實驗報告-綠原酸標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

綠原酸標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制一、實驗?zāi)康?.1熟練掌握用高效液相色譜儀測綠原酸含量的方法，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線；1.熟2練掌握用紫外分光光度儀測綠原酸含量的方法，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線；二、原理2.1綠原酸簡介綠原酸(chlorogenicacid)是由咖啡酸(caffeicacid)與奎尼酸(雞納酸,quinicacid,即1-羥基六氫沒食子酸)組成的縮酚酸，異名咖啡鞣酸,化學(xué)名3-0-咖啡?？崴?3-0-caf-feoylquinicacid)，分子式:C^H^Og,分子量:345.30,是植物體在有氧呼吸過程中經(jīng)莽草酸途徑產(chǎn)生的一種苯丙素類化合物。2.2高效液相色譜儀的工作原理：高效液相色譜儀的系統(tǒng)由儲液器、泵、進(jìn)樣器、色譜柱、檢測器、記錄儀等幾部分組成。儲液器中的流動相被高壓泵打入系統(tǒng),樣品溶液經(jīng)進(jìn)樣器進(jìn)入流動相,被流動相載入色譜柱(固定相)內(nèi),由于樣品溶液中的各組分在兩相中具有不同的分配系數(shù),在兩相中作相對運(yùn)動時,經(jīng)過反復(fù)多次的吸附-解吸的分配過程,各組分在移動速度上產(chǎn)生較大的差別,被分離成單個組分依次從柱內(nèi)流出,通過檢測器時,樣品濃度被轉(zhuǎn)換成電信號傳送到記錄儀,數(shù)據(jù)以圖譜形式打印出來。三、試劑與儀器3.1材料與試劑：綠原酸標(biāo)準(zhǔn)品；乙腈為色譜純試劑，磷酸、甲醇、乙醇等試劑均為分析純；主要儀器：高效液相色譜儀，分析天平， 、 棕色容量瓶，滴定管，容量瓶各個，、、 的移液管，紫外分光光度儀，比色皿；擦鏡紙；注射器。四、實驗步驟4.1用紫外分光光度法所測的綠原酸標(biāo)準(zhǔn)曲線紫外分光光度法：精密稱取綠原酸標(biāo)準(zhǔn)品0.0055g,用80%的乙醇溶解，轉(zhuǎn)移到100ml容量瓶中，加80%乙醇到刻度，混勻，制得標(biāo)準(zhǔn)母液。精密吸取1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0、7.0、8.0、9.0、10.0ml于25ml容量瓶中，加80%乙醇到刻度，混勻，此為標(biāo)準(zhǔn)系列溶液。將標(biāo)準(zhǔn)溶液在200?400nm波長范圍內(nèi)掃描,測定綠原酸的最大吸收波長，在最大波長處測定吸光度。以綠原酸標(biāo)準(zhǔn)品的濃度為橫坐標(biāo)，以其吸光度為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，求出相應(yīng)的回歸方程。4.2用高效液相色譜儀所測的綠原酸標(biāo)準(zhǔn)曲線高效液相色譜法(本方法參照《中國藥典(2005版)》)。色譜柱:C18ODS(250mmX4.6mm,5|Jm);流動相:乙腈20.4%磷酸溶液(13z87);檢測波長為327nm;柱溫:20°C;進(jìn)樣量：10|JL。標(biāo)準(zhǔn)曲線制備:準(zhǔn)確稱取綠原酸對照品20mg,置50mL棕色容量瓶中，加60%甲醇適量，超聲溶解并稀釋至刻度，搖勻，分別準(zhǔn)確移取1mL、2mL、3mL、4mL、5mL、6mL、7mL,置25mL棕色容量瓶中，用60%甲醇溶解并稀釋至刻度，得一系列綠原酸標(biāo)準(zhǔn)溶液，按上述色譜條件，進(jìn)樣10pL,測定峰面積，以峰面積積分值(Y)為縱坐標(biāo)、綠原酸含量(X)為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線，計算并得回歸方程。五．結(jié)果與討論5.用1紫外分光光度法所測的綠原酸標(biāo)準(zhǔn)曲線5.1綠.原1酸標(biāo)準(zhǔn)品的波長掃描綠原酸標(biāo)準(zhǔn)品的波長掃描如下圖所示，可知綠原酸的最大波長為328nm。

5.1.由2定量測量所得的綠原酸的濃度和吸光度的關(guān)系如下表所示：濃度ug/ml111111吸光度A111118以杜仲綠原酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度和吸光度進(jìn)行線性回歸，得回歸方程1 9表明綠原酸含量在 2范圍/內(nèi)與吸光度線性關(guān)系良好。用高效液相色譜儀所測的綠原酸標(biāo)準(zhǔn)曲線測量所得的綠原酸的濃度和鋒面積的關(guān)系如下表2所示：

濃度ug/ml峰面積m2207389698949113908716100342168360Lt厶乙■、人27628963227387表 綠原酸的濃度和鋒面積的關(guān)系綠2原酸標(biāo)準(zhǔn)品的色譜圖4.2繪.制3綠原酸標(biāo)準(zhǔn)曲線如下圖4所示：峰面積峰面積nm線性（峰面積nm）圖4綠原酸標(biāo)準(zhǔn)曲線以杜仲綠原酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度和峰面積進(jìn)行線性回歸，得回歸方程線性關(guān)系良好。六?總結(jié)通過紫外分光光度法可知：(1)綠原酸的最大波長為328nm;(2其)以綠原酸標(biāo)準(zhǔn)品的濃度為橫坐標(biāo)，以其吸光度為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，求出相