白蛋白的測(cè)定課件

實(shí)驗(yàn)八溴甲酚綠法測(cè)定血清白蛋白

【目的要求】

1.溴甲酚綠法測(cè)定血清白蛋白含量的實(shí)驗(yàn)原理、關(guān)鍵技術(shù)和特點(diǎn)意義。

2.熟悉穩(wěn)定性試驗(yàn)的基本操作及意義【實(shí)驗(yàn)原理】血清白蛋白在PH4.2的緩沖液中帶正電荷，在有非離子型表面活性劑存在時(shí)，可與帶負(fù)電荷的染料溴甲酚綠（BCG）結(jié)合形成藍(lán)綠色復(fù)合物，在波長(zhǎng)630納米處有光吸收峰，其顏色的深淺與白蛋白濃度成正比，與同樣處理的白蛋白標(biāo)準(zhǔn)比較，可求得血清白蛋白含量。實(shí)驗(yàn)試劑1.溴甲酚綠（BCG）貯存液取BCG419mg，用10ml0.1mol/LNaOH溶解，加NaN3100mg，定容至1000mL。貯于棕色瓶備用。如用溴甲酚綠鈉鹽應(yīng)稱取432mg.加水溶解。2.0.1mol/L檸檬酸緩沖液（pH4.2）分別配制0.1mol/L檸檬酸和檸檬酸鈉溶液，然后按12.3：7.7的體積比例混合。每1000ml混合液加入NaN3100mg。3.30%聚氧化乙烯月桂醚(Brij-35)溶液取Brij-3530g,加少量水，60℃水浴溶解，加水至100ml（此可用Tween-20或Tween-80代替)。4.BCG應(yīng)用液BCG貯存液250ml，0.1mol/L檸檬酸緩沖液（pH4.2)750ml,30%Brij-358ml(也可以用Tween-208ml或Tween-8010ml代替）混合而成。5.標(biāo)準(zhǔn)蛋白溶液（10mg/ml)稱取人白蛋白1.00g，用生理鹽水實(shí)驗(yàn)操作1.白蛋白標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制取4支試管，按下表稀釋標(biāo)準(zhǔn)液：1234白蛋白標(biāo)準(zhǔn)液（ml)0.100.200.400.60生理鹽水(ml)0.900.800.600.40稀釋后白蛋白含量（mg/ml)1.02.04.06.0各管混勻后，另取5支試管，按下表操作：混合后以空白管校零，立即比色，比色波長(zhǎng)為620nm，以光密度為縱坐標(biāo)，相應(yīng)管中的白蛋白濃度為橫坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。01234生理鹽水(ml)0.20————————上述1~4管標(biāo)準(zhǔn)稀釋液（ml)——0.200.200.200.20BCG應(yīng)用液（ml)5.05.05.05.05.02.血清白蛋白測(cè)定用生理鹽水按1：10的比例稀釋血清，取稀釋后的血清0.2ml加入BCG應(yīng)用液5.0ml混勻后立即同上比色，讀取光密度，并從標(biāo)注曲線上查出相應(yīng)的白蛋白濃度。3.白蛋白/球蛋白比值（A/G比值）用雙縮脲法測(cè)定血清標(biāo)本中的總蛋白濃度，用總蛋白濃度減去白蛋白濃度即得球蛋白濃度，并可求的A/G比值：A/G比值=—————————————白蛋白含量總蛋白含量---白蛋白含量參考值：35~50g/L【方法評(píng)價(jià)】1．本法操作簡(jiǎn)便、快速、膽紅素、溶血和中度脂血無(wú)干擾，既可手工操作，也能自動(dòng)化分析，是目前國(guó)內(nèi)測(cè)定血清白蛋白的最常用方法。2．本法線性范圍10-60g/L，RCV＜4%。但該法與溴甲酚紫法比較，對(duì)血清白蛋白特異性稍差。3．血清白蛋白測(cè)定法主要有色氨酸含量法、染料結(jié)合法、電