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實(shí)驗(yàn)十二維生素C的定量測(cè)定目的:1.學(xué)習(xí)VC定量測(cè)定的原理和方法;2.加深對(duì)VC性質(zhì)的認(rèn)識(shí)。原理:鉬酸銨在一定條件下(有硫酸和偏磷酸根離子存在)與VC反應(yīng)生成藍(lán)色結(jié)合物。在一定濃度范圍(樣品控制濃度在25~250mg/ml)吸光度與濃度成直線關(guān)系。在偏磷酸存在下,樣品所存在大還原糖及其他常見的還原性物質(zhì)均無干擾,因而專一性好,且反應(yīng)迅速。[HPO2-(偏磷酸根離子)、H2SO4]MoO42-(鉬酸銨離子)+還原型VCMo
(MoO4)2(鉬藍(lán))+氧化型VC材料:新鮮的橘子和香蕉,還可拿鮮橙汁測(cè)量。儀器和試劑:請(qǐng)清點(diǎn),用后照原樣擺好。實(shí)驗(yàn)十二維生素C的定量測(cè)定操作:1.標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作:2.樣品的測(cè)定:注意還要做對(duì)照管,樣品管做三管取平均值。3.計(jì)算樣品維生素C含量(先對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相對(duì)的維生素C的質(zhì)量,再按公式算出100g樣品中維生素C的質(zhì)量(mg)。m=(m0V1/m1V2×103)×100試中m:100g樣品中含抗壞血酸的質(zhì)量(mg);m0:從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出的V的質(zhì)量(μg);V1:稀釋總體積(ml);m1:稱樣質(zhì)量(g);V2:測(cè)定時(shí)取樣體積(ml);103:μg換算成mg。實(shí)驗(yàn)十二維生素C的定量測(cè)定注意事項(xiàng):1.因?yàn)槭嵌繙y(cè)定,因而量的準(zhǔn)確是關(guān)鍵,稱量和取液要準(zhǔn)確、時(shí)間和溫度等條件要控制好。強(qiáng)調(diào)移液管、容量瓶的正確操作方法;強(qiáng)調(diào)熟悉分光光度計(jì)的使用注意事項(xiàng):提前預(yù)熱,調(diào)零和調(diào)100,第1管為對(duì)照管。2.儀器操作要規(guī)范和熟練,因?yàn)橐呀?jīng)多次使用離心機(jī)、分光光度計(jì)、水浴鍋等;3.測(cè)量時(shí)所得的吸光度如果不在標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍內(nèi),要根據(jù)實(shí)際進(jìn)行調(diào)整;4.人數(shù)多,分組做,可3~4人合作,共同完成,但報(bào)告要收集兩種樣品的數(shù)據(jù),
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