微囊藻毒素在滇池螺類中的動(dòng)態(tài)分布

微囊藻毒素在滇池螺類中的動(dòng)態(tài)分布

隨著湖泊富營養(yǎng)化日益嚴(yán)重，大型綠藻水華頻繁爆發(fā)，藍(lán)藻毒素大量出現(xiàn)。藍(lán)藻毒素可以在水生生物體內(nèi)積累,這對(duì)攝食這些水生生物的消費(fèi)者會(huì)產(chǎn)生毒害作用目前,已有不少研究報(bào)道了MC在水生動(dòng)物體內(nèi)的生物積累有關(guān)MC在淡水螺類體內(nèi)的積累,國外研究報(bào)道了加拿大湖泊中幾個(gè)不同營養(yǎng)級(jí)螺類體內(nèi)的MC含量螺螄(MargaryamelanioidesNevill),屬于軟體動(dòng)物腹足類前腮亞綱,是我國特有種類,僅分布于云南省的高原湖泊中,是重要的經(jīng)濟(jì)螺類。云南捕螺螄為食已有數(shù)百年的歷史,其肉味鮮美,螺黃(性腺)營養(yǎng)豐富,為當(dāng)?shù)厝酥牢侗狙芯恳缘岢芈菸嚍閷?duì)象,調(diào)查水華爆發(fā)期MC在螺螄體內(nèi)不同組織的積累水平及動(dòng)態(tài)分布,并對(duì)肌肉和螺黃中MC的污染是否構(gòu)成食品安全威脅進(jìn)行了初步評(píng)估。試圖通過調(diào)查MC在高原湖泊特有螺類的分布規(guī)律來探討MC對(duì)高原湖泊特有螺類的污染現(xiàn)狀,并為制定MC在螺類水產(chǎn)品中的安全限量標(biāo)準(zhǔn)提供依據(jù)。1材料和方法1.1采樣區(qū)域采樣區(qū)域設(shè)置在位于滇池東北岸的福保灣,此灣是由大清河和海河沖擊扇包圍形成的湖灣,湖岸線長約3.16km,面積約1km1.2凈化肝臟組織中螺類組織中肝胰腺、腸道、臟器組織中的問題于2008年1月及微囊藻水華爆發(fā)期5～10月份每月下旬在滇池福保灣采集螺螄樣品15只,隨機(jī)抽取5只螺螄樣品為一組,同分3組。采集的樣品于-20℃冷凍保存帶回實(shí)驗(yàn)室解剖,得到肝胰腺、消化道、性腺和肌肉4部分組織后,于-20℃冷凍保存?zhèn)溆么郎y。在水華爆發(fā)期5～10月份每月采集螺螄樣品的同時(shí),采集螺螄生境水樣。2樣品處理方法2.1低通插裝液-20冷凍保存將螺螄樣品進(jìn)行冷凍干燥,干燥后碾磨成粉末狀,準(zhǔn)確稱取肝臟、消化道、性腺和肌肉各0.1g分別置于50mL的潔凈錐形瓶中,加入20mL5%乙酸溶液浸泡在磁力攪拌器上攪拌提取2h,離心(8000r/min,8min),取上清液,殘?jiān)儆?0mL90%甲醇重復(fù)提取2次,離心,取第二次上清液在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器中減壓濃縮至近干,將第一次所取上清液轉(zhuǎn)入蒸干的瓶中,過預(yù)先已活化的Sep-PakC18固相萃取小柱(10mL100%甲醇活化,10mL重蒸水調(diào)整)。依次用10mL重蒸水、10mL20%甲醇淋洗小柱,吹干,用10mL含0.1%TFA的甲醇洗脫,洗脫液在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器中減壓濃縮至干。用1.0mL去離子水定容后,-20℃冷凍保存待測。樣品中MC的測定均采用酶聯(lián)免疫檢測法(Enzyme-LinkedImmunoSorbentAssay,ELISA),檢測靈敏度為0.1ng/mL,測定方法見文獻(xiàn)2.2mc含量測定方法取水樣100mL用GF/C過濾,濾紙上主要為微囊藻,用于測定藻內(nèi)MC的含量而濾液用于測定水樣溶解態(tài)MC的含量。測定方法為ELISA,見文獻(xiàn)2.3mc含量與環(huán)境水體中mc含量相關(guān)性分析的go數(shù)據(jù)處理所有統(tǒng)計(jì)分析均采用SPSS13.0(SPSS13.0,Chicago)數(shù)據(jù)處理軟件。利用雙尾檢驗(yàn)及Pearson相關(guān)系數(shù)確定不同組織MC含量與環(huán)境水體中MC含量的相關(guān)性,實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的差異性比較采用t檢驗(yàn)或非參數(shù)檢驗(yàn)(K-W檢驗(yàn))比較不同組分的差異。差異顯著性水平設(shè)為0.05。3結(jié)果3.1水體總毒素含量在2008年5月至10月期間,采樣區(qū)域水體中總毒素和溶解性毒素含量的季節(jié)動(dòng)態(tài)如圖2所示。在螺螄的采樣區(qū)域,水體總毒素含量最高出現(xiàn)在7月,為76.45μg/L,最低出現(xiàn)在10月,為11.78μg/L;水體中溶解性毒素含量最高出現(xiàn)在7月,為0.91μg/L,最低出現(xiàn)在5月,為0.61μg/L(圖2)。3.2mc在組織及季節(jié)動(dòng)態(tài)中的含量研究期間,螺螄體內(nèi)各組織中MC含量如圖3所示。在整個(gè)研究期間,MC在肌肉、性腺、肝胰腺及消化道中的含量分別為0.35±0.43、1.23±0.97、3.38±1.90和2.72±1.63μg/gDW。統(tǒng)計(jì)分析發(fā)現(xiàn),肌肉中MC的含量顯著低于肝胰腺、消化道和性腺中MC的含量(p<0.05);性腺中MC的含量顯著低于消化道和肝胰腺中MC的含量(p<0.05);消化道中MC的含量與肝胰腺之間無顯著差異(p>0.05)。如圖3所示,在整個(gè)調(diào)查期間,滇池福保灣螺螄4種組織中MC的含量最低出現(xiàn)在5月,而到6月份顯著增加(p<0.05),MC在各組織中含量的最高值出現(xiàn)在7月份,然后逐月下降;1月份含量與9、10月含量水平相當(dāng)。3.3mc與環(huán)境水體的相關(guān)性MC在螺螄不同組織及周圍水體環(huán)境中含量的相關(guān)性分析如表1所示。可以看出,性腺和肝胰腺中的MC含量顯著正相關(guān),消化道和肌肉中的MC含量顯著正相關(guān)。將螺螄各組織中MC含量與環(huán)境水體中含量進(jìn)行相關(guān)性分析,各組織均與水體溶解性MC的相關(guān)性不顯著;而性腺和肌肉兩組織中MC含量與周圍環(huán)境水體中總MC含量之間顯著正相關(guān)(表1)。3.4mt量tditoelmaning污水處理表6根據(jù)WHO規(guī)定的人體每日可允許攝入的MC量TDI(TolerableDailyIntake)(≤0.04μg/kg人體重)的標(biāo)準(zhǔn)4mc與腸道c含量的相關(guān)性本研究發(fā)現(xiàn)MC在螺螄不同組織中的分布具有一定規(guī)律性。實(shí)驗(yàn)期間,肝臟中MC含量的均值最高,這與太湖關(guān)于銅銹環(huán)棱螺的研究結(jié)果一致由于1月份數(shù)據(jù)缺失,僅探討了5～10月份螺螄各組織中MC的含量與周圍環(huán)境中MC含量的相關(guān)性(表1)。本研究發(fā)現(xiàn),肌肉中MC的含量與消化道中MC的含量之間顯著正相關(guān)(r=0.844,p=0.035),肝胰腺中以及性腺中MC的含量與消化道中MC的含量也顯示出一定的正相關(guān)(表1),說明肌肉、肝胰腺以及性腺中MC的積累受食物中MC含量的影響。Chen等螺螄各組織中MC含量均是在7月最高,可能是由于7月份為微囊藻水華爆發(fā)強(qiáng)度最大的時(shí)期。其后3個(gè)月MC含量逐月降低,9、10月的含量與1月份相近,可能與秋冬季節(jié)微囊藻水華狀況波動(dòng)較小有關(guān)。各組織中MC含量最低都發(fā)生在5月,可能是由于滇池春天3～5月易爆發(fā)束絲藻水華,微囊藻被抑制,釋放到環(huán)境中的MC減少,因此被螺螄等攝食吸收的MC也較少。但到6月份,微囊藻替代束絲藻成為水華優(yōu)勢種,微囊藻水華開始全面爆發(fā),到7月達(dá)到高峰,因此在螺螄各組織中7月份的MC含