高考生物專題復(fù)習(xí)PCR技術(shù)課件

核技術(shù)：能量的放大計算機(jī)芯片：

信息的集成20世紀(jì)自然科學(xué)的兩大成就核技術(shù)：計算機(jī)芯片：20世紀(jì)自然科學(xué)的兩大成就1PCR技術(shù)：生命信息的放大基因芯片：生命信息的集成20世紀(jì)生命科學(xué)的兩大成就PCR技術(shù)：基因芯片：20世紀(jì)生命科學(xué)的兩大成就2PCR技術(shù)高考專題復(fù)習(xí)PCR技術(shù)高考專題復(fù)習(xí)3目的基因的檢測與鑒定基因工程的基本操作程序的步驟：目的基因的獲取基因表達(dá)載體的構(gòu)建將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞目的基因的檢測與鑒定基因工程的基本操作程序的步驟：目的基因的4一、目的基因的獲取1、目的基因概念：主要指的是編碼蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)基因。也可以是一些具有調(diào)控作用的因子。2、目的基因獲取方法：從基因文庫中獲取目的基因利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因化學(xué)方法直接人工合成一、目的基因的獲取1、目的基因概念：5從基因文庫中獲取目的基因基因文庫：

將含有某種生物不同基因的許多DNA片斷，導(dǎo)入到受體菌的群體中，各個受體菌分別含有這種生物的不同基因，稱為基因文庫?；蛭膸?/p>

基因組文庫部分基因文庫（如cDNA文庫）從基因文庫中獲取目的基因基因文庫：基因文庫基因組文庫部分基因6基因文庫的構(gòu)建過程基因組文庫限制酶供體細(xì)胞的全部DNA大量DNA片段拼接到載體上導(dǎo)入受體細(xì)胞擴(kuò)增基因文庫的構(gòu)建過程基因組文庫限制酶供體細(xì)胞的大量DNA拼接到7基因文庫的構(gòu)建過程mRNA單鏈DNA

雙鏈DNA逆轉(zhuǎn)錄cDNA文庫基因文庫的構(gòu)建過程mRNA單鏈DNA雙鏈DNA逆轉(zhuǎn)錄cDN8高考生物專題復(fù)習(xí)PCR技術(shù)ppt課件9利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因PCR的全稱：聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)PCR的原理：DNA復(fù)制

PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因的前提條件：要有一段已知的目的基因的核苷酸序列。利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因PCR的全稱：10模板原料引物酶控制溫度利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因——目的基因DNA——四種脫氧核苷酸——如單鏈DNA分子片段——耐熱的DNA聚合酶——PCR儀自動調(diào)控PCR的條件：模板利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因——目的基因DNA——四種脫氧11多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PolymeraseChainReaction），是一種體外迅速擴(kuò)增DNA片段的技術(shù)。1988年美國穆里斯（K.Mullis）等人發(fā)明，榮獲1993年諾貝爾化學(xué)獎。PCR多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PolymeraseChainReact12【基礎(chǔ)知識】一、PCR原理：DNA復(fù)制：半保留復(fù)制；DNA的熱變性原理。Taq

DNA聚合酶耐高溫?！净A(chǔ)知識】一、PCR原理：DNA復(fù)制：半保留復(fù)制；DNA的13【基礎(chǔ)知識】一、PCR原理：DNA復(fù)制：半保留復(fù)制；需要提供合成模板；不能起始新的DNA鏈，必須要有引物提供3’-OH；合成的方向都是5’→3’。DNA聚合酶【基礎(chǔ)知識】一、PCR原理：DNA復(fù)制：半保留復(fù)制；需要提供14【基礎(chǔ)知識】二、PCR條件：胞內(nèi)DNA復(fù)制與PCR技術(shù)的比較：變性TaqDNA聚合酶DNA母鏈dNTP3個溫度Mg2+,緩沖對連續(xù)復(fù)制DNA【基礎(chǔ)知識】二、PCR條件：胞內(nèi)DNA復(fù)制與PCR技術(shù)的比較15【基礎(chǔ)知識】二、PCR條件：引物：引物設(shè)計的原則：決定PCR擴(kuò)增產(chǎn)物的特異性和長度。1.引物長度：

通常為20～30bp，盡量降低引物與非擴(kuò)增區(qū)的同源性；2.引物內(nèi)部不能存在部分互補(bǔ)序列；3.兩個引物之間不能存在部分互補(bǔ)序列；【基礎(chǔ)知識】二、PCR條件：引物：引物設(shè)計的原則：決定PCR16例題1【2011年安徽】家蠶細(xì)胞具有高效表達(dá)外源基因能力。將人干擾素基因?qū)爰倚Q細(xì)胞并大規(guī)模培養(yǎng)，可以提取干擾素用于制藥。采用PCR技術(shù)可驗證干擾素基因是否已經(jīng)導(dǎo)入家蠶細(xì)胞。該PCR反應(yīng)體系的主要成分應(yīng)該包含：擴(kuò)增緩沖液（含Mg2+）、水、4種脫氧核糖核苷酸、模板DNA、

和

。對干擾素基因特異的DNA引物對TaqDNA聚合酶例題1【2011年安徽】家蠶細(xì)胞具有高效表達(dá)外源基因能力。17例題2【2011年江蘇】請回答基因工程方面的有關(guān)問題：

（1）設(shè)計引物是PCR技術(shù)關(guān)鍵步驟之一。某同學(xué)設(shè)計的兩組引物（只標(biāo)注了部分堿基序列）都不合理（如下圖），請分別說明理由。①第一組：

；②第二組：

。引物Ⅰ和引物Ⅱ局部發(fā)生堿基互補(bǔ)配對而失效引物Ⅰ’自身折疊后會出現(xiàn)局部堿基互補(bǔ)配對而失效（2）PCR反應(yīng)體系中含有熱穩(wěn)定DNA聚合酶，下面的表達(dá)式不能正確反映DNA聚合酶的功能，這是因為

。DNA聚合酶只能將單個脫氧核苷酸連續(xù)結(jié)合到雙鏈DNA片段的引物鏈上例題2【2011年江蘇】請回答基因工程方面的有關(guān)問題：①18【基礎(chǔ)知識】二、PCR條件：溫度：70℃～75℃：90℃～95℃：55℃～60℃：變性；復(fù)性；延伸?！咀⒁狻?/p>

具體溫度與DNA母鏈及引物中的G、C含量有關(guān)?！净A(chǔ)知識】二、PCR條件：溫度：70℃～75℃：90℃～919例題3【2008年江蘇】回答下列問題。（1）在采用常規(guī)PCR方法擴(kuò)增目的基因的過程中，使用的DNA聚合酶不同于一般生物體內(nèi)的DNA聚合酶，其最主要的特點是

。（2）PCR過程中退火（復(fù)性）溫度必須根據(jù)引物的堿基數(shù)量和種類來設(shè)定。表1為根據(jù)模板設(shè)計的兩對引物序列，圖2為引物對與模板結(jié)合示意圖。請判斷哪一對引物可采用較高的退火溫度？

。耐高溫引物對B例題3【2008年江蘇】回答下列問題。耐高溫引物對B20【基礎(chǔ)知識】三、PCR過程：預(yù)變性；復(fù)性；延伸；循環(huán)。變性；【基礎(chǔ)知識】三、PCR過程：預(yù)變性；復(fù)性；延伸；循環(huán)。變性；21【2011年江蘇】利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因，其原理與細(xì)胞內(nèi)DNA復(fù)制類似（如下圖所示）。圖中引物中為單鏈DNA片段，它是子鏈合成延伸的基礎(chǔ)。（1）從理論上推測，第四輪循環(huán)產(chǎn)物中含有引物A的DNA片段所占比例為

。（2）在第

輪循環(huán)產(chǎn)物中開始出現(xiàn)兩條脫氧核苷酸鏈等長的DNA片段。15/16三例題4【2011年江蘇】利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因，其原理與細(xì)胞內(nèi)22【2011年北京】根據(jù)T-DNA的已知序列，利用PCR技術(shù)可以擴(kuò)增出被插入的基因片段。如下圖，從圖中A、B、C、D四種單鏈DNA片段中選取

作為引物進(jìn)行擴(kuò)增，得到的片段將用于獲取該基因的全序列信息。B、C例題5【2011年北京】根據(jù)T-DNA的已知序列，利用PCR技術(shù)可23高考生物專題復(fù)習(xí)PCR技術(shù)ppt課件24【實驗操作】一、實驗儀器：【實驗操作】一、實驗儀器：25二、設(shè)置對照：【實驗操作】三、程序設(shè)計：避免外源DNA的污染。二、設(shè)置對照：【實驗操作】三、程序設(shè)計：避免外源DNA的污染26【實驗操作】微量離心管、槍頭、緩沖液以及蒸餾水等在使用前必須進(jìn)行高壓滅菌；微量離心管在每吸取一種試劑都必須更換槍頭；所有的成分加入離心管后，蓋嚴(yán)蓋子，用手