肝膽生物化學(xué)檢驗課件

肝膽生物化學(xué)檢驗CompanyLogo教學(xué)目標(biāo)[教學(xué)時數(shù)]6學(xué)時熟悉肝膽基本解剖生理功能；熟悉血氨、膽紅素、總蛋白、清蛋白/ALT/ALP等

分析前變異（標(biāo)本收集與前處理）；掌握ALT/ALP/AST/DB/TB/TP/Alb等檢驗方法原理熟悉肝膽酶學(xué)、膽紅素、氨、蛋白等臨床意義CompanyLogo梗阻性黃疸梗阻性黃疸生物化學(xué)標(biāo)記物特點？該患者在被檢驗師開始分離血清時已發(fā)現(xiàn)偏黃，血清偏黃色主要由黃疸引起，有時候為攝入著色劑引起黃疸病通常膽紅素會沉積在皮膚粘膜或眼睛CompanyLogo肝功能評估常見生物化學(xué)指標(biāo)（與功能相關(guān)）酶學(xué)：ALPALTASTGGT5’-NT(核苷酸酶）生物轉(zhuǎn)化及排泄：TBDB合成：TPAlb代謝及排泄：TGTC尿素氨CompanyLogoCompanyLogoCompanyLogo二、肝臟的生物化學(xué)功能排泄功能物質(zhì)代謝功能生物轉(zhuǎn)化重要生化功能CompanyLogo（一）排泄功能主要排泄對象：膽汁酸、膽紅素、氨1、膽汁酸代謝（1）膽汁的分泌：膽汁功能：促進(jìn)脂類的消化吸收，同時能將體內(nèi)某些代謝產(chǎn)物及生物轉(zhuǎn)化產(chǎn)物不斷地排入腸道隨糞便排出體外。膽汁的來源：肝膽汁膽囊膽汁十二指腸膽汁的成分：水/膽汁酸（鹽）、卵磷脂、蛋白質(zhì)、脂肪酸和膽固醇CompanyLogo（2）膽汁酸生成及種類：初級膽汁酸（肝細(xì)胞）次級膽汁酸（腸道）初級游離膽汁酸初級結(jié)合膽汁酸（甘氨酸/?；撬幔┐渭売坞x膽汁酸次級結(jié)合膽汁酸（甘氨酸/?；撬幔〤ompanyLogo（3）膽汁酸肝腸循環(huán)：（4）膽汁酸的功能：①促進(jìn)脂類消化②促進(jìn)脂類吸收③抑制膽固醇從膽汁中析出沉淀游離型膽汁酸結(jié)合型膽汁酸CompanyLogo2、膽紅素代謝膽色素

尿膽素原糞膽素原尿膽素糞膽素膽綠素膽紅素未結(jié)合膽紅素(單核吞噬細(xì)胞系統(tǒng)如骨髓、脾臟)結(jié)合膽紅素（肝臟）膽素原膽紅素代謝概況CompanyLogo部位——肝臟細(xì)胞鳥氨酸瓜氨酸瓜氨酸精氨酸代琥珀酸ATPAMP+PPi延胡索酸鳥氨酸精氨酸H2O尿素天門冬氨酸NH3CO2氨甲酰磷酸+H2O尿素循環(huán)3、氨代謝CompanyLogo（二）物質(zhì)代謝功能1、營養(yǎng)物質(zhì)代謝2、激素及維生素代謝(1)在蛋白質(zhì)代謝中的作用(2)在氨基酸代謝中的作用(3)在糖代謝中的作用(4)在脂代謝中的作用激素的滅活主要在肝臟進(jìn)行多種維生素能在肝細(xì)胞內(nèi)儲存并進(jìn)行轉(zhuǎn)化CompanyLogo膽紅素代謝紊亂生化（一）膽紅素代謝障礙定義:黃疸分類:黃疸和阻塞性黃疸溶血性黃疸肝細(xì)胞性黃疸高膽紅素血癥高膽紅素血癥高膽紅素血癥可分為肝前性、肝性、肝后性肝前性高膽紅素血癥可能為溶血或血紅素代謝旺盛、紅細(xì)胞破壞血紅蛋白增加、鐮狀細(xì)胞貧血引起表現(xiàn)為非結(jié)合膽紅素升高結(jié)合膽紅素正常肝性高膽紅素血癥既可能為未被轉(zhuǎn)運到肝臟或肝臟生物轉(zhuǎn)化功能缺陷引起，前者典型的如吉氏綜合征、后者典型如克-納氏綜合癥新生兒黃疸（缺UDPG轉(zhuǎn)移酶）表現(xiàn)為非結(jié)合和結(jié)合膽紅素都升高肝酶學(xué)指標(biāo)如ALTAST多升高表明肝臟有炎癥或肝細(xì)胞有損傷CompanyLogo肝后性高膽紅素血癥通常為結(jié)石、腫瘤、疤痕引起膽管堵塞，表現(xiàn)為結(jié)合膽紅素升高，非結(jié)合膽紅素正常，ALPGGT升高脂類代謝異常其他影像學(xué)檢查可輔助診斷梗阻部位該例患者最后被診斷為膽結(jié)石CompanyLogo案例2一新生兒從第三天總膽紅素開始升高母親O型新生兒A型接受光療（450nm）轉(zhuǎn)化非結(jié)合膽紅素，否則導(dǎo)致膽紅素穿過新生兒血腦屏障，發(fā)生腦癱耳聾智力低下并監(jiān)測膽紅素家屬尋求合理的解釋CompanyLogo生理性黃疸：2-3天出現(xiàn)，4天開始好轉(zhuǎn)，也可能持續(xù)2周一般非結(jié)合膽紅素升高肝酶學(xué)正常其他原因：溶血性疾病、先天性膽管閉鎖、新生兒特發(fā)性肝炎導(dǎo)致持續(xù)升高溶血性黃疸主要是免疫機(jī)制引起溶血屬于肝前性其檢查方法？CompanyLogoCompanyLogo血清膽紅素測定重氮鹽法膽紅素氧化酶(bilirubinoxidase,BOD)法高效液相色譜法(highperformanceliquidchromatography,HPLC)、導(dǎo)數(shù)分光光度法直接分光光度計法測定方法CompanyLogo1．重氮鹽改良J-G(JendrassikandGrofmethod,J-G)法(1)原理:

血清中結(jié)合膽紅素與重氮鹽反應(yīng)生成偶氮膽紅素；同樣條件下，游離膽紅素需要在加速劑作用下，使游離膽紅素分子內(nèi)的次級鍵斷裂，極性上升并與重氮試劑反應(yīng)。反應(yīng)完成后加入終止試劑，繼而加入堿性酒石酸鉀鈉使紫色偶氮試劑轉(zhuǎn)變?yōu)樗{(lán)色，波長600nm下比色分析，求出血樣中總膽紅素的含量。

(2)方法評價：

推薦的常規(guī)方法，其方法的線性范圍較寬，在342μmol/L(200mg/L)濃度下有較好的準(zhǔn)確性和精確性，高濃度時準(zhǔn)確性和精確性降低。因此，建議濃度過高時減少血樣用量測定。

CompanyLogo【臨床意義】【參考范圍】

黃疸的鑒別診斷總膽紅素:5.1～19.0μmol/L(0.3～1.1mg/dL)直接膽紅素:1.71～6.8μmol/L(0.1～0.4mg/dL)CompanyLogo2．膽紅素BOD測定法(1)原理:BOD在不同pH條件下催化不同組份的膽紅素氧化生成膽綠素，膽綠素與氧進(jìn)行非酶促反應(yīng)轉(zhuǎn)變?yōu)榈仙衔?，膽紅素的最大吸收峰在450nm

附近。隨著膽紅素被氧化,450nm下降，下降程度與膽紅素濃度成正比。；在pH8.0條件下,未結(jié)合膽紅素及結(jié)合膽紅素均被氧化，用于測定總膽紅素,在pH=4.5的酸性條件下，BOD僅能催化結(jié)合膽紅素和大部分δ膽紅素，而游離膽紅素不被氧化，測定其含量代表結(jié)合膽紅素。(2)方法評價：BOD法測定總膽紅素的準(zhǔn)確性、精密度比改良J-G法好

CompanyLogo【參考范圍】血清總膽紅素：10.26±4.10μmol/L血清結(jié)合膽紅素：2.57±2.56μmol/L膽紅素μmol/L=膽紅素mg/LX17.1【臨床意義】見重氮比色法CompanyLogo尿膽素原測定新鮮標(biāo)本（受膽紅素干擾可能被氧化為尿膽素）方法：埃里希反應(yīng)（試劑酸性對二甲基苯甲醛紅色）

膽紅素干擾排除：氯化鋇沉淀過濾CompanyLogo膽汁酸代謝障礙1、膽汁酸合成障礙2、膽汁酸向腸道排出障礙3．膽汁酸腸肝循環(huán)紊亂4．膽汁瘀積病變時膽汁酸代謝紊亂CompanyLogo血清膽汁酸測定高效液相色譜法放射免疫分析法酶免疫分析法比色分析測定法測定方法CompanyLogo(1)酶比色法測定原理3α-HSD膽汁酸+NAD+3-氧-5β類固醇+NADH（1）

NADH+NBT甲jie（藍(lán)色化合物λ=540nm）（2）

3-氧-5β類固醇+NAD+3-氧-5β類固醇+NADH（3）黃遞酶△4-DH酶比色法CompanyLogo由于膽汁酸在血中含量低，方法檢測的靈敏度達(dá)不到要求，通過增加3-氧-5β-類固醇脫氫酶(△4-DH)，膽汁酸經(jīng)3α-HSD催化的產(chǎn)物3-氧代膽酸在△4-DH作用下再次脫氫，加大了NADH的生成量，提高了反應(yīng)的檢測能力（見反應(yīng)式1、2、3）。但以上兩種方法都存在一個缺點：生成的藍(lán)色產(chǎn)物是一種染料，易于附著管壁，難于清洗或堵塞管道。酶循環(huán)法測定原理為：NAD+

Thio-NADThio-NADH膽汁酸3-氧代膽汁酸NADH3α-HSDCompanyLogo(2)酶比色測定法評價：快速、簡便、準(zhǔn)確、可靠和適用的優(yōu)點。它即可以手工操作、也可以在自動化儀器上進(jìn)行。但試劑價貴、不易保持。對酶量的要求嚴(yán)格，以保證酶促反應(yīng)在零級反應(yīng)下進(jìn)行，酶量不足易產(chǎn)生誤差。此外，標(biāo)準(zhǔn)品的制備非常重要。常采用甘氨膽酸溶入小牛血清中制成凍干品。

【參考范圍】1～7μmol/L

(成人空腹血清總膽汁酸)血清膽汁酸測定的臨床意義1、總膽汁酸測定①肝細(xì)胞微損傷確定診斷價值指標(biāo)②高膽紅素血癥與膽汁瘀積的區(qū)別◆

TBA測定正常而膽紅素升高，可視為高膽紅素血病◆

TBA升高，膽紅素正常為膽汁瘀積◆兩者均升高考慮為膽汁瘀積性黃疸2、膽汁酸比值測定★膽道梗阻時，患者血清中CA和CDCA升高，以CA為主，CA/CDCA>1?！锔螌嵸|(zhì)細(xì)胞損壞時，血清中以CDCA為主，CD/CDCA<1因此，CA/CDCA比值可作為鑒別梗阻性病變黃疸和肝細(xì)胞病變（黃疸）的指標(biāo)。3、其它★藥物：所致的中毒性肝炎、早期TBA↑★

指示回腸病變或功能紊亂的指標(biāo)★膽汁酸耐量試驗

任何引起肝細(xì)胞損傷的病理過程都可能引起血中膽汁酸升高可見于各種類型的肝病、肝硬化、脂肪肝，也見于急慢性膽道阻塞。其中空腹膽汁酸測定是一種敏感、特異性強(qiáng)并相對簡單的肝功能試驗，是目前公認(rèn)最敏感的肝功能試驗之一。特別適用于可疑有肝病但其它生化試驗正?；蜉p度異常的病人診斷。案例359歲女性未明原因發(fā)燒瘙癢血清棕黃色CompanyLogoCompanyLogo血漿酶紊亂檢驗1．肝臟合成酶類:膽堿脂酶、凝血因子、銅藍(lán)蛋白；2.肝細(xì)胞內(nèi)酶:

ALT、AST

3．肝臟阻塞性疾病酶活性改變：ALP、GGT4．肝硬化疾病酶活性改變：單胺氧化酶（MAO）

CompanyLogo酶活性測定的基本知識酶活性的概念酶活性單位酶活性單位的計算酶促反應(yīng)進(jìn)程酶促反應(yīng)底物動力學(xué)CompanyLogo一、酶活性的概念

酶活性即酶促反應(yīng)速度，指在規(guī)定條件下單位時間內(nèi)底物的減少量或產(chǎn)物的生成量。底物濃度為〔S〕,產(chǎn)物濃度為〔P〕,時間為t，反應(yīng)速度為vv=-d〔S〕/dt或v=d〔P〕/dt。注：在實際測定酶促反應(yīng)速度時，以測定單位時間內(nèi)產(chǎn)物的生成量為好。CompanyLogo二、酶活性單位定義：指在一定條件下使酶促反應(yīng)達(dá)到某一速度時所需要的酶量。酶活性單位是一個人為規(guī)定的標(biāo)準(zhǔn)。慣用單位：酶活性測定方法的建立者所規(guī)定的單位。國際單位：1IU指在規(guī)定條件（最適pH，最適底物濃度）下，每分鐘轉(zhuǎn)化1mol底物的酶量。單位為IU/L。Katal單位：1Katal指在規(guī)定條件下，每秒鐘轉(zhuǎn)化1mol底物的酶量，1Katal=60×106IU。CompanyLogo三、酶活性單位的計算步驟：運用公式進(jìn)行計算。明確測定方法的酶單位定義，按照酶單位定義確定物質(zhì)量、體積和時間的單位，CompanyLogo計算公式:

產(chǎn)物的增加量每單位規(guī)定的保溫時間1000（ml）酶單位/升=—————————×——————————×————————

每單位規(guī)定的產(chǎn)物增加量實際保溫時間實際標(biāo)本用量（ml）分光光度法測定的公式：

（A測定–A對照）·V總·106

每單位規(guī)定的保溫時間酶單位/升=——————————————×——————————

·L·V標(biāo)實際保溫時間CompanyLogo四、酶促反應(yīng)進(jìn)程酶促反應(yīng)進(jìn)程曲線CompanyLogo酶量的測定：通過酶活性測定間接測得酶的含量，因此，要準(zhǔn)確測定酶量，應(yīng)使酶濃度（〔E〕）與酶促反應(yīng)速度成正比，即〔E〕∝-d〔S〕/dt或〔E〕∝d〔P〕/dt。能夠真正代表酶活性大小的是線性期的酶促反應(yīng)速度，即酶促反應(yīng)初速度。

酶活性測定時首先要確定線性期，在此期測定反應(yīng)速度才能準(zhǔn)確代表酶活性。酶的含量酶活性酶促反應(yīng)初速度CompanyLogo五、酶促反應(yīng)底物動力學(xué)中間產(chǎn)物學(xué)說：酶促反應(yīng)進(jìn)行時，酶首先與底物結(jié)合為中間產(chǎn)物，然后再催化底物反應(yīng)生成產(chǎn)物。E+SES→E+P

CompanyLogo米-曼氏方程：

Vmax〔S〕v=—————〔S〕+Km上式中v代表反應(yīng)速度，Vmax代表最大反應(yīng)速度，〔S〕代表底物濃度，Km稱為米氏常數(shù)。CompanyLogo（一）米氏常數(shù)的定義由米-曼氏方程可以導(dǎo)出：（Vmax-v）〔S〕Km=———————

v當(dāng)v=1/2Vmax時，Km=〔S〕。因此Km值為反應(yīng)速度相當(dāng)于最大反應(yīng)速度一半時的底物濃度。Km值是酶的特征常數(shù)，具有重要的應(yīng)用價值。CompanyLogo（二）Km值的應(yīng)用1.鑒定酶的種類

Km值是酶的特征常數(shù)，在反應(yīng)條件一定時，只與酶的種類和底物的性質(zhì)有關(guān)，與酶的濃度無關(guān)。不同種類的酶其Km值不同，對于一種未知的酶，可在規(guī)定的條件下測定其Km值加以鑒定。CompanyLogo表7-1某些酶的Km值酶底物Km(mmol/L)乳酸脫氫酶丙酮酸0.017己糖激酶D-葡萄糖0.05D-果糖1.5-半乳糖苷酶D-乳糖4.0碳酸酐酶H2CO39.0過氧化氫酶H2O225蔗糖酶蔗糖28糜蛋白酶甘氨酰酪氨酰甘氨酸108CompanyLogo2.反映酶與底物的親合力Km值越大，酶與底物親合力越小，Km值越小，酶與底物親合力越大。3.選擇酶的最適底物

Km值取決于酶的種類和底物的性質(zhì)，在酶一定時，不同底物有不同的Km值。酶活力測定時，應(yīng)優(yōu)先選擇酶的最適底物，使酶促反應(yīng)容易進(jìn)行，并節(jié)省底物用量。CompanyLogo4.計算不同底物濃度時酶促反應(yīng)速度相當(dāng)于最大反應(yīng)速度的比率根據(jù)米-曼氏方程可以計算5.設(shè)計適宜的底物濃度酶促反應(yīng)進(jìn)程曲線表明，只有初速度才能真正代表酶活性，一般要求初速度達(dá)到最大速度的90%～95%、底物消耗率為1%～5%。這樣既可以近似地表示酶活性，又不致于使底物濃度過高而造成浪費。CompanyLogo(三)Vmax的應(yīng)用定義：Vmax指酶完全被底物分子飽和時的反應(yīng)速度。

應(yīng)用：

Vmax可用來計算酶的轉(zhuǎn)化率（TN），即單位時間內(nèi)每分子酶可使底物發(fā)生化學(xué)反應(yīng)的分子數(shù)，單位為分子數(shù)/秒。當(dāng)反應(yīng)速度達(dá)到最大反應(yīng)速度時，如果已知酶量，則可計算出酶的轉(zhuǎn)化率：

TN=底物轉(zhuǎn)化量（mol/s）/酶量（mol）CompanyLogo(四)Km和Vmax的測定1．Linweaver-Burk作圖法,又稱為雙倒數(shù)作圖法

1Km+〔S〕Km11——=—————=———·——+———vVmax〔S〕Vmax〔S〕VmaxCompanyLogo2．Cornish-Bowden作圖法又稱為直線線性作圖法。CompanyLogo同工酶測定同工酶的定義同工酶產(chǎn)生的機(jī)理同工酶的測定方法CompanyLogo同工酶的定義是催化功能相同，但是分子組成及理化性質(zhì)不同的一組酶，是在同一種屬中由不同基因位點或等位基因編碼的多肽鏈單體、純聚體或雜多體。CompanyLogo一、同工酶產(chǎn)生的機(jī)理（一）由不同基因位點編碼（二）由等位基因編碼（三）由多肽鏈化學(xué)修飾產(chǎn)生CompanyLogo二、同工酶的測定方法（一）按照理化性質(zhì)不同進(jìn)行分離鑒定1．電泳法

同工酶氨基酸組成不同，等電點不同，電泳遷移率也就不同，據(jù)此可用電泳法分離鑒定。

2．層析法根據(jù)同工酶分子荷電量不同，可用離子交換層析法加以分離。CompanyLogo（二）按照底物專一性不同進(jìn)行鑒定同工酶底物專一性不同，Km值也不同。如果同工酶之間的Km值差別足夠大，可以通過測定其Km值加以鑒定。（三）按照最適pH不同進(jìn)行鑒定同工酶分子氨基酸組成不同，最適pH也不同。如果同工酶最適pH之間的差別足夠大，可以通過調(diào)節(jié)緩沖溶液的pH值加以鑒定。CompanyLogo（四）按照免疫學(xué)特性不同進(jìn)行分離鑒定（五）按照耐熱程度不同進(jìn)行鑒定（六）選擇性抑制法CompanyLogo酶學(xué)分析在臨床診斷上的應(yīng)用血漿酶的來源酶的區(qū)域化分布酶活性測定在臨床診斷中的應(yīng)用同工酶的診斷價值CompanyLogo一、血漿酶的來源血漿酶血漿特異酶非血漿特異酶外分泌酶細(xì)胞內(nèi)酶CompanyLogo二、酶的區(qū)域化分布表7-3診斷常用血清酶的來源血清酶符號來源鳥氨酸氨基甲酰轉(zhuǎn)移酶OCT肝卵磷脂膽固醇?；D(zhuǎn)移酶LCAT肝谷氨酸脫氫酶GLDH肝山梨醇脫氫酶SDH肝丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶ALT肝、腎、心異檸檬酸脫氫酶ICD肝、胎盤、心-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶-GT

肝、膽、腎、小腸5ˊ-核苷酸酶5ˊ-NT肝、膽道單胺氧化酶MAO肝、腎、腦天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶AST心、肝、骨骼肌肌酸激酶CK骨骼肌、心、腦乳酸脫氫酶LDH心、腎、骨骼肌、肝、肺堿性磷酸酶ALP小腸、胎盤、肝、腎酸性磷酸酶ACP前列腺、紅細(xì)胞、血小板淀粉酶AMS胰、唾液腺脂肪酶LPS胰CompanyLogo三、酶活性測定在臨床診斷中的應(yīng)用（一）在肝臟疾病診斷中的應(yīng)用（二）在急性心肌梗死診斷中的應(yīng)用（三）在急性胰腺炎診斷中的應(yīng)用（四）在骨骼疾病診斷中的應(yīng)用（五）在肌肉疾病診斷中的應(yīng)用（六）在前列腺疾病診斷中的應(yīng)用（七）在腫瘤診斷中的應(yīng)用四、同工酶的診斷價值CompanyLogo血清酶測定（一）氨基轉(zhuǎn)移酶測定1．賴氏法測定ALT（１）原理：

（２）方法評價：①賴氏法的實驗結(jié)果需與卡門分光法的結(jié)果對比后求出；②NaOH的濃度對顯色有影響；③該法的重復(fù)性差。CompanyLogo【參考范圍】

5～25卡門氏單位【臨床意義】(2)慢性活動性肝炎或脂肪肝：(1)肝細(xì)胞損傷的靈敏指標(biāo):ALT輕度增高(100～200IU),或?qū)僬７秶?CompanyLogo2.連續(xù)監(jiān)測法測定ALT（１）原理：

采用酶偶聯(lián)反應(yīng),即L-丙氨酸和α-酮戊二酸在ALT作用下，生成丙酮酸和L-谷氨酸。丙酮酸再在LD作用下生成L-乳酸，同時NADH被氧化為NAD+,可在340nm處連續(xù)監(jiān)測到NADH的消耗量,從而計算出ALT活性濃度。

雙試劑法

:首先使血清與缺少α-酮戊二酸的底物溶液混合，37℃保溫5分鐘，將標(biāo)本中所含的α-酮酸(如丙酮酸)消耗完，然后，加入α-酮戊二酸啟動ALT催化的反應(yīng)，在波長340nm處連續(xù)監(jiān)測吸光度下降速率。根據(jù)線性反應(yīng)期吸光度下降速率(-△A/min)，來計算ALT的活性。CompanyLogo（２）方法評價：①存在著兩個副反應(yīng)，會使測定結(jié)果偏高；A、血清中存在的α-酮酸(如丙酮酸)能消耗NADH。B、血清中谷氨酸脫氫酶(GLDH)增高時，在有氨存在條件下，亦能消耗NADH。

②雙試劑法，因溫育期長，能有效地消除干擾反應(yīng)，測定準(zhǔn)確性高，是ALT測定的首選方法；③血清不宜反復(fù)冰凍保存，以免影響酶活性；避免使用溶血標(biāo)本。CompanyLogo3.賴氏法測定AST（１）原理：

血清中的AST可催化門冬氨酸(aspartate)與α-酮戊二酸間的氨基移換，生成草酸乙酸(oxaloacetate)和L-谷氨酸。草酸乙酸自行脫羧轉(zhuǎn)變成為丙酮酸。反應(yīng)60分鐘后，加入2，4-二硝基苯肼終止反應(yīng)，并與酮酸生反應(yīng)生成兩種2，4-二硝基苯腙。在堿性條件下,兩種苯腙的吸收光譜曲線有差別，在505nm處差異最大，由草酸乙酸轉(zhuǎn)變成的丙酮酸所生成的苯腙呈色強(qiáng)度顯著大于α-酮戊二酸苯腙。據(jù)此可用比色法測定AST活性。

（２）方法評價：①賴氏法的實驗結(jié)果需與卡門分光法的結(jié)果對比后求出；②該法的重復(fù)性差：負(fù)干擾現(xiàn)象

CompanyLogo【參考范圍】

8～28卡門氏單位【臨床意義】肌炎、胸膜炎、腎炎及肺炎：血清AST也可輕度增高。心肌梗死：血清中AST活性增高各種肝病病人：血清AST的升高CompanyLogo4．連續(xù)監(jiān)測法測定AST（１）原理：

采用酶偶聯(lián)反應(yīng),即L-門冬氨酸和α-酮戊二酸在AST作用下，生成草酰乙酸和L-谷氨酸。草酰乙酸在蘋果酸脫氫酶作用下生成L-蘋果酸，同時伴有NADH轉(zhuǎn)化為NAD+，在340nm監(jiān)測NADH的轉(zhuǎn)化速率，從而計算出AST的活性。

雙試劑法

:同ＡＬＴ測定。CompanyLogo（２）方法評價

誤差可來自內(nèi)源性和(或)外源性內(nèi)源性干擾主要來自血清中高濃度丙酮酸和L-谷氨酸脫氫酶(GLDH)。外源性干擾來自試劑中污染的GLDH和AST。

【參考范圍】

5～40IU/L(連續(xù)監(jiān)測法測定)

【臨床意義】

見賴氏法CompanyLogo(二)ALP測定化學(xué)法連續(xù)監(jiān)測法：鮑氏法金氏法皮氏法CompanyLogo１、金氏法測定ALP（１）原理：

ALP在堿性環(huán)境中作用于磷酸苯二鈉，使之水解釋放出酚和磷酸。酚在堿性溶液中與4－氨基安替比林作用，經(jīng)鐵氰化鉀氧化形成紅色醌類化合物，根據(jù)紅色深淺確定ALP的活力。(2)方法評價：

磷酸苯二鈉比色法與更早的β-甘油磷酸鈉法相比具有較大的優(yōu)點，如水解速度快，保溫時間較短、靈敏度較高、顯色穩(wěn)定、不需去蛋白、操作簡單、快速。但與磷酸對硝基酚連續(xù)監(jiān)測法相比，準(zhǔn)確度、精密度較低；操作比較繁瑣,，靈敏度低。CompanyLogo【參考范圍】成人：3～13單位，兒童：5～28單位

ALP金氏單位定義是100ml血清，37℃與底物保溫15分鐘，產(chǎn)生1mg酚為1個金氏單位。ALP主要用于診斷肝膽和骨骼疾病【臨床意義】CompanyLogo2.連續(xù)監(jiān)測法測定ALP（1）原理：以磷酸對硝基酚(p-nitrophenylphosphate,4-NPP)為底物，2-氨基-2-甲基-1,3-丙醇（2-amino-2-methyl-1-propanol,AMP）或二乙醇胺為磷酸基的受體。在堿性環(huán)境下，ALP催化4-NPP水解產(chǎn)生游離的對硝基酚，對硝基酚(p-nitrophenol，4-NP)在堿性溶液中轉(zhuǎn)變成黃色。根據(jù)405nm處吸光度增高速率來計算ALP活性單位。（2）方法評價：線性范圍可達(dá)500U/L，批內(nèi)CV為2.06%～2.36%，批間CV為2.74%。CompanyLogo【參考范圍】男性：1～12歲<500U/L,女性：1～12歲<500U/L

12～15歲<750U/L，>15歲40～150U/L，

>25歲40～150U/L?！九R床意義】

見金氏法CompanyLogo(三)GGT測定法化學(xué)法（重氮反應(yīng)比色法）和連續(xù)監(jiān)測法。1.重氮反應(yīng)比色法測定GGT原理：

【參考范圍】男性3～17U/L；女性2～13U/L2.連續(xù)監(jiān)測法測定GGT(1)原理：

(2)方法評價：

(2)方法評價：重氮比色法活性單位：100ml血清在37℃下反應(yīng)1hr,生成0.5μmol的α-苯胺為1個GGT活性單位。男性：11～50U/L；(以γ-谷氨酰-3-羧基-4-硝基苯胺為底物)女性：7～32U/L

男性：≤40U/L；女性：≤30U/L(以γ-谷氨酰-4-硝基苯胺為底物)【參考范圍】CompanyLogo(四)MAO測定原理:

MAO主要作用于CH2-NH2基團(tuán)，在氧參與下，氧化脫氨生成相應(yīng)的卞醛、氨及過氧化氫。以芐氨偶氮-β-萘酚為底物,在O2和H20參與下，MAO催化生成芐醛偶氮-β-萘酚、氨及過氧化氫，用環(huán)己烷抽提后進(jìn)行比色測定。(2)方法評價：【單位定義】：

1ml血清與底物在37℃孵育60分鐘，催化單胺氧化產(chǎn)生1nmol芐醛偶氮-β-萘酚為1個MAO單位。【參考范圍】12～40U/ml(12×103～40×103U/L)。【臨床意義】：肝硬化時，肝纖維化現(xiàn)象十分活躍，MAO活性明顯升高。

CompanyLogo討論：膽酶分離現(xiàn)象？CompanyLogo肝炎患者肝臟受損時，血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶ALT、谷草轉(zhuǎn)氨酶AST和膽紅素升高是同步的。但有時會出現(xiàn)另外一種情況，患者谷丙轉(zhuǎn)氨酶升高與膽紅素升高“不同步”，或是谷丙轉(zhuǎn)氨酶升高遠(yuǎn)不如膽紅素升高明顯，即出現(xiàn)所謂膽酶分離現(xiàn)象。表明肝細(xì)胞大量壞死或淤膽型肝炎CompanyLogo血漿蛋白質(zhì)紊亂檢驗一、血漿蛋白質(zhì)的組成、功能及分類1、血漿蛋白質(zhì)的組成：

2、血漿蛋白質(zhì)的功能：

①

營養(yǎng)作用

②維持膠體滲透壓③維持正常PH

④運輸作用⑤免疫與防御功能⑥催化作用⑦抑制組織蛋白酶⑧代謝調(diào)節(jié)⑨凝血、抗凝血及纖溶作用。免疫功能:

IgA、IgG、IgM、C3、C4、Kap、Lam、IgGsubclasses1-4、IgE、C1抑制物腎臟功能:

白蛋白、轉(zhuǎn)鐵蛋白、IgG、a1-微球蛋白、B2-微球蛋白、a2-巨球蛋白、

Kap-輕鏈、Lam-輕鏈、CystatinC炎癥:

CRP、a1-酸性糖蛋白、觸珠蛋白、a1-抗胰蛋白酶、銅蘭蛋白、纖維蛋白原、SAA類風(fēng)濕性疾病:

RF、ASL、CRP、ADNaseB心血管疾病: ApoA-I、ApoB、ApoAII、ApoE、Lp(a)、肌紅蛋白、纖維蛋白原、hsCRP

營養(yǎng)監(jiān)測:

前白蛋白、白蛋白、視黃醇結(jié)合蛋白、轉(zhuǎn)鐵蛋白、鐵蛋白出/凝血疾病:

纖維蛋白原、AT3、纖溶酶原貧血:

觸珠蛋白、轉(zhuǎn)鐵蛋白、鐵蛋白、可溶性轉(zhuǎn)鐵蛋白受體

涵蓋最廣泛的臨床檢測指標(biāo)氨基酸性質(zhì)：兩性電離及等電點、紫外吸收、呈色反應(yīng)。生物大分子：膠體性質(zhì)、變性、沉淀和凝固等特點。

蛋白質(zhì)性質(zhì)蛋白質(zhì)的分離透析、沉淀、鹽析、電泳、層析、超速離心血漿蛋白質(zhì)的分類根據(jù)分離方法：①鹽析法：白蛋白和球蛋白兩大類（各種蛋白質(zhì)的親水性和所帶的電荷均有差別。）②電泳法（醋酸纖維素薄膜）：白蛋白、α1－球蛋白、α2

－球蛋白、β

－球蛋白、纖維蛋白原、γ－球蛋白。

3、血漿蛋白質(zhì)的分類白蛋白（40－60％）α1-球蛋白（α1-抗胰蛋白酶、血清類粘蛋白、α1-酸性糖蛋白、甲胎蛋白）α2-球蛋白（α-脂蛋白、觸珠蛋白、銅藍(lán)蛋白、α2-巨球蛋白）β-球蛋白（轉(zhuǎn)鐵蛋白、血紅素結(jié)合蛋白、β微球蛋白、纖維蛋白原、

β脂蛋白、補(bǔ)體）

γ-球蛋白（各種免疫球蛋白主要位置及C-反應(yīng)蛋白）電泳法分類根據(jù)生理功能分類：1、白蛋白（albumin,Alb)

肝實質(zhì)細(xì)胞合成，分子量66458，

半衰期15～19天，是血漿中含量最多的蛋白質(zhì)，占40～60％。

★二、一些臨床常檢測血漿蛋白質(zhì)

由于白蛋白在血漿中濃度高而且分子量小，其主要生理功能是維持血液膠體滲透壓。

另外，白蛋白能結(jié)合諸如膽紅素之類的疏水分子。在體內(nèi)擔(dān)負(fù)轉(zhuǎn)運各種離子、酶類、脂溶性物質(zhì)、激素和藥物的功能。在機(jī)體營養(yǎng)作用中也起重要作用。

參考范圍：血清白蛋白35～55g／L

1）血液中的白蛋白2）腦脊液中的白蛋白CSF中白蛋白全部來自血液。

CSF中白蛋白增高與血腦屏障通透性增高有關(guān)?？梢娪诙喟l(fā)性硬化癥、病毒性腦炎或腦膜炎、細(xì)菌性腦膜炎等顱內(nèi)和椎管內(nèi)炎癥性疾病和某些神經(jīng)系統(tǒng)疾病。參考范圍：CSF白蛋白134～237mg／L3）、微量白蛋白尿（MA）尿ALB

正常成人尿ALB大約3.90～24.4mg/24h

兒童尿ALB0～13.3mg/24h

尿Alb／Cr(肌酐)<2.5mg／mmol

尿中蛋白超過以上數(shù)值則稱蛋白尿。

肝細(xì)胞合成，分子量54000，半衰期1.9天。2、前白蛋白（prealbumin,PA）參考范圍生理功能

臨床意義PA0.18~0.45g/L1、組織修補(bǔ)2、運載功能降低具有意義：營養(yǎng)不良、急性炎癥、惡性腫瘤、肝硬化、腎炎時血清濃度降低。Alb36~46g/L1、營養(yǎng)2、膠體滲透壓3、維持PH4、運輸作用增高：嚴(yán)重失水、輸入過多減少：丟失、肝臟疾病、消耗性疾病、腹水形成、腎病、嚴(yán)重感染、膠原病。★3、轉(zhuǎn)鐵蛋白（transferrin,TRF或Tf）由肝及單核吞噬細(xì)胞系統(tǒng)合成，分子量76500，位于β－球蛋白區(qū)帶，負(fù)責(zé)運載消化管吸收的及紅細(xì)胞降解釋放的鐵，以轉(zhuǎn)鐵－Fe3+復(fù)合物的形式進(jìn)入骨髓，用于合成血紅蛋白。半衰期7天。【參考范圍】2.5-4.3g/L【臨床意義】①屬急性時相反應(yīng)蛋白②并用于貧血的診斷,缺鐵性低色素貧血血漿轉(zhuǎn)鐵蛋白含量增高,但鐵的飽和度很低；紅細(xì)胞對鐵利用障礙引起貧血時，血漿轉(zhuǎn)鐵蛋白正?；蚪档?，但鐵的飽和度增加。3、轉(zhuǎn)鐵蛋白（transferrin,TRF或Tf）

由淋巴細(xì)胞合成，存在于所有有核細(xì)胞的表面，特別是淋巴細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞。可自由通過腎小球濾過膜，但在腎小管幾乎全部重吸收，被重吸收的β2－微球蛋白在腎小管細(xì)胞完全降解。4、β2－微球蛋白（β2－microgluobin,BMG或β2－m）【參考范圍】1.0-2.5mg/L(血清)；尿：0.2mg/L以下【臨床意義】血漿β2－微球蛋白含量升高見于炎癥、腫瘤、各種類型白血病及腎功能衰竭，尿毒癥患者血清β2－微球蛋白可達(dá)40mg/L。4、β2－微球蛋白（β2－microgluobin,BMG或β2－m）

2微球蛋白（2m）血清升高：腎小球濾過功能低下，慢、急性腎炎，腎功能不全腎前性：病毒感染，免疫疾患（SLE，Sjogren），惡性腫瘤。

尿中升高：

腎前性

腎小管障礙：

Fanconi，氨基甙類抗生素，重金屬中毒，

Wilwon，燒傷。

腎小球障礙5、C-反應(yīng)蛋白(C-reactiveprotein,CRP)★第一個被認(rèn)定為急性時相反應(yīng)蛋白,★由肝細(xì)胞合成,可結(jié)合多種細(xì)菌、真菌及原蟲體對內(nèi)的多糖?！锬芗せ钛a(bǔ)體，引發(fā)調(diào)理作用，增強(qiáng)細(xì)胞的吞噬功能，對血小板凝聚和血塊收縮有抑制作用。γ-球蛋白（各種免疫球蛋白主要位置及C-反應(yīng)蛋白）★5、C-反應(yīng)蛋白(C-reactiveprotein,CRP)【參考范圍】＜8.0mg/L【臨床意義】作為急性時相反應(yīng)的一個敏感指標(biāo),C-反應(yīng)蛋白在心肌梗死、創(chuàng)傷、感染、外科手術(shù)、腫瘤侵潤時其血漿含量在24－48小時內(nèi)迅速升高，可達(dá)到正常水平的2000倍。

6、1酸性糖蛋白（1-AG）

升高：急、慢性感染，AMI，腎炎，結(jié)締組織病，自身免疫，過敏，惡性腫瘤。0.25-2.0g/L,是電泳1-球蛋白含量最高部分,

但著色很淺。7、1抗胰蛋白酶（1-AT）升高：感染，腫瘤，膠原病，妊娠，術(shù)后藥物服用（口服避孕藥，激素……）降低：遺傳性：1-AT缺乏癥后天性：ARDS，重癥肝炎，腎炎，肺損傷，蛋白丟失，營養(yǎng)不良，早產(chǎn)兒，腎移植早期排異。0.83-1.99g/L，是電泳1-球蛋這一區(qū)帶顯色的主要成分8、銅蘭蛋白（ceruloplasmin,CP）

血清中降低：先天異常；

Wilson病，

Menkes綜合癥，營養(yǎng)不良，肝疾患，蛋白丟失，新生兒。血清中升高：腫瘤，感染，

AMI，貧血，膽道梗阻，膠原病，妊娠，肺氣腫，藥物，吸煙。199、觸珠蛋白（haptoglobin,HP）血清中降低：血管內(nèi)、外溶血，合成減低，手術(shù)（開胸術(shù)）自家輸血ABO不適合骨髓移植，燒傷后腎功不全，瘧疾，慢性丙型肝炎，自身免疫性溶貧；腎功能不全，自尿中漏出。

血清中升高：

AMI，內(nèi)源性發(fā)熱，腫瘤……。10、2-巨球蛋白（2-macroglobin,2MG）血清中2MG降低：惡性腫瘤，RA，DIC，溶栓療法，AMI，COPD，尿毒癥，肌萎縮性側(cè)索硬化，胰腺炎，潰瘍性結(jié)腸炎，術(shù)后。遺傳性2MG缺乏。升高：慢性炎癥，肝炎，腎炎，慢性肝病，糖尿病。

纖維蛋白原4.0%

α2-巨球2.93%

觸珠蛋白2.2%

銅蘭蛋白0.53%

α1抗胰蛋白酶1.99%

α1酸性糖蛋白2.0%前白蛋白0.45%

轉(zhuǎn)鐵蛋白4.3%白蛋白55%

其他26.59%細(xì)胞遭到破壞合成減低異常表達(dá)1、炎癥、創(chuàng)傷:

在急性炎癥或某些組織損傷時,有些血漿蛋白質(zhì)含量會增高,有些會降低,這些血漿蛋白質(zhì)并被稱為急性時相反應(yīng)蛋白(acutephasereactants,APR)。包括：1－抗胰蛋白酶、1－酸性糖蛋白、結(jié)合珠蛋白、銅蘭蛋白、C3、C4、C－反應(yīng)蛋白、纖維蛋白原、前白蛋白、白蛋白、轉(zhuǎn)鐵蛋白等。三、疾病時的體液蛋白質(zhì)

臨床常用炎癥的標(biāo)志物

(急性時相蛋白)

CRP

a1-酸性糖蛋白觸珠蛋白

a1-抗胰蛋白酶銅藍(lán)蛋白纖維蛋白原CRP

特性正常含量低（<5.0mg/L）炎癥反應(yīng)快（6–10h）變化幅度大（>1000倍）半衰期短（24h）1、炎癥、創(chuàng)傷:CRP臨床應(yīng)用<10mg/L無急性炎癥

10–99mg/L輕度或中度炎癥

>100mg/L重度炎癥1、炎癥、創(chuàng)傷:CRP參考范圍炎癥的診斷炎癥與非炎癥的鑒別炎癥過程的監(jiān)測療效考核預(yù)后1、炎癥、創(chuàng)傷:CRP在感染和組織損傷時可升高100～1000倍，半衰期4～6h，對機(jī)體有益。CRP和炎癥1、炎癥、創(chuàng)傷:在發(fā)熱、各種炎癥狀態(tài)、和創(chuàng)傷時，血清CRP水平升高1000倍。肝病,自身免疫失調(diào)和癌癥,血清CRP中度升高。運用高靈敏的CRP方法（hs-CRP)對吸煙、肥胖、老年、以及表面健康的對象的檢測，原先認(rèn)為是正常的CRP（如：＜3mg/L)，研究發(fā)現(xiàn)在“正常”水平內(nèi)的hs-CRP

濃度的高低，和未來發(fā)生冠脈綜合征的危險有關(guān)。引起普遍重視。<10mg/L無急性炎癥高敏C-反應(yīng)蛋白(hs-CRP)

采用乳膠增強(qiáng)的比濁技術(shù)大大提高了分析的靈敏度(檢測低限為0.005-0.10mg/l),

在低濃度

CRP(0.15-10mg/l)測定范圍內(nèi)有很高的準(zhǔn)確性.

用這些方法所進(jìn)行測定的CRP稱為高敏感(high-sensitivity)或超敏感(ultra-sensitive)CRP,縮寫

hs-CRP1、炎癥、創(chuàng)傷:高敏C-反應(yīng)蛋白(hs-CRP)動脈粥樣硬化的血栓形成除了脂肪堆積過程外,也是一個慢性炎癥過程,而CRP是動脈粥樣硬化血栓形成疾病的介導(dǎo)和標(biāo)志物。對表面健康的人群預(yù)示未來發(fā)生管脈

綜合征的可能性。

1、炎癥、創(chuàng)傷:CRP（C反應(yīng)性蛋白）參考值：用WHOCRP標(biāo)準(zhǔn)品定標(biāo)，測定468名健康人的均值為0.68mg/l，90%和99%百分位分別為3.0mg/l和10mg/l。多數(shù)主張將臨界值定為1-2mg/l者有臨床意義。1、炎癥、創(chuàng)傷:

1、肝臟疾病肝臟合成大多數(shù)血漿蛋白，肝枯否細(xì)胞參與免疫細(xì)胞的生成調(diào)節(jié)，肝臟疾患可以導(dǎo)致多種血漿蛋白質(zhì)發(fā)生變化。

2、腎臟疾病腎臟病變時早期就可以出現(xiàn)蛋白尿，而導(dǎo)致選擇性血漿蛋白質(zhì)丟失，嚴(yán)重腎病時腎小球失去分子篩的作用，可導(dǎo)致非選擇性蛋白丟失。3、風(fēng)濕?。好庖咔虻鞍譏gA、IgG、IgM升高等。4、遺傳性缺陷：某些蛋白質(zhì)發(fā)生變異或量缺乏。與疾病的關(guān)系體液蛋白質(zhì)測定方法:免疫化學(xué)法電泳法化學(xué)方法四、體液蛋白質(zhì)測定學(xué)習(xí)方法：【測定方法】【實驗原理】【參考范圍】【臨床意義】1、血清總蛋白（totalprotein,TP):【測定方法】雙縮脲法（目前推薦方法）【實驗原理】蛋白質(zhì)是由許多氨基酸通過肽鍵相互結(jié)合而成的，二價銅離子在堿性溶液中與蛋白中的肽鍵（-CONH-)發(fā)生反應(yīng)形成紫紅色絡(luò)合物，在540nm有吸收峰，并與蛋白含量成正比。蛋白+Cu2+→Cu–蛋白絡(luò)合物（紫紅色）【參考范圍】60－80g/L【臨床意義】

血清總蛋白升高：多發(fā)性骨髓瘤、巨球蛋白血癥、冷沉淀球蛋白血癥等多克隆性或單克隆性免疫球蛋白病，多發(fā)性骨髓瘤患者的血漿球蛋白大于50g/L，總蛋白大多都大于100g/L。血清總蛋白降低：反應(yīng)白蛋白合成減少或蛋白質(zhì)的丟失肝細(xì)胞損害合成減少：肝炎、肝硬化、肝癌總蛋白＜60g/L,白蛋白＜25g/L，低蛋白血癥營養(yǎng)不良：攝入不足丟失過多：腎病、燒傷、大出血消耗增加：結(jié)核、甲亢、惡性腫瘤2、白蛋白（Alb）的檢測【測定方法】溴甲酚綠終點法（推薦法）【實驗原理】血清中白蛋白與溴甲酚綠（BCG）在pH4.2環(huán)境中結(jié)合生成綠色復(fù)合物，溶液由黃色變?yōu)榫G色，在630nm有吸收峰，其顏色深淺與白蛋白濃度成正比，從而測出白蛋白含量。白蛋白+BCG→白蛋白－溴甲酚綠復(fù)合物【參考范圍】35－55g/L【臨床意義】

增高：嚴(yán)重失水、輸入過多。

減少：丟失、肝臟疾病、消耗性疾病、腹水形成、腎病、嚴(yán)重感染、膠原病，血清白蛋白小于20g/L，臨床可出現(xiàn)水腫。3、血清球蛋白（globulin）【檢測方法】現(xiàn)多用血清總蛋白減去血清白蛋白

【參考范圍】20-30g/L

白蛋白/球蛋白(A/G):1.5-2.5/L【臨床意義】血清球蛋白升高見于某些自身免疫性疾病、炎癥或感染，還見于惡性M球蛋白血癥。降低見于合成減少，有低γ－球蛋白血癥或無γ－球蛋白血癥。4、血漿纖維蛋白原（fibrinogen，F(xiàn)IB）測定【測定方法】：①纖維蛋白原凝固法②免疫化學(xué)法【實驗原理】：纖維蛋白原在凝血酶催化下形成纖維蛋白，纖維蛋白原含量與形成纖維蛋白所用時間成反比。【參考范圍】2.0-4.0g/L【臨床意義】

血漿纖維蛋白原為急性時相反應(yīng)蛋白之一,其血漿含量增高常見于某些感染、嚴(yán)重組織損傷、休克、外科手術(shù)后、腎炎、風(fēng)濕熱、惡性腫瘤等。其他放射治療、月經(jīng)期和妊娠期亦可增高。血漿纖維蛋白原含量減少常見于營養(yǎng)不良、嚴(yán)重肝功能損傷、彌散性管內(nèi)凝血、胎盤早產(chǎn)剝離、分娩時羊水滲入血管使在血管內(nèi)形成血栓、先天性纖維蛋白缺乏癥等。5、前白蛋白測定【實驗方法】免疫比濁法(透射比濁)【實驗原理】抗原抗體反應(yīng)形成免疫復(fù)合物，340nm測定?！緟⒖挤秶?.18~0.45g/L【臨床意義】能迅速反映營養(yǎng)攝入處于正平衡或負(fù)平衡。而白蛋白的半衰期長,達(dá)21d,即使肝臟停止合成白蛋白,8d后外周血中的白蛋白比濃度僅降低約20%,敏感地反映早期肝損害情況；PA是一種非特異宿主防御物質(zhì),所以在急性感染時,PA在血清中濃度可迅速降低,尤以細(xì)菌性感染時更為明顯。

散射濁度法依Rayleigh光散射理論

簡式：I=knv2

n：單位容積內(nèi)粒子數(shù)目

v：粒子大小

I：散射光強(qiáng)度光源I0濁度樣品I檢測器A檢測器B（透射濁度法）（散射濁度法）透射濁度法和散射濁度法的光路B

IB檢測技術(shù)的應(yīng)用6、C－反應(yīng)蛋白【實驗方法】免疫比濁法(散射比濁/透射比濁)【參考范圍】<8mg/L【臨床意義】：最重要的炎癥和組織損傷指標(biāo)，敏感的急性期蛋白。比血沉，白細(xì)胞計數(shù)更敏感。細(xì)菌性感染，心肌損傷，風(fēng)濕性疾患……與疾病的進(jìn)程和愈后有關(guān)。

7、尿總蛋白測定【測定方法】1、磺基水楊酸－硫酸鈉比濁法。

2、干化學(xué)法

3、尿蛋白電泳法【參考范圍】兒童：﹤40mg/24h

成人：30－130mg/24h【臨床意義】生理性蛋白尿、病理性蛋白尿（腎前性、腎后性、腎性蛋白尿（腎小球、腎小管、混合性蛋白尿）。8、尿微量蛋白質(zhì)測定目前臨床生化常做檢測的尿微量蛋白質(zhì)有：白蛋白（Alb）、

β2

－微球蛋白（β2

－m）、α1－微球蛋白（α1－m）、視黃醇結(jié)合蛋白(RBP)、轉(zhuǎn)鐵蛋白（TRF）、本周蛋白（B－JP）、α2－巨球蛋白（α2－MG)等。9、腦脊液蛋白質(zhì)測定【測定方法】：濁度法－－磺基水楊酸－硫酸鈉比濁法。

【參考范圍】150－450mg/L【臨床意義】

腦膜炎：化膿性腦膜炎蛋白質(zhì)含量顯著增高，結(jié)核性腦膜炎時中度增高，病毒性腦炎時輕度增高。出血性腦?。耗X室及蛛網(wǎng)膜下腔出血時腦脊液蛋白質(zhì)含量中度增高。腦部腫瘤或椎管梗阻如脊髓腫瘤、蛛網(wǎng)膜下腔粘連腦脊液蛋白質(zhì)含量增高。132以%表示：Alb:57%~68%α1:1.0%~5.7%

α2:4.9%~11.2%

β:7%~13%

γ:9.8%~18.2%以g/L表示：Alb:35~52g/Lα1:1.0~4.0g/L

α2:4.0~8.0g/L

β:5.0~10.0g/L

γ:6.0~13.0g/L血清蛋白電泳的正常組分133（二）異常電泳圖譜的臨床意義

異常血清蛋白質(zhì)電泳圖譜的分型及其特征圖譜類型TPAlbα1α2βγ腎病型↓↓↓↓↑↑↑不定肝硬化型↑N↓↓↓N↓N↓β-γ融合急性炎癥NN↓↑↑N慢性炎癥↓↑↑↑蛋白質(zhì)缺乏型個別區(qū)帶出現(xiàn)特征性缺乏

M蛋白血癥型在α-γ區(qū)帶中間出現(xiàn)M蛋白區(qū)帶134(1)急性和慢性炎癥主要特征：白蛋白減少或正常，α1和α2球蛋白增高，當(dāng)有明顯的急性炎癥病灶時，可顯著增高。炎癥轉(zhuǎn)為慢性時其增加程度減低。γ球蛋白增高不明顯，當(dāng)炎癥轉(zhuǎn)為慢性時，可明顯增加?！?N↑↑急性炎癥型代表疾病：慢性膽道感染、慢性泌尿系感染、結(jié)核病、自身免疫性疾病、過敏性疾病、惡性腫瘤等?！匝装Y型135（2）肝臟疾病↓β+γ(↑↑)主要特征：清蛋白在所有病例中均有不同程度的減低，α1、α2和β球蛋白正?；蚪档?，γ球蛋白常明顯增高，γ區(qū)帶的寬度也明顯增加，可見β-γ橋，為本病的特征。根據(jù)β-γ橋的程度可將其分為三型。Alb帶:PA，Alb明顯降低α1-帶：AAT增高顯著,AAG偏低α2-帶：Cp輕度升高，AMG明顯增高；Hp偏低β-帶：TRF明顯降低γ-帶：IgG彌散性增高，IgA明顯升高；CRP輕度升高。肝硬化136第Ⅰ型：

β和γ區(qū)帶連成一片，難于分開，稱為β-γ橋。此型除見于極少數(shù)結(jié)締組織疾病外，幾乎全見于肝硬化，如見到β-γ橋，并伴有α1和α2球蛋白減少時可確診為肝硬化，故將此型稱為肝硬化型。第Ⅱ型：有β-γ橋存在，但在β與γ區(qū)帶之間仍可見一淺谷，兩者可分開，稱為不完全性β-γ橋，但僅據(jù)此尚不能診斷為肝硬化，僅能作出提示診斷，故將此型稱為提示肝硬化型。第Ⅲ型：為非特異型，β與γ區(qū)帶能明顯分離，沒有形成β-γ橋，與其它原因所致的高γ球蛋白血癥完全不能區(qū)別。137病理分析:β-γ橋的出現(xiàn)與血清免疫球蛋白,特別是IgG、IgA、IgM同時增加有關(guān),其中又以IgA影響較大,IgAIgM泳動在β2與γ之間時,使

β與γ區(qū)融合而形成β-γ橋。138原發(fā)性肝癌型主要特征：白蛋白和α1球蛋白之間有一小的甲胎蛋白帶。↓↓AFP↑↑139（3）M蛋白血癥M蛋白血癥：漿細(xì)胞病時，異常漿細(xì)胞克隆增殖,產(chǎn)生大量單克隆免疫球蛋白或其輕鏈或重鏈片段，病人血清或尿液中可出現(xiàn)結(jié)構(gòu)單一的M蛋白。三種類型：免疫球蛋白型：IgE、IgA、IgM或IgD的一種輕鏈型：由于K或λ輕鏈合成超過重鏈，而游離于血清重鏈型：漿細(xì)胞只產(chǎn)生免疫球蛋白的重鏈或有缺陷的重鏈140主要特征：在電泳圖形上，出現(xiàn)異常濃集色澤深染的窄區(qū)帶，此區(qū)帶多出現(xiàn)在β或γ區(qū)，偶見于α區(qū)。用光密度計掃描，可見到尖銳的高峰。

（其寬窄是與ALB區(qū)帶相較，若大致相等或窄，應(yīng)考慮M蛋白）檢驗學(xué)部屬于蛋白質(zhì)的實驗項目

生化室：總蛋白，白蛋白，球蛋白，載脂蛋白A1，載脂蛋白B，前白蛋白，脂蛋白（a），高密度脂蛋白，低密度脂蛋白，極低密度脂蛋白，血清蛋白電泳（白蛋白，α1、α2、

β、γ球蛋白），血尿β2微球蛋白，糖化血紅蛋白，肌鈣蛋白-T，24小時尿蛋白定量，尿微量白蛋白，酶類。血凝室：纖維蛋白原，AT-Ⅲ（α2-球蛋白），各種凝血因子除第Ⅳ因子（Ca2+）均為蛋白質(zhì)，F(xiàn)DP,D-D是纖維蛋白降解產(chǎn)物。

免疫室

免疫球蛋白IgM,IgG,IgA,C反應(yīng)蛋白，前S1蛋白、類風(fēng)濕因子

肝炎抗原抗體類：HAV-IgM，HBSAg,HBSAb,HBEAg,HBEAb,HBCAb-IgM,HBCAg-IgG,丙肝抗體，戊肝抗體

腫瘤標(biāo)志物：細(xì)胞角質(zhì)素抗原211，鐵蛋白，甲胎蛋白，激素類:催乳素(PRL)，促黃體生成素(LH)，促卵泡生成素(FSH)，促甲狀腺激素(TSH),胰島素，補(bǔ)體類：C3,C4檢驗學(xué)部屬于蛋白質(zhì)的實驗項目小結(jié)：了解血漿蛋白質(zhì)組成、功能及分類。熟悉一些重要血漿蛋白質(zhì)。掌握疾病時血漿蛋白質(zhì)變化掌握體液蛋白質(zhì)測定CompanyLogo回顧案例3肝活檢結(jié)合影像學(xué)診斷為

原發(fā)性肝硬化案例4一棕黃色標(biāo)本為給出膽紅素結(jié)果，儀器標(biāo)識為：高；說明超過儀器測試范圍，檢驗師稀釋標(biāo)本再次測試，計算為31.5mg/dL;ASTALT均升高

最常見為病毒性肝炎、其次可能為酒精性肝炎、服用藥物引起

肝炎病毒往往采用血清學(xué)免疫測試CompanyLogo案例5一8歲兒童患者EDTA血漿血氨結(jié)果為120ug/dL(參考范圍為29-70），比較前一次結(jié)果為100ug/dL

檢查質(zhì)控及儀器維護(hù)詢問臨床確定其為急性肝衰竭血氨升高表明可能導(dǎo)致肝昏迷發(fā)展為肝性腦病

血氨主要由蛋白代謝產(chǎn)生通過鳥氨酸循環(huán)生成尿素

CompanyLogo部位——肝臟細(xì)胞鳥氨酸瓜氨酸瓜氨酸精氨酸代琥珀酸ATPAMP+PPi延胡索酸鳥氨酸精氨酸H2O尿素天門冬氨酸NH3CO2氨甲酰磷酸+H2O尿素循環(huán)Company