基礎(chǔ)生化第三章核酸

基礎(chǔ)生化第三章核酸第1頁，課件共89頁，創(chuàng)作于2023年2月第2頁，課件共89頁，創(chuàng)作于2023年2月1944年，Avery證明轉(zhuǎn)化肺炎球菌的物質(zhì)是DNA。1952年，A.Hershey和M.Chase噬菌體感染實驗第3頁，課件共89頁，創(chuàng)作于2023年2月第三章核酸化學(xué)第一節(jié)

核酸的化學(xué)組成及其基本結(jié)構(gòu)單位核苷酸第二節(jié)核酸的結(jié)構(gòu)和功能第三節(jié)核酸的性質(zhì)及研究方法第4頁，課件共89頁，創(chuàng)作于2023年2月第一節(jié)

核酸的化學(xué)組成及其基本結(jié)構(gòu)單位核苷酸一、核酸的化學(xué)組成二、核苷酸第5頁，課件共89頁，創(chuàng)作于2023年2月一、核酸的化學(xué)組成元素組成：C、H、O、N、PP元素的含量較多并且恒定，約占9～11%。核酸在酸、堿或酶作用下會水解P223第6頁，課件共89頁，創(chuàng)作于2023年2月一、核酸的化學(xué)組成（一）戊糖

（二）堿基

（三）核苷

（四）Pi第7頁，課件共89頁，創(chuàng)作于2023年2月

組成核酸的戊糖有兩種：DNA所含的糖為β-D-2-脫氧核糖；RNA所含的糖則為β-D-核糖。(一)戊糖RiboseDeoxyriboseO第8頁，課件共89頁，創(chuàng)作于2023年2月(二)堿基(嘌呤和嘧啶）P223第9頁，課件共89頁，創(chuàng)作于2023年2月1.常見的嘌呤和嘧啶堿基P223、224第10頁，課件共89頁，創(chuàng)作于2023年2月2.稀有堿基（修飾）P224主要存在于tRNA和rRNA中第11頁，課件共89頁，創(chuàng)作于2023年2月（三）核苷（nucleoside）1.核苷的結(jié)構(gòu)戊糖+堿基的連接方式：1’2’3’4’5’(OH)1’2’3’4’5’(OH)嘧啶核苷嘌呤核苷C-N糖苷鍵P225第12頁，課件共89頁，創(chuàng)作于2023年2月命名，簡寫符號2.常見核苷堿基核糖核苷脫氧核糖核苷A腺嘌呤核苷（A）腺嘌呤脫氧核苷（dA）G鳥嘌呤核苷（G）鳥嘌呤脫氧核苷（dG）C胞嘧啶核苷（C）胞嘧啶脫氧核苷（dC）U尿嘧啶核苷（U）——T——胸腺嘧啶脫氧脫氧核苷（dT）第13頁，課件共89頁，創(chuàng)作于2023年2月P2263.稀有核苷第14頁，課件共89頁，創(chuàng)作于2023年2月返回節(jié)第15頁，課件共89頁，創(chuàng)作于2023年2月二、核苷酸（nucleotide）

（一）脫氧核糖核苷酸5’P226形成3’-，5’-核苷酸，但生物體內(nèi)游離核苷酸多為5’-核苷酸第16頁，課件共89頁，創(chuàng)作于2023年2月（二）核糖核苷酸

形成2’-,3’-，5’-核苷酸，第17頁，課件共89頁，創(chuàng)作于2023年2月1.核苷單磷酸和多核苷酸（繼續(xù)磷酸化）AMPADPATP（三）核苷酸衍生物P227第18頁，課件共89頁，創(chuàng)作于2023年2月2.環(huán)化核苷酸cAMPcGMPP228在激素和信號轉(zhuǎn)導(dǎo)中起作用第19頁，課件共89頁，創(chuàng)作于2023年2月能量通貨（NTP）核酸合成的前體其它物質(zhì)的前體（輔酶）信號傳遞（cAMP、cGMP）活化其它物質(zhì)參與代謝調(diào)節(jié)（別構(gòu)）基因表達(dá)的調(diào)節(jié)（ppGpp、pppGpp）（四）核苷酸的功能返回章第20頁，課件共89頁，創(chuàng)作于2023年2月一、核酸的種類、分布及功能第二節(jié)核酸的結(jié)構(gòu)和功能二、核酸的一級結(jié)構(gòu)三、DNA的高級結(jié)構(gòu)四、RNA的高級結(jié)構(gòu)第21頁，課件共89頁，創(chuàng)作于2023年2月一、核酸的種類、分布及功能（一）種類根據(jù)所含糖不同分類DNARNAmRNAtRNArRNA生物細(xì)胞都含有DNA和RNA；病毒中只含DNA或RNA。RNA分子的種類較多，分子大小變化較大，功能復(fù)雜P218第22頁，課件共89頁，創(chuàng)作于2023年2月RNA種類功能mRNA將信息從基因傳遞到蛋白質(zhì)tRNA攜帶活化氨基酸參與蛋白質(zhì)生物合成rRNA構(gòu)成核蛋白體（蛋白質(zhì)合成場所）miRNA調(diào)節(jié)作用SnRNA參與mRNA前體剪接加工snoRNArRNA的加工修飾ScRNA蛋白質(zhì)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)定位合成信號識別體的組分M1RNARNaseP的催化單體端粒酶RNA端粒合成的模板引物RNA起始DNA復(fù)制TsRNA蛋白質(zhì)分泌復(fù)合物中的一部分RNA的種類及重要功能第23頁，課件共89頁，創(chuàng)作于2023年2月（二）分布真核生物原核生物DNA細(xì)胞核（98%）細(xì)胞質(zhì)（核區(qū)）線粒體（少量）質(zhì)粒葉綠體（少量）細(xì)胞質(zhì)（少量）RNA細(xì)胞質(zhì)（90%）細(xì)胞質(zhì)核仁（少量）第24頁，課件共89頁，創(chuàng)作于2023年2月1.DNA是主要的遺傳物質(zhì)2.RNA參與蛋白質(zhì)的生物合成3.RNA具有多種功能：

1）控制蛋白質(zhì)的合成；

2）RNA轉(zhuǎn)錄后加工和修飾；

3）基因表達(dá)與細(xì)胞功能調(diào)節(jié)；

4）生物催化與其它細(xì)胞持家功能；

5）遺傳物質(zhì)信息的加工和進(jìn)化（三）核酸的生物功能P220第25頁，課件共89頁，創(chuàng)作于2023年2月脫氧核糖核酸和核糖核酸異同的對比RNADNA組成戊糖

核糖

脫氧核糖堿基A,G,CA,G,CUT磷酸Pi(磷酸二酯鍵)Pi(磷酸二酯鍵)結(jié)構(gòu)常單鏈，部分堿基互補，局部雙螺旋，三葉草型等常雙鏈，堿基互補，雙螺旋分布細(xì)胞核(核仁)，細(xì)胞質(zhì)(線粒體、核蛋白體、胞液)細(xì)胞核(染色質(zhì))細(xì)胞質(zhì)(線粒體)生物功能遺傳信息表達(dá)，反轉(zhuǎn)錄，直接參與蛋白質(zhì)的生物合成等多樣性功能。遺傳的主要物質(zhì)基礎(chǔ)，負(fù)責(zé)遺傳信息貯存、發(fā)布返回節(jié)第26頁，課件共89頁，創(chuàng)作于2023年2月二、核酸的一級結(jié)構(gòu)（共價結(jié)構(gòu)）（一）核酸一級結(jié)構(gòu)的概念和特點5’→3’P227核苷酸的連接方式：3’,5’-磷酸二酯鍵第27頁，課件共89頁，創(chuàng)作于2023年2月（二）核酸一級結(jié)構(gòu)的表示方式5′PdAPdCPdGPdTOH3′5′PAPCPGPUOH′

或5′ACGTGCGT3′5′ACGUAUGU3′

ACGTGCGTACGUAUGU若不特別注明，一般規(guī)定從5′端書寫至3′端P228線條式字母式第28頁，課件共89頁，創(chuàng)作于2023年2月（三）DNA一級結(jié)構(gòu)的特點通過3’,5’-磷酸二酯鍵連接形成的直線形或環(huán)形多聚脫氧核苷酸。相對分子量非常大，一個染色體就是一個DNA分子原核生物：基因組較小，有重疊基因，基因連續(xù)（無內(nèi)含子），調(diào)控序列少，重復(fù)序列少。真核生物：基因組大，斷裂基因（有內(nèi)含子），調(diào)控序列多，大量重復(fù)序列。P228第29頁，課件共89頁，創(chuàng)作于2023年2月（四）RNA一級結(jié)構(gòu)的特點RNA也是無分支的線型多聚核苷酸，以3’,5’-磷酸二酯鍵連接。但RNA種類多，結(jié)構(gòu)不一：1.tRNA：由73-93個核苷酸組成，含較多稀有堿基（10-15%）增加識別和疏水作用；3’端為CCA，5’端為pG。2.rRNA：

5S、16S、23S（細(xì)菌）；5S、5.8S、18S、28S（哺乳動物）。甲基化修飾多在糖環(huán)上，有其保守序列。P229第30頁，課件共89頁，創(chuàng)作于2023年2月3.mRNA和hnRNA的一級結(jié)構(gòu)：原核生物（多順反子）：一條mRNA鏈上有多個編碼區(qū)真核生物（單順反子）：P229第31頁，課件共89頁，創(chuàng)作于2023年2月真核生物mRNA結(jié)構(gòu)特點3’末端polyA結(jié)構(gòu)：與mRNA從核入質(zhì)有關(guān)，與mRNA半壽期有關(guān)。5’末端帽子結(jié)構(gòu)：G被甲基化，可能與蛋白質(zhì)合成的起始有關(guān)；保護(hù)不被酶解。真核生物：5’端-帽子結(jié)構(gòu)；5’非編碼區(qū)、編碼區(qū)、

3’非編碼區(qū)、3’端多聚腺苷酸翻譯起始控制區(qū)5’非翻譯區(qū)3’非翻譯區(qū)編碼區(qū)AUGUAAUAGUGA第32頁，課件共89頁，創(chuàng)作于2023年2月真核細(xì)胞mRNA的結(jié)構(gòu)特點AAAAAAA-OH5′

“帽子”PolyA

3′

順反子m7G-5′ppp-Nm-3′p5’5’返回節(jié)P230第33頁，課件共89頁，創(chuàng)作于2023年2月三、DNA的高級結(jié)構(gòu)2.0nm小溝大溝（一）DNA的二級結(jié)構(gòu)1.B-型雙螺旋的結(jié)構(gòu)要點1）主鏈2）內(nèi)側(cè)和外側(cè)3）堿基平面4）參數(shù)P230第34頁，課件共89頁，創(chuàng)作于2023年2月英國劍橋大學(xué)的卡文迪許實驗室第35頁，課件共89頁，創(chuàng)作于2023年2月★磷酸與脫氧核糖彼此通過3’,5’-磷酸二酯鍵相連接，構(gòu)成DNA分子的兩條主鏈骨架?！锪姿崤c脫氧核糖在雙螺旋外側(cè)，嘌呤與嘧啶堿位于雙螺旋的內(nèi)側(cè)。第36頁，課件共89頁，創(chuàng)作于2023年2月★堿基平面與縱軸垂直，糖環(huán)平面與縱軸平行★兩條核苷酸鏈之間依靠堿基間的氫鍵結(jié)合在一起?！锫萑χg主要靠堿基平面間的堆積力維持第37頁，課件共89頁，創(chuàng)作于2023年2月第38頁，課件共89頁，創(chuàng)作于2023年2月★每圈螺旋10.4nt，堿基堆積距0.34nm，雙螺旋平均直徑2nm，★大溝：寬1.2nm，深0.85nm，★小溝：寬0.6nm，深0.75nm第39頁，課件共89頁，創(chuàng)作于2023年2月雙螺旋結(jié)構(gòu)模型（Watson&Crick

模型）（1）兩條反向平行多核苷酸鏈右手螺旋，（2）堿基均在主鏈內(nèi)側(cè)，A與T配對，G與C配對形成堿基平面與螺旋軸垂直；糖環(huán)和磷酸形成的主鏈在外側(cè)，（3）螺旋表面有大溝和小溝；大溝寬1.2nm，深0.85nm，小溝寬0.6nm，深0.75nm（4）雙螺旋的平均直徑為2nm，每轉(zhuǎn)1周有10個堿基對，螺距為3.4nm；大多數(shù)天然DNA屬雙鏈DNA；P230第40頁，課件共89頁，創(chuàng)作于2023年2月2.B-型雙螺旋結(jié)構(gòu)的實驗證據(jù)（1）x-光衍射分析（Franklin和Wilkins）DNA的X-射線衍射：在中心形成交叉的許多衍射點表明DNA具有螺旋結(jié)構(gòu)，兩端的深色帶是由重復(fù)出現(xiàn)的堿基造成的P230第41頁，課件共89頁，創(chuàng)作于2023年2月（2）DNA堿基組成的定量分析（chargaff規(guī)則）①DNA堿基組成有種的特異性，但無組織、器官特異性。②A=T；G=C；A+G=T+C紙層析和紫外分光（3）堿基的鍵長和鍵角等數(shù)據(jù)第42頁，課件共89頁，創(chuàng)作于2023年2月1)氫鍵：2)堿基堆積力：疏水相互作用和范得華力軸向平行相鄰的堿基平面自發(fā)地相互靠近，從而使堿基締合、層層堆積，形成了堿基堆積力，它是使DNA結(jié)構(gòu)穩(wěn)定的主要力量。3)離子鍵：環(huán)境中陽離子對磷酸基團(tuán)的穩(wěn)定3.穩(wěn)定DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)的力量第43頁，課件共89頁，創(chuàng)作于2023年2月不僅意味著探明了DNA分子的結(jié)構(gòu)，更重要的是雙鏈的互補性對于揭示和理解DNA的復(fù)制、重組、修復(fù)以及轉(zhuǎn)錄過程有重要意義，揭開了分子生物學(xué)研究的序幕。4.DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)的意義第44頁，課件共89頁，創(chuàng)作于2023年2月5.DNA二級結(jié)構(gòu)模型的完善（1）每周10.4nt，堿基平面呈螺旋槳狀扭曲

（2）DNA的變構(gòu)（環(huán)境條件的影響）A型結(jié)構(gòu)和Z型結(jié)構(gòu)

P232第45頁，課件共89頁，創(chuàng)作于2023年2月（2）DNA的變構(gòu)（環(huán)境條件的影響）

B-DNA：Watson,Crick雙螺旋。鈉鹽纖維，92％相對濕度A-DNA：75%Z-DNA：左手雙螺旋。C－DNA：鋰鹽纖維，44～46%P233DNA的構(gòu)象一定條件下可以相互轉(zhuǎn)變，如濕度、鹽濃度、離子種類、有機溶劑等。增加NaCl濃度使B型轉(zhuǎn)變?yōu)锳型；為鈉鹽時，可存在A、B、C三種類型；為鋰鹽時只有B和C；DNA的甲基化使大溝表面暴露的C甲基化形成m5C，導(dǎo)致B型轉(zhuǎn)變?yōu)閆型，與基因表達(dá)調(diào)節(jié)有關(guān)。第46頁，課件共89頁，創(chuàng)作于2023年2月反向重復(fù)序列與鏡像結(jié)構(gòu)（3)特殊DNA序列的結(jié)構(gòu)第47頁，課件共89頁，創(chuàng)作于2023年2月反向重復(fù)序列中的單鏈可形成發(fā)夾結(jié)構(gòu)第48頁，課件共89頁，創(chuàng)作于2023年2月反向重復(fù)序列可形成十字架結(jié)構(gòu)上頁

下頁

章首

節(jié)首第49頁，課件共89頁，創(chuàng)作于2023年2月H-DNA:三條鏈局部螺旋鏡像重復(fù)序列H-DNA存在于基因調(diào)控區(qū)和其他重要區(qū)域。（4)三股螺旋P233第50頁，課件共89頁，創(chuàng)作于2023年2月（5)四鏈螺旋見于富含G的區(qū)域，生物學(xué)意義不甚清楚第51頁，課件共89頁，創(chuàng)作于2023年2月（6)P-DNADNA過分纏繞時形成，每圈2.6bp，磷酸在內(nèi)，堿基在外第52頁，課件共89頁，創(chuàng)作于2023年2月DNA的三級結(jié)構(gòu)主要有以下三種：（二）DNA的三級結(jié)構(gòu)核酸的三級結(jié)構(gòu)指在二級結(jié)構(gòu)的基礎(chǔ)上DNA雙螺旋的進(jìn)一步卷曲。cccDNA的拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)松弛環(huán)形超螺環(huán)形開鏈環(huán)形第53頁，課件共89頁，創(chuàng)作于2023年2月第54頁，課件共89頁，創(chuàng)作于2023年2月負(fù)超：DNA欠旋，容易解鏈，有利于DNA的復(fù)制、重組和轉(zhuǎn)錄需要將兩條鏈分開才能進(jìn)行的反應(yīng)。

正超：DNA過旋，DNA的復(fù)制過程中，解鏈區(qū)前方不斷形成正超拓?fù)洚悩?gòu)酶可以切開一條鏈，繞另一鏈旋轉(zhuǎn)，再連接起來，因此可改變DNA的三級結(jié)構(gòu)。負(fù)超螺旋右旋正超螺旋左旋返回節(jié)第55頁，課件共89頁，創(chuàng)作于2023年2月（三）DNA與Pr的復(fù)合體基因組DNA與Pr結(jié)合成染色體（質(zhì)）P236第56頁，課件共89頁，創(chuàng)作于2023年2月核小體的電鏡照片1.真核生物染色質(zhì)的基本單元——核小體第57頁，課件共89頁，創(chuàng)作于2023年2月核小體：1）組蛋白核心八聚體：2H2a2H2b2H32H4，結(jié)構(gòu)保守有共同起源。2）約146bp的DNA左旋纏繞組蛋白核心八聚體1.65圈3）連接者：H1，核小體連接4）連接DNA：8-144bp，平均55bp每個核小體DNA長度平均200bp。第58頁，課件共89頁，創(chuàng)作于2023年2月真核生物染色體DNA組裝不同層次的結(jié)構(gòu)DNA

（2nm）核小體鏈（11nm，每個核小體200bp）纖絲（30nm，每圈6個核小體）突環(huán)（150nm，每個突環(huán)大約75000bp）玫瑰花結(jié)（300nm，6個突環(huán)）螺旋圈（700nm，每圈30個玫瑰花）染色體（1400nm，每個染色體含10個螺旋圈）P2397/10/202359第59頁，課件共89頁，創(chuàng)作于2023年2月大多數(shù)天然RNA分子是以一條單鏈形式存在的，但在生理條件下，RNA分子也可以形成雙螺旋區(qū)，發(fā)卡式結(jié)構(gòu)，莖-環(huán)結(jié)構(gòu)等二級結(jié)構(gòu)。這樣的結(jié)構(gòu)一般都出現(xiàn)在tRNA和rRNA分子中，RNA的雙螺旋區(qū)的結(jié)構(gòu)類似于A-DNA的結(jié)構(gòu)。四、RNA的高級結(jié)構(gòu)少數(shù)病毒RNA如水稻矮縮病毒、呼腸孤病毒、傷瘤病毒等RNA是雙鏈螺旋，類似于DNA的雙螺旋結(jié)構(gòu)。P239第60頁，課件共89頁，創(chuàng)作于2023年2月（1）占總RNA的15％（2）含有較多修飾成分（3）3′-末端都具有CCAOH（4）5′-末端pG（5）絕大多數(shù)tRNA經(jīng)過折疊形成4莖和4環(huán)組成的特征性三葉草形二級結(jié)構(gòu)。（6）倒L型三級結(jié)構(gòu)（一）tRNA1964Holly.R.鑒定出tRNAphe的二級結(jié)構(gòu)為三葉草形第61頁，課件共89頁，創(chuàng)作于2023年2月tRNA三葉草二級結(jié)構(gòu)

(四臂四環(huán))（1）aa接受臂（aminoacidarm）（2）二氫尿嘧啶環(huán)（dihydrouridineloop,DHUloop）（3）反密碼環(huán)（anticodonloop）（4）額外環(huán)（extraloop）（5）TψC環(huán)（TψCloop）P240第62頁，課件共89頁，創(chuàng)作于2023年2月在tRNA二級結(jié)構(gòu)中未配對的某些并不互補的堿基參與了三級結(jié)構(gòu)中特殊的氫鍵作用；tRNA鏈中的核糖-磷酸骨架與某些堿基甚至其他的骨架之間也能產(chǎn)生作用。tRNA的倒L型三級結(jié)構(gòu)P2411974s.H.Kim等揭示了酵母tRNAphe的三級結(jié)構(gòu)為倒L形第63頁，課件共89頁，創(chuàng)作于2023年2月占總RNA的80％（二）rRNA原核生物真核生物核糖體rRNA核糖體rRNA30s70s50s16s5s、23s40s80s50s18s5s、5.8s、28s真核和原核生物核糖體的組成P241第64頁，課件共89頁，創(chuàng)作于2023年2月16SrRNA的二級結(jié)構(gòu)不同物種來源的16SrRNA一級結(jié)構(gòu)相似性不高，但二級結(jié)構(gòu)很相似。所有rRNA有大量鏈內(nèi)互補序列形成互補配對，使其高度折疊。46%的堿基配對形成50個左右的莖環(huán)結(jié)構(gòu)，組成4個結(jié)構(gòu)域。大腸桿菌E.Coli.16srRNA的結(jié)構(gòu)第65頁，課件共89頁，創(chuàng)作于2023年2月5SrRNA的二級結(jié)構(gòu)第66頁，課件共89頁，創(chuàng)作于2023年2月（三）mRNA等其他RNA的高級結(jié)構(gòu)mRNA的二級結(jié)構(gòu)影響翻譯，是基因表達(dá)調(diào)控的方式之一。返回章核酶的催化功能與其結(jié)構(gòu)密切相關(guān)。P242第67頁，課件共89頁，創(chuàng)作于2023年2月一、核酸的性質(zhì)第三節(jié)核酸的性質(zhì)及研究方法（一）核酸的紫外吸收（二）核酸的兩性解離（三）變性（四）復(fù)性和分子雜交（五）核酸的水解第68頁，課件共89頁，創(chuàng)作于2023年2月1OD260DSDNA50g/mlSSDNA40g/mlRNA40g/ml（一）核酸的紫外吸收1.定性純DNA：A260/A280=1.8純RNA：A260/A280=2.02.定量（純品）P249第69頁，課件共89頁，創(chuàng)作于2023年2月（二）核酸的兩性解離磷酸基比堿基更易解離，故核酸表現(xiàn)為酸性。P247第70頁，課件共89頁，創(chuàng)作于2023年2月DNA分子的變性（三）核酸的變性P250第71頁，課件共89頁，創(chuàng)作于2023年2月理化性質(zhì)：紫外吸收↑粘度↓比旋光度↓生物活性：生物活性↓或喪失核酸變性的概念雙螺旋堿基對氫鍵斷裂，雙鏈變?yōu)閱捂?，天然?gòu)象和性質(zhì)發(fā)生改變。2.變性因素?zé)?、酸堿、變性劑、純水3.核酸變性的表現(xiàn)第72頁，課件共89頁，創(chuàng)作于2023年2月DNA熱變性在紫外吸收上的變化4.熱變性的Tm值(熔點，熔解溫度，變性溫度，解鏈溫度)理化性質(zhì)：紫外吸收↑粘度↓比旋光度↓生物活性：生物活性↓或喪失DNA熱變性時，紫外光吸收增加值達(dá)一半時的溫度。3.核酸變性的表現(xiàn)第73頁，課件共89頁，創(chuàng)作于2023年2月5.影響Tm的因素

1）DNA的均一性越高,Tm的溫度范圍越小。

2）G-C含量越高,Tm的值越大，當(dāng)GC的含量上升1%，則Tm上升0.4℃。馬默多蒂（Marmur-Doty）關(guān)系式：

Tm=69.3+0.41(G+C)%，或GC%=（Tm-69.3）×2.440影響雙螺旋穩(wěn)定3）介質(zhì)的離子強度較高時,Tm的值較大，變性溫度范圍窄。第74頁，課件共89頁，創(chuàng)作于2023年2月

4）酸性條件下,核酸容易脫嘌呤；堿性條件下,核酸容易變性,通常加NaOH降低Tm的值。

5）尿素,甲酰胺等變性劑可以破壞氫鍵降低Tm的值。第75頁，課件共89頁，創(chuàng)作于2023年2月7.RNA的變性雙鏈RNA與DNA雙鏈ianxing相似，但更穩(wěn)定，Tm值更高。單鏈RNA形成局部雙螺旋，性質(zhì)變化程度較小，Tm較低、變性范圍寬。6.增色效應(yīng)第76頁，課件共89頁，創(chuàng)作于2023年2月（四）核酸的復(fù)性及雜交(1)復(fù)性的概念、條件(2)減色效應(yīng)1.復(fù)性P251第77頁，課件共89頁，創(chuàng)作于2023年2月(3)影響復(fù)性速度的因素溫度：Tm-25℃DNA的濃度越高,復(fù)性的速度越快;DNA的片段越大,復(fù)性的速度越慢;

適當(dāng)增高溶液的離子強度,復(fù)性的速度會增高。

DNA的序列越簡單,復(fù)性的速度越快;第78頁，課件共89頁，創(chuàng)作于2023年2月2.分子雜交技術(shù)(1)分子雜交的概念分子雜交是將不同來源的核酸分子分別變性，再混合后復(fù)性，使不同來源的核酸單鏈的互補區(qū)形成雙鏈的技術(shù)。通常將其中的一方用放射性同位素（32P）或特定的基團(tuán)(如生物素,地高辛)標(biāo)記，稱作探針。(2)分子雜交的類型Southern雜交Northern雜交Western印跡技術(shù)Eastern印跡P252第79頁，課件共89頁，創(chuàng)作于2023年2月1975年英國E.M.Southern首創(chuàng)的Southernblotting（Southern印跡）檢出特定的序列第80頁，課件共89頁，創(chuàng)作于2023年2月（3）DNA芯片技術(shù)將人工合成的探針用點樣機點到玻璃或塑料基片上形成高密度的陣列，將樣品DNA用限制性內(nèi)切酶切割成一定大小的片段，變性后用熒光基團(tuán)標(biāo)記，再進(jìn)行分子雜交操作，通過對雜交信號的檢測分析，即可獲得樣品的遺傳信息?；蛐酒哂懈咄浚ㄒ淮蝿幼骺梢酝瓿蓪嶒炇叶鄠€步驟的工作）、高信息量（一張芯片可以完成多種基因的檢測）、快速靈敏、樣品用量少、成本相對低廉等優(yōu)點。P262第81頁，課件共89頁，創(chuàng)作于2023年2月（五）核酸的水解1.酸水解