第3章　第1節(jié)　重組DNA技術(shù)的基本工具

第1節(jié)重組DNA技術(shù)的基本工具1．概述基因工程是在遺傳學(xué)、微生物學(xué)、生物化學(xué)和分子生物學(xué)等學(xué)科基礎(chǔ)上發(fā)展而來(lái)的。2．闡明DNA重組技術(shù)的實(shí)現(xiàn)需要利用限制性內(nèi)切核酸酶、DNA連接酶和載體三種基本工具。1．生命觀念——運(yùn)用結(jié)構(gòu)與功能觀說(shuō)明基因工程的各種工具的特點(diǎn)。2．社會(huì)責(zé)任——關(guān)注基因工程的誕生和發(fā)展歷程，參與討論基礎(chǔ)理論和技術(shù)發(fā)展如何催生基因工程。一、基因工程及其誕生與發(fā)展1．基因工程的概念(1)操作場(chǎng)所：生物體外。(2)操作技術(shù)：轉(zhuǎn)基因等技術(shù)。(3)操作結(jié)果：賦予生物新的遺傳特性，創(chuàng)造出更符合人們需要的新的生物類型和生物產(chǎn)品。(4)操作水平：DNA分子水平。2．基因工程的誕生和發(fā)展(1)基因工程的誕生①1944年，艾弗里等人通過(guò)肺炎鏈球菌的轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)，不僅證明了遺傳物質(zhì)是DNA，還證明了DNA可以在同種生物的不同個(gè)體之間轉(zhuǎn)移。②1953年，沃森和克里克建立了DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)模型并提出了遺傳物質(zhì)自我復(fù)制的假說(shuō)。③1961年，尼倫伯格和馬太破譯了第一個(gè)編碼氨基酸的密碼子。④20世紀(jì)70年代初，多種限制酶、DNA連接酶和逆轉(zhuǎn)錄酶被相繼發(fā)現(xiàn)。這些發(fā)現(xiàn)為DNA的切割、連接以及功能基因的獲得創(chuàng)造了條件。⑤1973年，科學(xué)家證明質(zhì)?？梢宰鳛榛蚬こ痰妮d體，構(gòu)建重組DNA，導(dǎo)入受體細(xì)胞，使外源基因在原核細(xì)胞中成功表達(dá)，并實(shí)現(xiàn)物種間的基因交流。(2)基因工程的發(fā)展①1982年，第一個(gè)基因工程藥物——重組人胰島素被批準(zhǔn)上市。②1984年，我國(guó)科學(xué)家朱作言領(lǐng)導(dǎo)的團(tuán)隊(duì)培育出世界上第一條轉(zhuǎn)基因魚(yú)。③1985年，穆里斯等人發(fā)明PCR，為獲取目的基因提供了有效手段。④1990年，人類基因組計(jì)劃啟動(dòng)。2003年，該計(jì)劃的測(cè)序任務(wù)順利完成。⑤21世紀(jì)以來(lái)，科學(xué)家發(fā)明了多種高通量測(cè)序技術(shù)，可以實(shí)現(xiàn)低成本測(cè)定大量核酸序列，加速了人們對(duì)基因組序列的了解。⑥2013年，華人科學(xué)家張鋒及其團(tuán)隊(duì)首次報(bào)道利用最新的基因組編輯技術(shù)編輯了哺乳動(dòng)物基因組。二、重組DNA技術(shù)的基本工具1．限制性內(nèi)切核酸酶(簡(jiǎn)稱限制酶)——“分子手術(shù)刀”(1)來(lái)源：主要來(lái)自原核生物。(2)功能：能夠識(shí)別雙鏈DNA分子的特定核苷酸序列，并且使每一條鏈中特定部位的磷酸二酯鍵斷開(kāi)。(3)結(jié)果：產(chǎn)生黏性末端或平末端。(4)應(yīng)用：已知限制酶EcoRⅠ和SmaⅠ識(shí)別的堿基序列和酶切位點(diǎn)分別為G↓AATTC和CCC↓GGG，在圖中寫出兩種限制酶切割DNA后產(chǎn)生的末端并寫出末端的種類。EcoRⅠ限制酶和SmaⅠ限制酶識(shí)別的堿基序列不同，切割位點(diǎn)不同(填“相同”或“不同”)，說(shuō)明限制酶具有專一性。2．DNA連接酶——“分子縫合針”(1)作用：將雙鏈DNA片段“縫合”起來(lái)，恢復(fù)被限制酶切開(kāi)的兩個(gè)核苷酸之間的磷酸二酯鍵。(2)種類[填表]種類比較E．coliDNA連接酶T4DNA連接酶來(lái)源大腸桿菌T4噬菌體特點(diǎn)只能連接黏性末端既可以連接黏性末端，又可以連接平末端3．基因進(jìn)入受體細(xì)胞的載體——“分子運(yùn)輸車”(1)質(zhì)粒①質(zhì)粒的本質(zhì)：是一種裸露的、結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單、獨(dú)立于真核細(xì)胞細(xì)胞核或原核細(xì)胞擬核DNA之外，并具有自我復(fù)制能力的環(huán)狀雙鏈DNA分子。②質(zhì)粒適于作基因運(yùn)載體的特點(diǎn)a．質(zhì)粒DNA分子上有一個(gè)至多個(gè)限制酶切割位點(diǎn)，供外源DNA片段插入其中。b．?dāng)y帶外源DNA片段的質(zhì)粒進(jìn)入受體細(xì)胞后，能在細(xì)胞中進(jìn)行自我復(fù)制，或整合到受體DNA上，隨受體DNA同步復(fù)制。c．人工改造的質(zhì)粒常有特殊的標(biāo)記基因，便于重組DNA分子的篩選。(2)噬菌體、動(dòng)植物病毒等。三、DNA的粗提取與鑒定1．實(shí)驗(yàn)原理(1)DNA、RNA、蛋白質(zhì)和脂質(zhì)等在物理和化學(xué)性質(zhì)方面存在差異，可以利用這些差異，選用適當(dāng)?shù)奈锢砘蚧瘜W(xué)方法對(duì)它們進(jìn)行提取。①DNA不溶于酒精，但某些蛋白質(zhì)溶于酒精，利用這一原理，可以初步分離DNA與蛋白質(zhì)。②DNA能溶于2mol/L的NaCl溶液。(2)DNA遇二苯胺試劑會(huì)呈現(xiàn)藍(lán)色。2．方法步驟(1)研磨：取30g洋蔥切碎，倒入10mL研磨液研磨。(2)除雜：漏斗中墊上紗布過(guò)濾后，在4℃冰箱中放置幾分鐘后，再取上清液，也可以在1500r/min的轉(zhuǎn)速下離心5min，再取上清液(3)提?。涸谏锨逡褐屑尤塍w積相等的、預(yù)冷的酒精溶液(體積分?jǐn)?shù)為95%)，靜置2～3min，溶液中出現(xiàn)的白色絲狀物就是粗提取的DNA。方法一：用玻璃棒沿一個(gè)(填“一個(gè)”或“兩個(gè)”)方向攪拌，卷起絲狀物，并用濾紙吸去上面的水分。方法二：10000r/min的轉(zhuǎn)速下離心5min，取沉淀物晾干。(4)鑒定：項(xiàng)目AB2mol/L的NaCl溶液5mL絲狀物或沉淀物不加加入二苯胺試劑4mL沸水中加熱5min現(xiàn)象無(wú)色藍(lán)色1．用不同的限制酶切割DNA分子可能產(chǎn)生相同的黏性末端，這在基因工程操作中有什么意義？提示：識(shí)別DNA分子中不同核苷酸序列，但能切割產(chǎn)生相同黏性末端的限制酶被稱為同尾酶，同尾酶使構(gòu)建載體時(shí)，切割位點(diǎn)的選擇范圍擴(kuò)大。2．DNA連接酶和DNA聚合酶的作用相同嗎？試簡(jiǎn)要說(shuō)明。提示：不相同。DNA連接酶連接的是DNA片段，而DNA聚合酶連接的是單個(gè)的脫氧核苷酸。(正確的打“√”，錯(cuò)誤的打“×”)1．基因工程的原理是基因重組，不過(guò)在這里這種變異是定向的。 (√)2．DNA聚合酶也可以用作重組DNA技術(shù)的工具。 (×)提示：重組DNA技術(shù)的工具有限制酶、DNA連接酶和載體，沒(méi)有DNA聚合酶。3．限制酶在原來(lái)的原核細(xì)胞內(nèi)對(duì)細(xì)胞自身有害。 (×)提示：限制酶在原來(lái)的原核細(xì)胞內(nèi)用于切割外源DNA，使之失效，從而保護(hù)自身。4．不同DNA分子用同一種限制酶切割形成的黏性末端相同。 (√)5．DNA連接酶既能連接黏性末端，又能連接平末端。 (×)提示：E．coliDNA連接酶不能連接平末端。6．載體的種類有質(zhì)粒、噬菌體、動(dòng)植物病毒等，其中動(dòng)植物病毒必須是DNA病毒。 (√)基因工程的工具酶1．限制性內(nèi)切核酸酶(1)作用特點(diǎn)：具有專一性，表現(xiàn)在以下兩個(gè)方面。①能夠識(shí)別雙鏈DNA分子中特定的核苷酸序列。②能夠切割特定序列中的特定位點(diǎn)。(2)識(shí)別序列的特點(diǎn)：遵循堿基互補(bǔ)配對(duì)原則，無(wú)論是奇數(shù)個(gè)堿基還是偶數(shù)個(gè)堿基，都可以找到一條中心軸線，如圖，中軸線兩側(cè)的雙鏈DNA上的堿基是反向?qū)ΨQ重復(fù)排列的。如eq\a\vs4\al(GC,CG)eq\b\lc\|(\a\vs4\al\co1(GC,CG))以中心線為軸，兩側(cè)堿基互補(bǔ)對(duì)稱；eq\a\vs4\al(CCAGG,GGTCC)以eq\a\vs4\al(A,T)為軸，兩側(cè)堿基互補(bǔ)對(duì)稱。(3)作用產(chǎn)物：黏性末端或平末端。①黏性末端：是限制性內(nèi)切核酸酶在它識(shí)別序列的中心軸線兩側(cè)將DNA分子的兩條鏈分別切開(kāi)時(shí)形成的，如圖所示：②平末端：是限制性內(nèi)切核酸酶在它識(shí)別序列的中心軸線處切開(kāi)時(shí)形成的，如圖所示：2．DNA連接酶(1)作用：將具有相同或互補(bǔ)黏性末端以及具有平末端的DNA片段“縫合”成新的DNA分子。(2)連接方式：DNA連接酶可把黏性末端和平末端之間的縫隙“縫合”起來(lái)，相當(dāng)于把梯子兩邊的扶手的斷口連接起來(lái)，形成兩個(gè)磷酸二酯鍵。DNA連接酶與堿基之間的氫鍵形成無(wú)關(guān)。3．與DNA相關(guān)的五種酶的比較名稱作用部位作用結(jié)果限制酶磷酸二酯鍵將DNA切成兩個(gè)片段DNA連接酶磷酸二酯鍵將兩個(gè)DNA片段連接為一個(gè)DNA分子DNA聚合酶磷酸二酯鍵將單個(gè)脫氧核苷酸依次連接到單鏈末端DNA(水解)酶磷酸二酯鍵將DNA片段水解為單個(gè)脫氧核苷酸解旋酶堿基對(duì)之間的氫鍵將雙鏈DNA分子局部解旋為單鏈，形成兩條長(zhǎng)鏈1．為什么限制酶主要從原核生物中分離純化而來(lái)？推測(cè)它在原核生物中的作用是什么？它會(huì)不會(huì)切割自己的DNA分子？提示：原核細(xì)胞容易受到外源DNA的入侵，原核細(xì)胞中的限制酶能夠切割入侵的外源DNA而保護(hù)自身。原核細(xì)胞中的限制酶不會(huì)切割自己的DNA分子，因?yàn)槊妇哂袑Ｒ恍曰蜃约旱腄NA分子已被修飾而不被識(shí)別。2．限制性內(nèi)切核酸酶和DNA連接酶的作用是否都體現(xiàn)了酶的專一性？提示：限制性內(nèi)切核酸酶能夠識(shí)別雙鏈DNA分子的特定核苷酸序列，并且使每一條鏈中特定部位的磷酸二酯鍵斷開(kāi)，體現(xiàn)了酶的專一性。E．coliDNA連接酶能將具有互補(bǔ)黏性末端的DNA片段連接起來(lái)，對(duì)末端的堿基序列沒(méi)有要求；T4DNA連接酶既可以連接雙鏈DNA片段互補(bǔ)的黏性末端，又可以連接雙鏈DNA分子的平末端，對(duì)末端的堿基序列沒(méi)有要求，因此DNA連接酶的作用沒(méi)有體現(xiàn)酶的專一性。1．限制酶和DNA連接酶是基因工程的工具酶，以下說(shuō)法正確的是()A．DNA連接酶能將單個(gè)核苷酸加到已有的核苷酸片段上形成磷酸二酯鍵B．限制酶只能切割雙鏈DNA片段，不能切割煙草花葉病毒的核酸C．E．coliDNA連接酶既能連接黏性末端，也能連接平末端D．限制酶主要從原核生物中分離純化而來(lái)，所以也能剪切自身的DNAB[DNA連接酶連接的是兩個(gè)DNA片段，A項(xiàng)錯(cuò)誤；限制酶只能切割雙鏈DNA片段而不能切割RNA，煙草花葉病毒的核酸為RNA，B項(xiàng)正確；E．coliDNA連接酶只能連接黏性末端，不能連接平末端，C項(xiàng)錯(cuò)誤；限制酶主要從原核生物中分離純化而來(lái)，但是因?yàn)樵松顳NA分子中不存在該酶的識(shí)別序列或識(shí)別序列已經(jīng)被修飾，所以不能剪切自身的DNA，D項(xiàng)錯(cuò)誤。]2．下列各種酶及其作用對(duì)應(yīng)關(guān)系不正確的是()A．限制酶——識(shí)別雙鏈DNA分子的特定核苷酸序列，并使每一條鏈中特定部位的磷酸二酯鍵斷開(kāi)B．RNA聚合酶——與基因的特定位點(diǎn)結(jié)合，催化遺傳信息的翻譯C．DNA連接酶——將分開(kāi)的DNA片段通過(guò)特定末端連接在一起D．DNA聚合酶——將單個(gè)脫氧核苷酸連接到已有的核苷酸鏈上B[限制酶能識(shí)別雙鏈DNA分子的特定核苷酸序列，并使每一條鏈中特定部位的磷酸二酯鍵斷開(kāi)，A正確；RNA聚合酶與基因的特定位點(diǎn)結(jié)合，催化遺傳信息的轉(zhuǎn)錄，B錯(cuò)誤；DNA連接酶將分開(kāi)的DNA片段通過(guò)特定的末端連接在一起，在兩個(gè)DNA片段之間形成磷酸二酯鍵，C正確；DNA聚合酶將單個(gè)脫氧核苷酸連接到已有的核苷酸鏈上，形成磷酸二酯鍵，D正確。]幾種酶的作用部位圖解(1)作用于a(磷酸二酯鍵)的酶：限制酶(斷開(kāi))、DNA連接酶(形成)和DNA聚合酶(形成)。(2)作用于b(氫鍵)的酶：解旋酶(斷開(kāi))。基因工程中常用的載體1．特點(diǎn)質(zhì)粒是一種裸露的、結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單、具有自我復(fù)制能力的環(huán)狀雙鏈DNA分子。2．本質(zhì)質(zhì)粒是獨(dú)立于真核細(xì)胞細(xì)胞核或原核細(xì)胞擬核DNA之外的小型DNA分子，不是細(xì)胞器。3．質(zhì)粒作為載體所具備的條件條件分析穩(wěn)定并能復(fù)制目的基因穩(wěn)定存在且數(shù)量可擴(kuò)大有一個(gè)至多個(gè)限制酶切割位點(diǎn)可攜帶多個(gè)或多種外源基因具有特殊的標(biāo)記基因便于重組DNA的鑒定和選擇無(wú)毒害作用避免受體細(xì)胞受到損傷4．標(biāo)記基因的篩選原理載體上的標(biāo)記基因一般是某種抗生素的抗性基因，而未導(dǎo)入該基因的受體細(xì)胞沒(méi)有抵抗該抗生素的能力。將含有某抗生素抗性基因的載體導(dǎo)入受體細(xì)胞，抗性基因在受體細(xì)胞內(nèi)表達(dá)，受體細(xì)胞對(duì)該抗生素產(chǎn)生抗性。在含有該抗生素的培養(yǎng)基上，能夠生存的是被導(dǎo)入了基因表達(dá)載體的受體細(xì)胞。如圖所示：細(xì)胞膜上的載體與基因工程中的載體有什么不同？提示：(1)化學(xué)本質(zhì)不同：細(xì)胞膜上的載體化學(xué)成分是蛋白質(zhì)；基因工程中的載體可能是物質(zhì)，如質(zhì)粒(DNA)，也可能是生物，如動(dòng)植物病毒、噬菌體等。(2)功能不同：細(xì)胞膜上的載體功能是協(xié)助細(xì)胞膜控制物質(zhì)進(jìn)出細(xì)胞；基因工程中的載體是一種“分子運(yùn)輸車”，把目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞。1．作為基因的運(yùn)輸工具——載體，必須具備的條件之一及理由是()A．能夠在宿主細(xì)胞中穩(wěn)定地保存下來(lái)并大量復(fù)制，以便提供大量的目的基因B．具有多個(gè)限制酶切割位點(diǎn)，以便于目的基因的表達(dá)C．具有某些標(biāo)記基因，以使目的基因能夠與其結(jié)合D．對(duì)宿主細(xì)胞無(wú)傷害，以便于重組DNA的鑒定和選擇A[作為載體必須能夠在宿主細(xì)胞中穩(wěn)定地保存下來(lái)并大量復(fù)制，以便提供大量的目的基因，A正確；作為載體必須具有一個(gè)或多個(gè)限制酶切割位點(diǎn)，以便于目的基因的插入，而不是表達(dá)，B錯(cuò)誤；作為載體必須具有標(biāo)記基因，以便于重組DNA的篩選，C錯(cuò)誤；作為載體必須是安全的，對(duì)受體細(xì)胞無(wú)害，以便宿主細(xì)胞能進(jìn)行正常的生命活動(dòng)，D錯(cuò)誤。]2．某細(xì)菌質(zhì)粒如圖所示，通過(guò)標(biāo)記基因可以推知外源基因插入的位置，圖示中的a、b、c是外源基因插入位置，請(qǐng)根據(jù)表中提供的細(xì)菌生長(zhǎng)情況，推測(cè)①②③三種重組后細(xì)菌的外源基因插入點(diǎn)，正確的一組是()細(xì)菌在含氨芐青霉素的培養(yǎng)基上的生長(zhǎng)狀況細(xì)菌在含四環(huán)素的培養(yǎng)基上的生長(zhǎng)狀況①能生長(zhǎng)能生長(zhǎng)②能生長(zhǎng)不能生長(zhǎng)③不能生長(zhǎng)能生長(zhǎng)A．①是c；②是b；③是aB．①是a和b；②是a；③是bC．①是a和b；②是b；③是aD．①是c；②是a；③是bA[①細(xì)菌能在含氨芐青霉素和四環(huán)素的培養(yǎng)基上生長(zhǎng)，說(shuō)明抗氨芐青霉素基因和抗四環(huán)素基因沒(méi)有被破壞，所以插入點(diǎn)是c；②細(xì)菌能在含氨芐青霉素的培養(yǎng)基上生長(zhǎng)，而不能在含四環(huán)素的培養(yǎng)基上生長(zhǎng)，說(shuō)明其抗氨芐青霉素基因正常而抗四環(huán)素基因被破壞，故插入點(diǎn)為b；③細(xì)菌不能在含氨芐青霉素的培養(yǎng)基上生長(zhǎng)，能在含四環(huán)素的培養(yǎng)基上生長(zhǎng)，說(shuō)明其抗氨芐青霉素基因被插入而破壞，故插入點(diǎn)為a。]某線性DNA分子含有5000個(gè)堿基對(duì)(bp)，先用限制酶a切割，再把得到的產(chǎn)物用限制酶b切割，得到的DNA片段大小如表。限制酶a和b的識(shí)別序列和切割位點(diǎn)如下圖所示。A酶切割產(chǎn)物(bp)b酶再次切割產(chǎn)物(bp)2100；1400；1000；5001900；200；800；600；1000；500本案例考查演繹與推理的科學(xué)思維。(1)該DNA分子上有幾個(gè)a酶識(shí)別和切割的位點(diǎn)？有幾個(gè)b酶識(shí)別和切割的位點(diǎn)？(科學(xué)思維)(2)a酶和b酶切出的黏性末端能相互連接嗎？(科學(xué)思維)提示：(1)該DNA分子上有3個(gè)a酶識(shí)別和切割的位點(diǎn)；有2個(gè)b酶識(shí)別和切割的位點(diǎn)。(2)a酶和b酶切出的黏性末端相同，因此能相連。[課堂小結(jié)]知識(shí)網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建要點(diǎn)強(qiáng)化識(shí)記結(jié)論語(yǔ)句(1)基因工程的基本原理是基因重組，外源DNA能在受體細(xì)胞表達(dá)的理論基礎(chǔ)是密碼子的通用性。(2)重組DNA技術(shù)的基本工具有限制性內(nèi)切核酸酶、DNA連接酶和使目的基因進(jìn)入受體細(xì)胞的載體。(3)限制性內(nèi)切核酸酶可識(shí)別雙鏈DNA分子的某種特定核苷酸序列，并在特定位點(diǎn)上切割。(4)E．coliDNA連接酶只能連接黏性末端，而T4DNA連接酶既能連接黏性末端，也能連接平末端。(5)質(zhì)粒作為基因工程的載體需具備的條件有：能在宿主細(xì)胞內(nèi)穩(wěn)定保存并自我復(fù)制；具有一個(gè)或多個(gè)限制酶切割位點(diǎn)；具有標(biāo)記基因。(6)在基因工程中使用的載體除質(zhì)粒外，還有噬菌體、動(dòng)植物病毒等。1．下列有關(guān)基因工程中限制酶的描述，正確的是()A．同種限制酶既可以切割目的基因又可以切割質(zhì)粒，因此不具備專一性B．限制酶只能識(shí)別和切割DNA，不能識(shí)別RNAC．限制酶與DNA連接酶的作用部位不相同D．限制酶只能從原核生物中提取B[一種限制酶能識(shí)別雙鏈DNA分子中的特定核苷酸序列，并在特定位點(diǎn)上切割DNA分子，既可以切割目的基因又可以切割質(zhì)粒，體現(xiàn)了酶的專一性，A錯(cuò)誤；限制酶與DNA連接酶的作用部位相同，都是磷酸二酯鍵，C錯(cuò)誤；限制酶主要從原核生物中提取，D錯(cuò)誤。]2．下列關(guān)于DNA連接酶的敘述，正確的是()A．DNA連接酶連接的是兩個(gè)DNA片段堿基對(duì)之間的氫鍵B．DNA連接酶連接的是DNA單鏈上的磷酸和脫氧核糖C．DNA連接酶只能將單個(gè)核苷酸加到已有的核苷酸片段的末端D．E．coliDNA連接酶能將雙鏈DNA片段互補(bǔ)的平末端連接起來(lái)B[DNA連接酶連接的是兩個(gè)DNA片段之間的磷酸二酯鍵，A錯(cuò)誤；DNA連接酶連接的是DNA雙鏈片段兩個(gè)脫氧核苷酸之間的磷酸和脫氧核糖，B正確、C錯(cuò)誤；E．coliDNA連接酶只能將具有互補(bǔ)黏性末端的DNA片段連接起來(lái)，D錯(cuò)誤。]3．質(zhì)粒是基因工程最常用的載體，下列有關(guān)質(zhì)粒的說(shuō)法錯(cuò)誤的是()A．質(zhì)粒不僅存在于細(xì)菌中，某些病毒也具有B．質(zhì)粒作為載體時(shí)，應(yīng)具有標(biāo)記基因和多個(gè)限制酶切割位點(diǎn)C．質(zhì)粒為小型環(huán)狀DNA分子，存在于細(xì)胞核或擬核(區(qū))外的細(xì)胞質(zhì)基質(zhì)中D．質(zhì)粒能夠在宿主細(xì)胞中穩(wěn)定保存，并在宿主細(xì)胞內(nèi)復(fù)制A[質(zhì)粒為小型環(huán)狀DNA分子，不僅存在于細(xì)菌中，也存在于某些真核生物中，但病毒中沒(méi)有質(zhì)粒；質(zhì)粒作為載體時(shí)，應(yīng)具有標(biāo)記基因和多個(gè)限制酶切割位點(diǎn)；質(zhì)粒為小型環(huán)狀DNA分子，存在于細(xì)胞核或擬核外的細(xì)胞質(zhì)基質(zhì)中；質(zhì)粒能夠在宿主細(xì)胞中穩(wěn)定保存，并在宿主細(xì)胞內(nèi)復(fù)制。]4．下列關(guān)于DNA粗提取與鑒定的敘述，錯(cuò)誤的是()A．用同樣方法從等體積兔血和雞血中提取的DNA量相近B．DNA析出過(guò)程中，攪拌操作要輕柔以防DNA斷裂C．預(yù)冷的酒精溶液可用來(lái)粗提取DNAD．用二苯胺試劑鑒定DNA需要進(jìn)行沸水浴加熱A[兔屬于哺乳動(dòng)物，其成熟紅