HIV感染的血清學(xué)檢測(cè)

HIV感染的血清學(xué)檢測(cè)1精選課件ppt內(nèi)容HIV抗體檢測(cè)：HIV抗體篩查檢測(cè)HIV確認(rèn)實(shí)驗(yàn)HIVP24抗原檢測(cè)：2精選課件pptHIV抗體檢測(cè)全國(guó)艾滋病檢測(cè)技術(shù)規(guī)范NationalGuidelineforDetectionofHIV/AIDS（2004年版）3精選課件pptHIV抗體檢測(cè)可用于監(jiān)測(cè)、診斷、血液篩查：以監(jiān)測(cè)為目的的檢測(cè)是為了解不同人群HIV感染率及其變化趨勢(shì)而進(jìn)行的檢測(cè)，檢測(cè)的人群包括各類高危人群和一般人群。以診斷為目的的檢測(cè)是為了確定個(gè)體HIV感染狀況而進(jìn)行的檢測(cè)，包括臨床檢測(cè)和自愿咨詢檢測(cè)、術(shù)前檢測(cè)、根據(jù)特殊需要進(jìn)行的體檢等。以血液篩查為目的的檢測(cè)是為了防止輸血傳播HIV而進(jìn)行的檢測(cè)，包括獻(xiàn)血員篩查和原料血漿篩查。HIV抗體檢測(cè)分為篩查試驗(yàn)（包括初篩和復(fù)檢）和確認(rèn)試驗(yàn)4精選課件ppt

HIV抗體試劑盒進(jìn)展代次抗原方法 特異性檢測(cè)檢測(cè)時(shí)間 1全病毒間接IgG抗體HIV-1

>2個(gè)月 2重組或多肽間接IgG抗體HIV-1/-2

3-4周 3重組+多肽夾心IgM/IgG抗體4-7天HIV-1/-2/-O 4抗原+抗體夾心 IgM/IgG抗體抗原5pgHIV-1/-2/-Op24抗原5精選課件ppt

HIV抗體檢測(cè)篩查試驗(yàn)6精選課件pptHIV抗體篩查檢測(cè)程序 篩查、復(fù)檢、確認(rèn)原理 酶聯(lián)免疫、凝集、層析標(biāo)本 血液、唾液、尿液、組織液產(chǎn)品 ELISA、快速、簡(jiǎn)單7精選課件ppt篩查試劑要求HIV?混合型 國(guó)家SDA生物診斷試劑注冊(cè)批準(zhǔn)批檢合格臨床評(píng)估質(zhì)量?jī)?yōu)良8精選課件ppt篩查方法：常用的篩查方法是酶聯(lián)免疫試驗(yàn)（ELISA）快速檢測(cè)（RT）及其它檢測(cè)

(1)明膠顆粒凝集試驗(yàn)(PA)(2)斑點(diǎn)EIA或稱斑點(diǎn)ELISA(dot-EIA)(3)斑點(diǎn)免疫膠體金（或膠體硒）快速試驗(yàn)

(4)艾滋病唾液檢測(cè)卡尿液HIV抗體檢測(cè)9精選課件ppt一、酶聯(lián)免疫試驗(yàn)：ELISA

10精選課件ppt包被抗原血中抗體與抗原反應(yīng)顯色反應(yīng)酶聯(lián)免疫法病毒溶解抗原、重組的衍生抗原、合成肽抗原酶聯(lián)HRP、AP或化學(xué)發(fā)光11精選課件ppt（一）斑點(diǎn)EIA或稱斑點(diǎn)ELISA（dot-EIA）以硝酸纖維膜為載體，將HIV抗原滴在膜上成點(diǎn)狀，即為固相抗原。加血清樣品作用，以后步驟同ELISA。陽(yáng)性結(jié)果在膜上抗原部位顯示出有色斑點(diǎn)。反應(yīng)時(shí)間在10min以內(nèi)，使用抗原量少。二、快速診斷試劑12精選課件ppt（二）免疫膠體金（或膠體硒）快速試驗(yàn)與斑點(diǎn)EIA相似，也是以硝酸纖維膜為載體。區(qū)別在于不用酶標(biāo)記抗體，而代之以紅色的膠體金（或膠體硒）A蛋白，用滲濾法作為洗滌方法。13精選課件ppt穩(wěn)定，可室溫長(zhǎng)期保存。試驗(yàn)不需任何設(shè)備，迅速、簡(jiǎn)便、特異性較好，敏感性約相當(dāng)于中度敏感的ELISA，適用于應(yīng)急檢測(cè)、門診急診個(gè)體檢測(cè)。已有被SFDA批準(zhǔn)注冊(cè)的進(jìn)口試劑和國(guó)內(nèi)產(chǎn)品。一般可在1030min內(nèi)判讀結(jié)果。免疫膠體硒快速試驗(yàn)特點(diǎn)14精選課件ppt樣品墊:

加入血漿,血清或全血樣品.紅細(xì)胞在此遷移過(guò)程中被去除質(zhì)控條:固定的含捕捉硒標(biāo)物的特異性試劑,不管樣品中有無(wú)被檢測(cè)物都應(yīng)出現(xiàn)紅色線條.控制測(cè)試結(jié)果的有效性病人條:固定的含特異性分析試劑,任何與硒標(biāo)特異性試劑結(jié)合的分析復(fù)合物在此被結(jié)合固定,形成三文治結(jié)合物,肉眼可見的紅色線條說(shuō)明有陽(yáng)性反應(yīng)連接物墊:含分析特異性試劑結(jié)合的硒標(biāo),為一種肉眼可見的紅色信號(hào),被分析物和硒標(biāo)特異性試劑在此反應(yīng)結(jié)合15精選課件ppt

撕下所需的測(cè)試紙條數(shù),撕下表面保護(hù)膜16精選課件ppt血清/血漿樣品加50ul樣品于樣品墊中15分鐘內(nèi)讀取結(jié)果17精選課件ppt全血樣品加50ul樣品于樣品墊中手指血方法靜脈血方法加一滴緩沖液15分鐘內(nèi)讀取結(jié)果18精選課件ppt病人條質(zhì)控條19精選課件ppt注意事項(xiàng)非EDTA抗凝的血漿樣品可能會(huì)得到不正確的結(jié)果反應(yīng)條顏色深淺的程度與樣品中抗體的滴度沒有必然的聯(lián)系結(jié)果的判斷……20精選課件ppt

（三）艾滋病唾液檢測(cè)卡在硝酸纖維膜上包被人工合成的HIVgp41/gp36蛋白抗原，可同時(shí)檢測(cè)含在唾液中的HIV-1/HIV-2抗體，原理為酶免疫間接法。主要檢測(cè)唾液中的HIVIgA與IgG抗體，敏感性特異性與ELISA相近，可避免靜脈穿刺。但樣品預(yù)處理時(shí)間長(zhǎng)且售價(jià)較高。以唾液為樣品測(cè)定HIV抗體的ELISA、免疫印跡法（WB）試劑已經(jīng)美國(guó)FDA批準(zhǔn)。21精選課件ppt（四）明膠顆粒凝集試驗(yàn)（PA）PA是HIV血清抗體檢測(cè)的一種簡(jiǎn)便方法，是將HIV抗原致敏明膠顆粒作為載體，與待檢樣品作用，混勻后保溫（一般為室溫）。當(dāng)待檢樣品含有HIV抗體時(shí)，經(jīng)抗原致敏的明膠顆粒與抗體發(fā)生抗原-抗體反應(yīng)，根據(jù)明膠顆粒在孔中的凝集情況判讀結(jié)果。PA試劑有兩種，HIV-1和HIV-2抗原共同致敏的PA試劑（AFDHIV-1/2PA），已經(jīng)我國(guó)食品藥品監(jiān)督管理局（SFDA）注冊(cè)批準(zhǔn)；HIV-1、HIV-2抗原分別致敏的PA試劑（SERODIA-HIV-1/2）可初步區(qū)分HIV-1型和HIV-2型，目前我國(guó)尚未引進(jìn)。22精選課件ppt

尿液測(cè)定采樣優(yōu)點(diǎn)，尤其對(duì)吸毒者標(biāo)本機(jī)理：IgA為主，IgG少量HIV-1型抗體陽(yáng)性結(jié)果務(wù)必用血清學(xué)檢測(cè) 23精選課件ppt快速試劑的應(yīng)用偏遠(yuǎn)地區(qū)急診臨床（高危）職業(yè)暴露臨產(chǎn)24精選課件ppt結(jié)果報(bào)告：對(duì)呈陰性反應(yīng)的樣品，可由實(shí)施檢測(cè)的實(shí)驗(yàn)室出具HIV抗體陰性報(bào)告。對(duì)呈陽(yáng)性反應(yīng)的樣品，須進(jìn)行復(fù)檢，不能出陽(yáng)性報(bào)告。復(fù)檢試驗(yàn)：對(duì)初篩呈陽(yáng)性反應(yīng)的樣品用原有試劑和另外一種不同原理或不同廠家的篩查試劑重復(fù)檢測(cè)。如果兩種試劑復(fù)測(cè)均呈陰性反應(yīng)，則報(bào)告HIV抗體陰性；如均呈陽(yáng)性反應(yīng)，或一陰一陽(yáng)，需送艾滋病確認(rèn)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行確認(rèn)。

對(duì)初篩試驗(yàn)呈陽(yáng)性反應(yīng)者不能出陽(yáng)性報(bào)告，可出具“HIV抗體待復(fù)查”報(bào)告。25精選課件ppt初篩試驗(yàn)呈陽(yáng)性反應(yīng)樣品的轉(zhuǎn)送：

填寫“HIV抗體待復(fù)測(cè)送檢單”，經(jīng)1名檢驗(yàn)人員和1名具有中級(jí)以上技術(shù)職稱的人員審核簽字。送當(dāng)?shù)匕滩『Y查中心實(shí)驗(yàn)室，再轉(zhuǎn)送艾滋病確認(rèn)實(shí)驗(yàn)室，或在本實(shí)驗(yàn)室復(fù)檢后直接送確認(rèn)實(shí)驗(yàn)室。

對(duì)篩查陰性和陽(yáng)性者，均需做好檢測(cè)后咨詢。26精選課件ppt樣本初篩檢測(cè)一陰一陽(yáng)均陽(yáng)性反應(yīng)陰性報(bào)告送確認(rèn)實(shí)驗(yàn)室確認(rèn)重復(fù)檢測(cè)陰性報(bào)告均陰性反應(yīng)陽(yáng)性反應(yīng)原有試劑＋另一種原理初篩試劑用初篩試劑陰性反應(yīng)HIV抗體初篩檢測(cè)流程圖27精選課件ppt

初篩試驗(yàn)結(jié)果的報(bào)告對(duì)HIV抗體篩查試驗(yàn)：“—”“HIV抗體陰性”報(bào)告（可用附表“+”不能出陽(yáng)性報(bào)告，可出具“HIV抗體待復(fù)查”報(bào)告28精選課件ppt對(duì)HIV抗體篩查試驗(yàn)，呈陰性反應(yīng)者可出具“HIV抗體陰性”報(bào)告29精選課件ppt對(duì)初篩試驗(yàn)呈陽(yáng)性反應(yīng)者不能出陽(yáng)性報(bào)告，可出具“HIV抗體待復(fù)查”報(bào)告30精選課件ppt31精選課件ppt

HIV抗體檢測(cè)確認(rèn)試驗(yàn)32精選課件pptHIV抗體確認(rèn)試驗(yàn)確認(rèn)試驗(yàn)的試劑：必須是經(jīng)國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局注冊(cè)批準(zhǔn)、在有效期內(nèi)的試劑。確認(rèn)試驗(yàn)方法：包括免疫印跡試驗(yàn)(WB)、條帶免疫試驗(yàn)(LIATEKHIVⅢ)、放射免疫沉淀試驗(yàn)(RIPA)及免疫熒光試驗(yàn)(IFA)。國(guó)內(nèi)常用的確認(rèn)試驗(yàn)方法是WB。33精選課件ppt蛋白印跡實(shí)驗(yàn)（WB）

——廣泛使用的確認(rèn)實(shí)驗(yàn)基本原理HIV全病毒抗原經(jīng)過(guò)聚丙烯酰胺凝膠電泳,將分子量大小不等的HIV抗原蛋白帶分離開來(lái),然后再把這些已經(jīng)分離的不同蛋白帶電轉(zhuǎn)移到硝酸纖維素膜上。將此膜切割成條狀,每一條硝酸纖維素膜上均含有經(jīng)電泳分離過(guò)的HIV病毒抗原。34精選課件ppt將待檢血清樣品加到硝酸纖維素膜上,恒溫震蕩,使其充分接觸反應(yīng),血清中若含有抗HIV抗體,就會(huì)與膜條上的抗原帶相結(jié)合。加入酶偶聯(lián)的抗人IgG抗體和底物，即可使有反應(yīng)的抗原-抗體結(jié)合帶呈現(xiàn)紫褐色,根據(jù)出現(xiàn)條帶情況判定結(jié)果。35精選課件ppt蛋白質(zhì)抗原分子經(jīng)電泳分開血液中的抗體與抗原反應(yīng)，形成不同的條帶WesternBlot36精選課件ppt方法加血漿YYY洗加酶結(jié)合物(Ab-HRP)YYYYYYY洗加底物YYYYYY37精選課件ppt其可檢測(cè)標(biāo)本中針對(duì)HIV不同抗原的抗體，故被用做確認(rèn)試劑。不同的研究機(jī)構(gòu)有不同的判定標(biāo)準(zhǔn)38精選課件pptWB結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)無(wú)HIV-1特異性條帶２ENV或１ENV+p24CHINA無(wú)條帶1ENV+p24/p31FDA（USA）無(wú)條帶或只有P172ENV+GAG+POLWHO陰性陽(yáng)性組織“不確定”(±)：出現(xiàn)HIV-1特異性條帶，但帶型不足以 確認(rèn)陽(yáng)性，每三個(gè)月隨訪一次，共兩次， 仍屬可疑，判為陰性39精選課件pptHIV抗體確認(rèn)實(shí)驗(yàn)結(jié)果a強(qiáng)陽(yáng)性對(duì)照（HIV-1和HIV-2）b弱陽(yáng)性對(duì)照（HIV-1）c陰性對(duì)照d典型的HIV-2血清陽(yáng)性反應(yīng)

abcdgp160gp120

p66p55p51gp41p39

p31P24p17血清對(duì)照HIV-2特異帶40精選課件ppt不確定標(biāo)本的處理原因 特異性和非特異性因素 標(biāo)本種類，操作技術(shù)，感染時(shí)間， 指征把握等處理 隨訪（注意一根條帶）保存41精選課件ppt試驗(yàn)中應(yīng)注意的問題嚴(yán)格按照說(shuō)明書操作和閱讀判斷結(jié)果典型帶型和顏色；強(qiáng)調(diào)env帶非典型全而淡、一根主要條帶、高危人群、不確定，等等特異性高，但也有漏檢核對(duì)、多種、操作技術(shù)42精選課件ppt免疫印跡法（WB，HIV-1/2混合型）HIV-1陽(yáng)性反應(yīng)不確定反應(yīng)出現(xiàn)HIV-2指示條帶報(bào)告HIV-1陽(yáng)性不確定反應(yīng)陽(yáng)性反應(yīng)陰性反應(yīng)報(bào)告陰性每3個(gè)月隨訪1次，共2次，仍屬可疑，則報(bào)告陰性；如隨訪期間HIV抗體出現(xiàn)陽(yáng)性反應(yīng)則報(bào)告陽(yáng)性。隨訪期間可根據(jù)需要，檢測(cè)病毒核酸和或P24抗原，作為輔助診斷。陰性反應(yīng)報(bào)告陰性篩查試驗(yàn)陽(yáng)性反應(yīng)樣品報(bào)告HIV-2血清學(xué)陽(yáng)性免疫印跡法（WB，HIV-2）

圖2HIV抗體確認(rèn)檢測(cè)流程43精選課件pptP24抗原檢測(cè)44精選課件ppt窗口期<infectivity=>4thgen3rdgen=>

=>1st-2ndgenHIVantigenIgMabIgGabDetectionlimit<=window第一/二代試劑檢測(cè)IgG抗體，第三代試劑檢測(cè)IgG、IgM抗體,第四代試劑同時(shí)檢測(cè)IgG、IgM抗體和P24抗原使窗口期縮短。45精選課件ppt

窗口期窗口期的決定因素初篩試劑質(zhì)量和測(cè)試技術(shù)機(jī)體免疫反應(yīng)病毒特性窗口期無(wú)法避免46精選課件ppt

P24抗原測(cè)定適用范圍HIV-1抗體不確定或窗口期的輔助診斷。HIV-1陽(yáng)性母親所生嬰兒的鑒別診斷。第四代HIV-1抗原/抗體ELISA試劑檢測(cè)呈陽(yáng)性反應(yīng)，但HIV-1抗體確認(rèn)陰性者的診斷。監(jiān)測(cè)病程進(jìn)展和抗病毒治療效果。47精選課件ppt檢測(cè)原理P24抗原的檢測(cè)通常是采用ELISA夾心法，已知抗體包被固相反應(yīng)板孔底，加入待測(cè)血清，若血清中含有P24抗原則與包被抗體形成抗原-抗體復(fù)合物，再加入酶（HRP）標(biāo)記的HIV-1抗體與抗原結(jié)合，加底物顯色，在酶標(biāo)儀上讀結(jié)果。48精選課件ppt為了提高檢測(cè)血清中P24抗原的敏感性，需先將血清中免疫復(fù)合物解離后再進(jìn)行測(cè)定目前已發(fā)展了ICDP