leica sp8激光掃描共聚焦顯微鏡快速操作手冊

： 波長掃描（xyλ LeicaSP8 15UVIS,IVIS或VISIR的光路鍍 16掃描視場旋轉(zhuǎn)鏡（Abbe-Konig旋轉(zhuǎn) 20正方型針STED激光 21Fluorifier盤 22X1出口接口AOBS,及其他選配 23外置檢測器 24色散棱 25分開的熒光光 26最多5個光電倍增管或4個yD檢測 器（1）因為FSU和CSU器

不FSUCSUMiooeScanner先按電腦主機上的電源按鈕啟動電腦，再打開顯微鏡控制的開關(guān)，然后依次打開rrr將“LaserEmission”上的激光開關(guān)旋至注意：顯微鏡控制器的開關(guān)一般是常開的，在打開“PCMicroscope”按鈕后指示燈（按綠色的Power按鈕，如右圖（4）“ofutn”下拉菜單中選擇需要的（imulor“Mioe”菜單中選擇顯微鏡型號（”選項為快掃功能，可按需要打開或關(guān)閉，只有配備了快掃功能的系統(tǒng)才會顯示該選項，點擊“KMark&Find和Matrix功能不能使用。點擊界面最上方“Configuration”按鈕進入配置界面→點擊左邊“LaserConfig”（OFF→ONArgon（AcqiePocss定量測量（fy）工具和文件管理界面切換：Experiments界面下顯示當(dāng)前拍攝和打開的Rotation等。進行選擇（如下圖（在顯微鏡設(shè)置軟件LeicaAFHardwareConfigurator中可（調(diào)焦按鈕或旋鈕調(diào)節(jié)至合適的z軸平面，通過按顯微鏡前面板的熒光濾塊選擇按（上的標(biāo)注與熒光顏色的對應(yīng)關(guān)系為：3N1A—調(diào)用已有的設(shè)置：選擇“Load/Savesinglegainoffset都會自動設(shè)置，包含幾種最常用節(jié)PMTPMT的gainoffset分光鏡選擇原則：根據(jù)所用激光波長來選擇合適的分光鏡（如果配備的是AOBS聲光可調(diào)分光器，可以忽略1TD488/552/638分光鏡。3RT15/85分光鏡所有波長激光都可用，但是會損SequentialScan:若的射光譜有，為減少串色，成像時每種要單獨激發(fā)，或者說，測一種。可用SequentialScanxyz掃描，是最常xy掃描和z軸層切（xyz掃描。還可在下拉菜單中選擇由x，y，z，t（時間）xzy，xyt，xyλ，xyzt，xyzλ，xyzλt等。（format（peede線平均（lineaverage、面平均average分辨率：默認(rèn)值為512×512。也可選擇更低或更高分辨率。分辨率越速度?？蛇x擇雙向掃描（BidirectionalX）來達到更高速度，這時可能需要進行相位校準(zhǔn)（Phasecorrection。average12下圖；或者調(diào)節(jié)手輪或顯微鏡鏡體上的調(diào)焦旋鈕（見第8頁圖。圖像亮度動態(tài)范圍可通過調(diào)節(jié)激光輸出功率（9頁圖、SmartGainSmartOffset（見上圖一般情況下，Gain值的正常范圍為500—1000；SmartOffset的調(diào)節(jié)：可扣除背景噪音，但標(biāo)本信號也有一定程度的扣除。原則上，在保證圖像質(zhì)量的前提下，DigitalOffset值越接近于0越好；越強，同時標(biāo)本更容易被漂白或淬滅。當(dāng)PMTgain800HyDgain值大于100%時熒光亮度還是不夠時，可以考慮適當(dāng)增加激光強度。在做活細(xì)胞理想的熒光圖像中應(yīng)該數(shù)像素點達到飽和，可通過位于圖像左側(cè)的LUT按鈕進行觀察。。LUT按鈕（下圖紅圈）可在LUT（即指定的熒光顏色，也稱偽彩GlowOverUnder（GlowOU”和灰度圖三檔之間切換。在GlowOU模節(jié)SmartGain使圖像中僅少數(shù)像素點呈藍色，調(diào)節(jié)SmartOffset來降低圖像的背景。熒光圖像SmartOffset的默認(rèn)值為0%，通常應(yīng)將其調(diào)為負(fù)值以使圖像背景呈綠色。下圖中B圖亮度及背景值設(shè)置均未達最優(yōu)化值，調(diào)節(jié)SmartGain和SmartOffset后，對于HyD檢測器，其背景噪聲很低，無需通過調(diào)節(jié)SmartGain來降低背景。對透射光圖像，同樣可以調(diào)節(jié)透射光PMT“OptimizexyFormat”按鈕（如下圖，由系統(tǒng)自動設(shè)置最佳分辨率。根據(jù)Nyquist采樣原則，像素點尺寸（PixelSize）應(yīng)為物鏡側(cè)向分辨率（即xy平面分辨率）的2/5~1/2。物鏡分辨率可點擊物鏡參數(shù)表按鈕從彈出的界面讀現(xiàn)有的LASAF軟件3.0和3.1版本ZStack點擊“Live”進行圖像預(yù)覽，調(diào)節(jié)z（steps（optimied選擇合適的分辨率和掃描線速度，點擊”Start”進行xyz圖像 umprojection）:將所有Z平面的圖像信息選取最正交剖面方式按鈕（Orthogonalsection）:分別以XY、YZ、XZ三個方向顯示3D立體模式按鈕（Openin3Dviewer）:打開3D可視化模塊，以直觀方式展?！癝tart”進行時間序列圖像。Begin（Width（（?！癴y→Tools→StackProfile”，如下圖：；Base”的選項，點擊，彈出命名新的框；改、備注信息等，點擊“OK”，新數(shù)據(jù)即被存入系統(tǒng)的數(shù)據(jù)庫。并且有的功能。HyD檢測器有三種操作模式可供選擇：1使用HyD2選擇“SaveExperiment”即可將當(dāng)前文件夾下的所有保存為一個文件，文件保存格式為*.lif原始文件，只能通過LeicaLASAF、LASAFLite或其他專業(yè)圖（.tiff或.jpeg三維或圖MPEG4、WMV等。如右圖。所得參數(shù)設(shè)置信息，如圖85。像像關(guān)閉LASAF逆時針旋轉(zhuǎn)90度至“On0”位置。關(guān)閉電腦后，關(guān)閉“PCMicroscope”按鈕（CSU系統(tǒng)需關(guān)閉顯微鏡控風(fēng)扇停止后（關(guān)閉激光開關(guān)約5分鐘后，關(guān)閉“LaserPo