植物病害標本的采集制作與保存

植物病害標本的采集制作與保存植物病害標本是高等農(nóng)業(yè)院校植物病理學科本科教學不可缺少的實物，它在教學中具有直觀、不受季節(jié)和區(qū)域限制的特點。因此，植物病害標本的采集、制作和保存是植物病理學科實驗教學中必不可少的基礎(chǔ)知識和技能。植物病害標本的采集在北方由于季節(jié)分明，作物品種豐富，植物病害發(fā)生頻繁，大部分的植物病害標本都能從田間采集到。但是，病害的發(fā)生有一定的規(guī)律，要充分掌握病害發(fā)生的季節(jié)規(guī)律及寄主的生長規(guī)律才能收獲癥狀特征比較典型的標本。病害標本采集的工具植物病害大多發(fā)生在根、莖、葉和果實上，因此所用工具要針對不同的部位，常用的工具有刀、剪、鋤、鋸等，還有標本夾、標本箱、標本紙、小玻瓶、紙袋、標簽和記錄本等。1.2標本的采集大田采集主要分為按季節(jié)采集和按寄主采集。按季節(jié)采集主要是針對每年只在特定時期發(fā)生的病害。如白粉病具有性階段，小麥白粉病多在每年5—6月能夠采集到；植物的灰霉病則在低溫陰雨的條件下容易發(fā)病，每年3—5月最容易采到。按寄主采集主要針對寄主范圍廣泛的病害，如霜霉病，可以在很多植物病害的葉片上發(fā)現(xiàn)，常見的有萵苣、葡萄、白菜等；疫病如番茄、馬鈴薯、辣椒疫病等。1.3采集標本的記錄為了區(qū)分采集的不同的標本，采集時要進行記載。主要包括寄主名稱、時間和地點、采集人姓名、主要發(fā)生情況和必要的生態(tài)環(huán)境因子。植物病害標本的制作采集的標本通過鑒定以后，除去作為分離用的標本外，一般都用干燥法或浸漬法進行保存，要求能夠盡量保存標本的本來性狀。一些微小的可以做成玻片標本，比較難以保存的和特殊的標本可通過多媒體掃描系統(tǒng)或顯微系統(tǒng)存入計算機中，制成相應(yīng)的文體圖形、動畫、視頻圖像等。2.1標本干燥制作法壓制法。采到的植物病害標本，若干燥后容易卷縮的（如稻葉），最好隨采隨壓。其他的可以放到采集箱內(nèi)帶回去后壓在吸水紙中，用標本夾夾緊，日曬任其干燥。在此期間，要經(jīng)常更換標本紙。夏季溫度和濕度較高，容易使標本發(fā)霉變色，標本紙要勤更換。通常前3?4d換1?2次/d，以后2?3d換1次，至標本完全干燥。燙干法或硅膠烘干法。不準備作為分離用的標本可以采用此2種方法。為了加快標本的干燥速度，更好地保持標本原有的色澤，可以將剛采集的標本放在吸水紙或布中用電熨斗來回迅速燙干或?qū)⑵浼虞d草紙和干燥過的硅膠粉的標本夾中捆緊，放入50°C烘箱中2~3d,使其很快干燥。微波爐干燥保色法。為了彌補燙干法的不足之處，劉春元等（2003）報道了根據(jù)植物病害標本的質(zhì)地，摸索了一套微波干燥保色法。此法干燥迅速，保色效果較佳，可長期保存而不褪色。如豆科植物病葉處理1min,效果最佳，癥狀保存完好。冷凍干燥法。是目前比較好的方法。標本在冷凍的情況下干燥，幾乎能完全保持原有的色澤和形狀。自然干燥法。水分很少的標本如枝干病害的枝條等，不需要采取任何干燥的手段，在空氣中自然干燥即可。2.2浸漬標本制作法對于果實病害和汁液較多的病害以及肉質(zhì)的子囊菌和擔子菌的子實體，均可以采用浸漬法保存。但此方法占的面積大，保存時間有限，只能用于保存少量的標本，這些標本大多用于教學和示范。浸漬標本的制作，需要配備各種類型的浸漬液，主要包括各種保持原本顏色的保存液和防腐的保存液。保色浸漬液的配制。根據(jù)植物果實病害的寄主植物的顏色，可將保色的浸漬液分為保存綠色浸漬液、保存黃色和桔色的浸漬液、保存紅色的浸漬液等。①保存綠色的浸漬液。保存綠色的浸漬液很多，要根據(jù)不同的植物病害標本選擇適當?shù)姆椒ǎ拍苓_到好的效果。如醋酸銅浸漬液：將醋酸銅結(jié)晶逐漸加在50％的醋酸溶液中，到不再溶解為止，原液要根據(jù)標本顏色的不同將其用水稀釋3?4倍，然后使用。將標本加入到煮沸的稀釋液中，繼續(xù)加熱，標本的綠色開始褪去，經(jīng)3?4min，使綠色恢復后，將其取出，用清水沖凈，保存于5%的福爾馬林溶液中，或壓制成干燥的標本。這種方法保色效果良好，但與原色稍有出入。不能煮的如淡綠色蘋果、梨、綠色葡萄等的病害標本可直接浸泡在1%亞硫酸100ml、95%酒精100ml、水800ml配成的溶液中浸泡10?20d，然后取出，沖洗干凈，再保存在5%的福爾馬林溶液中。另外，還有硫酸銅亞硫酸浸漬液、瓦查（Vacha）浸漬液等，也是保存綠色標本常用的方法。②保存紅色的浸漬液。對于紅色的果實病害標本如草莓、辣椒、馬鈴薯以及其他的植物紅色組織，選擇病害癥狀典型的標本，可以將標本浸入瓦查的紅色浸漬液（硝酸亞鉆15g，福爾馬林25ml，氯化錫10g，水1000ml）內(nèi)，2周后取出沖洗干凈，浸泡在亞硫酸30?50ml，福爾馬林10ml，酒精（95%）10ml,水1000ml配成的溶液中加以保存。③保存黃色和桔紅色標本的浸漬液。含葉黃素和胡蘿卜素的果實如杏、梨、柿子、柑橘等，用亞硫酸溶液保存比較適宜。方法是將亞硫酸（含SO25%?6%）配成4%~10%的水溶液（含SO20.2%?0.5%）中［1］。總之，各種保色的浸漬液，除有些保存綠色的浸漬液外，保存其他顏色的浸漬液，效果都不理想。為了更好的顯示植物病害的危害狀，最好采用多媒體系統(tǒng)將其掃描或攝影，制作成相應(yīng)的圖片和視頻進行保存。防腐浸漬液。對于浸漬標本的保存來說，防腐是最重要的一個環(huán)節(jié)。因此，需要防腐浸漬液對其進行保存。主要成分如下：福爾馬林50ml，酒精（95%）300ml，水2000ml，也可單用福爾馬林和酒精。植物病害標本的保存蠟葉標本的保存散裝標本。將干燥好的蠟葉標本放進消毒室或消毒箱內(nèi)，傳統(tǒng)的方法是用酒精、升汞液消毒，或?qū)硵澄坊蛩穆然寂c二硫化碳混合液置于玻皿內(nèi)，利用毒氣熏殺標本上的蟲或蟲卵，約3d后即可取出。有條件也在-40°C低溫處理消毒。將消毒好的蠟葉標本鑒定、整理，然后裝進標本袋中，貼好標簽，以備實驗課用作實物標本，供學生上課使用。制作盒裝標本。將植物病害癥狀典型的蠟葉標本和干燥的果實標本，可利用玻面紙盒的方法進行保藏。按照標本的大小，選擇合適的紙盒（一般為長28cm、寬20cm、高1.5?3.0cm），在紙盒中鋪1層棉花，棉花上放標本和標簽，注明寄主植物、寄生菌的名稱、采集時間等，然后加上玻蓋。棉花中可加入少量的樟腦粉或驅(qū)蟲的藥劑。這種方法制作的標本可長期保存，循環(huán)使用。塑封標本。適合保存葉片標本和較小的莖稈（如小麥、水稻）標本。做法是：根據(jù)植物病害標本的大小選擇適當?shù)淖o卡膜，將1張比護卡膜稍小的白紙放入護卡膜中，在白紙右下角寫上該標本的標簽，然后把標本放在白紙上擺好，再把膜放平，放入預熱到160°C的過塑機封塑即可。如果標本較小、較窄，1張紙上可放幾個標本，可根據(jù)需要分類裝訂成冊。這種方法做出的標本彌補了以上盒裝方法存在許多缺點，如標本盒體積大，攜帶不便，造價較高，只能用肉眼和手持放大鏡觀察標本的局部，對細小組織和結(jié)構(gòu)觀察困難，標本易變色、發(fā)霉、受蟲蛀、不耐貯存等。3.2浸漬標本的保存將已鑒別的標本適當處理后放在盛有保存液的標本瓶中，用蠟或火棉膠封口后，將標簽貼在標本瓶上進行保存。由于浸漬液所使用的藥品大都為揮發(fā)性的，或容易氧化，因此浸漬標本最好放在暗處，以減少藥液的氧化，或瓶口因溫度變化而造成破裂。注意事項植物病害標本的采集受植物生長季節(jié)、氣候條件、采集地點、采集時間及作物品種布局等多種因素的影響，要把握時機才能采到需要的癥狀典型的標本。另外，對于病害標本的制作，不同部位制作和保存的方法不同。蠟葉標本在保存過程中，要保持標本室的干燥才能防止發(fā)霉，但干燥標本易遭蟲蛀，因此最好每年用甲基溴等藥劑熏蒸，以保證標本的完好。浸漬標本保存液也要經(jīng)常更換，以保證標本不腐爛。這樣，逐漸積累和補充各種病害標本，才能使實驗課程順利進行，達到預期的良好效果。昆蟲標本制作方法一、昆蟲標本的干制法用針刺曬干。用昆蟲針由昆蟲的胸部刺過,插在軟木板上。插人的針應(yīng)當垂直,插人的高度當用刺蟲臺校整,自然干固。粘蟲紙粘固。較小的昆蟲，如蚤、蚊等,將其粘在粘蟲紙上后,剪下紙塊,用昆蟲針刺在紙上固定曬干。展翅曬干。翅較大的昆蟲,針刺后常常兩翅下落,這時應(yīng)使用展翅板,將其兩翅伸平并用紙條固定曬干。去除內(nèi)臟。對較大的昆蟲,內(nèi)臟極易腐敗生霉,應(yīng)去除內(nèi)臟。在腹或背側(cè)開口取出內(nèi)臟,再用脫脂棉花加以充填,并放人少量的苯酚，再用昆蟲針從胸中刺人曬干。填蠟法。對較大的蛾類幼蟲,在去內(nèi)臟之后（去內(nèi)臟時用注射器從肛門刺人把內(nèi)臟全部吸除）,把化溶的石蠟用注射器從肛門注入其體腔內(nèi),呈現(xiàn)原來的飽滿狀態(tài)。放人冷水中加以固化。去臟烤干法。把昆蟲的內(nèi)臟抽出之后,用二聯(lián)球慢慢打人空氣使之體腔充起,外加紅外線燈烘烤至干。埋藏法。把昆蟲經(jīng)固定脫水之后,用熔化的酒精松香稠液慢慢澆灌,使昆蟲被包埋藏在松香之中；另法是把昆蟲脫水后,用白明膠液包藏之。明膠液配法明膠加水和石碳酸,用水浴法溶化后澆埋之。此外還可以用萬能膠包藏,效果較好。把脫水的材料放在白紙上用萬能膠滴埋,使其全部軀體都粘上膠,待后再滴一次,滴后應(yīng)加罩防塵。這種作法效果較好,包埋極薄的一層膠,不影響觀察,增加材料的堅固性能,能防潮防霉。二、昆蟲標本浸漬法福爾馬林浸存法。用5%福爾馬林浸泡。經(jīng)3-5d后換液一次再移入5%福爾馬林中保存。酒精浸存法。用50%酒精固定12-24h后移入70%酒精中保存。酒精甘油、甲醛甘油浸存法。將上二配方分別加20%-40%甘油效果更好。能增加昆蟲肢足關(guān)節(jié)的柔軟性，防治了單用酒精脫水變硬的缺點。鼠類的標本采制和保藏山西省農(nóng)科院濟經(jīng)作物研究所柳樞在進行鼠類區(qū)系、生態(tài)調(diào)查，滅鼠防治工作中，必須要做好一件事情，就是收集標本材料，保存和制作好各種鼠類的標本，作為研究生物科學的證據(jù)，標本的形跡是最重要的記錄材料，采集標本，鼠夾是最常用的捕鼠工具，種類型號很多，可根據(jù)鼠的活動特點棲息環(huán)境以及鼠類的體型大小分別選用。為了不損傷被捕獲的動物，也可選用各種捕鼠籠捕抓活體。此外，亦也有獵槍、小口徑步槍獵取動物。在藥物滅鼠現(xiàn)場則能收集妥善處理。尤其是動物疫病流行地區(qū)或不疑地區(qū)，在無十分安全可靠的消毒措施及手段時，不要隨便進行采集。必須指出，在進行該項工作時，應(yīng)穿戴防疫服裝、鞋、襪等，以避被跳蚤等叮咬感染動物流行病。（1）制作標本所需要的物品1、消毒用品：氯仿、來蘇兒、酒精、肥皂、洗滌劑等。2、防腐劑：砒礬粉（配方：亞砒酸、明礬各半研制成細粉）或砒皂膏（配方亞砒酸五分之一、樟腦五分之二，切碎的肥皂五分之二混合后加水煮成膏）樟腦或衛(wèi)生球等。3、工具和物品：熏桶、解剖刀、小剪刀、鉗子、鑷子、天平或小稱、鋼卷尺、鉛絲（粗細根據(jù)標本而定）、木板、毛巾、棉花、針、線、標簽、鋼筆、鉛筆、墨水、登記本、大頭針等等。制作生態(tài)標本時，還要準備假眼等。（二）剝制前的處理對于獲得的標本，務(wù)必置于鼠袋內(nèi)并扎緊袋口，謹防鼠類體外寄生蟲逸出。同時，使用標簽注明采集地點、時間、原則上應(yīng)以一鼠一袋為準。將帶回的鼠體，首先放在熏桶內(nèi)、倒入一定量的乙醚、氯仿或氰化鈣，把體外寄生蟲、蚤、螨等熏死和暫時麻醉，然后，用昆蟲鑷或密梳子清揀昆蟲。捕獲的活鼠可就地破壞延髓、壓擠內(nèi)藏、窒息等法處死。或置于密閉的容器內(nèi)充以CO2窒息處死。對于獲得的罕見鼠種，即使是幼鼠和有血跡污染，或稍有腐爛尸體，也要用布或滑石粉等擦洗干凈，設(shè)法制成標本。經(jīng)過上述處理的死動物，即可進行標本的測量，鑒定。（三）外部測量與鑒別已殺滅體外寄生蟲的死亡動物，挑選毛皮、頭骨、四肢及尾部完整的個體做標本。雖有損傷，但可能是稀有、珍貴或可疑的種類也應(yīng)選取。選取的標本應(yīng)先記錄體重，以克為單位，然后進行外部測量。外部測量以毫米為單位，取其整數(shù)即可。測量器械可用兩腳規(guī)、鋼卷尺、卡尺等。測量前，將鼠體仰放桌上或搪瓷盤內(nèi)，取其自然姿態(tài)，若是僵死蜷縮的標本，應(yīng)輕輕揉按直，其使恢復自然姿勢。測定及記載項目包括：標本編號、采集地日期、性別、體長、后足長、尾長、耳等（見圖1）動物的雌雄鑒別，主要決定于動物的外生殖器結(jié)構(gòu)，雌雄有發(fā)達的乳腺位于胸腹部和鼠鼷部兩側(cè)；雄性的睪丸自腹腔降落至鼠鼷部的陰囊里。對于幼體發(fā)育不完全，上述特征不易看清，因此不易鑒別。一般說來，可根據(jù)位于腹部正中線后端的泌尿生殖乳頭與肛門的距離長短而定，雄性比雌性距離為長。在上述方法皆無法鑒別性別或?qū)τ诓皇煜さ姆N類，可剖開腹部，通過內(nèi)生殖器觀察來判斷。雄性可看到陰莖及睪丸，雌性可看到輸卵管及子宮帶。（四）剝制方法將鼠體仰放于平板上，用小剪刀或解剖刀輕輕沿腹部正中線，至生殖器前端切開表皮。（不可用力過大，否則會切開腹肌露出內(nèi)臟），在刀口處小心把兩側(cè)表皮與肌肉分開，直到膝關(guān)節(jié)，并推出后腿的膝關(guān)節(jié)用剪刀將膝關(guān)節(jié)處剪斷。（如圖2）為了使這項工作作得方便，把后腿足略微向里推一點，此時關(guān)膝彎曲，而關(guān)節(jié)上去了。清除大腿的肌肉，把皮翻過來使恢復原態(tài)。另一側(cè)用同樣的方法處理。把生殖器及直腸與皮膚連接處切斷，便可剝離尾部。以后修剪一下尾周圍的結(jié)締組織纖維，在此后用一只手的食指與拇指攝緊尾基部皮緣，緩緩緊拉，尾椎即可抽出（見圖3）。切記不可用力過猛、否則尾椎會斷。尾部剝完后，繼續(xù)脫襪子式的向前推脫，一直脫到前肢，從肩胛處切斷。頭部剝皮比較復雜，應(yīng)特別小心謹慎，以免碰傷皮膚或頭骨。當翻至頸部上端時會遇到一層半透明的軟骨膜，這是耳殼。將周圍的結(jié)締組織輕輕剝離，細剪著耳部的皮膚，再向前剝至眼部，要特別小心，切匆剝破。輕拉皮與頭骨，可見到皮膚與眼球之間有一白色的園環(huán)，這就是眼臉。從脂白環(huán)與眼球之間小心剪開，繼剝至吻部。先剝下唇，后剝上唇，至鼻端從鼻骨處切斷。到此為止，鼠的尸體與鼠皮完全分開了。頭胄由頸部剪下，系上與鼠皮和采集薄上的一致編號，另行處理。如果要剝制生態(tài)標本，頭骨要保留在皮上。在上頷的鼻尖和下頷嘴唇的皮不要完全切開，適當?shù)谋Ａ粢稽c，由頭骨后部剪下，把舌頭、眼睛、腦漿挖出來，把頭骨上的肌肉去干凈。（五）標本的填裝與制作1、固態(tài)標本制作法：首先把皮上殘留肉和脂肪刮去，把破裂的地方要縫合好。將剝皮時留在皮上的四肢骨插上細鐵絲，涂以防腐劑，用棉花纏在四肢骨骼上，使其如生活有肌肉那樣豐滿，取長等于尾尖到胸部的鳥羽軸或竹?簽、鐵絲等卷以適當?shù)拿藁ú迦胛睬?。然后把鼠皮翻過來，開始填裝，填入的棉花應(yīng)均勻不管裝在什么部位，都要平而松軟，與原來肌肉相似。填充完畢后，將上下唇縫合，再縫合腹皮。縫合時應(yīng)注意要從里往外穿針，穿針時以免把毛帶進皮的內(nèi)面。由上而下先拉一針，然后再左右拉線。最后調(diào)整姿態(tài)，先用小鑷子張鼓眼臉，兩耳豎直，胡須擺正，將皮毛梳理好。標簽一般系在右后腿上。四肢用大頭針固定在硬紙板或木板上，固定時前肢并攏，腳掌向下，兩后肢靠緊尾巴，足掌向下，尾平放于兩后腿之間。而后分別在前飛后肢的掌部用大頭針加以固定（圖4）。在陰干過程中還要不斷加以整形，直到干為止。2、生態(tài)標本制作法：生態(tài)標本的制作法與固態(tài)標本相同，但是還需要用鐵絲支持其肢體，并按其生活時的姿態(tài)進行制作。鐵絲的粗細應(yīng)依動物個體的大小而不同。頭部、前后左右附肢及尾部各用一根鐵絲支撐。頭部的鐵絲先用棉花卷成與頸部原有肌肉粗細長短相同，其一端固定于頭骨上。眼窩、吻部等除去肌肉的部分，用棉花填充塑成而與原形相似，將它放在頭皮之內(nèi)，按其原頭部之形狀矯正眼、耳、臉飛唇的位置。取兩根細鐵絲，一端由足底沿肢骨后側(cè)插入肢內(nèi)，外留一段為固定之用。穿人的鐵絲沿肢骨彎曲，用線縛于骨骼上，外卷棉花以代替除去的肌肉。四肢皮膚翻回原狀，但應(yīng)注意不可扭轉(zhuǎn)。尾巴的制法與固態(tài)標本同。先將頭和前肢的鐵絲在相當于肩胛骨外扭合，再將后肢和尾巴的鐵絲扭合成適當?shù)能|干支柱，腹內(nèi)填充棉花，縫合切口。將制成的生態(tài)標本，按所需求的姿態(tài)固定于板上或生境架上，整理眼睛耳朵、嘴唇位置，唇間填入適當?shù)拿藁ɑ蛘惩?，使它與原肌肉一樣，胡須擺正，兩耳豎直，眼窩內(nèi)嵌入大小適宜的假眼睛。至此生態(tài)標本制作完畢。假眼的制作有許多方法。小型鼠類的眼睛因其虹彩不大明顯，可采用黑疙瘩釘。對于較大的鼠類，可采用彩色假眼，即用大小適當?shù)陌肭蛐魏谏w玻璃體，或黑豆粒等。制作生態(tài)標本時，必須熟悉鼠類的生活習性和形態(tài)特征，這樣才能制成如生的標本o3、浸制標本制作：暫時性的保存野外捕獲的鼠類或幼小的哺乳鼠，胎仔、生殖系統(tǒng)等資料，均可用浸制液保存。一般采得上述標本可直接浸于75％酒精，或5-10％甲醛（福爾馬林）溶液，或兩者各半的混合液中。對幼小鼠或胎盤內(nèi)臟等，宜用較稀藥液浸泡，否則，容易硬化。體