血小板抗原抗體檢測及其輸血科應用

關于血小板抗原抗體檢測及其輸血科應用第1頁，講稿共54頁，2023年5月2日，星期三010203目錄/contents血小板抗原血小板抗體與疾病血小板抗體檢測的臨床意義和臨床應用第2頁，講稿共54頁，2023年5月2日，星期三血小板簡介血小板：D:2-5um

V:紅細胞*1/5功能：促進止血和加速凝血正常范圍：100-300×109/L骨髓干細胞胞質塊脫落來源：多功能祖細胞巨核祖細胞幼巨核細胞巨核細胞血小板第3頁，講稿共54頁，2023年5月2日，星期三血小板形態(tài)靜息狀態(tài)活化狀態(tài)第4頁，講稿共54頁，2023年5月2日，星期三血小板抗原血小板“非特異性”抗原血小板“特異性”抗原

HPA抗原

HLA-Ⅰ類抗原

ABH抗原第5頁，講稿共54頁，2023年5月2日，星期三血小板具有HLA-Ⅰ類抗原（HLA-A、HLA-B抗原和少量HLA-C抗原），無HLA-Ⅱ類抗原。故輸注血小板要比器官移植所需配型簡單。血小板個體間HLA-Ⅰ類抗原位點數(shù)差別不大。每個血小板上至少有20000個HLA抗原位點。HLA抗原第6頁，講稿共54頁，2023年5月2日，星期三部分為血小板的固有蛋白，另一部分從血漿中吸附。血小板上的ABH抗原個體之間表達不同，約5%的非O型個體為A抗原或B抗原的高表達者。故血小板輸血應同型輸注；抗體檢測應采用O型血小板，以排除ABO系統(tǒng)抗體的干擾?！鬐PIb、GPIIb/IIIa、

GPIa/Iia、CD109等也攜帶少量ABH抗原ABH抗原第7頁，講稿共54頁，2023年5月2日，星期三主要存在于血小板膜的GP分子上，也少量存在于血管內皮細胞、結締組織細胞和平滑肌細胞。1990年國際輸血協(xié)會血小板免疫學工作組提出了HPA命名，以發(fā)現(xiàn)的時間順序排列：HPA-1、HPA-2、HPA-3等系統(tǒng)。HPA抗原第8頁，講稿共54頁，2023年5月2日，星期三已確定了33個HPA，其中12個抗原為雙等位基因表達（HPA-1,-2,-3,-4，-5和-15）。其中高頻率抗原命名a，低頻率抗原命名b。其余21個抗原為低頻率抗原，尚未發(fā)現(xiàn)對偶抗原，命名為bw。單核苷酸多態(tài)性（SNP）:33個HPA中均已搞清楚基因背景，其中32個HPA的多態(tài)性型是由一個氨基酸置換所致，而這又是由編碼血小板膜糖蛋白（GP）基因的一個核苷酸的不同所致。HPA-14bw不具有單核苷酸多態(tài)性。其核苷酸置換發(fā)生在AAG1929-31。HPA抗原第9頁，講稿共54頁，2023年5月2日，星期三HPA抗原第10頁，講稿共54頁，2023年5月2日，星期三HPA抗原第11頁，講稿共54頁，2023年5月2日，星期三血小板抗原定型血清學定型即用已知特異性抗體檢測血小板血型抗原缺點：特異性抗體來源困難

---人血清中血小板抗體通常為多特異性

---單克隆抗體匱乏，目前國際上僅有HPA-1a單抗，

無其它HPA單抗?；蚨ㄐ拖拗菩云伍L度多態(tài)性分析（RFLP）序列特異性寡核苷酸聚合酶鏈反應(PCR-SSO)序列特異性引物聚合酶鏈反應(PCR-SSP)第12頁，講稿共54頁，2023年5月2日，星期三用途：（1）健康人群HPA基因分型，建立已知HPA基因型的血小板獻血員庫。（2）檢測受者HPA基因型，以便從血小板獻血員庫中尋找與其HPA基因型相匹配的血小板供者。（3）檢測患者HPA基因型，輔助臨床胎兒/新生兒免疫性血小板減少癥、輸血后紫癜及血小板輸注無效癥等疾病的病因診斷。（4）對特定區(qū)域或種族人群HPA基因分型，可為人類遺傳學研究提供相關資料和證據(jù)。1aa2aa3ab4aa5aa6aa7aa8aa9aa10aa11aa12aa13aa14aa15ab16aa17aa血小板抗原定型第13頁，講稿共54頁，2023年5月2日，星期三血小板抗體的產生方式

以上途徑產生的血小板同種抗體與血小板上的相應抗原結合，導致血小板被內皮網狀系統(tǒng)清除。懷孕移植（骨髓、器官）藥物、自身免疫輸血小板、紅細胞（尤其是沒有濾白的紅細胞）第14頁，講稿共54頁，2023年5月2日，星期三血小板抗體與部分相關疾病

抗體分類疾病HLA/HPA抗體其它抗體同種抗體格蘭茨曼血小板功能不全病抗GPⅡb/Ⅲa抗體同種異體抗體新生兒同種異體免疫性血小板減少癥HPA1a(78%),HPA5b(19%)HPA-2,3,4(3%),HPA-15,HPA-9bw,Anti-CD36血小板輸注無效癥HLA-I抗體50~80%,HPA17~25%(日本人為HPA-2b),HPA-15,anti-CD36極少數(shù)為ABO抗體血小板輸血后紫癜HPA-1a,HPA-1b,HPA-2b,HPA-3a,HPA-3b,HPA-15,anti-CD36少數(shù)為抗GPIa/IIa抗體被動同種異體免疫性血小板減少癥HPA-1a,HPA-5b移植相關同種異體免疫性血小板減少癥HPA-1a,HPA-3,HPA-5b自身抗體自發(fā)性血小板減少癥多數(shù)位于GPⅡb/ⅢaGPIb/IX/V，少數(shù)位于GPIV/V和GPIa/IIa繼發(fā)于母體自發(fā)性血小板減少癥同上藥物依賴性抗體奎寧/奎尼丁抗體所致疾病抗原位于GPⅡb/Ⅲa和GPIb/IX肝素抗體所致疾病抗原表位是PF4第15頁，講稿共54頁，2023年5月2日，星期三胎盤屏障YYYY母體同種異體抗體通過胎盤母體同種異體免疫胎兒血小板減少舉例——NAIT第16頁，講稿共54頁，2023年5月2日，星期三NAIT胎母同種異體免疫血小板減少癥（fetomaternalalloimmunethrombocytopenia，F(xiàn)MAIT）致病機理與新生兒溶血?。℉DN）相似，前者是由胎兒父母血小板抗原不合引起的血小板減少癥，后者為紅細胞抗原不合引起的溶血性疾病。由于胎兒遺傳自父親的血小板抗原刺激母體產生IgG型的抗血小板抗體，該抗體能通過胎盤進入胎兒體內并與具有相應抗原的血小板結合，此致敏血小板在胎兒的血液循環(huán)中被清除而使得胎兒血小板減少，出現(xiàn)瘀點和瘀斑，其嚴重者會導致神經系統(tǒng)損傷（占已報道病例的20%）、10%出現(xiàn)顱內出血(死亡率近100%）。因多數(shù)病例在出生后才得以診斷，故此病也稱作新生兒同種異體免疫血小板減少癥。初次妊娠婦女即可發(fā)生FMAIT，其發(fā)病率大約為1/800-1500。第17頁，講稿共54頁，2023年5月2日，星期三FMAIT患兒病情變化較大，具有自限性，常在出生后2-3周恢復。輕度血小板減少患兒有時沒有任何臨床癥狀。病情較重患兒臨床表現(xiàn)為皮膚、體內外黏膜出血，出現(xiàn)紫癜、瘀點或瘀斑。嚴重患兒可能發(fā)生顱內出血（intracranialhaemorrhage，ICH），占10%。與FMAIT相關的ICH

80%發(fā)生在子宮內，其中14%發(fā)生在妊娠20周前，28%發(fā)生在妊娠30周前。NAIT臨床表現(xiàn)第18頁，講稿共54頁，2023年5月2日，星期三母體血清抗HPA抗體檢測，然而母體抗體水平到預產期時逐漸下降，約有30%的病例抗體陰性。父母雙親的HPA基因檢測，在高加索地區(qū)采取對其HPA-1和HPA-5基因檢測，而在亞洲地區(qū)應考慮進行HPA-4和HPA-5基因檢測。父母雙親交叉配型實驗，將母體血清與父親血小板進行交叉配型實驗，即使不能確切知道不相合的抗原，但這種方法也能發(fā)現(xiàn)母體是否存在血小板同種異體免疫反應。

NAIT早期診斷與篩查第19頁，講稿共54頁，2023年5月2日，星期三NAIT第20頁，講稿共54頁，2023年5月2日，星期三NAIT第21頁，講稿共54頁，2023年5月2日，星期三舉例——血小板輸注無效第22頁，講稿共54頁，2023年5月2日，星期三血小板抗體檢測常用方法功能性試驗酶標法熒光法固相凝集法應用范圍抗體檢測√√√√交叉配型√√√性能靈敏度低高極高高特異性不好好一般較好反應時間長＞2h＞2h＜1h所用儀器不定酶標儀熒光顯微鏡或流式細胞儀平板離心機16th版AABB評價未提及特異性鑒定的可靠方法敏感性高特異性不足血小板交叉配型應用最為廣泛的方法方法指標第23頁，講稿共54頁，2023年5月2日，星期三血小板抗體檢測方法-固相凝集法第24頁，講稿共54頁，2023年5月2日，星期三血小板抗體篩檢，包括HLA抗體、HPA抗體及其它血小板反應性抗體。輔助血小板相關免疫性疾病的診斷。血小板交叉配型，為患者篩選相容性的血小板或血小板供者，避免血小板輸注無效癥的發(fā)生。患者自身抗體檢測，包括血小板結合抗體和血清中游離抗體。檢測血小板結合抗體可將患者血小板平鋪在反應孔后，直接加入抗人IgG和指示紅細胞進行檢測。血清中的游離抗體可通過患者自身血小板和血清反應來檢測。用途：血小板抗體檢測方法-固相凝集法第25頁，講稿共54頁，2023年5月2日，星期三

1.主要應用科室：輸血科，血液病科，婦產科，新生兒科。2.輸血科：⑴.預防血小板輸注無效癥的發(fā)生：通過對患者進行血小板抗體篩查以及隨后的與血小板供者的交叉配型試驗，篩選和患者血小板抗原配合性高的血小板供者，以提高血小板輸注有效率，防止血小板輸注無效癥的發(fā)生。⑵.指導臨床輸血，保障輸血安全：輸血科在常規(guī)血型鑒定中加入血小板抗體檢測，可對臨床輸血中出現(xiàn)發(fā)熱、黃疸、急性肺損傷等非溶血性輸血反應的風險作出評估。血小板抗體檢測臨床意義第26頁，講稿共54頁，2023年5月2日，星期三

3.婦產科:孕前，孕期，產后

1).反復流產、不孕不育查因：對于反復和習慣性流產史（尤其是孕早期）和不孕不育史的患者，檢測患者血清和血漿中血小板抗體的水平，可對其造成流產和不孕不育的原因作出輔助診斷。2).產檢（尤其針對高齡和二胎產婦）孕早期檢測：在孕早期（三個月）產檢中常規(guī)檢測母親與胎兒的血小板相容性，對于孕早期出現(xiàn)流產和死胎的風險評價具有非常重要的意義孕晚期檢測：在孕晚期（胎兒出生前）檢測母體血清或血漿中血小板抗體水平，對胎兒出生后罹患新生兒血小板同種免疫性疾病風險評價具有非常重要的意義。3).妊娠期血小板降低的查因：孕婦在妊娠期血小板減少是一種常見現(xiàn)象，如是生理性降低則危害不大，往往生產后會恢復正常。但如果血小板的降低是由于孕婦自身免疫性疾病引起的則會引起流產、死胎、以及新生兒相關的血小板減少性疾病，危害嚴重。血小板抗體檢測臨床意義第27頁，講稿共54頁，2023年5月2日，星期三

4.血液病科：在血液腫瘤科檢測患者血清和血漿中自身血小板抗體的水平和特異性，可輔助診斷自身免疫性疾病如ITP等。5.新生兒科：新生兒血小板同種免疫性疾病的診斷。血小板抗體檢測臨床意義第28頁，講稿共54頁，2023年5月2日，星期三

婦產科領域輸血科常規(guī)輸血前的檢測（術前備血）預防血小板輸注無效血小板抗體檢測臨床應用第29頁，講稿共54頁，2023年5月2日，星期三曾有反復流產史的育齡婦女，可在懷孕前進行夫妻雙方的血小板相關抗體檢測，對由于母嬰血小板血型不合而導致的流產或NAIT進行早期的診斷和治療。青年女性流產率逐年上升每一次懷孕、流產都可能造成母體因外來抗原刺激而產生抗體，危及下一次妊娠。如何在孕前/孕期正確地評估因父母血小板血型不合引起的流產、NAIT的風險？血小板抗體檢測在婦產科領域的應用第30頁，講稿共54頁，2023年5月2日，星期三血小板抗體檢測在婦產科領域的應用第31頁，講稿共54頁，2023年5月2日，星期三父母血小板血型不合引起新生兒同種免疫性血小板減少癥的初步研究鄧晶、夏文杰、葉欣、徐秀章、邵媛、陳揚凱、丁浩強、羅廣平、王嘉勵（廣州血液中心臨床輸血研究所）熱帶醫(yī)學雜志2012年11月第12卷第11期文中觀點：通過收集22例臨床上確診為新生兒免疫性血小板減少癥（NIT）的患兒為研究對象，采用ELISA方法檢測患兒及其父母的血小板相關抗體，應用PCR-SSP法對患兒及父母進行HLA及HPA基因分型，根據(jù)相應的抗原進行抗體特異性分析。結果22例NIT患兒中，14例是由于同種免疫性因素引起的，其中27.3％（6例)由HLA抗體引起,13.6％（3例）由HPA抗體引起，22.7％（5例）由HLA＋HPA抗體引起；9.1％（2例）由于被動免疫性因素引起;27.3％（6例）由自身抗體引起。其中,同種免疫性抗體以抗HLA-A2、19，抗-B40及抗HPA-3a多見。結論：在新生兒免疫性血小板減少癥中，主要以父母血小板血型不合引起新生兒同種免疫性血小板減少癥為主，臨床產前診斷預防和產后治療具有重要意義。血小板抗體檢測在婦產科領域的應用第32頁，講稿共54頁，2023年5月2日，星期三實驗數(shù)據(jù)血小板抗體檢測在婦產科領域的應用第33頁，講稿共54頁，2023年5月2日，星期三血小板抗體檢測在婦產科領域的應用第34頁，講稿共54頁，2023年5月2日，星期三血小板抗體檢測在婦產科領域的應用第35頁，講稿共54頁，2023年5月2日，星期三血小板抗體檢測在婦產科領域的應用第36頁，講稿共54頁，2023年5月2日，星期三實驗結果血小板抗體檢測在婦產科領域的應用第37頁，講稿共54頁，2023年5月2日，星期三血小板抗體檢測在婦產科領域的應用第38頁，講稿共54頁，2023年5月2日，星期三血小板抗體檢測應用：非溶血性輸血反應的風險評估

白細胞特異性和組織相容性（HLA）抗體是引起臨床非溶血性發(fā)熱性輸血不良反應的最主要原因，尤其是有輸血史、輸血小板史、妊娠史、器官移植史、自身免疫性疾病史等的患者的臨床輸血工作中，非溶血性發(fā)熱反應是臨床最常見的輸血不良反應（約70%），文獻報道輸注紅細胞為2～6%，輸注血小板為20～30%，多次輸血患者高達27％～63％，而非溶血性發(fā)熱性輸血反應與白細胞特異性和組織相容性（HLA）抗體密切相關，是影響臨床安全輸血的嚴重因素。白細胞特異性和組織相容性（HLA）抗體的檢測對于預防和減少非溶血性發(fā)熱性輸血反應非常有意義。第39頁，講稿共54頁，2023年5月2日，星期三輸血反應與血小板抗體的關系癥狀報告數(shù)抗HLA抗體（HLA-I+HLA-II類抗體）抗血小板抗體（HPA+HLA-I類抗體）蕁麻疹37828/326(8.6%)5/296(1.7%)過敏反應373/36(8.3%)1/33(3.0%)過敏性休克11112/104(11.5%)2/96(2.1%)血壓降低290/25(0.0%)0/23(0.0%)呼吸困難4611/43(25.6%)3/38(2.4%)發(fā)熱反應15444/139(31.7%)9/115(7.9%)其它335/31(16.1%)2/26(7.7%)總計788103/704(14.6%)22/627(3.65)血小板抗體檢測應用：非溶血性輸血反應的風險評估第40頁，講稿共54頁，2023年5月2日，星期三

血小板輸血是提高患者（特別是腫瘤和移植患者）血小板計數(shù)，防止出血最為快速、有效的方法和手段。然而，血小板輸血并不是每次都能達到滿意效果，特別是反復多次隨機輸注血小板的患者，體內極易產生血小板抗體，從而破壞輸入的血小板并引起輸注無效。文獻報道約有20％~50％白血病患者，80％的再生障礙性貧血患者長期隨機輸注血小板后會出現(xiàn)輸注無效狀態(tài)，導致患者因血小板計數(shù)低下而自發(fā)出血或出血不止，甚至死亡。我國目前大多數(shù)臨床單位采用隨機輸注血小板，導致血小板輸注無效頻繁發(fā)生。后果：患者病情得不到改善，病危甚至死亡；浪費財力、物力；浪費寶貴的血小板資源；不利于血站及輸血科業(yè)務水平的提高。血小板抗體檢測的應用：血小板輸注無效的預防第41頁，講稿共54頁，2023年5月2日，星期三血小板輸注無效的危害

1）患者發(fā)生免疫反應，加重病情。

2）患者病情得不到改善，病危甚至死亡。

3）浪費財力、物力、寶貴的血小板資源。

4）存在醫(yī)療糾紛隱患。

5）不利于采供血機構和醫(yī)療機構業(yè)務水平的提高。血小板抗體檢測的應用：血小板輸注無效的預防第42頁，講稿共54頁，2023年5月2日，星期三血小板抗體檢測的應用：血小板輸注無效的預防第43頁，講稿共54頁，2023年5月2日，星期三血小板抗體檢測的應用：血小板輸注無效的預防第44頁，講稿共54頁，2023年5月2日，星期三血小板輸血采用隨機供者血小板有效率不超過30%；采用交叉配型相容性血小板有效率為92%，而對于重度血小板免疫患者，輸注相容性血小板有效率為70%。血小板交叉配型意義血小板抗體檢測的應用：血小板輸注無效的預防第45頁，講稿共54頁，2023年5月2日，星期三

對844例貧血、白血病、血小板減少及腫瘤等疾病患者進行血小板抗體檢測。其中有效病例766例，其余78例患者病例不祥。檢測結果統(tǒng)計如下：病例數(shù)男性女性平均年齡血小板抗體陽性數(shù)抗體陽性率貧血（包括再障和溶血性貧血）30314016345.955116.8%白血病99524741.602525.25%血小板減少27111642.30933.33%腫瘤60213956.3311.67%出血90424852.3466.67%骨髓纖維化及骨髓異常綜合癥1912755.74736.84%其它病癥168798948.12137.74%總計76635740947.5411214.62%臨床數(shù)據(jù)：血小板抗體檢測的應用：血小板輸注無效的預防第46頁，講稿共54頁，2023年5月2日，星期三海南省人民醫(yī)院共檢測102例患者，陽性18例，平均陽性率17.6%血小板抗體檢測的應用：血小板輸注無效的預防第47頁，講稿共54頁，2023年5月2日，星期三9例抗篩陽性患者，8例尋找到了相合的血小板，輸注效果良好?！吨腥A臨床醫(yī)師雜志》

2012/01血小板抗體檢測的應用：血小板輸注無效的預防第48頁，講稿共54頁，2023年5月2日，星期三

57例血小板輸注無