高考生物專題復習PCR技術課件

核技術：能量的放大計算機芯片：

信息的集成20世紀自然科學的兩大成就核技術：計算機芯片：20世紀自然科學的兩大成就1PCR技術：生命信息的放大基因芯片：生命信息的集成20世紀生命科學的兩大成就PCR技術：基因芯片：20世紀生命科學的兩大成就2PCR技術高考專題復習PCR技術高考專題復習3目的基因的檢測與鑒定基因工程的基本操作程序的步驟：目的基因的獲取基因表達載體的構建將目的基因導入受體細胞目的基因的檢測與鑒定基因工程的基本操作程序的步驟：目的基因的4一、目的基因的獲取1、目的基因概念：主要指的是編碼蛋白質的結構基因。也可以是一些具有調控作用的因子。2、目的基因獲取方法：從基因文庫中獲取目的基因利用PCR技術擴增目的基因化學方法直接人工合成一、目的基因的獲取1、目的基因概念：5從基因文庫中獲取目的基因基因文庫：

將含有某種生物不同基因的許多DNA片斷，導入到受體菌的群體中，各個受體菌分別含有這種生物的不同基因，稱為基因文庫。基因文庫

基因組文庫部分基因文庫（如cDNA文庫）從基因文庫中獲取目的基因基因文庫：基因文庫基因組文庫部分基因6基因文庫的構建過程基因組文庫限制酶供體細胞的全部DNA大量DNA片段拼接到載體上導入受體細胞擴增基因文庫的構建過程基因組文庫限制酶供體細胞的大量DNA拼接到7基因文庫的構建過程mRNA單鏈DNA

雙鏈DNA逆轉錄cDNA文庫基因文庫的構建過程mRNA單鏈DNA雙鏈DNA逆轉錄cDN8高考生物專題復習PCR技術ppt課件9利用PCR技術擴增目的基因PCR的全稱：聚合酶鏈式反應PCR的原理：DNA復制

PCR技術擴增目的基因的前提條件：要有一段已知的目的基因的核苷酸序列。利用PCR技術擴增目的基因PCR的全稱：10模板原料引物酶控制溫度利用PCR技術擴增目的基因——目的基因DNA——四種脫氧核苷酸——如單鏈DNA分子片段——耐熱的DNA聚合酶——PCR儀自動調控PCR的條件：模板利用PCR技術擴增目的基因——目的基因DNA——四種脫氧11多聚酶鏈式反應（PolymeraseChainReaction），是一種體外迅速擴增DNA片段的技術。1988年美國穆里斯（K.Mullis）等人發(fā)明，榮獲1993年諾貝爾化學獎。PCR多聚酶鏈式反應（PolymeraseChainReact12【基礎知識】一、PCR原理：DNA復制：半保留復制；DNA的熱變性原理。Taq

DNA聚合酶耐高溫?！净A知識】一、PCR原理：DNA復制：半保留復制；DNA的13【基礎知識】一、PCR原理：DNA復制：半保留復制；需要提供合成模板；不能起始新的DNA鏈，必須要有引物提供3’-OH；合成的方向都是5’→3’。DNA聚合酶【基礎知識】一、PCR原理：DNA復制：半保留復制；需要提供14【基礎知識】二、PCR條件：胞內DNA復制與PCR技術的比較：變性TaqDNA聚合酶DNA母鏈dNTP3個溫度Mg2+,緩沖對連續(xù)復制DNA【基礎知識】二、PCR條件：胞內DNA復制與PCR技術的比較15【基礎知識】二、PCR條件：引物：引物設計的原則：決定PCR擴增產(chǎn)物的特異性和長度。1.引物長度：

通常為20～30bp，盡量降低引物與非擴增區(qū)的同源性；2.引物內部不能存在部分互補序列；3.兩個引物之間不能存在部分互補序列；【基礎知識】二、PCR條件：引物：引物設計的原則：決定PCR16例題1【2011年安徽】家蠶細胞具有高效表達外源基因能力。將人干擾素基因導入家蠶細胞并大規(guī)模培養(yǎng)，可以提取干擾素用于制藥。采用PCR技術可驗證干擾素基因是否已經(jīng)導入家蠶細胞。該PCR反應體系的主要成分應該包含：擴增緩沖液（含Mg2+）、水、4種脫氧核糖核苷酸、模板DNA、

和

。對干擾素基因特異的DNA引物對TaqDNA聚合酶例題1【2011年安徽】家蠶細胞具有高效表達外源基因能力。17例題2【2011年江蘇】請回答基因工程方面的有關問題：

（1）設計引物是PCR技術關鍵步驟之一。某同學設計的兩組引物（只標注了部分堿基序列）都不合理（如下圖），請分別說明理由。①第一組：

；②第二組：

。引物Ⅰ和引物Ⅱ局部發(fā)生堿基互補配對而失效引物Ⅰ’自身折疊后會出現(xiàn)局部堿基互補配對而失效（2）PCR反應體系中含有熱穩(wěn)定DNA聚合酶，下面的表達式不能正確反映DNA聚合酶的功能，這是因為

。DNA聚合酶只能將單個脫氧核苷酸連續(xù)結合到雙鏈DNA片段的引物鏈上例題2【2011年江蘇】請回答基因工程方面的有關問題：①18【基礎知識】二、PCR條件：溫度：70℃～75℃：90℃～95℃：55℃～60℃：變性；復性；延伸?！咀⒁狻?/p>

具體溫度與DNA母鏈及引物中的G、C含量有關?！净A知識】二、PCR條件：溫度：70℃～75℃：90℃～919例題3【2008年江蘇】回答下列問題。（1）在采用常規(guī)PCR方法擴增目的基因的過程中，使用的DNA聚合酶不同于一般生物體內的DNA聚合酶，其最主要的特點是

。（2）PCR過程中退火（復性）溫度必須根據(jù)引物的堿基數(shù)量和種類來設定。表1為根據(jù)模板設計的兩對引物序列，圖2為引物對與模板結合示意圖。請判斷哪一對引物可采用較高的退火溫度？

。耐高溫引物對B例題3【2008年江蘇】回答下列問題。耐高溫引物對B20【基礎知識】三、PCR過程：預變性；復性；延伸；循環(huán)。變性；【基礎知識】三、PCR過程：預變性；復性；延伸；循環(huán)。變性；21【2011年江蘇】利用PCR技術擴增目的基因，其原理與細胞內DNA復制類似（如下圖所示）。圖中引物中為單鏈DNA片段，它是子鏈合成延伸的基礎。（1）從理論上推測，第四輪循環(huán)產(chǎn)物中含有引物A的DNA片段所占比例為

。（2）在第

輪循環(huán)產(chǎn)物中開始出現(xiàn)兩條脫氧核苷酸鏈等長的DNA片段。15/16三例題4【2011年江蘇】利用PCR技術擴增目的基因，其原理與細胞內22【2011年北京】根據(jù)T-DNA的已知序列，利用PCR技術可以擴增出被插入的基因片段。如下圖，從圖中A、B、C、D四種單鏈DNA片段中選取

作為引物進行擴增，得到的片段將用于獲取該基因的全序列信息。B、C例題5【2011年北京】根據(jù)T-DNA的已知序列，利用PCR技術可23高考生物專題復習PCR技術ppt課件24【實驗操作】一、實驗儀器：【實驗操作】一、實驗儀器：25二、設置對照：【實驗操作】三、程序設計：避免外源DNA的污染。二、設置對照：【實驗操作】三、程序設計：避免外源DNA的污染26【實驗操作】微量離心管、槍頭、緩沖液以及蒸餾水等在使用前必須進行高壓滅菌；微量離心管在每吸取一種試劑都必須更換槍頭；所有的成分加入離心管后，蓋嚴蓋子，用手