細(xì)胞周期(講座)教學(xué)課件

細(xì)胞周期(講座)1、合法而穩(wěn)定的權(quán)力在使用得當(dāng)時很少遇到抵抗。——塞·約翰遜2、權(quán)力會使人漸漸失去溫厚善良的美德?！?、最大限度地行使權(quán)力總是令人反感；權(quán)力不易確定之處始終存在著危險。——塞·約翰遜4、權(quán)力會奴化一切?！髻?、雖然權(quán)力是一頭固執(zhí)的熊，可是金子可以拉著它的鼻子走?！勘燃?xì)胞周期(講座)細(xì)胞周期(講座)1、合法而穩(wěn)定的權(quán)力在使用得當(dāng)時很少遇到抵抗。——塞·約翰遜2、權(quán)力會使人漸漸失去溫厚善良的美德。——伯克3、最大限度地行使權(quán)力總是令人反感；權(quán)力不易確定之處始終存在著危險。——塞·約翰遜4、權(quán)力會奴化一切?！髻?、雖然權(quán)力是一頭固執(zhí)的熊，可是金子可以拉著它的鼻子走?！勘燃?xì)胞增殖(cellproliferation)細(xì)胞周期(cellcycle)細(xì)胞分裂（celldivision)一、細(xì)胞增殖(cellproliferation)的意義一個受精卵發(fā)育為初生嬰兒，細(xì)胞數(shù)目增至1012個，長至成年有1014個，約200種類型,而成人體內(nèi)每秒鐘仍有數(shù)百萬新細(xì)胞產(chǎn)生，以補(bǔ)償血細(xì)胞、小腸粘膜細(xì)胞和上皮細(xì)胞等的衰老和死亡?！艏?xì)胞增殖(cellproliferation)是細(xì)胞生命活動的重要特征之一,是生物繁育的基礎(chǔ)?！魡渭?xì)胞生物細(xì)胞增殖導(dǎo)致生物個體數(shù)量的增加?！舳嗉?xì)胞生物由一個單細(xì)胞(受精卵)分裂發(fā)育而來，細(xì)胞增殖是多細(xì)胞生物繁殖基礎(chǔ)?！舫审w生物仍然需要細(xì)胞增殖，主要取代衰老死亡的細(xì)胞,維持個體細(xì)胞數(shù)量的相對平衡和機(jī)體的正常功能◆機(jī)體創(chuàng)傷愈合、組織再生、病理組織修復(fù)等，都要依賴細(xì)胞增殖。二、細(xì)胞周期(cellcycle)◆概念：

細(xì)胞周期的概念由Howard和Pelc,在1953年提出。一次細(xì)胞分裂結(jié)束到下一次分裂完成所經(jīng)歷的一個有序過程。其間細(xì)胞遺傳物質(zhì)和其他內(nèi)含物分配給子細(xì)胞。也稱細(xì)胞生活周期(celllifecycle)或細(xì)胞繁殖周期(cellreproductivecycle)（細(xì)胞周期是第一次分裂開始到第二次分裂開始所經(jīng)歷的全過程?！镀胀ㄉ飳W(xué)》陳閱增）◆歷史：

●上世紀(jì)50年代以前，有絲分裂期

（mitosis）、間期(interphase)。

●1953年Howard和Pelc用32P的磷酸鹽作為標(biāo)記物浸泡蠶豆發(fā)芽，取根尖作放射自顯影發(fā)現(xiàn):DAN合成期(DANsynthesisphase，S期)。

第一時間間隔期（firstgap，

G1期）。

第二時間間隔期（secondgap，

G2期）。

提出：細(xì)胞沿著G1→S→G2→M→G1周期性運轉(zhuǎn)（標(biāo)準(zhǔn)細(xì)胞周期，standardcellcycle)。

●1957年，3H-TdR放射自顯影、Feulgen染色等證實：該細(xì)胞周期在動、植物細(xì)胞增殖中普遍存在。（一）細(xì)胞周期的時相組成

G1(Gap1)

間期S(DNAsynthesis) G2(Gap2)細(xì)胞周期 分裂期M

前期（prophase）中期（metaphase）后期（anaphase）末期（telophase）（一）細(xì)胞周期時相組成·間期(interphase):G1phase，Sphase，G2phase·分裂期（Mphase）:有絲分裂(Mitosis)和減數(shù)分裂(Meiosis）·分裂期（Mphase）：Mitosis(nucleardivision)Cytokinesis(cytoplasmicdivision)

細(xì)胞沿著G1→S→G2→M→G1周期性運轉(zhuǎn)，在間期細(xì)胞體積增大(生長)，在M期細(xì)胞先是核分裂,接著胞質(zhì)分裂，完成一個細(xì)胞周期。細(xì)胞周期ThecellcycleOverviewofthecellcycleThemostbasicfunctionofthecellcycleistoduplicateaccuratelythevastamountofDNAinthechromosomesandthensegregatethecopiespreciselyintotwogeneticallyidenticaldaughtercells.大多數(shù)大多數(shù)昆蟲的受精卵、某些菌類和藻類先進(jìn)行多次核分裂，形成多核細(xì)胞，然后再發(fā)生胞質(zhì)分裂，在核間形成質(zhì)膜，從而形成一個細(xì)胞一個核。黏菌則不發(fā)生胞質(zhì)分裂。骨骼肌細(xì)胞也有多核現(xiàn)象。

（二）細(xì)胞周期時間·不同細(xì)胞的細(xì)胞周期時間差異很大·S+G2+M的時間變化較小,G1期的時間變化大·有些分裂增殖的細(xì)胞缺乏G1、G2期如蛙胚卵裂哺乳動物細(xì)胞周期的時間（hr）細(xì)胞類型TCTG1TSTG2+M人結(jié)腸上皮細(xì)胞259142直腸上皮細(xì)胞4833105胃上皮細(xì)胞249123骨髓細(xì)胞182124大鼠十二脂腸隱窩細(xì)胞10.42.27.01.2內(nèi)釉質(zhì)上皮細(xì)胞27.316.08.03.3肝細(xì)胞47.528.016.03.5·TC

＝TG1+TS+TG2+

TMTC:（細(xì)胞周期時間）·S+G2+M的時間變化較小,G1期的時間變化大

·細(xì)胞周期時間測定：細(xì)胞周期的時間長短與細(xì)胞類型有關(guān)，如：小鼠十二指腸上皮細(xì)胞的周期為10小時，人類胃上皮細(xì)胞24小時，骨髓細(xì)胞18小時，培養(yǎng)的人成纖維細(xì)胞18小時，CHO細(xì)胞14小時，HeLa細(xì)胞21小時。不同類型細(xì)胞的G1長短不同，是造成細(xì)胞周期差異的主要原因。1、脈沖標(biāo)記DNA復(fù)制和細(xì)胞分裂指數(shù)觀察測定法

3H-TdR標(biāo)記，洗滌，培養(yǎng)，定時取樣，放射自顯影分析。

BrdU(5-溴脫氧尿嘧啶核苷)可替代T。2、流式細(xì)胞分選儀檢測法根據(jù)DNA含量分類細(xì)胞，根據(jù)類群細(xì)胞的數(shù)量推斷時間。細(xì)胞周期各階段的時間(細(xì)胞周期測定)TG2－G2期時間，TM－M期時間，TS－S期時間，TC－細(xì)胞周期時間，TG1＝TC

－（TG2

＋TM＋

TS

）2、流式細(xì)胞分選儀檢測法

流式細(xì)胞儀（FlowCytometry）流式細(xì)胞儀的基本工作原理：

包在鞘液（包被細(xì)胞的液流）中的細(xì)胞通過高頻振蕩控制的噴嘴，形成包含單個細(xì)胞的液滴，在激光束的照射下，這些細(xì)胞發(fā)出的熒光和散射光，經(jīng)探測器檢測，轉(zhuǎn)換為電信號，送入計算機(jī)處理，輸出統(tǒng)計結(jié)果。（將細(xì)胞某成分的熒光信號→電信號→疊加信號的圖形）流式細(xì)胞儀的主要應(yīng)用：定量測定細(xì)胞中的DNA、RNA或某一特異蛋白的含量；測定細(xì)胞群體中不同時相細(xì)胞的數(shù)量；

從細(xì)胞群體中分離某些特異染色的細(xì)胞；

分離DNA含量不同的中期染色體。A.細(xì)胞周期中DNA含量變化；B.流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞周期根據(jù)DNA含量分類細(xì)胞，根據(jù)類群細(xì)胞的數(shù)量推斷時間。3、縮時攝像技術(shù)

可以得到準(zhǔn)確的細(xì)胞周期時間及分裂間期和分裂期的準(zhǔn)確時間。（三）根據(jù)增殖狀況，高等動物細(xì)胞分為三類有絲分裂周期G0G1G2SM（三）根據(jù)增殖狀況，高等動物細(xì)胞分為三類EmbryocellsCyclingcellsG0cellsTerminalcells各增殖類型的代表組織細(xì)胞·周期中細(xì)胞(cyclingcell)或連續(xù)分裂細(xì)胞：如表皮生發(fā)層細(xì)胞（basalcelllayer）

、部分骨髓細(xì)胞(bonemarrowstemcells)。

·終末分化細(xì)胞（Terminallydifferentiatedcells）：不分裂細(xì)胞，指不可逆地脫離細(xì)胞周期，不再分裂的細(xì)胞，又稱終端細(xì)胞，如神經(jīng)、肌肉、多形核細(xì)胞等?！ば菝呒?xì)胞(G0期細(xì)胞，G0phasecell)：G0期多發(fā)生在G1期，如成纖維細(xì)胞、某些淋巴細(xì)胞、肝細(xì)胞、腎細(xì)胞等。G0期細(xì)胞和終末分化細(xì)胞的界限有時難以劃分，有的細(xì)胞過去認(rèn)為屬于終末分化細(xì)胞，目前可能被認(rèn)為是G0期細(xì)胞。（四）細(xì)胞周期中不同時相及其

主要事件◆G1期◆S期◆G2期◆M期1.G1stage（Thefirstgap,DNA合成前期）◆G1

期較其他時期長◆細(xì)胞體積增大細(xì)胞表面積∕體積之比變小;核∕質(zhì)比變小◆合成各種糖類、RNA和蛋白質(zhì)等

●合成各種RNA

Baserga(1956)用放線菌素D(ActinomycinD)作用于G1期的細(xì)胞，抑制RNA的合成，結(jié)果細(xì)胞就不能進(jìn)入S期?！窈铣筛鞣N蛋白質(zhì)：

G1期向S期轉(zhuǎn)變的pro:觸發(fā)蛋白、鈣調(diào)蛋白、細(xì)胞周期蛋白（觸發(fā)蛋白(triggerprotein)

：一類不穩(wěn)定蛋白質(zhì)，只有當(dāng)含量達(dá)到臨界值時，才可轉(zhuǎn)向DNA復(fù)制方向。鈣調(diào)蛋白：核內(nèi)Ca2+受體，調(diào)節(jié)Ca2+濃度；在G1末達(dá)峰值，促進(jìn)G1向S轉(zhuǎn)變。細(xì)胞周期蛋白(cyclin)：一類隨細(xì)胞周期的變化呈周期性的出現(xiàn)與消失的蛋白質(zhì)，在細(xì)胞周期的不同階段表達(dá)，發(fā)揮不同的調(diào)控作用。它可以與細(xì)胞周期基因的產(chǎn)物（p34cdc2）結(jié)合并調(diào)節(jié)其活性，是MPF的調(diào)節(jié)亞基。）

Ieranlma和Yasukaw(1966)用蛋白質(zhì)合成抑制劑抑制G1期細(xì)胞的蛋白質(zhì)合成，細(xì)胞不能進(jìn)入S期

合成與細(xì)胞生長、DNA復(fù)制有關(guān)的酶RNA聚合酶、DNA合成酶等◆蛋白質(zhì)的磷酸化作用加強(qiáng)（與DNA合成啟動相關(guān)）

在蛋白激酶催化下，ATP或GTP的磷酸基轉(zhuǎn)移到底物蛋白質(zhì)氨基酸殘基的過程，激活蛋白質(zhì)的活性。

組蛋白（H1）、非組蛋白、激酶磷酸化◆膜轉(zhuǎn)運功能增加氨基酸、葡萄糖等進(jìn)入細(xì)胞◆染色質(zhì)去凝集◆

G1期的變化

增殖旺盛的細(xì)胞該期時間短，衰退細(xì)胞則時間長。衰老細(xì)胞停止于G1期。許多原生動物、真菌等沒有G1期。高等植物中，休眠期的種子大多處于G1期，由于所處生理條件的不同，G1期數(shù)天至數(shù)年，少數(shù)可停止在G2期。一般，不進(jìn)行分裂或極少分裂的動物細(xì)胞停止在G1期。因接觸抑制(contactInhibition)而停止分裂的培養(yǎng)細(xì)胞也停止在G1期。G1期是為S期的DNA合成做準(zhǔn)備2.S期（DNA合成期）◆脈沖標(biāo)記實驗

◆S期持續(xù)時間不同

APULSE-LABELINGEXPERIMENT1.Feedradioactive

thymidine(T*)to

cellsgrowingin

culture.2.After30minutes,

washunincorporated

T*outofcellculture.3.Spreadoutcells

andlayx-rayfilm

overthem.

有絲分裂前

S期

蠑螈

12小時

小鼠

5～6小時

小麥

3.8小時

酵母

0.5小時ExperimentaldemonstrationofthecoordinatedSynthesisofDNAandhistones.◆DNA復(fù)制與組蛋白合成同步，組成核小體串珠結(jié)構(gòu)核小體（nucleosome）：一種串珠狀結(jié)構(gòu)。構(gòu)成：200bpDNA、5種組蛋白核心：4種組蛋白（H2A、H2B、H3、H4）各2個分子組成八聚體核心顆粒；圓盤形相鄰核小體：H1組蛋白結(jié)合60bp連接DNAH1鎖住DNA分子進(jìn)出口，穩(wěn)定結(jié)構(gòu)組蛋白：與組裝構(gòu)成染色質(zhì)等有關(guān)

染色質(zhì)的基本結(jié)構(gòu)單位——核小體(nucleosome)

鋪展染色質(zhì)的電鏡觀察

未經(jīng)處理的染色質(zhì)自然結(jié)構(gòu)為30nm的纖絲，經(jīng)鹽溶液處理后解聚的染色質(zhì)呈現(xiàn)10nm串珠狀結(jié)構(gòu)

核小體的性質(zhì)及結(jié)構(gòu)要點示意圖（引自B.Alberts等）

在用微球菌核酸酶降解染色質(zhì)時，反應(yīng)早期可得到166bp的片段，但不穩(wěn)定；進(jìn)一步降解則得到146bp片段，比較穩(wěn)定。推測可能原因是失去H1后，DNA兩端各有10bp的DNA，易被核酸酶作用而降解。多級螺旋模型核小體10nm纖維30nm纖維螺線管◆中心粒復(fù)制中心粒的發(fā)育過程（中心體周期）

微管（microtubule）的結(jié)構(gòu)組成與極性MT可裝配成單管,二聯(lián)管(纖毛和鞭毛中),三聯(lián)管(中心粒和基體中)。Arrangementofprotofilamentsinsinglet,double,andtripletMTsSingletDoubleTripletABABCInciliaandflagellaIncentriolesandbasalbodiesMT的成分-tubulin（微管蛋白）和-tubulin聚合，形成異二聚體微管蛋白上有（1）GTP結(jié)合位點：與α微管蛋白GTP結(jié)合位點結(jié)合的GTP不發(fā)生水解或交換，稱為不可交換位點（nonexchangeablesite,Nsite）。微管組裝時與β微管蛋白結(jié)合的GTP可發(fā)生水解，去組裝后結(jié)合的GDP可交換為GTP，故稱為可交換位點（nexchangeablesite,Esite）。（2）二價陽離子結(jié)合位點。（3）秋水仙素結(jié)合位點。（4）長春花堿結(jié)合位點。異二聚體組裝，形成原纖維；13條原纖維，形成一根微管；有極性（即頭尾）,頭（－極），尾（

＋極）作用于微管的特異性藥物

秋水仙素(colchicine)：與-tubulin肽鏈中第201位Cys（胱氨酸）結(jié)合，阻斷微管蛋白組裝成微管，可破壞紡錘體結(jié)構(gòu)。紫杉酚(taxol)能促進(jìn)微管的裝配,并使已形成的微管穩(wěn)定。但這種穩(wěn)定對細(xì)胞是有害的，使細(xì)胞停止于有絲分裂期。◆中心粒復(fù)制中心粒的發(fā)育過程（中心體周期）

微管組織中心：在活細(xì)胞內(nèi)，能夠起始微管的成核作用并使之延伸的細(xì)胞結(jié)構(gòu)稱為微管組織中心（microtubuleorganizingcenter，MTOC）。微管組織中心決定了細(xì)胞中微管的極性，微管的負(fù)極指向微管組織中心，正極背向微管組織中心。如動物細(xì)胞中的中心體(centrosome),也存在于低等植物細(xì)胞（如衣藻、團(tuán)藻等藻類植物），高等植物細(xì)胞無中心體。中心體(centrosome)中心粒（centrioles）：位于紡錘體兩端，由9組三聯(lián)管構(gòu)成中心體(centrosome)：由一對相互垂直的中心粒及周圍基質(zhì)構(gòu)成。

γ管蛋白：位于中心體周圍的基質(zhì)中，環(huán)形結(jié)構(gòu)，結(jié)構(gòu)穩(wěn)定，為αβ微管蛋白二聚體提供起始裝配位點，所以又叫成核位點

·中心粒(centrioles)結(jié)構(gòu)

·中心粒復(fù)制周期

結(jié)構(gòu):9組微管三聯(lián)體，中心體具有9（3）＋2結(jié)構(gòu)

a:中心體及周圍物質(zhì)（PCM);b:9組微管三聯(lián)體呈風(fēng)車狀排列;c:兩對中心體；d:微管在MTOC上的聚合

γ管蛋白：位于中心體周圍的基質(zhì)中，環(huán)形結(jié)構(gòu)，結(jié)構(gòu)穩(wěn)定，為αβ微管蛋白二聚體提供起始裝配位點，所以又叫成核位點γ管蛋白成核位點成核模型及微管組裝◆中心粒復(fù)制中心粒的發(fā)育過程（中心體周期）中心粒在G1中期以后開始分開。中心粒在S期復(fù)制：兩個中心粒各產(chǎn)生了一個新的中心粒。中心體在G2晚期至M早期（前期），長大并向細(xì)胞兩極移動。中心體（Centrosome）存在于低等植物細(xì)胞（如衣藻、團(tuán)藻等藻類植物）和動物細(xì)胞中

◆DNA復(fù)制不同步，早期GC合成較多，晚期AT合成較多；常染色質(zhì)復(fù)制較早，異染色質(zhì)復(fù)制較晚；復(fù)制以多個復(fù)制子進(jìn)行◆此期遺傳物質(zhì)較易受損，因為DNA在合成過程中核苷酸雙鏈分開，易受致突變致癌物的影響?！粲肈NA合成抑制劑處理，細(xì)胞將停留在S期。G2期◆細(xì)胞繼續(xù)長大◆DNA復(fù)制完成(2n→4n)◆在G2期合成一定數(shù)量的蛋白質(zhì)和RNA分子◆中心體在G2期長大，G2晚期開始向細(xì)胞兩極移動◆合成微管蛋白等,為M期紡錘體準(zhǔn)備◆G2期DNA已經(jīng)加倍，對環(huán)境較敏感，容易受溫度、pH等的影響而停滯，當(dāng)這些因素去除后能恢復(fù)。增殖型腫瘤細(xì)胞若在G2期，宜用放療。◆G2期的持續(xù)時間較短。M期

◆M期即細(xì)胞分裂期，真核細(xì)胞的細(xì)胞分裂主要包括兩種方式，即有絲分裂(mitosis)和減數(shù)分裂(meiosis)。遺傳物質(zhì)和細(xì)胞內(nèi)其他物質(zhì)分配給子細(xì)胞?！羧旧|(zhì)凝集，紡錘體形成，收縮環(huán)出現(xiàn)，

遺傳物質(zhì)和細(xì)胞內(nèi)其他物質(zhì)分配給子細(xì)胞

◆M期的持續(xù)時間較短?！ohnson和

Rao(1970)將人HelaM期細(xì)胞與袋鼠（Ptk）G1、S、G2期細(xì)胞融合誘導(dǎo)間期細(xì)胞的染色體發(fā)生凝縮(早熟凝集染色體PCC)：

G1期PCC為單線狀，因DNA未復(fù)制；S期PCC為粉末狀，因DNA由多個部位開始復(fù)制；G2期PCC為雙線染色體，說明DNA復(fù)制已完成。提示M期細(xì)胞存在誘導(dǎo)PCC的因子稱成熟促進(jìn)因子(maturationpromotingfactor，MPF)。MPF促進(jìn)間期細(xì)胞分裂不同形態(tài)的PCC（五）細(xì)胞周期檢驗點(checkpoint)細(xì)胞周期檢驗點：是存在于細(xì)胞周期G1、M、G2時相中調(diào)控細(xì)胞周期運行的特殊時期。主要是確保周期每一時相事件的有序、全部完成，并與外界因素（營養(yǎng)和激素等）和內(nèi)在因素（細(xì)胞分裂周期基因cdc）相聯(lián)系。

.

◆G1期檢驗點：酵母——Start；動物細(xì)胞——RestrictionPoint

，R點控制G1進(jìn)入DNA合成期，相關(guān)的事件包括：DNA是否損傷？細(xì)胞外環(huán)境如營養(yǎng)、細(xì)胞生長因子等是否適宜？細(xì)胞體積是否

足夠大等？

細(xì)胞所得養(yǎng)分不足時：→G1→→G0人體正常器官、組織的細(xì)胞周期進(jìn)程中,若發(fā)生R點的消失，自分泌大量生長因子等異常情況時，其生長、分裂將失去控制，由此形成贅生物如腫瘤?！鬝期檢驗點：DNA復(fù)制是否完成？◆G2期檢驗點：DNA是否損傷？細(xì)胞體積是否足夠大？◆M期檢驗點（中-后期檢驗點，紡錘體組裝檢驗點）：紡錘體是否形成？著絲點是否正確連接到紡錘體上？染色體是否完好？

(六）細(xì)胞周期同步化細(xì)胞周期同步化(synchronization)是指在自然過程中發(fā)生或經(jīng)人為處理造成的細(xì)胞周期同步化，前者稱自然同步化，后者稱為人工同步化。細(xì)胞周期的同步化只是暫時性的，經(jīng)過幾代分裂之后，細(xì)胞群又會處于周期不同步狀態(tài)。1、自然同步化，◆多核體：如某種粘菌的變形體（plasmodia）只進(jìn)行核分裂，而不發(fā)生胞質(zhì)分裂，形成多核體。數(shù)量眾多的核處于同一細(xì)胞質(zhì)中，進(jìn)行同步化分裂，使細(xì)胞核達(dá)108，體積達(dá)6~9cm。◆某些動物受精卵早期卵裂Fruitflyembryo◆某些水生動物的受精卵：如海膽卵可以同時授精，最初的3次細(xì)胞分裂是同步的，再如大量海參卵受精后，前9次細(xì)胞分裂都是同步化進(jìn)行的。◆增殖抑制解除后的同步分裂：如真菌的休眠孢子移入適宜環(huán)境后，它們一起發(fā)芽，同步分裂。2、人工同步化（1）人工選擇同步化：◆有絲分裂選擇法：使單層培養(yǎng)的細(xì)胞處于對數(shù)增殖期，此時分裂活躍。有絲分裂細(xì)胞變圓隆起，與培養(yǎng)皿的附著性低，此時輕輕振蕩，M期細(xì)胞脫離器壁，懸浮于培養(yǎng)液中，收集培養(yǎng)液，再加入新鮮培養(yǎng)液，依法繼續(xù)收集，則可獲得一定數(shù)量的中期細(xì)胞。其優(yōu)點是，操作簡單，同步化程度高，細(xì)胞不受藥物傷害，缺點是獲得的細(xì)胞數(shù)量較少。（分裂細(xì)胞約占1%～2%）◆細(xì)胞沉降分離法：不同時期的細(xì)胞體積不同，而細(xì)胞在給定離心場中沉降的速度與其半徑的平方成正比，因此可用離心的方法分離。其優(yōu)點是可用于任何懸浮培養(yǎng)的細(xì)胞，方法簡單省時，效率高，成本低。，缺點是同步化程度較低，對大多數(shù)種類的細(xì)胞并不適用。

常用密度梯度離心法（densitygradientcentrifugation）：根據(jù)不同時期的細(xì)胞在體積和重量上存在差別進(jìn)行分離。如混合細(xì)胞懸液經(jīng)蔗糖密度梯度離心后，小細(xì)胞集中在蔗糖梯度的頂部，搜集起來便可進(jìn)行同步培養(yǎng)。酵母和哺乳動物細(xì)胞培養(yǎng)物可用此法同步化分選。差速離心密度梯度離心（2）藥物誘導(dǎo)同步化◆DNA合成陰斷法：選用DNA合成的抑制劑，可逆地抑制DNA合成，而不影響其他時期細(xì)胞的運轉(zhuǎn)，最終可將細(xì)胞群阻斷在S期或G/S交界處。5-氟脫氧尿嘧啶、羥基脲、阿糖胞苷、氨甲蝶呤、高濃度ADR、GDR和TDR，均可抑制DNA合成使細(xì)胞同步化。其中高濃度TdR對S期細(xì)胞的毒性較小，因此常用TDR雙阻斷法誘導(dǎo)細(xì)胞同步化。優(yōu)點是同步化程度高，適用于任何培養(yǎng)體系?？蓪缀跛械募?xì)胞同步化。缺點是產(chǎn)生非均衡生長，個別細(xì)胞體積增大。TdR阻斷法進(jìn)行細(xì)胞同步化◆中期阻斷法：利用破壞微管的藥物將細(xì)胞阻斷在中期，常用的藥物有秋水仙素和秋水仙酰胺，后者毒性較少。優(yōu)點是無非均衡生長現(xiàn)象，缺點是可逆性較差。3、其他同步化方法◆血清饑餓法、異亮氨酸營養(yǎng)缺乏法等，可獲得大量處于G1期的細(xì)胞?！?/p>

溫度

分裂前細(xì)胞的一些酶對溫度非常敏感，高溫可使分裂停止，而生物合成繼續(xù)進(jìn)行，因此有些細(xì)胞發(fā)生分裂的時間推遲，其他后進(jìn)的細(xì)胞便趁此趕上來，達(dá)到同步化狀態(tài)。Zeutnen和Scherbaum(1954)發(fā)現(xiàn)，將四膜蟲(retrahymena)在29.5℃（最適溫度）與34℃（抑制溫度）兩種溫度下每半小時進(jìn)行交替培養(yǎng)，經(jīng)7次循環(huán)之后，再于24℃下培養(yǎng)，結(jié)果有85%的細(xì)胞發(fā)生了同步分裂?！糨椛浞至亚暗募?xì)胞對射線很敏感，輻射可使細(xì)胞在分裂前積累，隨后去除輻射，細(xì)胞便在同一時間開始分裂?！魲l件依賴性突變株在細(xì)胞周期同步化中的應(yīng)用：將與細(xì)胞周期調(diào)控有關(guān)的條件依賴性突變株轉(zhuǎn)移到限定條件下培養(yǎng)，所有細(xì)胞便被同步化在細(xì)胞周期中某一特定時期。（七）特異的細(xì)胞周期

特異的細(xì)胞周期是指那些特殊的細(xì)胞所具有的與標(biāo)準(zhǔn)的細(xì)胞周期相比有著鮮明特點的細(xì)胞周期?！糇冈缙谂咛ゼ?xì)胞的細(xì)胞周期◆酵母細(xì)胞的細(xì)胞周期◆植物細(xì)胞的細(xì)胞周期◆細(xì)菌的細(xì)胞周期1、爪蟾早期胚胎細(xì)胞的細(xì)胞周期·細(xì)胞分裂快,幾乎無G1期和G2期，S期也短(所有復(fù)制子都激活),以至認(rèn)為僅含有S期和