腫瘤標(biāo)志物課件

張鵬主任技師天津醫(yī)科大學(xué)腫瘤醫(yī)院腫瘤標(biāo)志物簡介及臨床應(yīng)用1醫(yī)學(xué)課件張鵬主任技師天津醫(yī)科大學(xué)腫瘤醫(yī)院腫瘤標(biāo)志物人體癌癥地圖2醫(yī)學(xué)課件人體癌癥地圖2醫(yī)學(xué)課件

在腫瘤發(fā)生和增殖過程中，由腫瘤細胞合成、釋放、或者是宿主對腫瘤反應(yīng)產(chǎn)生的一類生化物質(zhì)

在血液、體液及組織中腫瘤標(biāo)志物的定量或定性檢測可以作為腫瘤篩查（僅AFP與PSA用于高危人群）、鑒別診斷、治療后病情監(jiān)測及預(yù)后判斷的標(biāo)志與依據(jù)腫瘤標(biāo)志物【tumormarkersTM】3醫(yī)學(xué)課件在腫瘤發(fā)生和增殖過程中，由腫瘤細胞合腫瘤標(biāo)志物【tum腫瘤標(biāo)志物應(yīng)用的一般準(zhǔn)則

是大分子物質(zhì)(多為糖蛋白或脂蛋白成分),其在外周血和/或其他體液中的表達和濃度變化與惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展關(guān)系密切

在腫瘤細胞表面或腫瘤細胞內(nèi)合成，或通過其它細胞誘導(dǎo)而成

用于診斷的“理想標(biāo)志物”應(yīng)具備：僅在細胞惡變后才產(chǎn)生、分泌到血中，濃度可達被檢測到；一經(jīng)檢測即可知腫瘤發(fā)生的部位4醫(yī)學(xué)課件腫瘤標(biāo)志物應(yīng)用的一般準(zhǔn)則是大分子物質(zhì)(多為糖蛋白或脂蛋白成目前臨床應(yīng)用腫瘤標(biāo)志物現(xiàn)狀理想形式特異性100%真陰性100%假陽性0%健康人臨界值敏感性100%真陽性100%假陰性0%腫瘤患者實際狀況假陰性假陽性臨界值敏感性100%特異性-60%健康人腫瘤患者特異性100%敏感性-50%敏感性上升特異性上升腫瘤標(biāo)志物參數(shù)在健康人和腫瘤患者兩組人群間的區(qū)別實際狀態(tài)：假陰性和假陽性在選擇臨界值中的作用：特異性越高，敏感性越低，反之亦然5醫(yī)學(xué)課件目前臨床應(yīng)用腫瘤標(biāo)志物現(xiàn)狀理想形式特異性100%健康人臨界值腫瘤標(biāo)志物檢測質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

TM的診斷數(shù)值取決于其敏感性和特異性

TM的特異性是：在健康人或良性疾病患者所檢測到的真陰性結(jié)果發(fā)生率，即假陽性結(jié)果百分率越低，特異性越好

TM的敏感率是腫瘤患者檢測陽性結(jié)果的百分率46醫(yī)學(xué)課件腫瘤標(biāo)志物檢測質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)TM的診斷數(shù)值取決于其敏感性和特異TM敏感性和特異性在診斷上的意義

關(guān)鍵依賴于腫瘤分期和對照組的選擇，只有腫瘤分期確定后，敏感性的數(shù)據(jù)才是可靠的

只有對照組有明確限定特征，其特異性才有意義

目前研究結(jié)果不僅是特異性和敏感性，還應(yīng)指出群體研究中的個體結(jié)果以及普遍的分類7醫(yī)學(xué)課件TM敏感性和特異性在診斷上的意義關(guān)鍵依賴于腫瘤分期和對照組TM的臨界值設(shè)定原則

臨界值是指某一TM在正常人或良性疾病患者中的假定上限值

臨界值無固定數(shù)值，可隨試驗的目的而改變；鑒定盡可能多的腫瘤患者，降低臨界值以增加其敏感性（假陽性

，特異性）

最大可能地指示出腫瘤發(fā)生，臨界值可設(shè)定得高些，以增加其特異性（假陰性，敏感性）

TM的診斷價值很大程度上取決于臨界值的選擇；

在相對于健康人和良性疾病患者特異性為95%的臨界值水平上比較其數(shù)據(jù)，可提高此TM的敏感性8醫(yī)學(xué)課件TM的臨界值設(shè)定原則臨界值是指某一TM在正常人或良性疾病患特異性、敏感性及陰性和陽性預(yù)期值定義特異性=真陰性結(jié)果數(shù)真陰性結(jié)果數(shù)+假陽性結(jié)果數(shù)敏感性=真陰性結(jié)果數(shù)真陽性結(jié)果數(shù)+假陰性結(jié)果數(shù)陽性預(yù)期值=真陽性結(jié)果數(shù)真陽性結(jié)果數(shù)+假陽性結(jié)果數(shù)陰性預(yù)期值=真陰性結(jié)果數(shù)真陰性結(jié)果數(shù)+假陰性結(jié)果數(shù)9醫(yī)學(xué)課件特異性、敏感性及陰性和陽性預(yù)期值定義特異性=真陰性結(jié)果數(shù)真陰臨床實驗室選用腫瘤標(biāo)志物試驗的要求

可靠性和重復(fù)性

批內(nèi)變異＜5%

批間變異＜10%

寬分析范圍

合理收費和減輕工作人員負擔(dān)

高特異性＞95%

高敏感性＞50%

最佳陽性和陰性預(yù)期值（PV）

與腫瘤大小的相關(guān)性

本地區(qū)適合的試劑和批號敏感性（%）特異性（%）10080-60-40-20-0100806040200標(biāo)志A標(biāo)志B兩條ROC（接受器工作特性）曲線，A在對照組和惡性腫瘤之間分布好，B不能進行分布10醫(yī)學(xué)課件臨床實驗室選用腫瘤標(biāo)志物試驗的要求可靠性和重復(fù)性敏感性（%腫瘤胚胎性抗原甲胎蛋白（AFP）、癌胚抗原（CEA）異位激素絨毛膜促性腺激素（HCG）、促腎上腺皮質(zhì)激素（ACTH）、降鈣素酶和同工酶乳酸脫氫酶（LDH）神經(jīng)元特異性烯醇化酶（NSE）前列腺酸性磷酸酶（PAP）血漿蛋白β2—巨球蛋白（PsM）細胞代謝產(chǎn)物脂質(zhì)相關(guān)涎酸腫瘤抗原CAl9—9、CAl25癌基因和抑癌基因蛋白產(chǎn)物c—myc、ras、p53、Rb微量元素砷、銅、鐵、硒、鋅腫瘤標(biāo)志物分類11醫(yī)學(xué)課件腫瘤胚胎性抗原甲胎蛋白（AFP）、癌胚抗原（C生化特性：糖蛋白，45~60%糖，電泳遷移率，6個抗原決定基分子量：180,000發(fā)生部位：胚胎及胎兒腸黏膜參考值范圍：＜3ng/ml臨床應(yīng)用：監(jiān)測結(jié)直腸癌、胃癌、乳腺癌和支氣管癌病程及療效影響因素：5%吸煙者檢測值可至2.5~5ng/ml，1%至10~20ng/ml；肝炎疾病可使CEA水平短暫升高癌胚抗原【CEA】99mTc(鍀）標(biāo)記抗癌胚抗原單抗C50片段Fab’12醫(yī)學(xué)課件生化特性：糖蛋白，45~60%糖，電泳遷移率，6個生化特性：糖蛋白，4%糖，電泳-1-遷移率分子量：70，000發(fā)生部位：卵黃囊、胚胎肝參考值范圍：＜15ng/ml臨床應(yīng)用：發(fā)現(xiàn)原發(fā)性肝細胞癌,監(jiān)測治療效果;用于診斷生殖細胞腫瘤影響因素：肝炎疾病可使AFP水平短暫升高;AFP可通過胎盤,妊娠32~36周可達高峰；羊水中AFP濃度與胎兒身長與孕周呈負相關(guān)（其95%參考上限5500~200ng/ml，24~41孕周），于正常提示胎兒畸形、死胎、無腦兒和開放性神經(jīng)缺損等甲胎蛋白【AFP】肝癌細胞AFP+++HCC患者外周血AFPmRNART-PCR（反轉(zhuǎn)錄）產(chǎn)物電泳圖譜13醫(yī)學(xué)課件生化特性：糖蛋白，4%糖，電泳-1-遷移率甲胎蛋白生化特性：單鏈糖蛋白，前列腺分泌產(chǎn)物分子量：36，000發(fā)生部位：前列腺分泌腺管參考值范圍：＜3.7ng/ml臨床應(yīng)用：監(jiān)測前列腺癌影響因素：具有組織特異性，但不是腫瘤所特異的，注意：應(yīng)在直腸癌指診前取血，前列腺癌患者多高于10ng/ml前列腺特異抗原【t-PSA】PCR及重疊延伸產(chǎn)物的瓊脂糖凝膠電泳

構(gòu)建抗前列腺特異抗原(PSA)單鏈抗體（scFv）/人羧肽酶A（hCPA）融合基因總PSA（t-PSA）中80%以結(jié)合形式存在，稱復(fù)合PSA（c-PSA）；20%以游離形式存在，稱游離PSA（f-PSA）；t-PSA及f-PSA升高，而f-PSA/t-PSA比值降低，提示前列腺癌當(dāng)總PSA在3.0~10.0ng/ml時，f-PSA/t-PSA比值低于0.19~0.10時，前列腺癌的可能性較大14醫(yī)學(xué)課件生化特性：單鏈糖蛋白，前列腺分泌產(chǎn)物前列腺特異抗原生化特性：糖蛋白，由兩個單克隆抗體：1.115D8抗乳脂膜及2.DF3抗乳腺癌細胞系所證實分子量：

115D8：400，000；DF3290，000發(fā)生部位：乳腺癌細胞和某些上皮細胞參考值范圍：＜28U/ml臨床應(yīng)用：監(jiān)測乳腺癌療效影響因素：與CEA聯(lián)合檢測癌抗原15-3【CA15-3】糖與多肽連接的兩種方式

？是1984年由Kufer和Hilkens發(fā)現(xiàn)，是由鼠抗人乳腺癌肝細胞轉(zhuǎn)移株的膜的單克隆抗體DF3制備的15醫(yī)學(xué)課件生化特性：糖蛋白，由兩個單克隆抗體：癌抗原15-3生化特性：糖脂,Lewis()血型決定基半抗原分子量：

抗原:36,000;粘蛋白:106D發(fā)生部位：各種腫瘤,在胎兒胃腸道上皮細胞,許多粘膜細胞參考值范圍：＜37U/ml臨床應(yīng)用：監(jiān)測胰腺癌療效影響因素：結(jié)直腸TM的第二選擇糖類抗原19-9【CA19-9】是1981年由Koprowski從大腸腺癌細胞系和免疫鼠雜交瘤產(chǎn)物分離而成16醫(yī)學(xué)課件生化特性：糖脂,Lewis()血型決定基半抗原糖類生化特性：糖蛋白,以卵巢癌細胞系免疫所獲單克隆抗體所證實分子量：

200,000發(fā)生部位：卵巢癌(膜結(jié)合物),胎兒和成人支氣管正常上皮細胞參考值范圍：＜35U/ml(＜65U/ml)臨床應(yīng)用：監(jiān)測卵巢癌病程及療效，透明細胞癌，子宮內(nèi)膜癌、輸卵管埃及未分化卵巢癌明顯升高影響因素：

來源于體腔上皮細胞衍生物的分化抗原(Müller’管上皮),特異性低；血清濃度輕微升高正常婦女，以及良性卵巢疾患，懷孕前3個月、行經(jīng)期、肝硬化、子宮纖維變性、急性輸卵管炎、胸膜炎和心包感染等也稍高。

糖類抗原125【CA125】1981年由Bast發(fā)現(xiàn)的由鼠抗人乳頭狀囊性卵巢上皮細胞系OC125制備而成17醫(yī)學(xué)課件生化特性：糖蛋白,以卵巢癌細胞系免疫所獲糖類抗原12生化特性：烯醇化酶二聚體分子量：

87,000發(fā)生部位：神經(jīng)系統(tǒng)的神經(jīng)元和神經(jīng)內(nèi)分泌細胞,紅細胞,血小板參考值范圍：＜12.5ng/ml臨床應(yīng)用：

神經(jīng)元特異性烯醇化酶是小細胞肺癌(SCLC)和神經(jīng)母細胞瘤的腫瘤標(biāo)志物，可用于鑒別診斷、病情監(jiān)測、療效評價和復(fù)發(fā)預(yù)報。用神經(jīng)元特異性烯醇化酶監(jiān)測小細胞肺癌的復(fù)發(fā)，比臨床確定復(fù)發(fā)要早4～12周。神經(jīng)元特異性烯醇化酶還可用于神經(jīng)母細胞瘤和腎母細胞瘤的鑒別診斷，前者神經(jīng)元特異性烯醇化酶異常增高而后者增高不明顯。增高：見于小細胞肺癌（最敏感最特異的腫瘤標(biāo)志物之一）、神經(jīng)母細胞瘤、神經(jīng)內(nèi)分泌細胞腫瘤（如嗜鉻細胞瘤、胰島細胞瘤、黑色素瘤）等影響因素：

不要將血放置太久，否則將出現(xiàn)假高值；一小時內(nèi)離心；檢測SCLC時，與CEA聯(lián)合應(yīng)用神經(jīng)特異性烯醇化酶【NSE】18醫(yī)學(xué)課件生化特性：烯醇化酶二聚體神經(jīng)特異性烯醇化酶【NSE生化特性：糖蛋白激素，由兩個非共價結(jié)合的亞單位組成，a，

分子量：

a：14,000；：24,000發(fā)生部位：胎盤合體滋養(yǎng)層,滋養(yǎng)層組織中的胚細胞腫瘤,合體滋養(yǎng)層巨細胞(精原細胞來源許多中空器官的上皮細胞成分)參考值范圍：男性:0~5mU/ml臨床應(yīng)用：

非精原細胞瘤胚芽細胞瘤(48~86%),睪丸或胎盤絨毛膜腫瘤(100%),胞蟲囊狀痣(97%),精原細胞瘤(合并腫瘤)(7~14%)人絨毛膜促性腺激素【HCG】RNA的甲醛變性膠電泳結(jié)果，可見清晰的18S、28S兩條帶及其距加樣孔的距離

PCR擴增后進行PAGE電泳及放射自顯影結(jié)果箭頭所示條帶T26只在絨癌中顯示，在正常絨毛中不顯示19醫(yī)學(xué)課件生化特性：糖蛋白激素，由兩個非共價結(jié)合的亞單人絨毛膜生化特性：增生性抗原,多肽，由B1、B2和C三個亞基組成，其活性主要在B1分子量：

17,000～43,000發(fā)生部位：卵黃囊,胚胎肝參考值范圍：＜80U/L臨床應(yīng)用：

膀胱癌？正常人陽性率4.7%。但有相當(dāng)一部分非惡性腫瘤患者血清中有TPA存在，其陽性率約為14%～35%，以下呼吸道、肝及尿路感染者多見，故TPA亦非腫瘤所特有的標(biāo)志。但在惡性腫瘤者中，TPA的增高往往是持續(xù)性的，因此，若進行連續(xù)監(jiān)測，常常有利于惡性腫瘤與非惡性病變的鑒別

影響因素：

測定值＞80:膀胱、支氣管、卵巢、胃癌，可能為肝，腎，肺等疾?。惶禺愋缘徒M織多肽抗原【TPA】20醫(yī)學(xué)課件生化特性：增生性抗原,多肽，由B1、B2和C三個亞基組生化特性：多肽（32個氨基酸）分子量：

3,500發(fā)生部位：C細胞，胸腺也有分泌降鈣素的機能

參考值范圍：

＜100pg/ml臨床應(yīng)用：

甲狀腺髓樣癌：此種癌起源于甲狀腺濾泡旁細胞（C細胞），可產(chǎn)生多種生物活性物質(zhì)，其中以降鈣素為主?；颊哐褰碘}素水平高于正常數(shù)十到數(shù)百倍。如經(jīng)手術(shù)治療，則降鈣素水平恢復(fù)正常影響因素：

適用于危險人群篩查和輔助診斷；肺小細胞癌可產(chǎn)生多種激素，其中包括降鈣素

降鈣素21醫(yī)學(xué)課件生化特性：多肽（32個氨基酸）降鈣素21醫(yī)學(xué)課件生化特性：糖蛋白,即由兩個單克隆抗體所識別的TAG72:1:CC49,2:B72-3分子量：

400,000發(fā)生部位：上皮細胞參考值范圍：

＜3U/ml臨床應(yīng)用：

胃癌,卵巢粘液癌影響因素:

與CEA聯(lián)合檢測胃癌,卵巢癌的第二選擇標(biāo)志物癌抗原72-4【CA72-4】1989年由Gero首先測定22醫(yī)學(xué)課件生化特性：糖蛋白,即由兩個單克隆抗體所識別的癌抗原生化特性：與IgG分子的重鏈和輕鏈的C片段同型,與HLA共同片段的部分相同分子量：

11,800發(fā)生部位：淋巴細胞,巨嗜細胞和一些上皮細胞表面參考值范圍：1.2~2.5mg/l臨床應(yīng)用：

多發(fā)性骨髓瘤,非何杰金氏淋巴瘤（NHL）影響因素：

在腎臟疾病診斷中也有重要意義

-2-微球蛋白【-2-m】23醫(yī)學(xué)課件生化特性：與IgG分子的重鏈和輕鏈的C片段同型,與-生化特性：糖蛋白,腫瘤抗原T4分子量：

48,000發(fā)生部位：主要存在于子宮頸鱗狀細胞癌,正常鱗狀上皮參考值范圍：＜2.5ng/ml臨床應(yīng)用：監(jiān)測宮頸、耳、鼻、喉、肺和食管鱗狀細胞癌病程及治療影響因素：被皮膚或唾液污染后可導(dǎo)致假性高值鱗狀上皮細胞癌抗原【SCC】24醫(yī)學(xué)課件生化特性：糖蛋白,腫瘤抗原T4鱗狀上皮細胞癌抗原生化特性：細胞角蛋白片段19分子量：

30,000發(fā)生部位：存在于許多組織中，特別是肺中參考值范圍：

＜3.3ng/ml臨床應(yīng)用：

非小細胞肺癌影響因素：

被唾液污染后可導(dǎo)致假性高值細胞角蛋白組分19【CYFRA21-1】細胞角蛋白陽性細胞肺癌腦轉(zhuǎn)移25醫(yī)學(xué)課件生化特性：細胞角蛋白片段19細胞角蛋白組分19【糖類抗原50【CA50】生化特性：糖類抗原CA50是一種以唾液酸酯和唾液酸糖蛋白為主的腫瘤標(biāo)志物參考范圍：＜23U/ml臨床意義：糖類抗原CA50是一種非特異性的廣譜腫瘤標(biāo)志物，與癌抗原19-9有一定的交叉抗原性，主要用于胰腺癌、結(jié)腸／直腸癌、胃癌的輔助診斷，其中胰腺癌病人增高最明顯。增高：見于胰腺癌（陽性率可達87％）、結(jié)腸／直腸癌、胃癌、肺癌。肝癌。卵巢癌、乳腺癌等惡性腫瘤；潰瘍性結(jié)腸炎、肝硬化、黑色素瘤、淋巴瘤、自身免疫性疾病等也增高26醫(yī)學(xué)課件糖類抗原50【CA50】26醫(yī)學(xué)課件糖類抗原242【CA242】CA242是一種唾液酸化的新型粘蛋白類糖類腫瘤抗原1993年P(guān)ujol等采用遲緩銪鑭熒光分析技術(shù)測定102例NSCLC患者血清CA242濃度，CA242血清濃度閾值為20.0U/ml，結(jié)果其敏感性及特異性分別為28.5%和95.6%。肺鱗癌患者血清CA242水平顯著低于非鱗癌(腺癌和大細胞肺癌)患者，發(fā)生遠處轉(zhuǎn)移者的CA242濃度高于未轉(zhuǎn)移者，且Ⅰ～Ⅳ期濃度逐漸增加。從整體角度看，CA242水平與生存不相關(guān)，但是，在不能手術(shù)切除的NSCLC患者中，CA242濃度升高患者的生存期較濃度低于20U/ml患者顯著短。由于CA242敏感性較低，對NSCLC的診斷無意義CA242可作為胰腺癌和結(jié)腸癌校好的腫瘤標(biāo)志物，其靈敏度與CA19-9相仿，但特異性、診斷效率則優(yōu)于CA19-9參考值：＜25U/ml27醫(yī)學(xué)課件糖類抗原242【CA242】CA242是一種唾液酸化的新

CA549也是乳腺癌的標(biāo)志物，它是一種酸性糖蛋白

大部分健康女性＜11U／mL

異常升高者比例并不高，可見于50%乳腺癌、卵巢癌、40%前列腺癌、33%肺癌患者。由此，作為乳腺癌的早期診斷，CA則還較欠缺，應(yīng)聯(lián)合應(yīng)用其它TM

糖類抗原594【CA549】28醫(yī)學(xué)課件CA549也是乳腺癌的標(biāo)志物，它是一種酸性糖類抗原594【血清堿性磷酸酶【ALP或AKP

】是一組底物特異性較低，在堿性環(huán)境中能水解很多磷酸單酯化合物的酶AFP在器官組織的含量：肝腎胎盤小腸骨＞＞＞＞磷酸對硝基酚（底物）2-氨基-2-甲基-1-丙酮（受體）+ALP對硝基酚+堿性溶液405nm變黃色，連續(xù)監(jiān)測法參考值：女性：1~12歲＜500U/L；＞15歲，40~150U/L男性：1~12歲＜500U/L；12~15歲，＜750U/L＞15歲，40~150U/LAFP活力測定常作為肝膽疾病和骨骼疾病的臨床輔助診斷指標(biāo)。升高：骨Paget病、膽道梗阻、惡性腫瘤骨轉(zhuǎn)移或肝轉(zhuǎn)移、佝僂病、骨軟化、成骨細胞瘤、甲狀旁腺功能亢進及骨折愈合期降低：少見，呆小癥、磷酸酶過少癥、維生素C缺乏癥。甲功低下、惡性貧血臨床意義29醫(yī)學(xué)課件血清堿性磷酸酶【ALP或AKP】是一組底物特異性較低，在阻塞性黃疸、肝硬化、肝壞死，堿性磷酸酶明顯升高（肝細胞性黃疸則升高不明顯）原發(fā)性和繼發(fā)性肝癌時堿性磷酸酶亦明顯升高，與癌組織中或癌腫周圍肝細胞合成堿性磷酸酶增加有關(guān)

其他腫瘤如乳腺癌、肺癌、卵巢癌、骨細胞瘤、骨肉瘤等，堿性磷酸酶增高時，提示可能有肝臟轉(zhuǎn)移

變形性骨炎、成骨細胞癌、佝僂病、骨軟化、甲狀腺及甲狀旁腺功能亢進、腎小管性酸中毒、遺傳性磷酸酶過多癥

很多藥物可使堿性磷酸酶增高，如巴比妥類、抗生素（紅霉素、慶大霉素、氯霉素、卡那霉素、氨芐青霉素等

常見于重癥慢性腎炎、乳糜瀉、貧血、惡病質(zhì)、兒童甲狀腺功能不全或減退、維生素C缺乏癥壞血病）。營養(yǎng)不良、呆小癥、遺傳性低磷酸酶血癥。增高減低血清堿性磷酸酶【ALP或AKP

】30醫(yī)學(xué)課件阻塞性黃疸、肝硬化、肝壞死，堿性磷酸酶明顯升高（肝細胞性黃疸酸性磷酸酶測定【ACP】磷酸麝香草酚酞（YMP）ACP麝香草酚酞+無機磷堿液終止反應(yīng)麝香草酚酞

呈藍色595nmα-磷酸萘胺

ACP酸性條件α-萘胺+磷酸固紅TR鹽重氮化合物總酸性磷酸酶活性－非前列腺酸性磷酸酶活性=前列腺酸性磷酸酶活性酒石酸抑制405nm參考值：成人總酶活性為0~9U/L，前列腺酸性磷酸酶活性為0~3U/LACP含量無性別差異，新生兒出生后1個月血清酶活性甚高，隨年齡增長而逐漸下降；青春期又可出現(xiàn)一活性峰值，至20歲降至成人水平ACP主要用于前列腺癌的輔助診斷及療效觀察指標(biāo)，特別是轉(zhuǎn)移時，血清ACP可明顯增高溶血性疾病、變形性骨炎、急性尿潴留及近期做過直腸檢查者，此酶也可增高臨床意義31醫(yī)學(xué)課件酸性磷酸酶測定【ACP】磷酸麝香草酚酞（YMP）ACP麝香草P53蛋白是一種由393個氨基酸組成的含磷蛋白，位于細胞核。研究發(fā)現(xiàn)在癌旁正常和鱗狀化生的支氣管上皮未見P53蛋白表達，在輕→中→重度不典型增生、原位癌、浸潤癌中，P53蛋白表達的陽性率逐漸升高，表明P53基因與肺癌發(fā)生有關(guān)對P53基因的不同類型腫瘤中突變頻率檢測結(jié)果，鱗癌為63.6%，腺癌為65%，發(fā)現(xiàn)P53蛋白在不同分化程度肺癌組織之間無顯著性差異，但在肺鱗癌組織中隨分化程度降低P53表達卻增強，認(rèn)為P53蛋白與肺鱗癌的關(guān)系可能較肺腺癌更為密切。而且在肺鱗癌伴有和不伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移病例中，P53表達無顯著性差異，而肺腺癌中伴有與不伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者P53表達具有顯著性差異，提示P53過度表達與肺腺癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)P53蛋白鱗癌P53細胞核陽性32醫(yī)學(xué)課件P53蛋白是一種由393個氨基酸組成的含磷蛋白，位于細胞核。bcl-2蛋白是原癌基因bcl-2編碼的一種能調(diào)節(jié)細胞死亡而不影響細胞增殖的蛋白質(zhì)，1993年P(guān)ezzella等研究bcl-2在NSCLC患者中的表達與預(yù)后之間的關(guān)系。該實驗采用bcl-2特異性單克隆抗體及免疫組化染色測定80例肺鱗癌及42例肺腺癌患者腫瘤組織中bcl-2蛋白。結(jié)果25%(20/80)的鱗癌患者及12%(5/42)的腺癌患者bcl-2蛋白陽性，在鄰近的正常呼吸道上皮中，bcl-2蛋白僅存在于基底細胞。bcl-2蛋白陽性患者的5年生存率高于陰性患者(P<0.1)，年齡為60歲或60歲以上bcl-2蛋白陽性患者的預(yù)后最好(P<0.02)。該研究表明，原癌基因bcl-2在肺癌患者中發(fā)生異常表達，其表達與預(yù)后有一定關(guān)系原癌基因bcl-2蛋白33醫(yī)學(xué)課件bcl-2蛋白是原癌基因bcl-2編碼的一種能調(diào)節(jié)細胞死亡而腫瘤標(biāo)志物的組合應(yīng)用-Ⅰ標(biāo)志CEAARPCA19-9CA72-4CA125CA15-3SCCHCG腫瘤結(jié)腸

●

●

胰腺●

●

胃●

●

●

食道●

●

肝臟●

膽囊●

乳腺●

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卵巢●

●

子宮頸●

●

絨毛膜●

34醫(yī)學(xué)課件腫瘤標(biāo)志物的組合應(yīng)用-Ⅰ標(biāo)志CEAARPCA19腫瘤標(biāo)志物的組合應(yīng)用-Ⅱ標(biāo)志CEAARPNSESCCCYFRA21-1HCGPSATPACalcitoninHTG

腫瘤肺（SCLC）●●肺（NSCLS）●●胚胎細胞●●前列腺●膀胱●

●甲狀腺●●C-細胞●●耳鼻咽喉●●35醫(yī)學(xué)課件腫瘤標(biāo)志物的組合應(yīng)用-Ⅱ標(biāo)志CEAARPN臨床檢測腫瘤標(biāo)志物試驗方法進展◆單相瓊脂擴散法◆雙相瓊脂擴散法◆血凝法◆對流電泳法◆火箭電泳法◆放射免疫法（RIA）◆免疫放射法（IRMA）◆

ELISA法◆斑點法◆金標(biāo)法◆熒光免疫法◆化學(xué)發(fā)光法（CLIA）◆電化學(xué)發(fā)光法（ECLIA）◆分子生物學(xué)36醫(yī)學(xué)課件臨床檢測腫瘤標(biāo)志物試驗方法進展◆單相瓊脂擴散法◆ELISA雙相瓊脂擴散法單相瓊脂擴散法抗體與凝膠混合后，裝于小玻璃管中，待凝固后加入抗原溶液，使其擴散入凝膠與抗體反應(yīng)形成環(huán)狀乳白色沉淀帶

一種抗原或抗體混合物成分的定性與定量的分析方法。通常采用凝膠作為支持介質(zhì)，讓抗原與抗體混合物在介質(zhì)中互相擴散，相互反應(yīng)形成沉淀弧線或沉淀弧帶37醫(yī)學(xué)課件雙相瓊脂擴散法單相瓊脂擴散法抗體與凝膠混合后，裝于小玻璃管中血凝法細菌和紅細胞等顆粒性抗原，當(dāng)與相應(yīng)抗體特異結(jié)合后，在適量電解質(zhì)存在的條件下，可逐漸聚集，出現(xiàn)肉眼可見的凝集現(xiàn)象稱為凝集反應(yīng)。反應(yīng)中的抗原稱為凝集原（agglutinogen），抗體稱為凝集素（agglutinin）根據(jù)凝集反應(yīng)的原理，以后又發(fā)展建立了，各種間接凝集試驗、間接凝集抑制試驗以及固相免疫吸附血凝試驗等新方法

38醫(yī)學(xué)課件血凝法細菌和紅細胞等顆粒性抗原，當(dāng)與相應(yīng)抗體特異結(jié)合后，在適

膠乳微粒免疫檢測技術(shù)是在膠乳凝集定性試驗基礎(chǔ)上發(fā)展建立的-種非放射性均相免疫測定法，可以對各種微量的抗原物質(zhì)和小分子半抗原(加藥物、團體激素等)進行精確的定量測定。根據(jù)特異性抗體致敏的膠乳微粒(一般為直徑約1μm的聚苯乙烯膠乳)，與待測標(biāo)本中的相應(yīng)抗原相遇時發(fā)生凝集反應(yīng)，膠乳凝集程度與被測物的濃度呈函數(shù)關(guān)系，由此可測出標(biāo)本中待測物的含量。測定方法主要有粒子計數(shù)法和濁度法兩種39醫(yī)學(xué)課件膠乳微粒免疫檢測技術(shù)39醫(yī)學(xué)課件

對流免疫電泳(counterimmunoelectrophoresis,CIEP)是將雙向免疫擴散與電泳相結(jié)合的一種技術(shù)。在pH8.6的緩沖液中，蛋白質(zhì)抗原帶負電荷向正極泳動；而抗體大部分屬于Ig，由于分子量大，暴露的極性基團較少，在離子瓊脂中泳動緩慢，同時受電滲作用的影響向負極泳動(電滲是指在電場中液體對于一個固定固體的相對移動。瓊脂是一種酸性物質(zhì)，在堿性溶液中帶負電荷，而與它接觸的溶液帶正電荷，因此液體向負極泳動，產(chǎn)生電滲)在抗原抗體相遇的最適比例處形成乳白色沉淀線。由于電場的作用，限制了抗原、抗體的自由擴散，而使其定向泳動，因而增加了試驗的靈敏度，并縮短反應(yīng)時間。此法操作簡便，僅需30～60分鐘，靈敏度比雙向擴散高10～15倍；但缺點是特異性不如雙向瓊脂擴散高40醫(yī)學(xué)課件對流免疫電泳40醫(yī)學(xué)課件

火箭免疫電泳(rocketimmunoelectrophoresis，RIEP)是將單向免疫擴散和電泳相結(jié)合的一種定量檢測技術(shù)。電泳時，含于瓊脂凝膠中的抗體不發(fā)生移動，而在電場的作用下促使樣品中的抗原向正極泳動。當(dāng)抗原與抗體分子達到適當(dāng)比例時，形成一個形狀如火箭的不溶性免疫復(fù)合物沉淀峰，峰的高度與撿樣中的抗原濃度呈正相關(guān)。因此，當(dāng)瓊脂中抗體濃度固定時，以不同稀釋度標(biāo)準(zhǔn)抗原泳動后形成的沉淀峰為縱坐標(biāo)，抗原濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。根據(jù)樣品的沉淀峰長度即可計算出待測抗原的含量；反之，當(dāng)瓊脂中抗原濃度固定時，便可測定待測抗體的含量(即反向火箭免疫電泳)

41醫(yī)學(xué)課件火箭免疫電泳41醫(yī)學(xué)課件競爭法雙抗體夾心法間接法

酶聯(lián)免疫吸附試驗1971年瑞典學(xué)者Engvail和Perlmannn,荷蘭學(xué)者VanWeerman和Schuurs分別報道將免疫技術(shù)發(fā)展為檢測體液中微量物質(zhì)的固相免疫測定方法，稱為酶聯(lián)免疫吸附試驗)。最初發(fā)展的免疫酶測定方法。是使酶與抗體或抗原結(jié)合，用以檢查組織中相應(yīng)的抗原或抗體的存在。后來發(fā)展為將抗原或抗體吸附于固相載體，在載體上進行免疫酶染色，底物顯色后用肉眼或分光光度計判定結(jié)果。這種技術(shù)就是目前應(yīng)用最廣的酶聯(lián)免疫吸附試驗，俗稱ELISA(enzymelinkedimmunosorbantassay)

42醫(yī)學(xué)課件競爭法雙抗體夾心法間接法

免疫印跡技術(shù)免疫印跡(immunoblotting)又稱蛋白質(zhì)印跡(Westernblotting)，是一種借助特異性抗體鑒定抗原的有效方法。該法是在凝膠電泳和固相免疫測定技術(shù)基礎(chǔ)上發(fā)展起來的一種新的免疫生化技術(shù)。將含有目標(biāo)蛋白(抗原)的樣品首先用SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS)或非變性電泳(Native)等分離后，通過轉(zhuǎn)移電泳原位轉(zhuǎn)印至硝酸纖維素膜或其它膜的表面，然后將膜表面的蛋白質(zhì)再用抗原抗體反應(yīng)進行特異性檢測43醫(yī)學(xué)課件免疫印跡技術(shù)43醫(yī)學(xué)課件

免疫微粒技術(shù)是利用高分子材料合成一定粒度大小的固相微粒作為載體，包被上具有特異性親和力的各種免疫活性物質(zhì)(抗原或抗體)，使其致敏為免疫微粒，用于免疫學(xué)及其他生物學(xué)檢測與分離的一項技術(shù)。作為載體的微粒通常是以某種高分子有機單體為原料，經(jīng)過乳液聚合、懸浮聚合及輻照聚合等高分子聚合方法制備而成。由于制備材料及工藝不同，微粒的種類繁多，現(xiàn)已制成惰性微粒如聚苯乙烯膠乳微粒、活性微粒如羧化聚苯乙烯微粒、磁性微粒及標(biāo)記微粒(用同位素、熒光素或酶標(biāo)記)等四大類微粒，數(shù)量多達幾十種。將制備好的微粒與抗原(或抗體)經(jīng)物理吸附、化學(xué)偶聯(lián)及生物素親合親橋聯(lián)法等致敏方法形成免疫微粒。廣泛應(yīng)用于各種可溶性大分子物質(zhì)的檢測、分離與純化、細胞標(biāo)記與識別等。近年來，微粒技術(shù)在核酸分子雜交、DNA與RNA的分離及PCR等研究領(lǐng)域亦顯示出廣闊的應(yīng)用前景

44醫(yī)學(xué)課件免疫微粒技術(shù)44醫(yī)學(xué)課免疫熒光細胞化學(xué)技術(shù)是采用熒光素標(biāo)記的已知抗體(或抗原)作為探針，檢測待測組織、細胞標(biāo)本中的靶抗原(或抗體)，形成的抗原抗體復(fù)合物帶有熒光素，在熒光顯微鏡下，由于受高壓汞燈光源的紫外光照射，熒光素發(fā)出明亮的熒光，這樣就可以分辨出抗原(或抗體)的所在位置及其性質(zhì)，并可利用熒光定量技術(shù)計算抗原的含量，以達到對抗原物質(zhì)定位、定性和定量測定的目的

45醫(yī)學(xué)課件免疫熒光細胞化學(xué)技術(shù)45醫(yī)學(xué)課件

免疫組織化學(xué)技術(shù)又稱免疫細胞化學(xué)，是指帶顯色劑標(biāo)記的特異性抗體在組織細胞原位通過抗原抗體反應(yīng)和組織化學(xué)的呈色反應(yīng)，對相應(yīng)抗原進行定性、定位、定量測定的一項新技術(shù)。把免疫反應(yīng)的特異性、組織化學(xué)的可見性巧妙地結(jié)合起來，借助顯微鏡(包括熒光顯微鏡、電子顯微鏡)的顯像和放大作用，在細胞、亞細胞水平檢測各種抗原物質(zhì)(如蛋白質(zhì)、多肽、酶、激素、病原體以及受體等)。全過程包括：

抗原的提取與純化；

免疫動物或細胞融合，制備特異性抗體以及抗體的純化；

將顯色劑與抗體結(jié)合形成標(biāo)記抗體；

標(biāo)本的制備；

免疫細胞化學(xué)反應(yīng)以及呈色反應(yīng)；

觀察結(jié)果

46醫(yī)學(xué)課件免疫組織化學(xué)技術(shù)46醫(yī)學(xué)課件

免疫電鏡技術(shù)(Immuneelectronmicroscopy，IEM)是將抗原抗體反應(yīng)的特異性與電子顯微鏡的高分辨力相結(jié)合，在亞細胞和超微結(jié)構(gòu)水平上對抗原物質(zhì)進行定位分析的一種高度精確、靈敏的方法。特異性抗體用電子致密物質(zhì)，如鐵蛋白、膠體金等標(biāo)記后，使之與組織超薄切片中的抗原結(jié)合，在電鏡下觀察到標(biāo)記物所在位置，即為抗原抗體反應(yīng)的部位。首創(chuàng)此項技術(shù)的是Singer(1959)，他最先使用鐵蛋白標(biāo)記抗體的方法47醫(yī)學(xué)課件免疫電鏡技術(shù)47醫(yī)學(xué)課件

流式細胞儀(Flowcytometer，F(xiàn)CM)能快速、精確地測量通過檢測區(qū)液流中的各種粒子。這些粒子可以是細胞、大分子、乳膠滴或其他粒子。流式細胞術(shù)是對單細胞定量分析和分選的新技術(shù)。通常是應(yīng)用一個激光和有關(guān)的光學(xué)檢測系統(tǒng)來收集這些信號以供分析。其檢測速度之快，統(tǒng)計學(xué)精度之高，是其他方法無法比擬的。它可以研究一個細胞從新生到死亡，從細胞膜到腦漿和核內(nèi)物質(zhì)及染色體，還可以探討不同物質(zhì)之間的關(guān)系。它在免疫學(xué)、腫瘤學(xué)、細胞遺傳學(xué)、病理學(xué)、放射生物學(xué)等學(xué)科中已形成了獨立的學(xué)科分支使用程序48醫(yī)學(xué)課件流式細胞儀使用程序48醫(yī)學(xué)課件

免疫磁性微粒分離與純化技術(shù)

磁性微粒(magneticmicrospheres,MMS)是80年代初，用高分子材料和金屬離子為原料，聚合而成的一種以金屬離子為核心，外層均勻地包裹高分子聚合體的固相微粒。在液相中，受外加磁場的吸引作用，MMS可快速沉降而自行分離，無需進行離心沉淀。因此，將MMS應(yīng)用于免疫檢測，可使操作過程大為簡化。經(jīng)過特異性抗體包被制成免疫MMS，與檢樣中的抗原結(jié)合形成免疫MMS-靶分子(或靶細胞)復(fù)合體，通過外加磁場的作用即可與其他成分分離開來。再以適當(dāng)方式使復(fù)合體解離，在磁場吸引下除去游離的免疫MMS，即可獲得純化的靶分子或細胞49醫(yī)學(xué)課件免疫磁性微粒分離與純化技術(shù)49醫(yī)學(xué)課件放射免疫技術(shù)是利用放射性核素可探測的靈敏度、精確度和抗原抗體反應(yīng)特異性相結(jié)合的一種免疫技術(shù)。靈敏度高、特異性強、重復(fù)性好、樣品及試劑用量小是其優(yōu)點；但核素的放射性，對工作人員和環(huán)境易造成危害和污染，是其缺點

放射免疫分析【RIA】是標(biāo)記抗原（Ag*）和非標(biāo)記抗原（Ag）對有限量的特異性抗體競爭性結(jié)合反應(yīng)Ag*Ag＋Ab

Ag*Ab＋Ag*

Ag＋Ab第二Ab法聚乙二醇沉淀法PR法活性炭吸附法分離

免疫放射分析【IRMA】是非競爭性免疫結(jié)合反應(yīng)，用過量的放射性核素標(biāo)記抗體（Ab*）與待測抗原反應(yīng)，待充分反應(yīng)后，除去游離的Ab*，AgAb*＋Ab*結(jié)合物的放射性強度與待測抗原呈正比關(guān)系A(chǔ)g＋Ab*=AgAb*＋Ab*Ag雙點位IRMA單點位IRMAAg固相抗原Ag50醫(yī)學(xué)課件放射免疫技術(shù)是利用放射性核素可探測的靈敏度、放射免疫分析【RIA】模式放射免疫分析廣義還包括放射受體分析及放射配體結(jié)合分析放射免疫分析常用的放射性核素有125I、130I、3H、14C等51醫(yī)學(xué)課件放射免疫分析【RIA】模式放射免疫分析廣義還包括放射受體分析化學(xué)發(fā)光免疫分析化學(xué)發(fā)光免疫分析包含兩個部分,即免疫反應(yīng)系統(tǒng)和化學(xué)發(fā)光分析系統(tǒng)?；瘜W(xué)發(fā)光分析系統(tǒng)是利用化學(xué)發(fā)光物質(zhì)經(jīng)催化劑的催化和氧化劑的氧化,形成一個激發(fā)態(tài)的中間體,當(dāng)這種激發(fā)態(tài)中間體回到穩(wěn)定的基態(tài)時,同時發(fā)射出光子(hM),利用發(fā)光信號測量儀器測量光量子產(chǎn)額。免疫反應(yīng)系統(tǒng)是將發(fā)光物質(zhì)(在反應(yīng)劑激發(fā)下生成激發(fā)態(tài)中間體)直接標(biāo)記在抗原(化學(xué)發(fā)光免疫分析)或抗體(免疫化學(xué)發(fā)光分析)上,或酶作用于發(fā)光底物進樣系統(tǒng)反應(yīng)池PMT放大器記錄儀負高壓

檢測系統(tǒng)化學(xué)發(fā)光分析法儀器方框圖PMT:光電倍增管

52醫(yī)學(xué)課件化學(xué)發(fā)光免疫分析化學(xué)發(fā)光免疫分析包含兩個部分,即免疫反應(yīng)系

電化學(xué)發(fā)光技術(shù)用先進的電化學(xué)發(fā)光技術(shù)(ECL),是一種在電極表面由電化學(xué)引發(fā)的特異性化學(xué)發(fā)光反應(yīng),實際上包括了電化學(xué)和化學(xué)發(fā)光兩個過程,由電啟動發(fā)光反應(yīng),因此可對反應(yīng)進行精確控制,其采用[Ru(bpy)3]2+作為標(biāo)記物,結(jié)合了標(biāo)記物的生物分子與配體發(fā)生特異的結(jié)合反應(yīng)后進入流動測量室,此時,電發(fā)光過程被啟動?；具^程如下:含三丙胺(TPA)的緩沖液進入測量室,同時電極加電,化學(xué)發(fā)光劑…

53醫(yī)學(xué)課件電化學(xué)發(fā)光技術(shù)基因芯片技術(shù)基因芯片（GeneChip）通常指DNA芯片，其基本原理是將指大量寡核苷酸分子固定于支持物上，然后與標(biāo)記的樣品進行雜交，通過檢測雜交信號的強弱進而判斷樣品中靶分子的數(shù)量54醫(yī)學(xué)課件基因芯片技術(shù)基因芯片（GeneChip）通常指DNA芯片，

蛋白芯片技術(shù)蛋白芯片是將大量蛋白質(zhì)分子按預(yù)先設(shè)置的排列固定于一種載體表面行成微陣列，根據(jù)蛋白質(zhì)分子間特異性結(jié)合的原理，構(gòu)建微流體生物化學(xué)分析系統(tǒng)，以實現(xiàn)對生物分子的準(zhǔn)確、快速、大信息量的檢測55醫(yī)學(xué)課件蛋白芯片技術(shù)55醫(yī)學(xué)課件6050403020100腫瘤患者%7.07.04.27.07.4臨界值(ng/ml)5033282722在實體腫瘤患者中,CEA特異性為95%時的敏感性參考值范圍：＜3ng/ml在實體腫瘤患者中CEA表達狀況56醫(yī)學(xué)課件60腫瘤患者7.07.010080604020(%)959127142293900＜1515~100100~10001000~10,00010,000~100,000原發(fā)性肝細胞癌肝轉(zhuǎn)移癌AFP(ng/ml)

原發(fā)性肝細胞癌和其他惡性腫瘤肝轉(zhuǎn)移癌中AFP表達狀況參考值范圍：＜15ng/ml巨型快多結(jié)節(jié)型介入57醫(yī)學(xué)課件100(%)959127142293900＜15原發(fā)性肝細胞癌和肝轉(zhuǎn)移癌AFP和CEA的表達100908070605040302010095992507213(%)AFP＞15ng/mlCEA＞3ng/mlCEA＞10ng/ml原發(fā)性肝細胞癌肝轉(zhuǎn)移癌參考值范圍：＜3ng/ml參考值范圍：＜15ng/ml58醫(yī)學(xué)課件原發(fā)性肝細胞癌和肝轉(zhuǎn)移癌AFP和CEA的表達10095992肺癌中腫瘤標(biāo)志物的應(yīng)用CYFRA21-1CEANSE治療前治療后復(fù)查組織類型不明確腺癌鱗狀細胞癌小細胞肺癌大細胞肺癌59醫(yī)學(xué)課件肺癌中腫瘤標(biāo)志物的應(yīng)用CYFRA21-1CEANSE治療前治胃癌單項或聯(lián)合測定CEA、CA19-9及CA72-4的敏感性806040200敏感性（%