代。直接傳代法：懸浮細(xì)胞沉淀在瓶壁時(shí)，將上清培養(yǎng)液去除l／2一2／3，然后用吸管直接吹打形成細(xì)胞懸液再傳代。細(xì)胞傳代方法第6頁(yè)，講稿共10頁(yè)，2023年5月2日，星期三2．半懸浮生長(zhǎng)細(xì)胞傳代（Hela細(xì)胞）此類細(xì)胞部分呈現(xiàn)貼壁生長(zhǎng)現(xiàn)象，但貼壁不牢，可用直接吹打法使細(xì)胞從瓶壁脫落下來(lái)，進(jìn)行傳代。3．貼壁生長(zhǎng)細(xì)胞傳代采用酶消化法傳代。常用的消化液有0.25％的胰蛋白酶液。第7頁(yè)，講稿共10頁(yè)，2023年5月2日，星期三貼壁生長(zhǎng)細(xì)胞傳代方法：1吸光培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液2加入1-2ml0.25％的胰蛋白酶液(以消化液能覆蓋整個(gè)瓶底為準(zhǔn)）靜置2-10min（顯微鏡下動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)）。3吸去胰蛋白酶液，加入培養(yǎng)液。4用吸管吸取瓶?jī)?nèi)培養(yǎng)液，反復(fù)吹打瓶壁細(xì)胞，形成細(xì)胞懸液。第8頁(yè)，講稿共10頁(yè)，2023年5月2日，星期三5離心，細(xì)胞沉淀用培養(yǎng)液制成懸液。5吸取1/10—1/40細(xì)胞懸液，接種于新的培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)。6加適量新鮮培養(yǎng)液于接種了細(xì)胞懸液的新培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)。7將后者放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。第