凝集反應(yīng)（免疫學(xué)檢驗課件）

第十三章凝集反應(yīng)本章要點凝集反應(yīng)概念、特點及類型。1直接凝集反應(yīng)原理、方法類型及臨床應(yīng)用。2間接凝集反應(yīng)原理、方法類型及臨床應(yīng)用。3抗球蛋白試驗原理、方法類型及臨床應(yīng)用。4冷凝集試驗的原理和臨床應(yīng)用。5CONTENTS目錄01020304概述直接凝集反應(yīng)間接凝集反應(yīng)抗球蛋白試驗0506冷凝集試驗小結(jié)概述00概述早在1896年，Widal就利用傷寒病人的血清與傷寒桿菌發(fā)生特異性凝集的現(xiàn)象，有效地診斷傷寒病。至1903年，Landsteiner在特異性血凝現(xiàn)象的基礎(chǔ)上發(fā)現(xiàn)了人類ABO血型，并于1930年獲得了諾貝爾醫(yī)學(xué)獎。概述一、概念一、概念細菌、紅細胞等顆粒性抗原與相應(yīng)抗體結(jié)合后，在適當(dāng)電解質(zhì)存在下，形成肉眼可見的凝集現(xiàn)象。顆粒性抗原還包括可溶性抗原（或抗體）與載體顆粒(O型人紅細胞、綿羊紅細胞、聚苯乙烯膠乳、炭粒等)結(jié)合成的致敏顆粒。概述二、特點二、特點抗原分子大，介質(zhì)中成均勻的顆粒懸液?？乖贵w復(fù)合物以抗原為主。試驗時稀釋抗體。效價報告抗體的稀釋度。概述三、主要技術(shù)類型三、主要技術(shù)類型直接凝集反應(yīng)01直接凝集反應(yīng)細菌、紅細胞等顆?？乖?，在適當(dāng)電解質(zhì)參與下可直接與相應(yīng)抗體結(jié)合出現(xiàn)凝集，稱為直接凝集反應(yīng)（directagglutination）。凝集反應(yīng)中的抗原稱為凝集原（agglutinogen），抗體稱為凝集素（agglutinin）。常用的凝集試驗有玻片法和試管法兩種。直接凝集反應(yīng)一、玻片凝集試驗直接凝集反應(yīng)一、玻片凝集試驗YYY+直接凝集反應(yīng)臨床應(yīng)用:1.菌種鑒定2.血清學(xué)分型3.血型鑒定方法評價:1.操作簡單、快速2.敏感度低3.定性檢測直接凝集反應(yīng)二、試管凝集試驗直接凝集反應(yīng)二、試管凝集試驗在試管內(nèi)顆粒性抗原直接與抗體結(jié)合，在電解質(zhì)的作用下，出現(xiàn)肉眼可見的凝集現(xiàn)象。直接凝集反應(yīng)二、試管凝集試驗為半定量試驗方法，在微生物學(xué)檢驗中常用已知菌液與一系列稀釋的受檢血清混合，保溫后觀察每管內(nèi)抗原凝集程度，通常以產(chǎn)生明顯凝集現(xiàn)象的最高稀釋倍數(shù)作為血清中抗體的效價，亦稱為滴度。二、試管凝集試驗臨床應(yīng)用:1.肥達試驗Widaltest2.外斐氏試驗Weil-felixtest3.交叉配血試驗方法評價:1.半定量試驗2.操作簡便、快速3.敏感度不高4.可有假陽性間接凝集反應(yīng)02間接凝集反應(yīng)將可溶性抗原或抗體吸附于顆粒性載體表面，然后與相應(yīng)的抗體或抗原反應(yīng)，在電解質(zhì)的作用下，出現(xiàn)肉眼可見的凝集現(xiàn)象。間接凝集反應(yīng)一、載體間接凝集反應(yīng)一、載體

RBC

聚苯乙烯膠乳載體的種類離子交換樹脂活性炭明膠顆粒間接凝集反應(yīng)載體的條件：1.不溶于水，理化性質(zhì)穩(wěn)定且無化學(xué)和免疫學(xué)活性。2.大小均勻，密度與介質(zhì)相近。3.能直接吸附和通過偶聯(lián)劑牢固結(jié)合抗原抗體。間接凝集反應(yīng)二、方法類型二、方法類型根據(jù)致敏載體用的是抗原或抗體以及凝集反應(yīng)的方式不同，間接凝集反應(yīng)可分為4類:1.正向間接凝集試驗2.反向間接凝集試驗3.間接凝集抑制試驗4.協(xié)同凝集試驗間接凝集反應(yīng)二、方法類型間接凝集反應(yīng)二、方法類型間接凝集反應(yīng)二、方法類型間接凝集反應(yīng)二、方法類型間接凝集反應(yīng)三、間接血凝試驗間接凝集反應(yīng)三、間接血凝試驗抗原致敏紅細胞紅細胞+抗原抗原致敏紅細胞凝集抗體間接凝集反應(yīng)四、膠乳凝集試驗間接凝集反應(yīng)四、膠乳凝集試驗?zāi)z乳凝集試驗也是間接凝集反應(yīng)，因所用的載體顆粒為聚苯乙烯膠乳而得名。間接凝集反應(yīng)膠乳凝集抑制試驗檢測HCG：標(biāo)本中加入相應(yīng)量的HCG抗體，抗體與尿中HCG結(jié)合，再加入HCG膠乳抗原，本應(yīng)凝集反應(yīng)受到抑制，說明尿中含HCG，妊娠反應(yīng)陽性。抗球蛋白試驗03抗球蛋白試驗抗球蛋白試驗由C-oombs于1945年建立，故又稱為Coombs試驗，是檢測抗紅細胞不完全抗體的經(jīng)典方法。Coombs利用抗球蛋白抗體作為第二抗體，連接結(jié)合在紅細胞表面抗原的不完全抗體，使紅細胞凝集。常用試驗方法有直接抗球蛋白試驗和間接抗球蛋白試驗?？骨虻鞍自囼炓?、直接抗球蛋白試驗抗球蛋白試驗一、直接抗球蛋白試驗一、直接抗球蛋白試驗直接抗球蛋白試驗既可用玻片法定性測定，也可用試管法作半定量分析。常用于新生兒溶血癥、自身免疫性溶血性貧血和醫(yī)源性溶血性疾病等的檢測。抗球蛋白試驗二、間接抗球蛋白試驗抗球蛋白試驗二、間接抗球蛋白試驗二、間接抗球蛋白試驗此試驗可用于檢測母體Rh（D）抗體，以便及早發(fā)現(xiàn)和避免新生兒溶血癥的出現(xiàn)。還可對某些細菌、立克次體感染后產(chǎn)生的不完全抗體進行檢測?？捎糜趯t細胞不相容輸血所產(chǎn)生的血型抗體進行檢測。冷凝集試驗04冷凝集試驗冷凝集試驗是用于檢測血清中冷凝集素的方法。冷凝集素（coldagglutinin）是冷反應(yīng)型抗紅細胞抗體，具有較強的凝集紅細胞的作用，屬于IgM型抗體，可存在于正常人血清中，但是正常人血清抗紅細胞抗原的lgM冷凝集素效價比較低。冷凝集試驗冷凝集試驗可協(xié)助診斷肺炎支原體感染引起的肺炎，可用于輔助診斷冷凝集素綜合征、傳染性單核細胞增多癥、瘧疾、肝硬化、淋巴瘤及多發(fā)性骨髓瘤等。冷凝集試驗是傳統(tǒng)的實驗方法，但是其敏感度和特異性不強。小結(jié)Sumup方法類型原理臨床用途方法評價玻片凝集試驗抗原與抗體在玻片上直接反應(yīng)血型的鑒定、菌種診斷或分型簡便、快速，敏感度低，多用于定性試驗試管凝集試驗抗原與系列倍比稀釋的血清在試管內(nèi)反應(yīng)交叉配血、輔助診斷傷寒和斑疹傷寒操作簡單，敏感度不高，為半定量試驗間接凝集試驗抗原（抗體）致敏載體，檢測標(biāo)本中相應(yīng)抗體（抗原）檢測病原微生物和自身免疫病相關(guān)抗體操作簡單、快速，敏感度和特異性高小結(jié)Sumup方法類型原理臨床用途方法評價間接凝集抑制試驗抗原致敏載體檢測是否存在與致敏抗原相同的抗原絨毛膜促性腺激素(HCG)的檢測靈敏度高于上面間接凝集試