5章-農(nóng)藥、獸藥殘留速測(cè)技術(shù)課件

第五章農(nóng)藥、獸藥殘留速測(cè)技術(shù)第五章農(nóng)藥中毒事件回顧海南“毒豇豆”事件2010年1月，海南豇豆在武漢白沙洲農(nóng)副產(chǎn)品市場(chǎng)連續(xù)三次被檢測(cè)出含有禁用農(nóng)藥水胺硫磷。隨后在武漢、上海、鄭州、合肥、杭州、廣州等11個(gè)城市檢測(cè)出海南豇豆農(nóng)藥殘留超標(biāo)。僅武漢銷毀毒豇豆3596.9公斤

水胺硫磷，是一種高毒性農(nóng)藥，早在2002年，農(nóng)業(yè)部已將它例如黑名單中，禁止在水果蔬菜、中草藥植物上使用。它能經(jīng)由食道、皮膚和呼吸道，引起人體中毒。農(nóng)藥中毒事件回顧海南“毒豇豆”事件2010年1月，海南豇豆在農(nóng)藥中毒事件回顧青島“毒韭菜”事件2010年4月，青島一些醫(yī)院陸續(xù)接到9名食用韭菜后中毒的患者，他們都是食用韭菜之后出現(xiàn)了頭疼、惡心、腹瀉等癥狀，經(jīng)醫(yī)院檢查屬于有機(jī)磷中毒，也就是說韭菜上的殘余農(nóng)藥嚴(yán)重超標(biāo)導(dǎo)致中毒。隨后，檢出農(nóng)藥殘留超標(biāo)韭菜1930公斤。農(nóng)藥中毒事件回顧青島“毒韭菜”事件2010年4月，青島一些醫(yī)農(nóng)藥中毒事件回顧張?jiān)＜t酒農(nóng)藥超標(biāo)事件2012年8月7日某媒體報(bào)道：記者將三家國(guó)內(nèi)葡萄酒上市公司的十款葡萄酒送國(guó)家食品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)中心檢測(cè)，均檢出多菌靈或甲霜靈農(nóng)藥殘留，而張?jiān)．a(chǎn)品殘留值超過另兩家。多菌靈為美國(guó)禁用的農(nóng)藥，有導(dǎo)致肝癌的風(fēng)險(xiǎn)。張?jiān)股價(jià)直奔跌停，最終大跌9.83%農(nóng)藥中毒事件回顧張?jiān)＜t酒農(nóng)藥超標(biāo)事件2012年8月7日某媒體2001年，杭州的空心菜有機(jī)磷中毒事件。2003年，南京蔬菜有機(jī)磷殘留導(dǎo)致中毒的事件。2007年，福建大田發(fā)生有機(jī)磷污染水源導(dǎo)致中毒事件。2008年1月，日本發(fā)生餃子中毒事件，該餃子被化驗(yàn)出含甲胺磷殘留……2008年1月9日，中國(guó)決定停止甲胺磷、對(duì)硫磷等五種高毒農(nóng)藥的生產(chǎn)、流通和使用。

2011年3月，河南毒韭菜事件—有機(jī)磷中毒(超標(biāo)農(nóng)藥殘留主要是甲拌磷)2001年，杭州的空心菜有機(jī)磷中毒事件。6一、前言

隨著人們環(huán)境意識(shí)的不斷加強(qiáng)，由農(nóng)藥引起的食品安全問題也越來越受到人們的關(guān)注。為了保障消費(fèi)者的安全和健康，提高農(nóng)產(chǎn)品的質(zhì)量安全水平，增強(qiáng)農(nóng)業(yè)產(chǎn)品的國(guó)際競(jìng)爭(zhēng)力，我國(guó)政府決定加強(qiáng)農(nóng)產(chǎn)品中農(nóng)藥殘留的監(jiān)控，建立健全農(nóng)藥殘留的檢測(cè)體系，實(shí)施對(duì)蔬菜、瓜果、茶葉生產(chǎn)全過程的農(nóng)藥監(jiān)控，從源頭抓起，加強(qiáng)農(nóng)產(chǎn)品的產(chǎn)地檢測(cè)，把住農(nóng)產(chǎn)品的市場(chǎng)準(zhǔn)入關(guān)。6一、前言隨著人們環(huán)境意識(shí)的不斷加強(qiáng)，由農(nóng)藥引起7

（一）農(nóng)藥概念

農(nóng)藥(pesticides)

是指用于預(yù)防、消滅或者控制危害農(nóng)業(yè)、林業(yè)的病、蟲、草及其他有害生物，以及有目的地調(diào)節(jié)植物、昆蟲生長(zhǎng)的的化學(xué)合成或者來源于生物、其他天然物質(zhì)的一種物質(zhì)或者幾種物質(zhì)的混合物及其制劑。現(xiàn)在農(nóng)藥不僅應(yīng)用于農(nóng)業(yè)，而且也廣泛應(yīng)用于畜牧業(yè)、林業(yè)和公共衛(wèi)生事業(yè)等方面。一、概述7（一）農(nóng)藥概念一、概述8（二）農(nóng)藥殘留的概念

農(nóng)藥殘留是指農(nóng)藥使用后殘存于生物體、食品(農(nóng)副產(chǎn)品)和環(huán)境中的微量農(nóng)藥原體、有毒代謝物、降解物和雜質(zhì)的總稱。

8（二）農(nóng)藥殘留的概念農(nóng)藥殘留是指農(nóng)藥使用后殘存

農(nóng)藥殘留幾乎無處不在！！土壤水體空氣農(nóng)藥植物動(dòng)物人土壤水體空氣農(nóng)植動(dòng)物10（三）農(nóng)藥的分類

1.按化學(xué)成分可分為有機(jī)氯、有機(jī)磷、氨基甲酸酯類、擬除蟲菊酯類及砷、汞、銅、硫磺等制劑。

2.按用途可分為殺蟲劑、殺菌劑、除草劑、植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑和糧食熏蒸劑等。10（三）農(nóng)藥的分類1.按化學(xué)成分可分為有機(jī)氯、11（四）農(nóng)藥的毒性及種類農(nóng)藥除了可造成人體的急性中毒外，絕大多數(shù)對(duì)人體產(chǎn)生的慢性危害，多是通過污染食品的形式造成。

某些農(nóng)藥對(duì)人和動(dòng)物的遺傳和生殖造成影響，產(chǎn)生畸形和引起癌癥等方面的毒素作用。11（四）農(nóng)藥的毒性及種類農(nóng)藥除了可造成人體的急性中毒外，絕

我國(guó)農(nóng)藥的發(fā)展20世紀(jì)80年代前，中國(guó)生產(chǎn)的農(nóng)藥尚不足80種，大多是進(jìn)口，農(nóng)藥主要是有機(jī)氯。1983年禁止生產(chǎn)和使用有機(jī)氯農(nóng)藥后，代之以有機(jī)磷、氨基甲酸酯類農(nóng)藥，但其中一些品種比有機(jī)氯的毒性大10倍甚至100倍。90年代之后，中國(guó)逐漸由農(nóng)藥進(jìn)口國(guó)變成出口國(guó)，近兩年，農(nóng)藥進(jìn)口量只相當(dāng)于產(chǎn)量的2%-3%，出口量已是進(jìn)口量的十幾倍。

我國(guó)農(nóng)藥的發(fā)展20世紀(jì)80年代前，中國(guó)生產(chǎn)的農(nóng)藥131、有機(jī)氯農(nóng)藥品種：DDT、六六六、艾氏劑、狄氏劑等。特點(diǎn)：化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定，不易分解，易溶于脂肪中，并在脂肪中蓄積，長(zhǎng)期使用會(huì)嚴(yán)重的環(huán)境污染。131、有機(jī)氯農(nóng)藥品種：DDT、六六六、艾氏劑、狄氏劑等。危害：有機(jī)氯農(nóng)藥容易積累在人體的脂肪、肝臟、腎臟等部位，并且不容易排除體外。DDT：當(dāng)人體蓄積的濃度20mg/kg時(shí)，神經(jīng)系統(tǒng)放生障礙，達(dá)到500mg/Kg時(shí)，可以致死。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證實(shí)有致畸、致癌作用目前許多國(guó)家都已禁止使用，我國(guó)已于1983年全部禁止生產(chǎn)和使用。危害：有機(jī)氯農(nóng)藥容易積累在人體的脂肪、肝臟、腎臟等部位，并且15六六六，BHC滴滴涕，DDT15六六六，BHC滴滴涕，DDT16滴滴涕：減少了蛋殼的厚度，從而降低了小鳥的孵出率。二惡英：進(jìn)入機(jī)體后幾乎不被排泄、沉積在肝臟和脂肪組織中。屬于劇毒物質(zhì)，毒性比氰化鉀高130倍，致癌毒性比黃曲霉毒素高10倍，會(huì)引起基因突變，影響繁殖力和智力發(fā)育。

1617早期的高效高毒品種：對(duì)硫磷（1605）、甲拌磷（3911）、內(nèi)吸磷（1059）后期使用得較多的為高效低毒低殘留的品種，如：樂果、敵百蟲、殺螟松、倍硫磷毒性極低的馬拉硫磷、雙硫磷、氯硫磷、鋅硫磷、碘硫磷、地亞農(nóng)、滅蜈松2、有機(jī)磷農(nóng)藥17早期的高效高毒品種：對(duì)硫磷（1605）、甲拌磷（391118有機(jī)磷農(nóng)藥主要品種甲胺磷乙酰甲胺磷18有機(jī)磷農(nóng)藥主要品種甲胺磷乙酰甲胺磷19樂果一六0五19樂果一六0五20急性毒性：有機(jī)磷農(nóng)藥化學(xué)性質(zhì)不穩(wěn)定，分解快，在作物中殘留時(shí)間短，大多不溶于水、堿性條件下易水解而失效

。危害：有機(jī)磷類農(nóng)藥的中毒特征是抑制血液和組織中膽堿酯酶的活性，導(dǎo)致神經(jīng)系統(tǒng)機(jī)能失調(diào),從而使一些受神經(jīng)系統(tǒng)支配的臟器,如心臟、支氣管、腸、胃等發(fā)生功能異常。20急性毒性：有機(jī)磷農(nóng)藥化學(xué)性質(zhì)不穩(wěn)定，分解快，在作物中殘留21主要表現(xiàn)為植物性食物殘留，尤其是含有芳香物質(zhì)的植物如：水果、蔬菜，特別是葉菜類如小白菜、大白菜、雞毛菜、甘藍(lán)、芹菜、韭菜、芥菜、花菜、綠花菜、茼蒿、枸杞菜和黃瓜等21主要表現(xiàn)為植物性食物殘留，尤其是含有芳香物質(zhì)的植物223、氨基甲酸酯類農(nóng)藥是目前使用量較大的殺蟲劑。品種：西維因、殺滅威、速滅威、葉蟬散等在作物上的殘留時(shí)間為4d，在動(dòng)物的肌肉和脂肪中的明顯蓄積時(shí)間約為7d特點(diǎn)：分解快、殘留期短、低毒、高效、選擇性強(qiáng)危害：同有機(jī)磷農(nóng)藥223、氨基甲酸酯類農(nóng)藥是目前使用量較大的殺蟲劑。23

氨基甲酸酯類農(nóng)藥是農(nóng)藥急性中毒的主要原因，也是時(shí)下蔬菜中農(nóng)藥殘留的重點(diǎn)檢測(cè)品種。氨基甲酸酯類農(nóng)藥的中毒原因與有機(jī)磷農(nóng)藥相同，也是抑制人體內(nèi)膽堿酯酶，從而影響人體內(nèi)神經(jīng)沖動(dòng)的傳遞。

氨基甲酸酯類殺蟲劑進(jìn)入人體內(nèi)，在胃中酸性條件下可與食物中的亞硝酸鹽和硝酸鹽反應(yīng)生成亞硝基化合物，具有致癌性。23氨基甲酸酯類農(nóng)藥是農(nóng)藥急性中毒的主要原我國(guó)農(nóng)藥在農(nóng)產(chǎn)品的用量居高不下

導(dǎo)致農(nóng)產(chǎn)品中的農(nóng)藥殘留超標(biāo)食品安全、影響消費(fèi)者健康、影響農(nóng)產(chǎn)品的貿(mào)易加強(qiáng)農(nóng)殘檢測(cè)不合理使用我國(guó)農(nóng)藥在農(nóng)產(chǎn)品的用量居高不下不合理使用

分析步驟

所需設(shè)備1.采集樣品2.稱取樣品分析天平3.搗碎樣品高速組織搗碎機(jī)4.樣品的提取分離漏斗等5.樣品的凈化SPE、SPME等6.樣品的濃縮氮吹儀、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀等7.樣品的定性、定量測(cè)定GC、HPLC、GC-MS等（五）傳統(tǒng)農(nóng)殘分析技術(shù)一般過程分析步驟所需設(shè)備1.采集樣品2.稱取樣品26

優(yōu)點(diǎn)

缺點(diǎn)能夠?qū)γ恳环N農(nóng)藥進(jìn)行準(zhǔn)確的定性和定量檢驗(yàn)分析周長(zhǎng)長(zhǎng)檢驗(yàn)費(fèi)用高需要消耗大量的有機(jī)溶劑、容易造成環(huán)境污染需要使用GC、HPLC等昂貴的大型儀器設(shè)備對(duì)檢驗(yàn)分析人員的化學(xué)分析水平有較高要求檢驗(yàn)分析過程繁瑣、影響因子復(fù)雜、不易掌控（六）傳統(tǒng)農(nóng)殘分析技術(shù)的優(yōu)缺點(diǎn)26優(yōu)點(diǎn)缺點(diǎn)能夠?qū)γ恳环N農(nóng)藥進(jìn)行準(zhǔn)27

傳統(tǒng)的農(nóng)殘化學(xué)分析主要是氣相或液相色譜等儀器

優(yōu)點(diǎn)：敏感(10－l2

～10－6mol／L)、準(zhǔn)確

缺點(diǎn)：操作復(fù)雜、費(fèi)時(shí)及成本高。難以滿足需求－－怎么辦？－－發(fā)展適合我國(guó)的快速檢測(cè)技術(shù)2728生化檢測(cè)生物檢測(cè)化學(xué)比色法

二、適合我國(guó)的農(nóng)藥殘留快速檢測(cè)方法酶抑制法免疫分析法發(fā)光菌檢測(cè)法敏感家蠅檢測(cè)法速測(cè)卡速測(cè)儀主要為酶免疫法28二、適合我國(guó)的農(nóng)藥殘留快速檢測(cè)方法酶抑制法免疫分析法發(fā)光29酶抑制法

酶抑制技術(shù)是研究比較成熟、應(yīng)用最廣泛快速的農(nóng)藥殘留檢測(cè)技術(shù)，是根據(jù)有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥對(duì)乙酰膽堿酯酶（AChE)的特異性生化反應(yīng)建立起來的農(nóng)藥殘留的微量和痕量快速檢測(cè)技術(shù)。29酶抑制法酶抑制技術(shù)是研究比較成熟、應(yīng)用最廣301、速測(cè)卡法1）原理：301、速測(cè)卡法1）原理：

速測(cè)卡（即紙片，固化有膽堿酯酶和靛酚乙酸酯試劑的紙片）

浸提液（pH7.5緩沖溶液，15.0gNa2HPO4·12H2O+1.59gKH2PO4

，用500mL蒸餾水溶解）儀器（常量天平，有條件時(shí)配備37℃±2℃恒溫裝置，專為速測(cè)卡法而設(shè)計(jì)的“農(nóng)藥殘留速測(cè)儀”和超聲波提取器）

2）、試劑及儀器

速測(cè)卡（即紙片，固化有膽堿酯酶和靛酚乙酸酯試劑的紙

預(yù)反應(yīng)速測(cè)卡反應(yīng)加樣樣本前處理樣本制備采樣白色藥片不變色或略有淺藍(lán)色白色藥片變?yōu)樘焖{(lán)色或與空白對(duì)照卡相同陽(yáng)性

陰性空白試驗(yàn)確證對(duì)照

3）、檢測(cè)流程

預(yù)反應(yīng)速測(cè)卡反應(yīng)加樣樣本前處理樣本制備采樣白色藥片不

整體測(cè)定法①選取有代表性的蔬菜樣品，擦去表面泥土，剪成1cm左右見方片，取5g放入帶蓋瓶中，加入10ml浸提液，震搖50次，靜置2min以上（超聲波提取中震蕩30秒）。（采樣-樣本制備-樣本前處理）②取一片速測(cè)卡，在白色藥片上滴上2～3滴提取液。（加樣）③在37℃溫度中放置10min（有條件時(shí)在恒溫裝置中放置），預(yù)反應(yīng)后的藥片表面必須保持濕潤(rùn)。（預(yù)反應(yīng)）④將速測(cè)卡對(duì)折，用手捏3min，使紅色藥片和白色藥片疊合反應(yīng)。（速測(cè)卡反應(yīng)）⑤每批測(cè)定應(yīng)設(shè)一個(gè)緩沖液的空白對(duì)照。

有條件時(shí)，將紙片插入“農(nóng)藥殘留速測(cè)儀”自動(dòng)恒溫、定時(shí)觀察。

4)、檢測(cè)方法（整體測(cè)定法、表面測(cè)定法）

4)、檢測(cè)方法（整體測(cè)定法、表面測(cè)定5章-農(nóng)藥、獸藥殘留速測(cè)技術(shù)ppt課件表面測(cè)定法（粗篩法）

①選取有代表性的蔬菜樣品，擦去蔬菜表面泥土，滴2～3滴浸提液在蔬菜表面，用另一片蔬菜在滴液處輕輕摩擦。②取一片速測(cè)卡，將蔬菜上的液滴滴在白色藥片上。③、④、⑤步驟同上。

表面測(cè)定法（粗篩法）

36速測(cè)卡檢測(cè)結(jié)果“-”陰性（藍(lán)色）“+”弱陽(yáng)性（淡藍(lán)）“++”強(qiáng)陽(yáng)性（白色）36速測(cè)卡檢測(cè)結(jié)果“-”陰性（藍(lán)色）干擾物質(zhì)的排除

蔥、蒜、蘿卜、芹菜及番茄汁液，含葉綠素較高的蔬菜，不要剪得太碎。測(cè)定番茄時(shí)，可將提取液放在茄蒂處浸泡2min，取浸泡液測(cè)定。測(cè)定韭菜或大蒜時(shí)，可整根或整粒放入容器中，加入提取液后振搖提取測(cè)定。

6)、操作要點(diǎn)

干擾物質(zhì)的排除

6)、操作要點(diǎn)空白對(duì)照卡不變色原因：藥片表面浸提液少、表面不夠濕潤(rùn)，和/或是溫度太低。反應(yīng)時(shí)間和溫度的控制當(dāng)T＜37℃，酶反應(yīng)的時(shí)間相對(duì)延長(zhǎng)。樣品放置時(shí)間應(yīng)與空白對(duì)照卡放置時(shí)間一致（可比性）疊合反應(yīng)的時(shí)間3min(3min后的藍(lán)色加深，24h后退色）6)、操作要點(diǎn)

空白對(duì)照卡不變色原因：藥片表面浸提液少、表面不夠濕潤(rùn)，和/或速測(cè)卡技術(shù)指標(biāo)符合率

據(jù)報(bào)道，在檢出的30份以上陽(yáng)性樣品中，經(jīng)氣相色譜驗(yàn)證，陽(yáng)性結(jié)果的符合率在80%以上。檢出限

速測(cè)卡法檢測(cè)常見農(nóng)藥的檢出限與國(guó)家允許蔬菜中最大殘留限量（mg/kg）比較。（附表）

速測(cè)卡技術(shù)指標(biāo)附：速測(cè)卡對(duì)幾種常用農(nóng)藥的最低檢出限與最大殘留限量比較（mg/kg）

農(nóng)藥名稱檢出限（mg/kg）殘留限量（mg/kg）農(nóng)藥名稱檢出限（mg/kg）殘留限量（mg/kg）甲胺磷1.7不得檢出敵敵畏0.30.2對(duì)硫磷1.7不得檢出敵百蟲0.50.1水胺硫磷3.1不得檢出樂果1.31.0馬拉硫磷2.0不得檢出西維因2.52.0久效磷2.5不得檢出好年冬1.0不得檢出乙酰甲胺磷3.50.2呋喃丹0.5不得檢出附：速測(cè)卡對(duì)幾種常用農(nóng)藥的最低檢出限與最大殘留限量比較（m412、速測(cè)儀原理:在一定條件下，有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥對(duì)膽堿酯酶正常功能有抑制作用，其抑制率與農(nóng)藥的濃度呈正相關(guān)。酶催化乙酰膽堿水解，其水解產(chǎn)物與顯色劑反應(yīng)，產(chǎn)生黃色物質(zhì)。用分光光度計(jì)在412nm處測(cè)定吸光度隨時(shí)間的變化，計(jì)算出抑制率，通過抑制率可以判斷出樣品中是否含有有機(jī)磷或氨基甲酸酯類農(nóng)藥的存在。412、速測(cè)儀原理:在一定條件下，有機(jī)磷和氨基甲酸酯42農(nóng)藥殘留快速測(cè)試儀42農(nóng)藥殘留快速測(cè)試儀43速測(cè)儀檢測(cè)結(jié)果

判定依據(jù)

說明抑制率小于等于50

合格抑制率大于50超標(biāo)，說明含有有機(jī)磷或氨基甲酸酯類農(nóng)藥抑制率與農(nóng)藥殘留量成正相關(guān)，抑制率越高說明殘留量越高43速測(cè)儀檢測(cè)結(jié)果判定依據(jù)說明抑制率小于等44免疫分析技術(shù)

免疫分析技術(shù)是將免疫反應(yīng)與現(xiàn)代測(cè)試手段相結(jié)合而建立的超微量分析技術(shù)，是基于抗原抗體特異性結(jié)合和反應(yīng)為基礎(chǔ)的分析方法。目前應(yīng)用于農(nóng)殘檢測(cè)的是酶免疫分析(EIA)和放射性免疫分析(RIA)。其中酶聯(lián)免疫分析技術(shù)應(yīng)用最為普遍。44免疫分析技術(shù)免疫分析技術(shù)是將免疫反應(yīng)與現(xiàn)代測(cè)試手453、酶聯(lián)免疫技術(shù)

ELISA是一種以酶作為標(biāo)記物的免疫分析方法，也是目前應(yīng)用最廣泛的免疫分析方法之一，它將酶標(biāo)記在抗體／抗原分子上形成酶標(biāo)抗體／酶標(biāo)抗原，酶作用于能呈現(xiàn)出顏色的底物，通過儀器或肉眼進(jìn)行辨別。453、酶聯(lián)免疫技術(shù)46ELISA法基本原理是預(yù)先結(jié)合在固相載體上的抗體或抗原分子與樣品中的抗原或抗體分子在一定條件下進(jìn)行免疫學(xué)反應(yīng)。該法因不需昂貴儀器設(shè)備，對(duì)人體無害等優(yōu)點(diǎn)而被廣泛采用，具有靈敏、特異、快速、穩(wěn)定以及易于自動(dòng)化操作等特點(diǎn)。46ELISA法基本原理是預(yù)先結(jié)合在固相載體上的抗體或抗原分47

目前，ELISA方法常用的固相載體是96孔聚苯乙烯酶標(biāo)板，常用的酶是辣根過氧化物酶，常用的底物是鄰苯二胺和四甲基聯(lián)苯胺等。酶標(biāo)板u型96孔47目前，ELISA方法常用的固相載體是96孔聚苯乙烯酶484、發(fā)光菌檢測(cè)法

農(nóng)藥與細(xì)菌作用后可影響細(xì)菌的發(fā)光程度，通過細(xì)菌發(fā)光情況，可測(cè)出農(nóng)藥殘留量。

此方法簡(jiǎn)便但是特異性差484、發(fā)光菌檢測(cè)法農(nóng)藥與細(xì)菌作用后可影響細(xì)495、敏感家蠅檢測(cè)法敏感家蠅對(duì)殺蟲劑具有敏感性，記錄家蠅存活情況，根據(jù)家蠅的死亡率可知農(nóng)藥殘留情況。該技術(shù)方法直接、過程簡(jiǎn)單、容易掌握，但定性粗糙，只對(duì)少數(shù)農(nóng)藥有效，而且由于其他生物對(duì)不同農(nóng)藥的毒性反應(yīng)與人畜可能不同，因此影響對(duì)農(nóng)藥殘留量的判斷。如家蠅對(duì)毒性較低的除蟲菊酯類敏感，遠(yuǎn)超過有機(jī)磷和氨基甲酸酯類中毒或高毒的農(nóng)藥。495、敏感家蠅檢測(cè)法敏感家蠅對(duì)殺蟲劑具有敏感性，記錄家蠅存

目前常用的化學(xué)比色法包括各種檢測(cè)試劑和試紙，兩者都是利用迅速產(chǎn)生明顯顏色的化學(xué)反應(yīng)檢測(cè)待測(cè)物質(zhì)，可通過與標(biāo)準(zhǔn)比色卡比較進(jìn)行目視定性或半定量分析。6、化學(xué)比色法

目前常用的化學(xué)比色法包括各種檢測(cè)試劑和試紙，兩者都是利用迅51

化學(xué)比色分析法與一般的儀器分析方法相比，具有價(jià)格低，操作相對(duì)簡(jiǎn)便，結(jié)果顯示直觀，一次性使用，不需檢修維護(hù)，有一定的靈敏度和專一性等優(yōu)點(diǎn)。隨著檢測(cè)儀器的不斷發(fā)展，與其相配套的微型檢測(cè)儀器也相應(yīng)出現(xiàn)。如與試劑檢測(cè)方法相配套的微型光電比色計(jì)目前已發(fā)展得比較成熟。51化學(xué)比色分析法與一般的儀器分析方法相比，52三、農(nóng)藥殘留快速檢測(cè)技術(shù)展望

一些快速速檢測(cè)方法與國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)方法和儀器法相比具有操作簡(jiǎn)單、快速的優(yōu)點(diǎn)，但由于大多數(shù)快速檢測(cè)方法在食品樣品前處理、操作規(guī)范性方面還有許多待完善之處，目前還只能作為快速篩選的手段而不能作為最終診斷的依據(jù)，兼具快速和準(zhǔn)確兩大優(yōu)點(diǎn)是快速檢測(cè)方法追求的目標(biāo)。52三、農(nóng)藥殘留快速檢測(cè)技術(shù)展望一些快速速檢測(cè)方法方法檢測(cè)對(duì)象國(guó)內(nèi)外對(duì)比化學(xué)檢測(cè)技術(shù)有機(jī)磷靈敏度低酶抑制檢測(cè)技術(shù)有機(jī)磷和氨基甲酸酯國(guó)內(nèi)假陽(yáng)性、假陰性率高，二十余家生產(chǎn)廠商，多種速測(cè)卡、速測(cè)儀，GB/T5009.199-2003；NY/T448-2001國(guó)外測(cè)定樣品和農(nóng)藥種類有限，歐美作為普查農(nóng)藥殘留和田間實(shí)地檢測(cè)的基本手段；AOAC官方方法964.17免疫分析法有機(jī)磷類、氨基甲酸酯類、硫代氨基甲酸酯類、有機(jī)氯類、三嗪類、擬除蟲菊酯類和酰胺類等幾十種農(nóng)藥國(guó)內(nèi)研究活躍，但未有真正推廣使用的商品化產(chǎn)品國(guó)外技術(shù)成熟，靈敏度高，F(xiàn)AO推薦方法，美國(guó)USDA、EPA、AOAC制定了評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)，但經(jīng)認(rèn)證的有限，經(jīng)EPA認(rèn)證的免疫試劑盒約有4個(gè)廠家的26種試劑盒：EPA方法4010、EPA方法4015EPA方法4040等生物傳感器有機(jī)磷、氨基甲酸酯國(guó)內(nèi)處于研究階段國(guó)外電導(dǎo)型生物傳感器、光尋址電位型傳感器、安培型傳感器，處于研究和應(yīng)用階段，并未廣泛推廣使用農(nóng)藥快速檢測(cè)技術(shù)方法檢測(cè)對(duì)象國(guó)內(nèi)外對(duì)比化學(xué)檢測(cè)技術(shù)有機(jī)磷靈敏度低酶抑制檢測(cè)第二節(jié)獸藥殘留快速檢測(cè)技術(shù)第二節(jié)獸藥殘留快速檢測(cè)技術(shù)1、獸藥的概念：獸藥是用于預(yù)防、治療、診斷動(dòng)物疾病的藥物或者有目的地調(diào)節(jié)動(dòng)物生理機(jī)能的物質(zhì)（含動(dòng)物保健品和動(dòng)物飼料添加劑）。獸藥的主要用途是防病治病、促進(jìn)生長(zhǎng)、提高生產(chǎn)性能、改善動(dòng)物性食品的品質(zhì)等一、獸藥殘留與食品安全意義1、獸藥的概念：一、獸藥殘留與食品安全意義2、獸藥的種類種類用途常見品種殘留危害抗生素類防治傳染性疾病、抗菌消炎青霉素類、氨基糖苷類、大環(huán)內(nèi)酯類、四環(huán)素類、螺旋霉素、鏈霉素、土霉素、金霉素等增強(qiáng)細(xì)菌耐藥性，人體腸道菌群失調(diào)、超敏反應(yīng)、損害聽力及腎臟磺胺類抗菌消炎磺胺嘧啶、磺胺二甲嘧啶、磺胺瞇、菌得清、新諾明等呋喃類抗菌消炎呋喃唑酮、呋喃西林、呋喃妥因等胃腸反應(yīng)、超敏反應(yīng)，長(zhǎng)期攝入引起不可逆性末端神經(jīng)損害，有致癌、致突變作用激素類提高生長(zhǎng)、發(fā)育、繁殖速度固醇或類固醇類：己烯雌酚、孕酮、皋酮、雌二醇多肽或多肽衍生物等影響正常生理機(jī)能，有一定的致癌性；導(dǎo)致兒童性早熟、發(fā)育異常和異性趨向等抗寄生蟲類驅(qū)蟲或殺蟲苯并咪唑（丙硫咪唑、丙氧咪唑、噻苯咪唑、甲苯咪唑和丁苯咪唑）左旋咪唑、克球酚、吡喹酮等持久殘留于肝內(nèi)，對(duì)動(dòng)物有致畸性與致突變性其它血清制品、疫苗、診斷制品、中藥材、生化藥品、放射性藥品等2、獸藥的種類種類用途常見品種殘以下6種獸藥不能長(zhǎng)期應(yīng)用，否則易超過動(dòng)物食品張獸藥限量：呋喃唑酮（痢特靈）磺胺類喹乙醇氯霉素土霉素硫酸慶大霉素以下6種獸藥不能長(zhǎng)期應(yīng)用，否則易超過動(dòng)物食品張獸藥限量：3、獸藥殘留獸藥殘留：根據(jù)聯(lián)合國(guó)糧農(nóng)組織和世界衛(wèi)生組織（FAO/WHO）食品中獸藥殘留聯(lián)合立法委員會(huì)的定義，獸藥殘留是指動(dòng)物性產(chǎn)品的任何可食部分含有獸藥母體化合物或其代謝物，以及與獸藥有關(guān)的雜質(zhì)的殘留。獸藥殘留形式：原藥、藥物在體內(nèi)的代謝產(chǎn)物、共價(jià)結(jié)合物3、獸藥殘留獸藥殘留：根據(jù)聯(lián)合國(guó)糧農(nóng)組織和世界衛(wèi)生組織（FA獸藥殘留主要是由于不合理使用藥物治療疾病和作為飼料添加劑而引起。在獸藥品應(yīng)用方面，用于飼料添加劑占46%，治療藥品占43%，疫苗等生物藥品占11%。我國(guó)濫用和超標(biāo)使用獸藥尤其是抗生素和激素類藥物的狀況是十分嚴(yán)重的。3、獸藥殘留現(xiàn)狀肉蛋奶的安全成問題獸藥殘留主要是由于不合理使用藥物治療疾病和作為飼料添加劑而引5章-農(nóng)藥、獸藥殘留速測(cè)技術(shù)ppt課件我國(guó)獸藥殘留安全問題“瘦肉精”（鹽酸克倫特羅）中毒事件鮮牛奶中抗生素殘留進(jìn)出口貿(mào)易受挫我國(guó)獸藥殘留安全問題全球禁止，不得檢出1、“瘦肉精”中毒在養(yǎng)殖業(yè)中常見使用的激素類，也叫鹽酸克倫特羅2001年央視新聞?lì)^條，屢禁不止全球禁止，不得檢出1、“瘦肉精”中毒在養(yǎng)殖業(yè)中常見使用的激素

瘦肉精中毒的臨床表現(xiàn)為心動(dòng)過速，面頸、四肢肌肉顫抖，頭暈、頭疼、惡心、嘔吐，特別是對(duì)患有高血壓、心臟病的病人，可能會(huì)加重病情導(dǎo)致意外。因此，全球禁止將其作為飼料添加劑。瘦肉精中毒的臨床表現(xiàn)為心動(dòng)過速，面頸、四肢肌肉顫抖，頭2、鮮牛奶中抗生素殘留

國(guó)家質(zhì)檢總局的一條消息頻繁見諸媒體：一項(xiàng)對(duì)中國(guó)北方市場(chǎng)的檢測(cè)調(diào)查結(jié)果顯示，在近800份乳品采樣中，抗生素殘留超標(biāo)居不合格項(xiàng)目第一位，其次是汞和鉛超標(biāo)。2、鮮牛奶中抗生素殘留國(guó)家質(zhì)檢總局的一條消息頻繁見諸媒奶粉、奶片、冰激凌等奶制品生產(chǎn)原則是一般不用好奶。溫馨提示思考：為什么酸奶都是無抗奶？購(gòu)買伊利、光明等生產(chǎn)廠家推出的無抗奶。擔(dān)心有抗奶，就喝酸奶。奶粉、奶片、冰激凌等奶制品生產(chǎn)原則是一般不用好奶。溫馨提示2002年，外經(jīng)貿(mào)部收到駐歐使團(tuán)經(jīng)商處的特級(jí)報(bào)告：歐盟委員會(huì)擬討論通過全面禁止從中國(guó)進(jìn)口所有動(dòng)物源性產(chǎn)品的決議。由于歐盟的禁令，美國(guó)、日本等國(guó)已高度關(guān)注我國(guó)出口水產(chǎn)品的質(zhì)量。3、進(jìn)出口貿(mào)易受挫誰(shuí)來解決我放心吃魚蝦的問題2002年，外經(jīng)貿(mào)部收到駐歐使團(tuán)經(jīng)商處的特級(jí)報(bào)告：3、進(jìn)出口進(jìn)出口貿(mào)易受挫

據(jù)悉，自從一九八六年歐盟嚴(yán)格執(zhí)行肉類食品法規(guī)以來，中國(guó)的豬肉就基本上無法進(jìn)入歐盟市場(chǎng)；日本則根據(jù)國(guó)際流行病疫情報(bào)告，把中國(guó)列入“三類地區(qū)”，從此中國(guó)的豬、羊、牛肉也基本上無法進(jìn)入日本市場(chǎng)。隨著我國(guó)加入WTO，我國(guó)畜產(chǎn)品在國(guó)際貿(mào)易中將面臨更加激烈的競(jìng)爭(zhēng)環(huán)境，藥物殘留往往是引發(fā)國(guó)際貿(mào)易中非貿(mào)易性技術(shù)壁壘障礙的導(dǎo)火線。進(jìn)出口貿(mào)易受挫據(jù)悉，自從一九八六年歐盟嚴(yán)格執(zhí)行肉類食品法歐盟以氯霉素殘留超標(biāo)為由暫停中國(guó)蜂蜜進(jìn)口案我國(guó)年產(chǎn)蜂蜜約20萬(wàn)噸、蜂王漿1000噸，年創(chuàng)匯1億多美元，蜂群數(shù)量和主要蜂產(chǎn)品出口均居世界第一，其中歐洲一直是我國(guó)蜂蜜出口的主要市場(chǎng)。由于“抗生素超標(biāo)”，我國(guó)蜂蜜在國(guó)際市場(chǎng)上的價(jià)格和數(shù)量?jī)?yōu)勢(shì)喪失殆盡，大批已經(jīng)出口至歐洲國(guó)家的蜂蜜慘遭退貨，我國(guó)蜂蜜出口由此受到嚴(yán)重影響。據(jù)天津口岸2002年第一季度的數(shù)據(jù)顯示，與2001年3月同期相比，蜂蜜的整體出口總量下降了70％，出口總值下降了65.4％。因氯霉素結(jié)構(gòu)中的硝基苯根能抑制血細(xì)胞線粒體蛋白質(zhì)的合成，導(dǎo)致線粒體的損壞。如果使用氯霉素不當(dāng)，將會(huì)引起再生障礙性貧血。

歐盟以氯霉素殘留超標(biāo)為由暫停中國(guó)蜂蜜進(jìn)口案我國(guó)年產(chǎn)蜂蜜約20飼用含獸藥的飼料及飼料添加劑不恰當(dāng)用藥隨意加大藥物用量用藥錯(cuò)誤或未做用藥記錄沒有按規(guī)定執(zhí)行應(yīng)有的休藥期使用未經(jīng)批準(zhǔn)的或禁用的獸藥屠宰前使用獸藥（通常屠宰前10天要禁藥）食品加工過程受到污染（如食品保鮮）4、獸藥殘留的來源

（以抗生素殘留為代表）禽畜末次給藥到允許屠宰或它們的產(chǎn)品（乳\蛋等）許可上市的間隔時(shí)間，通常4~7天。飼用含獸藥的飼料及飼料添加劑4、獸藥殘留的來源

5、獸藥殘留的危害

（以抗生素殘留為代表）毒性作用過敏反應(yīng)和變態(tài)反應(yīng)細(xì)菌耐藥性菌群失調(diào)“三致”作用激素的副作用造成經(jīng)濟(jì)損失5、獸藥殘留的危害

（以抗生素殘留6、獸藥殘留的控制有效的監(jiān)督管理和檢測(cè)體系建設(shè)加強(qiáng)藥物的合理使用規(guī)范嚴(yán)厲查處違禁藥物用作飼料添加劑謹(jǐn)慎使用抗生素飼料生產(chǎn)過程中藥物添加劑污染的控制：藥物添加劑型選擇、藥物添加的管理、加工和設(shè)備清洗、標(biāo)簽嚴(yán)格規(guī)定休藥期和指定動(dòng)物性食品藥物的最高殘留限量（MRL）在消費(fèi)環(huán)節(jié)沒有很好的辦法去除殘留在動(dòng)物性食品中的獸藥6、獸藥殘留的控制有效的監(jiān)督管理和檢測(cè)體系建設(shè)在消費(fèi)環(huán)節(jié)沒有獸藥最高殘留限量(MRL)動(dòng)物用藥后產(chǎn)生的允許存在于食品表面或內(nèi)部的改獸藥殘留的最高量。(單位μg／kg，以鮮重計(jì))。二、食品中獸藥殘留控制及其分析獸藥最高殘留限量(MRL)二、食品中獸藥殘留控制及其分析為有效控制獸藥殘留，各國(guó)都制定了獸藥使用的法律與法規(guī)及使用的有關(guān)標(biāo)準(zhǔn)。休藥期：是指動(dòng)物從停止給藥到許可屠宰或它們的乳、蛋等產(chǎn)品許可上市的間隔時(shí)間。奶廢棄期：即奶牛從停止給藥到它們所產(chǎn)的奶許可上市的間隔時(shí)間。為有效控制獸藥殘留，各國(guó)都制定了獸藥使用的法律與法規(guī)及使用的獸藥殘留分析技術(shù)的特點(diǎn)待測(cè)物質(zhì)濃度低樣品基質(zhì)復(fù)雜，干擾物質(zhì)多獸藥殘留代謝產(chǎn)物多樣或不明動(dòng)物種類多樣，對(duì)藥物代謝存在差異獸藥殘留分析技術(shù)的特點(diǎn)

對(duì)檢測(cè)方法的要求快速高通量(highthroughput)定量準(zhǔn)確度和精確度(accuracy&precision)確證(unequinocalidentification)法定的和QC對(duì)檢測(cè)方法的要求

食品獸藥殘留的傳統(tǒng)檢測(cè)分析方法GC-MSLC-MS耗時(shí)長(zhǎng)、設(shè)備昂貴、試劑消耗量大，不易推廣。高通量、低成本、快速敏感性好、再現(xiàn)性好、操作容易、不需昂貴的儀器。食品獸藥殘留的傳統(tǒng)檢測(cè)分析方法耗時(shí)長(zhǎng)、設(shè)備昂貴、試劑消耗量篩選方法：微生物法、免疫化學(xué)方法（ELISA）等確證方法：HPLC、GC、GC-MS、LC-MS、LC-MS-MS篩選方法：微生物法、免疫化學(xué)方法（ELISA）等

理想的儀器裝備樣品經(jīng)簡(jiǎn)單處理即可上機(jī)測(cè)定不需萃取和凈化快速、準(zhǔn)確的定量分析自動(dòng)的資料處理理想的儀器裝備食品中獸藥殘留快速篩選檢測(cè)常用方法：微生物法免疫法色譜法食品中獸藥殘留快速篩選檢測(cè)常用方法：抗生素種類繁多，結(jié)構(gòu)復(fù)雜，測(cè)定方法各不相同。因而給檢測(cè)工作帶來了許多困難?？股氐臏y(cè)定方法進(jìn)展很快。三、食品中抗生素殘留快速檢測(cè)方法微生物法、免疫法、理化儀器法是食品中抗生素殘留檢測(cè)常用的3種方法抗生素種類繁多，結(jié)構(gòu)復(fù)雜，測(cè)定方法各不相同。因而給檢測(cè)工作帶二、食品中抗生素殘留檢測(cè)方法微生物法——如“TTC試驗(yàn)”基于抗生素對(duì)微生物的生理機(jī)能、代謝的抑制作用，來定性或定量確定樣品中抗微生物藥物殘留。以擴(kuò)散過程或渾濁度為基礎(chǔ)?？股貪舛仍礁撸⑸锏纳L(zhǎng)受抑制程度越大，菌落越小。微生物法試劑盒：分析樣品數(shù)量、操作便捷、靈敏度高、條件要求低適合：養(yǎng)殖場(chǎng)、食品加工車間二、食品中抗生素殘留檢測(cè)方法微生物法——如“TTC試驗(yàn)”（1）平皿法以抑菌區(qū)域?yàn)闄z測(cè)指標(biāo)（1）平皿法動(dòng)物源性食品抗生素類藥物殘留檢測(cè)用尺子測(cè)量從棉試子邊緣到抑菌圈邊緣的距離，樣品周圍有大于2毫米的抑菌區(qū)域證明陽(yáng)性（含有抗生素）；沒有抑菌區(qū)域表明樣品為陰性。先枯草桿菌懸液放于培養(yǎng)皿中，再將樣品接種到培養(yǎng)皿，在恒溫箱中培養(yǎng)16~24h動(dòng)物源性食品抗生素類藥物殘留檢測(cè)用尺子測(cè)量從棉試子邊緣到抑菌培養(yǎng)基I培養(yǎng)基II陰性最低檢測(cè)限陽(yáng)性其他藥物殘留培養(yǎng)基I培養(yǎng)基II陰性最低檢測(cè)限陽(yáng)性其他藥物殘留（2）生化檢測(cè)法牛乳等液體樣品主要利用培養(yǎng)基pH等因素改變引起指示劑顏色變化的生物化學(xué)原理來指示檢測(cè)結(jié)果.檢測(cè)法/試劑盒：TTC、Delvotest、CharmScience等。（2）生化檢測(cè)法鮮乳中抗生素殘留量的測(cè)定（TTC試驗(yàn)）

（一）原理

當(dāng)乳中含有抗生素時(shí)，標(biāo)準(zhǔn)菌株嗜熱鏈球菌的生長(zhǎng)受到抑制，不能將指示劑2,3,5—氯化三苯基四氮唑（TTC）還原為無色。反之，當(dāng)乳中抗生素不存在時(shí)，加入的標(biāo)準(zhǔn)菌株，就會(huì)大量生長(zhǎng)繁殖，而且將TTC還原為紅色化合物。其紅色強(qiáng)度與細(xì)菌數(shù)量成正比。本法對(duì)各種抗生素的最低檢出量：青霉素為0.004IU/mL，鏈霉素為0.5IU/mL，慶大霉素為0.4IU/mLTTC法為鮮乳中抗菌藥物殘留檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)方法。鮮乳中抗生素殘留量的測(cè)定（TTC試驗(yàn)）（一）原理T2，3，5—氯化三苯四氮唑試驗(yàn)（TTC試驗(yàn)）嗜熱乳酸鏈球菌2，3，5—氯化三苯四氮唑試驗(yàn)（TTC試驗(yàn)）嗜熱乳酸鏈球菌（二）注意事項(xiàng)

1.本法的正確性與菌種的活力有密切關(guān)系。如菌種活力減弱時(shí)，應(yīng)多次反復(fù)傳代加強(qiáng)活力。

2.每次檢驗(yàn)每個(gè)樣品應(yīng)一式二份，另外要作陰性、陽(yáng)性對(duì)照各2管，陰性對(duì)照管作無抗生素乳9mL，陽(yáng)性對(duì)照管用無抗生素乳9mL加抗生素。

3.水浴培養(yǎng)要避光，保持37℃，水面高于被檢樣品，判斷要迅速；檢樣經(jīng)80℃水浴加熱5min，要嚴(yán)格掌握。

4.制備培養(yǎng)基的乳要絕對(duì)無抗生素存在；操作所用試管、吸管均須經(jīng)滅菌。（二）注意事項(xiàng)89四環(huán)素類抗生素殘留量的測(cè)定

食品中四環(huán)素類抗生素的測(cè)定多采用微生物法原理

樣品經(jīng)提取，用離子交換樹脂分離，甲醇溶劑洗脫，經(jīng)濃縮，殘?jiān)肕cllvaine緩沖液溶解，經(jīng)熒光鑒定，然后用微生物法進(jìn)行定量測(cè)定。本方法的最低檢出量為0.05mg/kg。89四環(huán)素類抗生素殘留量的測(cè)定食品中四環(huán)素類抗生素的90其它抗生素也可用此法進(jìn)行測(cè)定，只是試驗(yàn)的菌種不同或培養(yǎng)基不同。測(cè)定青霉素為金黃色葡萄球菌，鏈霉素或雙氫鏈霉素為枯草桿菌（6633），氯霉素為卵黃色八疊球菌（9341），新生霉素為白色葡萄球菌。90其它抗生素也可用此法進(jìn)行測(cè)定，只是試驗(yàn)的菌種不同2、免疫檢驗(yàn)法通過檢測(cè)食品中的抗抗生素抗體來確定抗生素含量?；诳股兀乖┐碳?dòng)物產(chǎn)生相應(yīng)的應(yīng)急反應(yīng)，從而形成抗體。優(yōu)點(diǎn)：操作簡(jiǎn)單，速度快、取樣量小，前處理簡(jiǎn)單、容量大，儀器化程度低，靈敏度高，適用于現(xiàn)場(chǎng)監(jiān)控和大量樣品的篩選，具有廣闊的應(yīng)用前景缺點(diǎn)：直接測(cè)定存在樣本信息量太少，假陽(yáng)性和理化分析技術(shù)選擇性低，當(dāng)樣品中含有與某類抗生素結(jié)構(gòu)相似的化合物時(shí)，可能出現(xiàn)免疫交叉反應(yīng)而呈現(xiàn)假陽(yáng)性結(jié)果2、免疫檢驗(yàn)法通過檢測(cè)食品中的抗抗生素抗體來確定抗生素含量。免疫學(xué)方法快速檢測(cè)放射免疫分析酶聯(lián)免疫分析熒光免疫分析發(fā)光免疫分析膠體金免疫分析免疫學(xué)方法快速檢測(cè)獸藥殘留免疫學(xué)快速檢測(cè)方法的建立重要包括：檢測(cè)對(duì)象的選擇檢測(cè)對(duì)象結(jié)構(gòu)分析免疫半抗原的合成人工結(jié)合抗原的制備與鑒定抗體的制備檢測(cè)方法的確立與方法評(píng)價(jià)等。獸藥殘留免疫學(xué)快速檢測(cè)方法的建立重要包括：1、藥物結(jié)構(gòu)分析和半抗原的合成獸藥多為小分子化合物（分子量小于5000Da），不具備免疫原性，需先和大分子載體偶聯(lián)后方可用于抗體的生產(chǎn)。多數(shù)情況下，檢測(cè)對(duì)象的結(jié)構(gòu)不適合用于直接和蛋白質(zhì)等載體直接偶聯(lián)，需要進(jìn)行抗原改造。半抗原改造的原則：和載體偶聯(lián)后可以最大限度地暴露原藥物的結(jié)構(gòu)特征。1、藥物結(jié)構(gòu)分析和半抗原的合成2、人工結(jié)合抗原的制備通過選擇小分子半抗原中的活性基團(tuán)或者改造后加入的活性基團(tuán)，選擇適當(dāng)?shù)呐悸?lián)試劑、載體蛋白和連接條件進(jìn)行人工結(jié)合抗原的制備。2、人工結(jié)合抗原的制備3、抗體的制備多克隆抗體動(dòng)物免疫、抗體純化、鑒定高度異質(zhì)性，不同個(gè)體產(chǎn)生的抗體成分不同單克隆抗體動(dòng)物免疫、細(xì)胞融合、雜交瘤細(xì)胞株的建立、抗體的生產(chǎn)及鑒定永續(xù)性、高度均一性3、抗體的制備4、檢測(cè)方法的建立膠體金免疫層析法（速測(cè)卡、膠體金試紙條、速測(cè)試紙條）酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法放射免疫及熒光免疫測(cè)定法生物感應(yīng)器主要由兩個(gè)元件組成：生物學(xué)識(shí)別元件（通常是一個(gè)抗體）；信號(hào)轉(zhuǎn)換元件連接著數(shù)據(jù)采集和處理系統(tǒng)的精密接觸元件。分析靶標(biāo)與生物受體(抗體）結(jié)合產(chǎn)生信號(hào)，該信號(hào)被不同原理的傳感器轉(zhuǎn)換成電子信號(hào)，然后被計(jì)算機(jī)等處理成最后的結(jié)果。4、檢測(cè)方法的建立主要由兩個(gè)元件組成：生物學(xué)識(shí)別元件（通常是3、理化儀器分析方法常用高效液相色譜（HPLC）和質(zhì)譜（MS）對(duì)抗生素進(jìn)行定量、定性的測(cè)定，主要是基于它們測(cè)定痕量物質(zhì)的優(yōu)越性。優(yōu)點(diǎn)：分離速度快、效率高和操作可自動(dòng)化，已成為大多數(shù)抗生素殘留的常規(guī)分析方法。目前，HPLC方法已用于紅霉素、慶大霉素、羧芐青霉素和吩羧青霉素殘留的測(cè)定。3、理化儀器分析方法常用高效液相色譜（HPLC）和質(zhì)譜（MS央視《每周質(zhì)量報(bào)告》播出3·15特別節(jié)目《“健美豬”真相》鹽酸克倫特羅檢測(cè)卡央視《每周質(zhì)量報(bào)告》播出3·15特別節(jié)目《“健美豬”真相》鹽克倫特羅為白色結(jié)晶粉末，易溶于水、醇類、微溶于氯仿。作用機(jī)理：克倫特羅選擇性作用于動(dòng)物β-腎上腺素能受體，激活腺甘酸環(huán)化酶，使環(huán)磷酸苷(cAMP)增加，加強(qiáng)脂肪分解，促進(jìn)蛋白質(zhì)合成，實(shí)現(xiàn)動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)再分配，可提高動(dòng)物的瘦肉率。

克倫特羅β-受體酶ATPcAMP脂肪分解蛋白合成營(yíng)養(yǎng)再分配提高瘦肉率克倫特羅為白色結(jié)晶粉末，易溶于水、醇類、微溶于氯仿。在畜牧業(yè)生產(chǎn)中一些非法使用者將其作為一種生長(zhǎng)促進(jìn)劑添加到動(dòng)物飼料中，用以改善胴體的品質(zhì)；同時(shí)也造成動(dòng)物性食品中鹽酸克倫特羅（瘦肉精）的殘留。當(dāng)人們食用含有鹽酸克倫特羅（瘦肉精）殘留的產(chǎn)品后會(huì)產(chǎn)生一定的中毒癥狀。在畜牧業(yè)生產(chǎn)中一些非法使用者將其作為一種生長(zhǎng)促進(jìn)劑添加到動(dòng)物克倫特羅的毒性心血管系統(tǒng)：

心悸、心慌、頭暈頭痛等臨床癥狀

神經(jīng)系統(tǒng)

惡心、嘔吐、肌肉疼痛、肌肉顫抖、興奮、不自主地顫抖、運(yùn)動(dòng)障礙禁忌癥

心臟病、糖尿病、高血壓、青光眼、甲亢

克倫特羅的毒性心血管系統(tǒng)：

心悸、心慌、頭暈頭痛等臨床癥狀中毒劑量人醫(yī)用藥量：

0.02~0.5μg/kg中毒一般含量：肝臟100~500μg/kg中毒極端含量：肝臟19~5395μg/kg

中毒劑量人醫(yī)用藥量：以克倫特羅快速檢測(cè)★

金標(biāo)（膠體金）快速檢測(cè)試紙★金標(biāo)（膠體金）快速檢測(cè)卡金標(biāo)試紙金標(biāo)檢測(cè)卡以克倫特羅快速檢測(cè)★金標(biāo)（膠體金）快速檢測(cè)試紙金標(biāo)試紙金金標(biāo)檢測(cè)技術(shù)的基本原理金標(biāo)免疫檢測(cè)試紙條系統(tǒng)使用一種特殊的多孔膜（NC膜）作為固相載體。該膜具有很強(qiáng)的蛋白吸附功能，抗體抗原吸附于NC膜并經(jīng)干燥處理后即作為固相，可與液相中的相應(yīng)標(biāo)記了膠體金的抗原抗體快速結(jié)合。

在濕潤(rùn)狀態(tài)下，液相中的抗原抗體免疫金可因“燈芯引流現(xiàn)象”作快速定向泳動(dòng)并與固相另一抗原決定簇單抗結(jié)合，形成特異的金標(biāo)記抗體－抗原－抗體紅色沉積線，表現(xiàn)出抗原抗體的特征反應(yīng)。金標(biāo)檢測(cè)技術(shù)的基本原理金標(biāo)免疫檢測(cè)試紙條系統(tǒng)使用一種特殊的多BSA偶聯(lián)的克倫特羅分子與膠體金顆粒結(jié)合，包被在玻纖上標(biāo)記抗原的金顆粒在纖維素膜上分別將克倫特羅抗體和BSA抗體分別包被在檢測(cè)區(qū)（T）和質(zhì)控區(qū)（C）抗體試劑條組裝被標(biāo)記的金顆粒樣品墊濾紙抗體加入樣品樣品流動(dòng)試劑條檢測(cè)BSA偶聯(lián)的克倫特羅分子與膠體金顆粒結(jié)合，包被在玻纖上標(biāo)記抗樣品中沒有克倫特羅時(shí)：

金顆粒上的克倫特羅抗原和纖維素膜上抗體的結(jié)合，檢測(cè)區(qū)T線顯示紅色。樣品中有高濃度的克倫特羅（>3ppb

）時(shí)：

由于樣品中克倫特羅的分子與金顆粒上克倫特羅抗原競(jìng)爭(zhēng)與纖維素膜上的抗體結(jié)合，當(dāng)樣本中克倫特羅濃度較高，膠體金偶聯(lián)物不能與克倫特羅抗體結(jié)合，T線不顯色；當(dāng)樣本中克倫特羅低于一定值，T線紫紅色線條。樣品中沒有克倫特羅時(shí)：金顆粒上的克倫特羅抗原T線C線

這樣，在高濃度的情況下，即使T線不出現(xiàn)，只要C線出現(xiàn)，就知道試劑沒有問題。而如果連C線都沒有，則可知道是試劑有問題，該包裝的試劑應(yīng)該棄用。這樣就避免了假陽(yáng)性的結(jié)果。>3ppb1ppb0.5ppb0ppb陽(yáng)性陰性T線C線這樣，在高濃度的情況下，即使T線不出現(xiàn)，金標(biāo)卡檢測(cè)操作與注意事項(xiàng)1）.

檢測(cè)準(zhǔn)備（1）準(zhǔn)備：

試劑盒尿樣記錄本記號(hào)筆計(jì)時(shí)器操作步驟

（2）打開試劑盒

（3）閱讀說明書金標(biāo)卡檢測(cè)操作與注意事項(xiàng)1）.

檢測(cè)準(zhǔn)備操作步驟（2）打開

（1）取出檢測(cè)卡：根據(jù)檢測(cè)樣品數(shù)量確定需要的檢測(cè)卡數(shù)量2）.

操作

（2）檢測(cè)卡放置：在平坦的臺(tái)面上

（3）檢測(cè)卡標(biāo)記（必要時(shí)）：標(biāo)記上尿樣編號(hào)（1）取出檢測(cè)卡：根據(jù)檢測(cè)樣品數(shù)量確定需要的檢測(cè)卡數(shù)量2）2）.

操作

（4）吸取尿樣：用試劑盒帶的滴管吸取尿樣

（5）滴加尿樣：滴管垂直滴加2滴尿樣于加樣孔（S）中2）.

操作（4）吸取尿樣：用試劑盒帶的滴管吸取尿樣（5

（6）觀察結(jié)果：肉眼觀察紫紅條帶的出現(xiàn)，測(cè)試結(jié)果應(yīng)在5min時(shí)讀取2）.

操作（6）觀察結(jié)果：肉眼觀察紫紅條帶的出現(xiàn)，測(cè)試結(jié)果應(yīng)在5mi3）.

結(jié)果判定陽(yáng)性（+）：僅質(zhì)控區(qū)（C）出現(xiàn)一條紫紅色帶，在測(cè)試區(qū)（T）內(nèi)無紫紅色條帶出現(xiàn)。表明尿液中的克倫特羅殘留物大于3ppb。

陰性（-）：兩條紫紅色條出現(xiàn)。一條位于測(cè)試區(qū)（T）內(nèi)，另一條位于質(zhì)控區(qū)內(nèi)（C）。表明尿液中不含克倫特羅殘留物或小于3ppb。

無效：質(zhì)控區(qū)（C）未出現(xiàn)紫紅色條帶，表明不正確的操作過程或檢測(cè)卡已變質(zhì)損壞。在此情況下，應(yīng)再次仔細(xì)閱讀說明書，并用新的檢測(cè)卡重新測(cè)試。如果問題仍然存在，應(yīng)立即停止使用此批號(hào)產(chǎn)品，并與當(dāng)?shù)毓?yīng)商聯(lián)系。未加樣前陰性陽(yáng)性無效3）.

結(jié)果判定陽(yáng)性（+）：僅質(zhì)控區(qū)（C）出現(xiàn)一條紫紅色帶，2.2.注意事項(xiàng)1）.存儲(chǔ)與使用（1）儲(chǔ)存：室溫（2-40℃）陰涼干燥處，忌冷凍。（2）使用：室溫（2-40℃）使用，檢測(cè)卡取出20min內(nèi)使用，避免受潮失效。（3）反應(yīng)：檢測(cè)卡避免陽(yáng)光直射、空調(diào)或風(fēng)扇直吹。2.2.注意事項(xiàng)1）.存儲(chǔ)與使用注意事項(xiàng)2）.操作過程（1）檢測(cè)卡放置：放置于水平的臺(tái)面上，忌傾斜。（2）加樣：①尿樣加入加樣孔中，不要加入檢測(cè)區(qū)；②垂直滴加2滴尿樣，不要整管加入（3）結(jié)果判讀：測(cè)試結(jié)果在5min時(shí)判讀注意事項(xiàng)2）.操作過程注意事項(xiàng)3）.樣品準(zhǔn)備一般澄清尿樣可直接用于檢測(cè)，較為渾濁尿樣建議離心或過濾后用于檢測(cè)4）.包裝袋使用未用完檢測(cè)卡的包裝袋要確認(rèn)封口密封，以免產(chǎn)品受潮注意事項(xiàng)3）.樣品準(zhǔn)備無效結(jié)果與可能原因無效結(jié)果正常結(jié)果陽(yáng)性陰性白板無C線出線淡不跑板可能原因1.包裝袋密封不好，產(chǎn)品受潮2.檢測(cè)卡未水平放置3.尿樣加入檢測(cè)區(qū)4.尿樣加樣量太多或太少5.不潔凈尿樣，如含有漂白粉、明礬，或渾濁尿樣6.檢測(cè)環(huán)境溫度過低7.產(chǎn)品過期8.其他原因無效結(jié)果與可能原因無效結(jié)果正常結(jié)果陽(yáng)性陰性鹽酸克倫特羅檢測(cè)卡適用于豬肉、內(nèi)臟、豬尿液中國(guó)鹽酸克倫特羅含量的檢測(cè)；靈敏度（閾值）：不同規(guī)格3ng/ml(kg)、5ng/ml(kg)、6ng/ml(kg)等針對(duì)豬組織和尿液采樣不同類型的檢測(cè)卡，使用時(shí)應(yīng)區(qū)別使用；肉及內(nèi)臟中脂肪會(huì)導(dǎo)致假陽(yáng)性結(jié)果，取樣時(shí)需剔除肉眼可見的脂肪；檢測(cè)卡應(yīng)在在常溫下使用，不用對(duì)剛屠宰或冷凍豬肉直接進(jìn)行檢測(cè)；自來水、蒸餾水或去離子水不能作為陰性對(duì)照，可用閾值接近的幾個(gè)濃度階梯來校驗(yàn)檢測(cè)卡的靈敏度。鹽酸克倫特羅檢測(cè)卡適用于豬肉、內(nèi)臟、豬尿液中國(guó)鹽酸克倫特羅含萊克多巴胺檢測(cè)卡氯霉素檢測(cè)卡萊克多巴胺檢測(cè)卡氯霉素檢測(cè)卡5章-農(nóng)藥、獸藥殘留速測(cè)技術(shù)ppt課件牛乳中青霉素酶活檢測(cè)試劑盒適用范圍：檢測(cè)牛乳中殘留的青霉素酶檢測(cè)原理：采用間接競(jìng)爭(zhēng)法，利用青霉素酶可分解牛奶樣品中的β-內(nèi)酰胺類抗生素的原理，通過配體-受體識(shí)別法快速測(cè)定與青霉素酶反應(yīng)后殘留的青霉素G的含量，從而檢測(cè)牛奶樣品中殘留的青霉素酶。

本試劑盒一個(gè)小時(shí)內(nèi)便可檢測(cè)到牛奶樣品中殘留的青霉素酶，在40℃±3℃溫育45分鐘后，極低濃度的青霉素酶便可以催化水解4ppb的青霉素G。牛乳中青霉素酶活檢測(cè)試劑盒適用范圍：檢測(cè)牛乳中殘留的青霉素酶試劑盒組成：

青霉素酶活性檢測(cè)試劑盒所含有的試劑：

含有特定濃度青霉素G的玻璃試劑瓶；

試劑筒（包括8孔微孔試劑和8條測(cè)試條）

微量移液器配套吸頭96支

陰性質(zhì)控（不含抗生素和酶的原奶干粉），淺綠