羥苯磺酸鈣治療腎功能不全患者的穩(wěn)態(tài)血藥濃度檢測

羥苯磺酸鈣治療腎功能不全患者的穩(wěn)態(tài)血藥濃度檢測

氨基磺酸鈣常用于改善微循環(huán)和抗血郁閉合物，包括一些腎功能不全的患者。這部分患者使用羥苯磺酸鈣后肌氨酸氧化酶法血清肌酐大幅降低,導致患者認為該藥物有明顯的改善腎功能作用本研究借鑒血清羥苯磺酸鈣高效液相色譜法(HPLC)測定的文獻11.1病例選擇選擇標準選擇于2016年5～10月間黃石市第二醫(yī)院收治服用羥苯磺酸鈣劑量為1.5g/d(Tid)的患者30例。其中,腎功能不全組:20例慢性腎臟病患者(符合K/DOQI指南診斷標準),男性13例,女性7例,年齡56.6(37～68)歲,入選標準:有腎功能不全(血清酶法肌酐高于120μmol/L)。非腎功能不全組:本院收治非腎功能不全患者10例,男性7例,女性3例,年齡54.3(32～71)歲,入選標準:無腎功能不全(血清酶法肌酐低于90μmol/L)。兩組排除標準均為:有明顯心、肺及肝功能障礙者,發(fā)熱及血液白細胞計數(shù)高于參考范圍者,未按規(guī)定劑量服藥者。兩組均采集患者羥苯磺酸鈣服藥5天后清晨空腹靜脈血,分離血清-40℃保存待測。本研究征得患者知情同意,藥物的使用僅依據(jù)病情的需要。1.2藥品與試劑儀器:島津LC-20AT高效液相色譜儀,八方世紀BF-2000氮氣吹干儀,上海精科雷磁PXSI-226離子計,sigma3K15離心機,海門市其林貝爾儀器制造有限公司QL-901渦旋振蕩器;美國ABBOTT公司ARCHITECTC8000全自動生化分析儀,日本富士膠片株式會社FUJIFILMDRI-CHEM4000ie干式生化分析儀。藥品與試劑:口服羥苯磺酸鈣為西安利君制藥公司產(chǎn)品(0.5g/粒);羥苯磺酸鈣對照品(含量94.8%,批號:100573-201503)購自中國食品藥品檢定研究院;對氨基苯甲酸對照品(含量99.8%,批號:100017-201210)購自中國食品藥品檢定研究院;磷酸(分析純)購自武漢市中天化工有限責任公司;磷酸二氫鉀(分析純)、四丁基氫氧化銨水溶液(10%,分析純)均購自國藥集團化學試劑有限公司;乙腈(高效液相色譜純)購自山東禹王實業(yè)有限公司化工分公司;水為二次去離子水;肌氨酸氧化酶法肌酐試劑購自浙江東甌診斷產(chǎn)品有限公司;半胱氨酸蛋白酶抑制劑C(CystatinC)試劑購自寧波瑞源生物科技有限公司;脫亞胺酶法肌酐試劑購自日本富士膠片株式會社;質(zhì)控品購自英國RANDOX公司;空白血清為未服藥物且排除心、肝、腎等常見疾病的健康體檢者混合血清。1.3方法1.3.1ods-sp柱色譜柱:InertsilODS-SP柱(5μm,4.6*250mm,日本GLSciences公司),保護柱ODS-SP柱(5μm,4.0*10mm,日本GLSciences公司);流動相:0.05mol/LpH3.0磷酸二氫鉀緩沖液-乙腈(85∶15,v/v),流動相中含0.1mg/dl四丁基氫氧化銨1.3.2標準儲存液的配制稱取羥苯磺酸鈣對照品200mg(相當于羥苯磺酸鈣189.6mg),用100ml容量瓶加去離子水至刻度溶解成標準儲存液。用去離子水稀釋標準儲存液配成濃度為19.0,37.9,94.8,189.6,474.0,948.0和1896.0mg/L的標準系列儲存液;內(nèi)標為對氨基苯甲酸,用去離子水配成50mg/L濃度的內(nèi)標儲存液。上述儲存液4℃避光冷藏備用。1.3.3乙腈沉淀蛋白檢測吸取0.25ml空白血清(患者血清)于2.5ml具塞尖底塑料離心管中,加入標準系列儲存液(去離子水)25μl,加入內(nèi)標儲存液(50mg/L)25μl,混勻后加入1ml乙腈沉淀蛋白,旋渦振蕩1min,4000r/min離心10min,取上清液0.65ml于試管中,氮氣吹干后加250μl流動相溶解,混勻后取20μl進樣分析。1.3.4萃取樣品法取94.8,474.0,1896.0mg/L標準系列儲存液,按“標準系列(檢測樣品)處理”法處理進樣分析,每種濃度平行做6份,得到萃取后峰面積。另取上述標準系列儲存液,除用去離子水替換空白血清外,其它按“標準系列(檢測樣品)處理”法處理,每種濃度平行做2份,取峰面積均值作為對照計算羥苯磺酸鈣及內(nèi)標萃取回收率。1.3.5標準系列濃度與檢出限取標準系列儲存液按“標準系列(檢測樣品)處理”法分別處理并進樣檢測,每種濃度重復測定2次取均值,標準系列濃度分別為1.90,3.79,9.48,18.96,47.40,94.80和189.60mg/L?？瞻籽逯貜蜋z測10次,以空白血清1.3.6加標回收率、精密度和加標回收率取空白血清標本,以9∶1比例分別加入189.6,948.0,1896.0mg/L標準儲存液(對照加去離子水)配制3份濃度為18.96,94.80,189.60mg/L的加標測試樣品和1份對照樣品,每份樣品按“標準系列(檢測樣品)處理”法分別處理并進樣檢測,每天每種樣品檢測2次,連續(xù)5天,計算加標回收率、日內(nèi)及日間精密度。1.3.7血清檢查按“標準系列(檢測樣品)處理”法檢測穩(wěn)態(tài)血藥濃度,并同期檢測其CystatinC,肌氨酸氧化酶法肌酐和脫亞胺酶法肌酐。1.4統(tǒng)計分析采用LCsolution色譜工作站對高效液相色譜數(shù)據(jù)分析處理。估算法GFR(eGFR)參照吳炯等2萃取回收率及標準系列濃度在1.3.1色譜條件下,空白血清、空白血清加內(nèi)標、空白血清加內(nèi)標和標準液及1名患者血清色譜圖見圖1。羥苯磺酸鈣、對氨基苯磺酸內(nèi)標保留時間分別為:6.9和8.0min。色譜圖表明,血清內(nèi)源性物質(zhì)不干擾羥苯磺酸鈣測定。9.48,47.40,189.60mg/L的羥苯磺酸鈣萃取回收率分別為:75.6%±1.22%,75.7%±1.48%,75.1%±1.29%;內(nèi)標對氨基苯甲酸萃取回收率分別為:94.4%±1.14%,94.6%±1.32%,94.5%±1.38%;羥苯磺酸鈣及內(nèi)標對氨基苯磺酸平均萃取回收率分別為:75.5%和94.5%。標準系列濃度為1.90,3.79,9.48,18.96,47.40,94.80和189.60mg/L,以羥苯磺酸鈣與內(nèi)標氨基苯磺酸峰面積比為橫坐標(平均加標回收率為98.9%(95.6%～103.6%);18.96,94.80和189.60mg/L三種濃度測試樣品日內(nèi)見表1。腎功能不全組和非腎功能不全組穩(wěn)態(tài)血清羥苯磺酸鈣濃度、eGFR檢測結果比較,差異均有統(tǒng)計學意義(均腎功能不全組穩(wěn)態(tài)血清羥苯磺酸鈣濃度與eGFR相關性顯著(3腎功能不全患者egfr劑量用藥分析羥苯磺酸鈣化學名2,5二羥苯磺酸鈣,常用藥物及對照品(標準品)為一水合物,分子式為(C由于服藥患者肌酐檢測受到干擾,且基于CystatinC計算的eGFR較簡化MDRD評估方程文獻報道鑒于腎功能不全患者常規(guī)劑量服用羥苯磺酸鈣后出現(xiàn)與eGFR