必歐瀚生物技術(shù)合肥

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必歐瀚生物技術(shù)〔合肥〕II〔PGII〕檢測(cè)日期 文件號(hào).工程信息工程名稱(chēng)檢測(cè)目的檢測(cè)方法工程原理檢測(cè)原理反 第一步應(yīng) 其次步過(guò)第三步程第四步第五步

胃蛋白酶原II〔PGII〕檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)操作程序PepsinogenII，英文英文縮寫(xiě)：PGII中文 胃蛋白酶原IIII〔PGII〕檢測(cè)試劑盒承受酶聯(lián)免疫法〔ELISA〕，定量PGII酶聯(lián)免疫法〔Elisa〕Biohit的PGII〔ELISA〕檢測(cè)試劑盒承受雙抗體〔吸附于微孔板上的PGII特異性捕獲抗體和辣根過(guò)氧化物酶〔HRP〕標(biāo)記的抗體〕夾心法的酶學(xué)免疫分析技術(shù)PGII特異性的單克隆抗體，與樣本中的PGII分子結(jié)合。洗板，除去殘留樣本。HRPPGII〔抗原抗體結(jié)合物〕結(jié)合。TMB底物溶液，被酶氧化后顯藍(lán)色。參加終止液終止酶反響后顯黃色。其顏色的深度與PGII濃度呈正相關(guān)。樣本采集與處理病人預(yù)備事項(xiàng)預(yù)備事項(xiàng)禁食/特種飲食病人的預(yù)備事項(xiàng)樣本采集特別要求樣本類(lèi)型及處理方法推舉類(lèi)型

具體內(nèi)容測(cè)試前飲食清淡10小時(shí)應(yīng)保持空腹。避開(kāi)溶血。待測(cè)血液必需完全凝固后再分別血清，杜絕混入紅細(xì)胞，纖維蛋白等，以防止堵塞儀器管道。血清類(lèi)型樣本量收集容器運(yùn)輸容器運(yùn)輸要求

可承受類(lèi)型最正確量最少量

血漿〔EDTA〕1.0ml0.5ml含促凝膠試管、一般試管〔不含其它物質(zhì)〕或相應(yīng)抗凝管帶塑膠蓋試管在室溫條件下運(yùn)送，可承受冷凍及冷藏取樣。穩(wěn)定性及貯存要求時(shí)間要求

室溫〔18-28?C〕冷藏溫度〔2-8?C〕冷凍溫度〔-20?C〕無(wú)

8小時(shí)7天個(gè)月LOM-4-02-01-01BIOHITOYJ工程名稱(chēng)編寫(xiě)人 批準(zhǔn)人

必歐瀚生物技術(shù)〔合肥〕II〔PGII〕檢測(cè)日期 文件號(hào)樣本拒收及實(shí)行措施影響／干擾因素其它條件

拒收嚴(yán)峻溶血及被微生物污染的標(biāo)本纖維蛋白、嚴(yán)峻溶血、脂濁及其它顆粒性物質(zhì)應(yīng)避開(kāi)反復(fù)凍融標(biāo)本試劑盒組成、試劑的預(yù)備及所供給物質(zhì)的穩(wěn)定性全部試劑用量足夠于96次測(cè)試。不同批號(hào)試劑盒中的試劑不行混合使用。微孔板組成：12×8條，共96PGIIIgG1。預(yù)備：直接使用。穩(wěn)定性：效期內(nèi)穩(wěn)定，板條使用后應(yīng)廢棄。濃縮洗滌液〔10倍〕組成：120ml〔10倍稀釋后使用〕20和0.1%ProCline300為防腐劑。預(yù)備：用蒸餾水將洗滌液稀釋10倍〔如100ml洗滌液＋900ml蒸餾水〕后混勻使用。穩(wěn)定性：稀釋后在〔2～8℃〕2周。稀釋液組成：100ml磷酸鹽緩沖液，含有酪蛋白、吐溫20、0.1%ProCline300為防腐劑和紅色染劑。預(yù)備：直接使用。穩(wěn)定性：效期內(nèi)穩(wěn)定?？瞻滓航M成：1.5ml人類(lèi)血清基質(zhì)的磷酸鹽緩沖液，含有0.1%ProCline300為防腐劑。預(yù)備：直接使用。穩(wěn)定性：效期內(nèi)穩(wěn)定。標(biāo)準(zhǔn)液組成：3瓶1.5ml人類(lèi)血清基質(zhì)的標(biāo)準(zhǔn)液，含有0.1%ProCline300為防腐劑。每批試劑盒中PGII標(biāo)準(zhǔn)液的濃度約為6.3μg/l、12.5μg/l、50μg/l，其具體濃度值見(jiàn)瓶簽。預(yù)備：直接使用。穩(wěn)定性：效期內(nèi)穩(wěn)定。比照液組成：1.5ml人類(lèi)血清基質(zhì)的PGII比照液，含有0.1%ProCline300為防腐劑。PGII期望值見(jiàn)瓶簽。預(yù)備：直接使用。穩(wěn)定性：效期內(nèi)穩(wěn)定。酶標(biāo)液組成：15ml辣根過(guò)氧化物〔HRP〕標(biāo)記單克隆抗人類(lèi)PGII抗體，保存在穩(wěn)定劑及0.1%ProCline300預(yù)備：直接使用。穩(wěn)定性：效期內(nèi)穩(wěn)定。底物液組成：15ml四甲基聯(lián)苯胺〔TMB〕溶液，含有防腐劑。預(yù)備：直接使用。LOM-4-02-01-01BIOHITOYJ工程名稱(chēng)編寫(xiě)人 批準(zhǔn)人

必歐瀚生物技術(shù)〔合肥〕II〔PGII〕檢測(cè)日期 文件號(hào)穩(wěn)定性：效期內(nèi)穩(wěn)定，避開(kāi)陽(yáng)光直射。終止液組成：15ml硫酸溶液〔0.1mol/l〕。預(yù)備：直接使用。穩(wěn)定性：效期內(nèi)穩(wěn)定。封孔膜3張孵育用塑料封孔膜。使用說(shuō)明書(shū)需要的儀器設(shè)備及其他試驗(yàn)用品·蒸餾水或去離子水·20～1000μl移液器及一次性吸頭·1～10ml移液器·可吸取100μl的8通道移液器·1000ml量筒·稀釋樣本用渦流混勻器·稀釋樣本用試管·洗板機(jī)·紙巾或吸水紙·計(jì)時(shí)器·恒溫箱，37℃·酶標(biāo)儀，測(cè)定波長(zhǎng)450nm·采集血漿或血清的塑料管·盛冰用容器試驗(yàn)操作流程試驗(yàn)前預(yù)備將全部試劑和微孔板恢復(fù)至室溫〔20-25℃〕，平衡30min10倍稀釋〔100ml濃縮洗滌液+900ml蒸餾水〕，冰凍樣本快速溶解于室溫水槽中搖勻讓其溶解，試驗(yàn)前應(yīng)認(rèn)真閱讀說(shuō)明書(shū)，推舉全部空白，標(biāo)準(zhǔn)液、比照液和樣品均做復(fù)孔測(cè)試。每次試驗(yàn)均應(yīng)設(shè)置空白液、標(biāo)準(zhǔn)液及比照液孔。測(cè)試前所有的試劑盒樣本應(yīng)充分混勻試驗(yàn)步驟全自動(dòng)酶標(biāo)儀具體操作參見(jiàn)例如：BIOBASE2023全自動(dòng)酶免工作站標(biāo)準(zhǔn)操作文件。手工操作流程如下：第一步樣本稀釋5〔孔外稀釋?zhuān)?00ul+400ul20ul+80ul液〕，充分混勻。其次步標(biāo)本充分混勻試劑及已稀釋好的樣本，向反響孔中分別參加100ul空白液、標(biāo)準(zhǔn)液、比照液和樣本，封孔膜封板3760加樣例如圖示見(jiàn)說(shuō)明書(shū)LOM-4-02-01-01BIOHITOYJ工程名稱(chēng)編寫(xiě)人 批準(zhǔn)人

必歐瀚生物技術(shù)〔合肥〕II〔PGII〕檢測(cè)日期 文件號(hào)第三步洗滌350ul〔400ul45〕10置微孔板于干凈的吸水紙上叩擊數(shù)次。洗板機(jī)洗板流程：預(yù)洗——選擇對(duì)應(yīng)的洗板程序〔3×350μl〕——運(yùn)行——完畢后吸水紙上叩擊1-2次即可洗板機(jī)留意事項(xiàng)：a.請(qǐng)依據(jù)試驗(yàn)室規(guī)程定期對(duì)洗板機(jī)進(jìn)展校準(zhǔn);b.洗板機(jī)清洗程序設(shè)置請(qǐng)參閱設(shè)備商供給的洗板機(jī)標(biāo)準(zhǔn)操作sop文件；c.微孔板置于洗板機(jī)板槽時(shí)確保放置穩(wěn)當(dāng)；建議第四步、第六步、第七步操作使用8通道移液器。第四步酶標(biāo)液100ul已混勻的酶標(biāo)液，用封孔膜封上微孔板，在室溫3730分鐘。第五步洗滌參照第三步。第六步底物液100ul〔20-25℃〕30封孔膜。第七步終止反響100ul第八步酶標(biāo)儀測(cè)定30450nmsop酶標(biāo)儀測(cè)定流程：?jiǎn)?dòng)酶標(biāo)儀——翻開(kāi)相應(yīng)的軟件——放置微孔板——選擇450nm波長(zhǎng)讀數(shù)，選擇相應(yīng)曲線(xiàn)——導(dǎo)出數(shù)據(jù)；留意事項(xiàng)：a.加完終止液不要馬上讀數(shù)，一分鐘前方可；b.微孔板放置正確，否則讀數(shù)有誤；c.測(cè)定完畢后，微孔板臨時(shí)備份，以免數(shù)據(jù)有誤，需重測(cè)定。注：酶標(biāo)儀測(cè)定數(shù)值后推舉使用e-LisaXL〔2〕對(duì)結(jié)果進(jìn)展計(jì)算。結(jié)果計(jì)算A)B)自動(dòng)計(jì)算，將吸光度轉(zhuǎn)換為PGII濃度。由於標(biāo)準(zhǔn)液是直接使用，毋須使用稀釋因子培增病人樣本的結(jié)果。手工計(jì)算計(jì)算空白液、標(biāo)準(zhǔn)液、比照液和樣本各復(fù)孔測(cè)試的平均吸光度，各測(cè)試均值減去空白液的平均吸光度值。0點(diǎn)為起點(diǎn)，標(biāo)準(zhǔn)液的平均吸光度值為YX軸,繪出最正確擬合曲線(xiàn)作為標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。依據(jù)樣本及比照液的平均吸光度值，在曲線(xiàn)上查出對(duì)應(yīng)的PGII濃度值。建議使用模板，請(qǐng)查閱模板附件1。自動(dòng)計(jì)算有多種計(jì)算機(jī)程序用于自動(dòng)計(jì)算。在標(biāo)準(zhǔn)液最高濃度范圍內(nèi)，運(yùn)用簡(jiǎn)潔二項(xiàng)式計(jì)算未知濃度；當(dāng)樣本的吸光度值超過(guò)最高濃度標(biāo)準(zhǔn)液的吸光度值時(shí)，建議使用更為簡(jiǎn)單的外推計(jì)算法。建議使用模板，請(qǐng)查閱附件2。標(biāo)2。LOM-4-02-01-01BIOHITOYJ工程名稱(chēng)編寫(xiě)人 批準(zhǔn)人

必歐瀚生物技術(shù)〔合肥〕II〔PGII〕檢測(cè)日期 文件號(hào)結(jié)果報(bào)告及復(fù)查標(biāo)準(zhǔn)結(jié)果審核結(jié)果推斷 當(dāng)PGI與PGII的比值<3.0時(shí)說(shuō)明患者的胃體有嚴(yán)峻萎縮，且胃癌發(fā)生率將增高。所定的臨界值僅供參考。同一樣本的結(jié)果與承受不同廠家的試劑盒檢測(cè)所得的結(jié)果可能有差異,由于不同廠家對(duì)PGII產(chǎn)品檢測(cè)承受的標(biāo)準(zhǔn)化、試劑規(guī)定和分析方法有差異,所以不同廠家的檢測(cè)結(jié)果不具有可比性。使用單位生物參考區(qū)間

ug/l3-15臨床背景PGII是由胃竇部的幽門(mén)腺和十二指腸近端的Brunner氏腺黏膜的主細(xì)胞和頸細(xì)胞分泌。正常時(shí)，血清或I〔PGI〕II〔PGII〕4：1。PGIPGII的比值隨著胃體萎縮性胃炎的嚴(yán)峻程度增加呈直線(xiàn)下降。中、重度萎縮性胃炎時(shí)，其比值為<2.5。PGI與PGII的比值較低時(shí)，胃癌的發(fā)生率增加5倍。PGII的測(cè)試用于關(guān)心胃體萎縮性胃炎的診斷，以及評(píng)估癌變的發(fā)生率。PGII測(cè)試需和PGIPGIPGII的比值。診斷程序的限制同其他診斷手段，Biohit的PGII檢測(cè)試劑盒的測(cè)試結(jié)果，必需綜合病人的臨床病癥和其他信息進(jìn)展分析。留意事項(xiàng)試驗(yàn)前請(qǐng)檢查全部?jī)x器〔移液槍、洗板機(jī)、酶標(biāo)儀〕，確保儀器的正常使用，并定期對(duì)儀器進(jìn)展校準(zhǔn)；試驗(yàn)時(shí)必需戴手套；4℃保存，枯燥劑置于板底；樣品處理及保存請(qǐng)遵從試劑盒說(shuō)明書(shū)；試驗(yàn)前全部試劑盒成分肯定要室溫下平衡30分鐘左右；試劑盒試劑室溫平衡后要混勻充分，建議使用渦旋振蕩器；微孔板拆封使用前對(duì)光觀看孔底是否干凈，正常狀況下孔底透亮無(wú)污漬，否則棄用；LOM-4-02-01-01BIOHITOYJ工程名稱(chēng)編寫(xiě)人 批準(zhǔn)人

必歐瀚生物技術(shù)〔合肥〕II〔PGII〕檢測(cè)日期 文件號(hào)出；除加樣外，其他步驟請(qǐng)盡量使用8通道移液器；酶標(biāo)液孵育完畢后微孔板肯定要清洗干凈，否則對(duì)試驗(yàn)結(jié)果影響較大；底物液肯定要避光處理；底物液孵育完加終止液時(shí)避開(kāi)液體濺出；終止液加完30分鐘內(nèi)酶標(biāo)儀測(cè)定結(jié)果，測(cè)定前確保混勻，一般酶標(biāo)儀會(huì)有振蕩功能；試驗(yàn)完畢測(cè)定后，微孔板臨時(shí)保存，勿丟棄。試驗(yàn)前請(qǐng)做好加樣圖譜；CV%大小〔CV%≤10%〕確保試驗(yàn)的準(zhǔn)確性；建議有自己的中控樣品*，從而能推斷每次試驗(yàn)的準(zhǔn)確性；450nm；空白比照的吸光度≤0.3，否則試驗(yàn)不行靠；試驗(yàn)完畢后請(qǐng)遵循試驗(yàn)室規(guī)定對(duì)廢棄物進(jìn)展處理。*中