艾滋病檢測(cè)原理和技術(shù)規(guī)范

關(guān)于艾滋病檢測(cè)原理和技術(shù)規(guī)范第1頁(yè)，講稿共40頁(yè)，2023年5月2日，星期三2023/7/52一、艾滋病與艾滋病病毒第2頁(yè)，講稿共40頁(yè)，2023年5月2日，星期三2023/7/53（有A～E多個(gè)亞型）與一種感染灰身白臉猴的猴免疫缺陷病毒（SIV）相似。HIV-1HIV-2Humanimmunodeficiencyvirus

HIV（有A～J，O1～O4多個(gè)亞型）與一種感染黑猩猩的猴免疫缺陷病毒（SIV）相似。第3頁(yè)，講稿共40頁(yè)，2023年5月2日，星期三2023/7/54艾滋病病毒感染后，可嚴(yán)重破壞人體的免疫系統(tǒng)，使人體喪失抵御各種疾病的能力，有利于各種病原體的侵入，從而導(dǎo)致各種嚴(yán)重的、難以治愈的機(jī)會(huì)性感染或腫瘤，最終導(dǎo)致死亡，病死率可達(dá)100％。第4頁(yè)，講稿共40頁(yè)，2023年5月2日，星期三2023/7/55HIV-1M組HIV-1O組HIV-2非洲中部和東部美國(guó)、歐洲、南美洲、非洲和亞洲南美洲、印度、贊比亞、中國(guó)非洲中部和東部泰國(guó)、中非、印度巴西、羅馬尼亞、喀麥隆加蓬、蘇聯(lián)、尼日利亞、烏干達(dá)、塞內(nèi)加爾、贊比亞喀麥隆、扎伊爾、中非塞浦路斯扎伊爾喀麥隆、加蓬HIV型別和亞型的分類進(jìn)化與地區(qū)分布：西非、印度HIVABCDEFGHIJO1O2O3O4ABCDE第5頁(yè)，講稿共40頁(yè)，2023年5月2日，星期三2023/7/56基因亞型與感染途徑的關(guān)系第6頁(yè)，講稿共40頁(yè)，2023年5月2日，星期三2023/7/57感染分期臨床分期維持時(shí)間感染標(biāo)志物傳染性原發(fā)感染潛伏期潛伏期2-4周抗體陰性(窗口期)傳染危險(xiǎn)性高原發(fā)感染癥狀期急性HIV感染1-2周傳染危險(xiǎn)性高慢性感染潛伏期無癥狀HIV感染2－15年(平均8-10年)抗體陽性有傳染性臨床發(fā)病期艾滋病0－3年(平均1-2年)抗體陽性抗原陽性傳染性強(qiáng)艾滋病從感染到發(fā)病的一般過程第7頁(yè)，講稿共40頁(yè)，2023年5月2日，星期三2023/7/58二、艾滋病檢測(cè)的原理及方法第8頁(yè)，講稿共40頁(yè)，2023年5月2日，星期三2023/7/59臨床診斷感染監(jiān)測(cè)耐藥監(jiān)測(cè)治療評(píng)價(jià)干預(yù)評(píng)估抗體檢測(cè)抗體檢測(cè)核酸定性CD4檢測(cè)新感染檢測(cè)CD4檢測(cè)核酸定量核酸定量病毒分離基因測(cè)序核酸定性核酸定量各種檢測(cè)技術(shù)為艾滋病防治工作提供廣泛的技術(shù)支持平臺(tái)第9頁(yè)，講稿共40頁(yè)，2023年5月2日，星期三2023/7/510檢驗(yàn)標(biāo)志物檢驗(yàn)?zāi)康臋z驗(yàn)方法HIV(1+2)抗體篩查試驗(yàn)金標(biāo)法、硒標(biāo)法快速診斷試驗(yàn)明膠顆粒凝集試驗(yàn)(PA)

微孔板法酶聯(lián)免疫試驗(yàn)（ELISA）第三代：雙抗原夾心法第四代：增加檢測(cè)P24抗原確證試驗(yàn)蛋白印跡法(WB)

手工/儀器病毒抗原早期診斷酶聯(lián)免疫試驗(yàn)檢測(cè)P24抗原病毒核酸臨床診斷治療評(píng)價(jià)定性試驗(yàn)

檢測(cè)DNA定量試驗(yàn)

即病毒載量，檢測(cè)RNACD4流式細(xì)胞儀法檢測(cè)CD4+T淋巴細(xì)胞艾滋病實(shí)驗(yàn)診斷方法第10頁(yè)，講稿共40頁(yè)，2023年5月2日，星期三2023/7/511診斷試劑窗口期特點(diǎn)金標(biāo)法、硒標(biāo)法5周35天敏感性低，容易漏檢明膠顆粒凝集試驗(yàn)(PA)5周35天特異性較好，敏感性不足ELISA（國(guó)產(chǎn)第三代）3周多20～25天普及，穩(wěn)定性欠佳ELISA（進(jìn)口第三代）3周18～22天較為成熟，穩(wěn)定性好ELISA（進(jìn)口第四代）2周多16～17天假陽性率偏高核酸檢測(cè)1周多10～12天不用于常規(guī)診斷各種診斷試劑特性第11頁(yè)，講稿共40頁(yè)，2023年5月2日，星期三2023/7/512硒標(biāo)法金標(biāo)法HIV抗體篩查試驗(yàn)第12頁(yè)，講稿共40頁(yè)，2023年5月2日，星期三2023/7/513明膠顆粒凝集試驗(yàn)（Particleagglutinationtest，PA）

第13頁(yè)，講稿共40頁(yè)，2023年5月2日，星期三2023/7/514PA的操作和結(jié)果判斷第14頁(yè)，講稿共40頁(yè)，2023年5月2日，星期三2023/7/5155

450/630nm下測(cè)定OD值混勻，加蓋，37℃溫育洗板3

加入底物第二次特異性結(jié)合4

加入終止液1

加入樣品洗板2

加入酶標(biāo)記物加蓋，37℃溫育加蓋，37℃溫育第一次特異性結(jié)合酶聯(lián)免疫分析ELISA

（雙抗原夾心、兩步法）第15頁(yè)，講稿共40頁(yè)，2023年5月2日，星期三2023/7/516快速法可否單獨(dú)使用？《全國(guó)艾滋病檢測(cè)技術(shù)規(guī)范》（2004版）：將PA、dot-EIA、膠體硒法納入快速檢測(cè)規(guī)范方法，因此可以使用。有研究指出：任何一種快速試劑可以篩查出99%以上的陰性樣本；兩種快速試劑均為陽性時(shí)，可以篩查出98%以上的陽性樣本；兩種快速試劑結(jié)果不一致時(shí)，可用ELISA復(fù)檢；單獨(dú)使用或兩種同時(shí)使用時(shí)，特異性差別無顯著意義。第16頁(yè)，講稿共40頁(yè)，2023年5月2日，星期三2023/7/517■

針對(duì)各種病毒蛋白的特異抗體■

區(qū)分ELISA真陽性與假陽性■

檢測(cè)HIV-1和HIV-2HIV抗體確證試驗(yàn)WesternBlot免疫印跡法第17頁(yè)，講稿共40頁(yè)，2023年5月2日，星期三2023/7/518基因名稱代號(hào)功能基因產(chǎn)物片段HIV-1HIV-2結(jié)構(gòu)基因外膜蛋白基因env合成外膜蛋白gp160gp120gp41gp140gp105

gp36

核蛋白基因gag合成核蛋白p55p24p18

p56p26p16

逆轉(zhuǎn)錄酶基因pol合成逆轉(zhuǎn)錄酶p65p51p31

p68p53p34調(diào)節(jié)基因反式激活因子tat加速病毒蛋白合成毒力蛋白表達(dá)調(diào)節(jié)基因rev促進(jìn)整合的病毒選擇性地產(chǎn)生調(diào)節(jié)蛋白或毒粒成份負(fù)調(diào)節(jié)因子nef減緩基因轉(zhuǎn)錄，使停止繁殖而處于潛伏狀態(tài)毒粒感染性因子vif促進(jìn)病毒感染另一個(gè)細(xì)胞HIV的主要基因及其產(chǎn)物

（HIV標(biāo)志物）第18頁(yè)，講稿共40頁(yè)，2023年5月2日，星期三2023/7/519ss-RNA第19頁(yè)，講稿共40頁(yè)，2023年5月2日，星期三2023/7/520全自動(dòng)免疫印跡儀第20頁(yè)，講稿共40頁(yè)，2023年5月2日，星期三2023/7/521HIV抗體陽性診斷標(biāo)準(zhǔn)：■2條env（gp160/gp120+gp41）■1條env+p24p55p66p31p51gp120gp160gp41p17p24膜蛋白（env）核蛋白（gag）逆轉(zhuǎn)錄酶（pol）第21頁(yè)，講稿共40頁(yè)，2023年5月2日，星期三2023/7/522篩查試驗(yàn)：診斷出陰性樣本，并為陽性/可疑樣本排除非特異條帶。復(fù)檢1（試劑A）：對(duì)陽性/可疑樣本排除操作誤差。復(fù)檢2（試劑B）：對(duì)陽性/可疑樣本排除試劑誤差。確證試驗(yàn)：診斷出陽性樣本。篩查試驗(yàn)和確證試驗(yàn)的作用第22頁(yè)，講稿共40頁(yè)，2023年5月2日，星期三2023/7/523臨床分期流行病學(xué)臨床表現(xiàn)實(shí)驗(yàn)室診斷潛伏期有明確感染史HIV進(jìn)入血液未能檢出任何標(biāo)記物急性HIV感染有明確感染史上呼吸道感染癥狀頸、腋等淋巴結(jié)腫大頭疼、皮疹、肝脾腫大后期抗-HIV陽轉(zhuǎn)少數(shù)病例P24陽性CD4/CD8>1外周血WBC及淋巴細(xì)胞總數(shù)先降后回?zé)o癥狀HIV感染有明確感染史呈潛伏感染狀態(tài)無任何癥狀及體征但免疫系統(tǒng)逐漸被破壞抗-HIV陽性，P24陰性CD4/CD8>1，CD4總數(shù)正常艾滋病有明確感染史全身淋巴結(jié)腫大持續(xù)低熱>1個(gè)月慢性腹瀉>4-5次/日3個(gè)月內(nèi)體重下降>10%免疫功能低下多種機(jī)會(huì)性感染、腫瘤抗-HIV陽性，P24陽性CD4/CD8<1CD4總數(shù)正常<200/mm3（或200-500）外周血WBC、Hb下降有相關(guān)感染的病原學(xué)、腫瘤病理學(xué)依據(jù)HIV/AIDS

診斷標(biāo)準(zhǔn)

（GB16000-1995）第23頁(yè)，講稿共40頁(yè)，2023年5月2日，星期三2023/7/524AIDS指征性疾病

（美國(guó)CDC,1993,抗-HIV陽性及其中一種疾病即可診斷）氣管、支氣管、肺、食道的念珠菌病除肝、脾、淋巴結(jié)以外的CMV感染彌漫性或肺外的鳥外分支桿菌病并發(fā)失明的CMV性視網(wǎng)膜炎彌漫性或肺外的其它分支桿菌感染HSV所致的慢性口腔、呼吸道、食道炎癥彌漫性或肺外的組織胞漿菌病侵潤(rùn)性宮頸癌彌漫性或肺外的球孢子菌病卡波濟(jì)肉瘤肺外隱球菌病伯基特淋巴瘤肺部或肺外的結(jié)核病免疫母細(xì)胞型淋巴瘤原發(fā)性肺炎原發(fā)性腦淋巴瘤卡氏肺囊蟲肺炎進(jìn)行性多發(fā)性腦白質(zhì)病慢性腸道隱孢子?。ú〕?gt;1個(gè)月）腦弓形體病慢性腸道孢子球蟲病（病程>1個(gè)月）HIV相關(guān)腦病反復(fù)發(fā)生的沙門氏菌敗血癥HIV相關(guān)的消瘦綜合征第24頁(yè)，講稿共40頁(yè)，2023年5月2日，星期三2023/7/525HIV！HIV？HIV感染母親所生嬰兒：分別于12個(gè)月、18個(gè)月追蹤檢測(cè)陰性者為陰性，18個(gè)月仍陽性者為陽性。第25頁(yè)，講稿共40頁(yè)，2023年5月2日，星期三2023/7/526三、艾滋病檢測(cè)技術(shù)規(guī)范第26頁(yè)，講稿共40頁(yè)，2023年5月2日，星期三2023/7/527主要內(nèi)容：

樣品采集和處理

檢測(cè)方法（HIV抗體、病毒核酸、病毒載量、CD4、HIV抗原檢測(cè)）

安全防護(hù)、職業(yè)暴露質(zhì)量管理（質(zhì)量保證、質(zhì)量控制、質(zhì)量評(píng)價(jià)）實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量考評(píng)

HIV診斷試劑質(zhì)量評(píng)估第27頁(yè)，講稿共40頁(yè)，2023年5月2日，星期三2023/7/528篩查試驗(yàn)（試劑A）陽性／可疑均陰性均陽性陰性重復(fù)檢測(cè)（試劑A+B）陰性陽性確證試驗(yàn)篩查實(shí)驗(yàn)室一陰一陽確證實(shí)驗(yàn)室復(fù)核檢測(cè)（試劑A/B/C）陽性／可疑陰性篩查報(bào)告（陰性）確認(rèn)報(bào)告（陰性）確認(rèn)報(bào)告（陽性）第28頁(yè)，講稿共40頁(yè)，2023年5月2日，星期三2023/7/529檢測(cè)方法檢測(cè)結(jié)果檢驗(yàn)報(bào)告處理篩查試驗(yàn)陰性HIV抗體陰性陰性告知陽性HIV抗體待復(fù)查上送確證確證試驗(yàn)陰性HIV抗體陰性（-）陰性告知陽性HIV抗體陽性（+）陽性告知，個(gè)案調(diào)查不確定HIV抗體不確定（±）告知，3個(gè)月后復(fù)查共2次HIV抗體檢測(cè)結(jié)果處理規(guī)范第29頁(yè)，講稿共40頁(yè)，2023年5月2日，星期三2023/7/530HIV待確證樣品HIV陽性確證報(bào)告原件感染者確認(rèn)報(bào)告原件確認(rèn)報(bào)告復(fù)印件備案篩查實(shí)驗(yàn)室所在單位篩查實(shí)驗(yàn)室所在單位確證實(shí)驗(yàn)室篩查實(shí)驗(yàn)室艾滋病樣本確證、報(bào)告流程：第30頁(yè)，講稿共40頁(yè)，2023年5月2日，星期三2023/7/531認(rèn)真填寫各類表格（最好能打?。?，及時(shí)上報(bào)。第31頁(yè)，講稿共40頁(yè)，2023年5月2日，星期三2023/7/532各篩查實(shí)驗(yàn)室每月5日前上報(bào)上月檢測(cè)數(shù)據(jù)：第32頁(yè)，講稿共40頁(yè)，2023年5月2日，星期三2023/7/533四、艾滋病檢測(cè)的質(zhì)量控制第33頁(yè)，講稿共40頁(yè)，2023年5月2日，星期三2023/7/534

行政支持

重視、投入、理解

實(shí)驗(yàn)室規(guī)范化建設(shè)

規(guī)范、制度、程序

人員要求

資質(zhì)條件、培訓(xùn)和輪訓(xùn)質(zhì)量保證（QA）質(zhì)量控制（QC）

室內(nèi)質(zhì)控

質(zhì)控圖的建立和應(yīng)用

檢驗(yàn)期間核查

試劑對(duì)照、外部質(zhì)控品對(duì)照、平行雙樣結(jié)果關(guān)聯(lián)性（不同方法、不同實(shí)驗(yàn)室結(jié)果、人群特征等）可實(shí)時(shí)校驗(yàn)：樣品、試劑、儀器、操作等環(huán)節(jié)。質(zhì)量評(píng)價(jià)（EQA）

實(shí)驗(yàn)室室間質(zhì)量考評(píng)第34頁(yè)，講稿共40頁(yè)，2023年5月2日，星期三2023/7/535■

建立各項(xiàng)規(guī)章制度和操作程序，定期檢查；■人員定期接受培訓(xùn)和復(fù)訓(xùn)，培養(yǎng)良好的業(yè)務(wù)素質(zhì)；對(duì)HIV實(shí)驗(yàn)室的10項(xiàng)基本要求第35頁(yè)，講稿共40頁(yè)，2023年5月2日，星期三2023/7/536■儀器設(shè)備運(yùn)作正常，定期檢定和校準(zhǔn)，妥善維護(hù)；■樣品流轉(zhuǎn)有序，記錄詳細(xì)，保存規(guī)范；■采用合格試劑，經(jīng)常核查試劑質(zhì)量，正確保存和使用；■環(huán)境條件符合要求，有監(jiān)控有記錄；■嚴(yán)格按照規(guī)范和試劑說明書操作；■建立各類質(zhì)量記錄表格，資料保存完整，溯源性強(qiáng)；■堅(jiān)持開展室內(nèi)質(zhì)控，參加室間比對(duì)和能力驗(yàn)證；■安全防護(hù)、廢物處理措施落實(shí)，建立人員健康監(jiān)護(hù)檔案。第36頁(yè)，講稿共40頁(yè)，2023年5月2日，星期三2023/7/537■每個(gè)實(shí)驗(yàn)室必須配備至少2種不同原理/不同廠家的試劑，其中一種必須是ELISA（第三代、雙抗原夾心、兩步法）?！龅谝淮魏Y查試驗(yàn)推薦使用高敏感性的ELISA法，快速法可用于應(yīng)急試驗(yàn)或復(fù)核試驗(yàn)?！霭凑袠?biāo)目錄采購(gòu)，保存供應(yīng)商的資質(zhì)證明文件，試劑批批檢報(bào)告?！龅怯浽噭┎少?gòu)和使用情況，注意保存條件并實(shí)行監(jiān)控。■試劑和樣品應(yīng)分開存放，過期試劑必須及