醫(yī)療器械無菌試驗檢查要點指南(2023年版)

醫(yī)療器械無菌試驗檢查要點指南(2023—2——2—醫(yī)療器械無菌試驗檢查要點指南〔2023版〕無菌檢驗是無菌醫(yī)療器械產(chǎn)品生產(chǎn)把握過程中的一項重要內(nèi)容。其檢驗方法、檢驗結果判定及檢驗人員業(yè)務力氣等因素直接影響產(chǎn)品的質(zhì)量和的生疏，指導和標準全市醫(yī)療器械生產(chǎn)監(jiān)管人員對醫(yī)療器械生產(chǎn)企業(yè)無菌檢驗過程把握水平的監(jiān)視檢查工作，同時，為醫(yī)療器械生產(chǎn)企業(yè)〔以下簡稱生產(chǎn)企業(yè)〕在無菌檢驗的過程治理要求供給參考和依據(jù)。一、適用范圍業(yè)許可證》核發(fā)、變更、換證等現(xiàn)場檢查、醫(yī)療器械質(zhì)量治理體系考核、醫(yī)療器械生產(chǎn)質(zhì)量治理標準檢查、醫(yī)療器械生產(chǎn)日常監(jiān)視等各項涉無菌檢驗的檢查。二、檢查內(nèi)容驗過程的把握水平進展客觀的檢查和評價。關記錄：查法包括直接接種法和薄膜過濾法。當建立產(chǎn)品的無菌檢查方法時，生產(chǎn)企業(yè)應進展方法的驗證，以證明所承受的方法能夠給出正確的結果。假設該產(chǎn)品的組分或原檢驗條件發(fā)生轉變時，檢查方法應重驗證。驗證時，應按供試品無菌檢查的規(guī)定及有關要求進展操作。對藥典規(guī)定的每一試驗菌—3——4—4—2℃～25℃、避光的環(huán)境，假設保存于非密閉容器中，一般在3周內(nèi)使用；假設保存于密閉容器中，一般可在1年內(nèi)使用?；臒o菌性檢查及靈敏度檢查的要求。檢查可在供試品的無菌檢查前或與供試品的無菌檢查同時進展。供試品的無菌檢查承受薄膜過濾法。供試品無菌檢查所承受的檢查方法和檢驗條件應與驗證的方法一樣。無菌試驗過程中，假設需使用外表活性劑、滅活劑、中和劑等試劑，應證明其有效性，且對微生物無毒性。供試品容器內(nèi)有確定的真空度，可用適宜的無菌器材〔如帶有除菌過濾器的針頭〕向容器內(nèi)導入無菌空氣，再按無菌操作起開容器取出內(nèi)容物。培育及觀看含培育基的容器按規(guī)定的溫度培育14天。培育期間應逐日觀看并記錄是否有菌生長。如在參與供試品后、或在培育過程中，培育基消滅渾濁，培育14天后，不能從外觀上推斷有無微生物生長，可取該培育液適量轉種至同種穎培育基中，細菌培育2天、真菌培育3天，觀看接種的同種穎培育基是否再消滅渾濁；或取培育液涂片，染色，鏡檢，推斷是否有菌。在觀看試驗結果的過程中，還應考慮假陰性的影響。其中影響假陰性〔促生長試驗〔消退抑菌物質(zhì)處理到培育有確定的時間間隔〔確定滅菌后產(chǎn)品的儲存條件及儲存時間。結果推斷生產(chǎn)企業(yè)應依據(jù)如下標準進展推斷：規(guī)定；②假設供試品管中任何一管顯渾濁并確證有菌生長，判供試品不符合規(guī)定，除非能充分證明試驗結果無效，即生長的微生物非供試品所含。陽性比照管應生長良好，陰性比照管不得有菌生長，否則試驗無效。所用的設備及環(huán)境的微生物監(jiān)控結果不符合無菌檢查法的要求；②回憶無菌試驗過程，覺察有可能引起微生物污染的因素；③供試品管中生長的微生物經(jīng)鑒定后，確證是因無菌試驗中所使用的物品和〔或〕無菌操作技術不當引起的。假設無菌生長，判供試品符合規(guī)定；假設有菌生長，判供試品不符合規(guī)定。6、查閱試驗記錄。完整的試驗記錄應明確包含以下幾類信息：批號、取樣地點、取樣方式、取樣人、原始試驗記錄序號。滅菌物品制作記錄①培育基：培育基名稱、培育基批號、培育基用量〔g、蒸餾水用量〔m制作人、培育基存放地點和有效期等。滅菌時間、制作人、器具存放地點、有效期等。原始試驗記錄，至少應包括：記錄名稱、記錄序號、樣品名稱、樣品唯一性標識〔例如：樣品號、樣品規(guī)格、樣品批號、滅菌批號、樣品、試驗結論、檢測人、復核人等?！补腆w、液體、廢棄物數(shù)量、滅菌時間和壓力、經(jīng)辦人、處理日期等。三、其它應留意的問題1表加工過程和條件的批中選擇。選擇樣品是隨機的。試驗樣品的選擇和處試驗樣品可以選擇制造過程中的不合格產(chǎn)品，它們應當代表這個生產(chǎn)批的加工程序和條件。用于試驗的不合格產(chǎn)品應不會影響無菌測試的有效性。2尤其是只有一層包裝的樣品。進入無菌檢驗室的樣品假設有兩層〔或兩層以上〕包裝的，需將外包裝在傳遞窗〔或緩沖間〕撤除后，傳入試驗室。被燙死。對不同種類和不同批次的產(chǎn)品，在拆包裝及夾取樣品時，應更換試驗用具〔如：剪刀、鑷子。法進展消毒處理〔如：紫外燈照耀不少于30分鐘121℃高壓30的全過程，對于在試驗過程中消滅的各種狀況，均應在記錄中客觀反映。參考資料一：常見的名詞解釋110-6及以下。動物和病毒。染及其干擾的一系列操作方法和有關措施，其中包括無菌環(huán)境設施、無菌試驗器材以及無菌操作。檢驗的過程中，能防止微生物污染與干擾的一種常規(guī)操作方法。方式的組合。6、需氧菌：在代謝中，有氧條件下才能生存的微生物。7、厭氧菌：在代謝中，沒有氧的條件下才能生存的微生物。8、抑細菌/抑霉菌試驗：用選定的微生物來演示某些物質(zhì)的存在能夠抑制這些微生物的生殖。910、假陰性：實際陽性的無菌試驗結果被變成了陰性。11、假陽性：實際陰性的無菌試驗結果被變成了陽性。檢驗器材。13在一個或多個預定工藝參數(shù)上顯示變化的指示器材。14、無菌保證水平〔SAL〕:滅菌后產(chǎn)品上存在單個活微生物的概率。參考資料二：無菌室空氣中菌落數(shù)的檢查無菌室在消毒處理完畢后，應檢查空氣中的菌落數(shù)。方法如下：取直徑約90mm20mL35℃培育483只培育皿在無菌室操作臺或超凈工作臺平均位置翻開上蓋，暴露30分鐘后蓋好，置30℃～35℃培育48小時后取出檢查，3只雙碟上生長的菌落數(shù)平均不得超過1個。無菌試驗過程中應檢查空氣中的菌落數(shù)，方法同上。在試驗開頭進展時翻開平皿蓋，至試驗完畢蓋好照上法培育，應符合上述要求。參考資料三：供試品數(shù)量的選擇檢驗數(shù)量是指一次試驗所用供試品最小包裝容器的數(shù)量。除另有規(guī)定B中表123規(guī)定。表1、表2、表3中最少檢驗數(shù)量不包括陽性比照試驗的供試品用量。1/2的最小檢驗數(shù)量作陽性比照用；假設承受直接接種法，應增加供試品1〔或瓶〕作陽性比照用。執(zhí)行GB/T14233.2的供試品數(shù)量應滿足同一批號3～11個單位供試品。檢驗量是指一次試驗所用的供試品總量〔gml份培育基接種的供試品量按表2、表3規(guī)定。假設每支〔瓶〕供試品的裝量按規(guī)定足夠接種兩份培育基，則應分別接種硫乙醇酸鹽流體培育基和改進馬丁培育基。承受薄膜過濾法時，檢驗量應不少于直接接種法的總接種量，只要供試品特性允許，應將全部容器內(nèi)的全部內(nèi)容物過濾。表1供試品批產(chǎn)量N(個)每種培育基最少檢驗數(shù)量注射劑≤100100＜N≤50010%或4個(取較多者)10個大體積注射劑(＞＞5002%或20個(取較少者)2%或10個(取較少者)100ml)眼用及其他非注射產(chǎn)品≤200＞2005%或2個(取較多者)10個桶裝固體原料≤4每個容器4＜N≤50＞5020%或4個容器(取較多者)2%或10個容器(取較多者)醫(yī)療器具10≤10010%或4〔取較多者〕100＜N≤500＞500102%或20〔取較少者〕注:假設每個容器中的裝量缺乏接種兩種培育基,那么表中的檢—10—10—驗數(shù)量應加倍2上市抽驗樣品(液體制劑)的最少檢驗量供試品量V(ml)每支樣品接入每管培養(yǎng)基的最少樣品量最少檢驗數(shù)量(瓶或支)≤1全量20①1＜V＜5半量105≤V＜202ml1020≤V＜505ml1050≤V＜10010ml1050≤V＜100(靜脈給藥)半量10100≤V≤500半量6V＞500500ml6103上市抽驗樣品(固體制劑)的最少檢驗量供試品裝量M(瓶或支)每支樣品接入每管培育基的最少樣品量最少檢驗數(shù)量(瓶或支)M＜50mg全量20①50mg≤M＜300mg半量10300mg≤M＜5g150mg10M≥5g500mg10一次性使用含藥產(chǎn)品整個產(chǎn)品10104參考資料四：培育基的制備30～35℃1423～28℃14制造方法、潛在的微生物污染來源、可能遇到的微生物種類。硫乙醇酸鹽流體培育基必需在煮沸后，再進展分裝、滅菌。1、硫乙醇酸鹽流體培育基酪胨(胰酶水解)15.0g、酵母浸出粉5.0g、葡萄糖5.0g、氯化鈉2.5g、L-胱氨酸0.5g、配制的0.1%刃天青溶液1.0ml、硫乙醇酸鈉0.5g0.3ml)、瓊脂0.75g、水1000ml除葡萄糖和刃天青溶液外，取上述成分混合，微溫溶解，調(diào)整pH弱堿性，煮沸，濾清，參與葡萄糖和刃天青溶液，搖勻，調(diào)整pH7.1±0.2培育完畢后培育基氧化層〔粉紅色〕不超過培育基深度的1/2。滅菌。在1/5須經(jīng)100℃水浴加熱至粉紅色消逝〔不超過20分鐘，快速冷卻，只限加熱一次，并防止被污染。30℃～35℃培育。2、改進馬丁培育基5.0g1.0g2.0g0.5g、葡萄糖20.0g1000mlpH值約為6.8，煮沸，參與葡萄糖溶解后，搖勻，濾清，調(diào)整pH值使滅菌后為6.4±0.2，分裝，滅菌。23℃～28℃培育。3、選擇性培育基基滅菌或使用前參與適宜的中和劑、滅活劑或外表活性劑，其用量同驗證試驗。4、養(yǎng)分肉湯培育基10.0g、氯化鈉5.0g、牛肉浸出粉3.0g1000mlpHpH7.2±0.2，分裝，滅菌。5、養(yǎng)分瓊脂培育基按上述養(yǎng)分肉湯培育基的處方及制法，參與14.0g瓊脂，調(diào)整pH值7.2±0.2，分裝，滅菌。6、改進馬丁瓊脂培育基按改進馬丁培育基的處方及制法，參與14.0g瓊脂，調(diào)整pH值使滅6.4±0.2，分裝，滅菌。參考資料五：培育基的適用性檢查支〔瓶14菌生長。2、靈敏度檢查5〔從菌種保存中心獲得的冷凍枯燥菌種為第代，試驗用菌種應承受適宜的菌種保存技術進展保存，以保證試驗菌株的生物學特性。金黃色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)〔CMCC(B)26003〕銅綠假單胞菌(Pseudomonasaeruginosa)〔CMCC(B)10104〕枯草芽孢桿菌〔Bacillussubtilis〔CMCC〔〕63501〕生孢梭菌(Clostridiumsporogenes)〔CMCC(B)64941〕白色念珠菌(Candidaalbicans)〔CMCC(F)98001〕黑曲霉(Aspergillusniger)〔CMCC(F)98003〕3、菌液制備接種金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、枯草芽孢桿菌的穎培育物至養(yǎng)分肉湯培育基中或養(yǎng)分瓊脂培育基上，接種生孢梭菌的穎培育物至硫乙醇酸鹽流體培育基中，30℃～35℃培育18小時～24小時；接種白色念珠菌的穎培育物至改進馬丁培育基中或改進馬丁瓊脂培育基上，23～28℃培育24～48小時，上述培育物用0.9%無菌氯化鈉溶液制成每1ml于100cfu〔菌落形成單位〕的菌懸液。接種黑曲霉的穎培育物至改進馬丁瓊脂斜面培育基上，23～28℃培育5～7天，參與3～5ml含0.05％〔v/v〕聚山梨酯80的0.9%無菌氯化鈉溶液，將孢子洗脫。然后，用適宜的方法吸出孢子懸液至無菌試管內(nèi)，用含0.05％〔v/v〕聚山梨酯80的0.9%無菌氯化鈉溶液制成每1ml于100cfu的孢子懸液。22～8℃可在24小時內(nèi)使用。黑曲霉孢子懸液可保存在2～8℃，在驗證過的貯存期內(nèi)使用。4、培育基接種取每管裝量為12ml的硫乙醇酸鹽流體培育基9支，分別接種小于100cfu的金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、枯草芽孢桿菌、生孢梭菌各2139ml的改進馬丁培養(yǎng)基5支,分別接種小于100cfu的白色念珠菌、黑曲霉各2支，另1支不接種作為空白比照，培育5天。逐日觀看結果。5、結果判定空白比照管應無菌生長，假設加菌的培育基管均生長良好，判該培育基的靈敏度檢查符合規(guī)定。參考資料六：方法驗證試驗1、菌種及菌液制備除大腸埃希菌〔Escherichiacoli〕[CMCC(B)44102〕外，金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌、生孢梭菌、白色念珠菌、黑曲霉同培育基靈敏度檢查。大腸埃希菌的菌液制備同金黃色葡萄球菌。2、薄膜過濾法取每種培育基規(guī)定接種的供試品總量按薄膜過濾法過濾，沖洗，在最終一次的沖洗液中參與小于100cfu的試驗菌，過濾。取出濾膜接種至硫乙醇酸鹽流體培育基或改進馬丁培育基中，或?qū)⑴嘤又翞V筒內(nèi)。另取一3～5天，各試驗菌同法操作。3、直接接種法8接入小于100cfu的金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、枯草芽孢桿菌、生孢梭菌各2管，取符合直接接種法培育基用量要求的改進馬丁培育基4管，分別接入小于100cfu的白色念珠菌、黑曲霉各2管。其中1管接入每支培育基規(guī)定量的供試品量，另1管作為比照，按置規(guī)定的溫度培育3～5天。4、結果推斷試品的該檢驗量在該檢驗條件下無抑菌作用或其抑菌作用可以無視不計，照此檢查方法和檢查條件進展供試品的無菌檢查。如含供試品的任一容器中的試驗菌生長微弱、緩慢或不生長，則說明供試品的該檢驗量在該檢驗條件下有抑菌作用，可承受增加沖洗量、增加培育基的用量、使用中和劑或滅活劑、更換濾膜品種等方法，消退供試品的抑菌作用，并重進展方法驗證試驗。參考資料七：供試品處理及接種培育基直接接種法：每個供試品按規(guī)定量分別接種至各含硫乙醇酸鹽流體培育基和改進馬丁培育基的容器中。除另有規(guī)定外，每個容器中培育基的用10%，同時，硫乙醇酸鹽流體培育基每管裝量不少于15ml，改進馬丁培育基每管裝量不少于10ml。薄膜過濾法：將供試液混勻，過濾。如供試品具有抑菌作用或含防腐劑，須用適量的沖洗液沖洗濾膜，沖洗次數(shù)不得少于三次。沖洗后，如用封閉式薄膜過濾器，分別將100ml硫乙醇酸鹽流體培育基及改進馬丁培育基參與相應的濾筒內(nèi)。如承受一般薄膜過濾器，取出濾膜，將其剪成3等份，分別置于含50ml其中一份做陽性比照用。無菌檢查用的濾膜孔徑應不大于0.45μm50mm溶劑的特性選擇濾膜材質(zhì)?？股毓┰嚻窇x擇低吸附的濾器及濾膜。濾器及濾膜使用前應承受適宜的方法滅菌。使用