微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)課件

專題2

微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用課題1

微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)(2)專題2微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用課題1微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)(2)課堂講義重點(diǎn)難點(diǎn)個(gè)個(gè)擊破一、培養(yǎng)基的制備1.制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基計(jì)算：依據(jù)牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基配方比例計(jì)算配制100mL的培養(yǎng)基時(shí)，

各種成分的用量稱量：牛肉膏比較黏稠，可用玻璃挑取，稱量紙稱取，牛肉膏和蛋白胨

都易吸潮，稱取時(shí)動(dòng)作要迅速，稱后要及時(shí)蓋上瓶蓋課堂講義溶化：牛肉膏和稱量紙＋水

取出稱量紙―→加蛋白胨和氯化鈉―→

加瓊脂(注意：不斷用玻璃棒攪拌防止糊底而導(dǎo)致燒杯破裂)―→

補(bǔ)加蒸餾水至100mL倒平板：待培養(yǎng)基冷卻至50℃左右時(shí)，在酒精燈火焰附近倒平板溶化：牛肉膏和稱量紙＋水取出稱量紙―→加蛋2.注意事項(xiàng)(1)用天平稱量時(shí)，注意放等大的稱量紙，防止牛肉膏粘在托盤上。(2)在溶化時(shí)要用玻璃棒不斷攪拌，防止瓊脂糊底而導(dǎo)致燒杯破裂。(3)培養(yǎng)基滅菌后，需冷卻至50℃左右時(shí)才能倒平板，原因是瓊脂在44℃以下凝固。(4)培養(yǎng)皿打開一條稍大于瓶口的縫隙，不要完全打開。(5)整個(gè)操作過程要在酒精燈火焰旁進(jìn)行，避免雜菌污染。(6)平板冷凝后要倒置的原因：防止皿蓋上的冷凝水落入培養(yǎng)基，造成污染。(7)若倒平板時(shí)，培養(yǎng)基濺在皿蓋和皿底之間的部位，易滋生雜菌，這個(gè)平板應(yīng)丟棄。2.注意事項(xiàng)一、制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基1.用文字和箭頭寫出制備流程：

。2.倒平板是制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基的重要環(huán)節(jié)，如圖為倒平板的操作示意圖。(1)請(qǐng)用文字和箭頭寫出正確的倒平板操作流程：

。(2)甲、乙、丙中的滅菌方法是

。(3)丁中的操作需要等待

才能進(jìn)行。答案預(yù)習(xí)導(dǎo)學(xué)挑戰(zhàn)自我點(diǎn)點(diǎn)落實(shí)平板冷卻凝固計(jì)算→稱量→溶化→滅菌→倒平板丙→乙→甲→丁灼燒滅菌一、制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基答案預(yù)習(xí)導(dǎo)學(xué)二、微生物的分離與純化技術(shù)1.原理微生物的分離與純化就是將待檢測(cè)微生物樣品通過劃線或涂布接種在固體培養(yǎng)基上，樣品中的每一個(gè)細(xì)胞或孢子都可以生長繁殖形成單個(gè)菌落。將單個(gè)菌落接種到斜面培養(yǎng)基上，經(jīng)培養(yǎng)后，即可得到一個(gè)微生物的純種。二、微生物的分離與純化技術(shù)2.方法步驟微生物的分離包括樣品稀釋、劃線或涂布及培養(yǎng)三個(gè)步驟。(1)梯度稀釋操作(如圖1)①將分別盛有9mL水的6支試管滅菌，并按101～106的順序編號(hào)。②用移液管吸取1mL培養(yǎng)的菌液，注入101倍稀釋的試管中。用手指輕壓移液管上的橡皮頭，吹吸三次，使菌液與水充分混勻。③從101倍稀釋的試管中吸取1mL稀釋液，注入102倍稀釋的試管中，重復(fù)第2步的操作。依次類推，直到完成最后一支試管的稀釋。注意：移液管需要經(jīng)過滅菌。操作時(shí)，試管口和移液管應(yīng)在離火焰1～2cm處。圖1微生物分離操作流程圖2.方法步驟圖1微生物分離操作流程圖(2)劃線或涂布平板劃線法：在近火焰處，左手拿皿底，右手拿接種環(huán)，挑取大腸桿菌培養(yǎng)液在平板上劃線，常用的劃線方法有平行劃線和連續(xù)劃線兩種。平行劃線時(shí)，每轉(zhuǎn)一個(gè)角度燒一次接種環(huán)。劃線完畢后，蓋上培養(yǎng)皿蓋，做好標(biāo)記(如圖2)。圖2劃線示意圖(2)劃線或涂布稀釋涂布平板法：取3個(gè)平板，底面分別用記號(hào)筆寫上10－4、10－5和10－6三種稀釋度，然后用無菌吸管分別吸取相應(yīng)稀釋度的稀釋液各0.1mL，放入已標(biāo)記好的平板上，用無菌玻璃涂棒在培養(yǎng)基表面輕輕地涂布均勻，室溫下靜置5～10min，使菌液吸附進(jìn)培養(yǎng)基(如圖3)。圖3涂布法示意圖稀釋涂布平板法：取3個(gè)平板，底面分別用記號(hào)筆寫上10－4、1(3)培養(yǎng)將接種后的培養(yǎng)基和一個(gè)未接種的培養(yǎng)基都放入37℃恒溫箱中，培養(yǎng)12h和24h后，分別觀察并記錄結(jié)果。(4)結(jié)果分析①確認(rèn)培養(yǎng)基制備是否合格為確認(rèn)培養(yǎng)基制備是否合格，需設(shè)置對(duì)照實(shí)驗(yàn)，即接種后的培養(yǎng)基和一個(gè)未接種的培養(yǎng)基都放入37℃恒溫箱中，培養(yǎng)12h和24h，觀察現(xiàn)象并記錄——如果未接種的培養(yǎng)基在恒溫箱中保溫1～2d后無菌落生長，說明培養(yǎng)基的制備是成功的，否則實(shí)驗(yàn)失敗需要重新制備。(3)培養(yǎng)②接種操作成功的標(biāo)準(zhǔn)如果培養(yǎng)基上生長的菌落的顏色、形狀、大小基本一致，并符合該菌菌落的特點(diǎn)，則說明接種操作是符合要求的；如果培養(yǎng)基上出現(xiàn)了其他菌落，則說明接種過程中無菌操作還未達(dá)到要求，實(shí)驗(yàn)失敗，需要分析原因，再次制備。②接種操作成功的標(biāo)準(zhǔn)答案二、純化大腸桿菌1.接種微生物的方法最常用的有

和

。2.右圖中甲為平板劃線法中最重要的環(huán)節(jié)，乙為操作的結(jié)果。每一次劃線后要將接種環(huán)

，除第一次劃線外，每一次劃線的起點(diǎn)是

，最后一次劃線不要和

相連。3.稀釋涂布平板法是將菌液進(jìn)行一系列的

，然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到

的表面進(jìn)行培養(yǎng)。只要

，就能在培養(yǎng)基表面形成單個(gè)的菌落。稀釋度足夠高平板劃線法稀釋涂布平板法灼燒上一次劃線的末端第一區(qū)域梯度稀釋瓊脂固體培養(yǎng)基答案二、純化大腸桿菌稀釋度足夠高平板劃線法稀釋涂布平板法灼燒答案三、菌種的保藏對(duì)于頻繁使用的菌種，可以采用

法；對(duì)于需要長期保存的菌種，可以采用

法。甘油管藏臨時(shí)保藏答案三、菌種的保藏甘油管藏臨時(shí)保藏預(yù)習(xí)診斷判斷正誤：(1)在制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基的過程中，所用的滅菌方法是高壓蒸汽滅菌法(

)(2)將培養(yǎng)基從干熱滅菌箱內(nèi)取出立即就可以倒平板(

)(3)平板劃線法和稀釋涂布平板法都要在固體培養(yǎng)基上操作(

)××√返回答案預(yù)習(xí)診斷判斷正誤：××√返回答案答案思維激活1.請(qǐng)簡(jiǎn)述制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基過程中的幾次滅菌過程。答案(1)對(duì)培養(yǎng)皿進(jìn)行干熱滅菌；(2)對(duì)制備成的培養(yǎng)基進(jìn)行高壓蒸汽滅菌；(3)倒平板過程中的灼燒滅菌(酒精燈火焰進(jìn)行操作)。2.等平板冷卻凝固后要將平板倒置，請(qǐng)簡(jiǎn)述倒置的原因。答案平板冷卻后，皿蓋上會(huì)有凝結(jié)的水滴，且培養(yǎng)基表面的濕度較高，平板倒置后，既可以使培養(yǎng)基表面的水分更好地?fù)]發(fā)，又可以防止皿蓋上的水滴滴入培養(yǎng)基造成污染。答案思維激活1.請(qǐng)簡(jiǎn)述制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基過程中的幾次應(yīng)用示例1.制備各種牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基，關(guān)于倒平板的具體描述正確的是(

)①待培養(yǎng)基冷卻至40℃左右時(shí)，在酒精燈火焰附近倒平板②將滅過菌的培養(yǎng)皿放在桌面上，左手拔出棉塞③右手拿錐形瓶，使瓶口迅速通過火焰④用左手的拇指和食指完全打開皿蓋⑤右手將錐形瓶中培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿，左手立即蓋上培養(yǎng)皿的皿蓋⑥等待平板冷卻5～10s，將平板倒過來放置，使皿蓋在下，皿底在上A.①③④⑤

B.④⑤⑥C.③⑤

D.①②④⑥解析答案問題導(dǎo)析應(yīng)用示例1.制備各種牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基，關(guān)于倒平板的具體問題導(dǎo)析(1)培養(yǎng)基滅菌后，需冷卻至

左右時(shí)才能倒平板，原因是瓊脂在44℃以下凝固。(2)倒平板的過程要在

附近進(jìn)行。答案返回上頁酒精燈火焰50℃問題導(dǎo)析(1)培養(yǎng)基滅菌后，需冷卻至左右時(shí)解析瓊脂是一種多糖，在98℃以上可溶解于水，在44℃以下凝固，倒平板時(shí)高于50℃則會(huì)燙手，低于50℃時(shí)若不能及時(shí)操作，瓊脂會(huì)凝固。無菌操作應(yīng)貫穿于操作的全過程，皿蓋全打開則空氣中的微生物會(huì)進(jìn)入培養(yǎng)基。等待平板冷卻凝固(大約需5～10min)后，將平板倒過來放置，使皿蓋在下，皿底在上。答案C解析瓊脂是一種多糖，在98℃以上可溶解于水，在44℃以一題多變倒平板的過程需要進(jìn)行無菌操作，在培養(yǎng)基的制備過程中，還有哪些環(huán)節(jié)需要進(jìn)行無菌操作？答案要對(duì)培養(yǎng)基進(jìn)行高壓蒸汽滅菌，對(duì)培養(yǎng)皿進(jìn)行干熱滅菌，酒精燈火焰旁屬于灼燒滅菌。答案一題多變倒平板的過程需要進(jìn)行無菌操作，在培養(yǎng)基的制備過程中，思維激活1.稀釋涂布平板法要求菌液的稀釋度要足夠大，平板劃線法要求連續(xù)多次劃線，且除了第一次劃線外，每一次劃線的起點(diǎn)是上一次劃線的末端，兩種操作方法雖然不同，但目的相同，該目的是什么？答案目的是將菌種充分地分散，保證菌落是由一個(gè)細(xì)胞或孢子繁殖而成，所獲得的菌落中的菌種是單一的純種。答案思維激活1.稀釋涂布平板法要求菌液的稀釋度要足夠大，平板劃線2.平板劃線法中的接種環(huán)要進(jìn)行多次灼燒(取菌液前的灼燒、每一次劃線后的灼燒及劃線結(jié)束后的灼燒)，請(qǐng)簡(jiǎn)述每次灼燒的目的。答案取菌液前灼燒的目的是避免接種環(huán)上可能存在的微生物污染培養(yǎng)物；每一次劃線后的灼燒的目的是殺死上次劃線結(jié)束后接種環(huán)上殘留的菌種，使每次劃線的菌種都來自上次劃線末端；劃線結(jié)束后的灼燒殺死接種環(huán)上殘留的菌種，避免細(xì)菌污染環(huán)境和感染操作者。答案2.平板劃線法中的接種環(huán)要進(jìn)行多次灼燒(取菌液前的灼燒、每一下列敘述中，錯(cuò)誤的是(

)A.甲中涂布前要將涂布器灼燒，冷卻

后才能取菌液B.對(duì)于濃度較高的菌液，如果甲中的

稀釋倍數(shù)僅為102，則所得的菌落不

是由單一的細(xì)胞或孢子繁殖而成C.乙中培養(yǎng)皿中所得的菌落都符合要求D.乙中的連續(xù)劃線的起點(diǎn)是上一次劃線的末端應(yīng)用示例解析答案問題導(dǎo)析2.右圖中甲是稀釋涂布平板法中的部分操作，乙是平板劃線法操作結(jié)果。下列敘述中，錯(cuò)誤的是()應(yīng)用示例解析答案問題導(dǎo)析2.右圖問題導(dǎo)析(1)對(duì)菌液進(jìn)行稀釋時(shí)，菌液中的菌體的濃度越高，則稀釋的倍數(shù)也要_____，菌體的濃度低時(shí)，則稀釋的倍數(shù)不必

。(2)高溫會(huì)殺死菌體，所以一些經(jīng)過高溫或灼燒滅菌的器材需要

后才能接觸菌種。(3)平板劃線法的多次劃線中，菌體_________，即不同劃線處的_________不同，所以形成的菌落并非全部是由單個(gè)菌體繁殖而成的。答案返回上頁菌體數(shù)目越高太高冷卻越來越少問題導(dǎo)析(1)對(duì)菌液進(jìn)行稀釋時(shí)，菌液中的菌體的濃度越高，則稀解析灼燒后的接種環(huán)如果沒有冷卻就接觸菌種，會(huì)將菌體殺死，A正確；稀釋倍數(shù)過低，會(huì)導(dǎo)致多個(gè)菌體聚集在一起繁殖成菌落，B正確；平板劃線法中最后一次劃線的末端處形成的菌落才是由單一的細(xì)胞或孢子繁殖而成，這種菌落才符合要求，C錯(cuò)誤；連續(xù)劃線中，除了第一次劃線外，每一次劃線的起點(diǎn)是上一次劃線的末端，目的是使得菌體密度越來越小，保證最后劃線末端處的菌落是由單一的細(xì)胞或孢子繁殖而成。答案C解析灼燒后的接種環(huán)如果沒有冷卻就接觸菌種，會(huì)將菌體殺死，A一題多變(1)兩種接種方法中，如果操作均正確無誤，只有稀釋涂布平板法才適合對(duì)細(xì)菌進(jìn)行計(jì)數(shù)而平板劃線法不能，請(qǐng)簡(jiǎn)述原因。答案只要稀釋倍數(shù)足夠高，則稀釋涂布平板法中形成的每個(gè)菌落都是由單一菌體繁殖而成的，即一個(gè)肉眼看不見的細(xì)菌對(duì)應(yīng)著一個(gè)可以看見的菌落，可以通過統(tǒng)計(jì)菌落的數(shù)目推測(cè)出細(xì)菌的數(shù)目。而平板劃線法中除了最后一次劃線末端處的菌落是由單一的細(xì)菌繁殖而成的，其他每個(gè)菌落往往是由多個(gè)細(xì)菌一起繁殖而成，即一個(gè)菌落并非對(duì)應(yīng)著一個(gè)細(xì)菌，所以不適合用于細(xì)菌的計(jì)數(shù)。答案一題多變(1)兩種接種方法中，如果操作均正確無誤，只有稀釋涂(2)稀釋倍數(shù)和劃線次數(shù)是兩種接種方法的關(guān)鍵，決定稀釋倍數(shù)和劃線次數(shù)的因素是什么？答案決定稀釋倍數(shù)及劃線次數(shù)的因素是菌液的濃度，如果菌液的濃度較高則需要高倍數(shù)的稀釋，所劃線次數(shù)也要較多，否則就可以低倍稀釋或減少劃線次數(shù)。答案(2)稀釋倍數(shù)和劃線次數(shù)是兩種接種方法的關(guān)鍵，決定稀釋倍數(shù)和課堂小結(jié)返回答案稱量課堂小結(jié)返回答案稱量對(duì)點(diǎn)練習(xí)1234解析答案1.制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基的步驟是(

)A.計(jì)算、稱量、倒平板、溶化、滅菌B.計(jì)算、稱量、溶化、倒平板、滅菌C.計(jì)算、稱量、溶化、滅菌、倒平板D.計(jì)算、稱量、滅菌、溶化、倒平板解析制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基，應(yīng)先根據(jù)需要計(jì)算各成分用量，然后稱量、溶化、滅菌、倒平板。C對(duì)點(diǎn)練習(xí)1234解析答案1.制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基的1234解析答案2.平板冷凝后，要將平板倒置，其原因是(

)A.接種時(shí)再拿起來方便B.在皿底上標(biāo)記日期等方便C.正著放置容易破碎D.防止皿蓋上的冷凝水落入培養(yǎng)基造成污染解析平板倒置主要是防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基造成污染。D1234解析答案2.平板冷凝后，要將平板倒置，其原因是(解析答案3.分離純化大腸桿菌最常用的方法是平板劃線法和稀釋涂布平板法。下列有關(guān)這兩種方法的敘述錯(cuò)誤的是(

)A.均將大腸桿菌接種在固體培養(yǎng)基的表面B.獲得的每個(gè)菌落均是由一個(gè)細(xì)菌繁殖而來的子細(xì)胞群C.都應(yīng)在火焰附近進(jìn)行操作，以防止雜菌污染D.稀釋分散菌種的原理不同，均能達(dá)到分離純化大腸桿菌的目的解析用稀釋涂布平板法時(shí)，如果稀釋得當(dāng)，在平板表面或瓊脂培養(yǎng)基中就可出現(xiàn)分散的單個(gè)菌落，這個(gè)菌落可能是由一個(gè)細(xì)菌細(xì)胞繁殖形成的。平板劃線中最后一次劃線的末端處開成的菌落才是由單一的細(xì)胞或孢子繁殖形成，這種菌落才符合要求。B1234解析答案3.分離純化大腸桿菌最常用的方法是平板劃線法和稀釋涂12344.右表是從土壤中分離純化土壤細(xì)菌的培養(yǎng)基配方。請(qǐng)回答下面的問題。試劑用量試劑用量牛肉膏/g5瓊脂/g20蛋白胨/g10水/mL1000NaCl/g5——解析答案(1)