【一例新城疫的診斷與治療6000字（論文）】

一例新城疫的診斷與治療目錄TOC\o"1-3"\h\u10309摘要 19887文獻綜述 370461.新城疫概述 3204432.新城疫病毒的結構 3239863.新城疫的流行病學 4183914.新城疫的臨床癥狀 520956一例新城疫的診斷與治療 641351發(fā)病情況調(diào)查與臨床癥狀 6243552檢查方法 6142762.1整體診斷 6295912.2解剖診斷 6275592.3細菌檢查 6191483.結果 6147403.1初步診斷 6250923.2解剖診斷 7322653.3細菌檢查 7202053.4病毒的分離 7324083.5病毒RT-PCR驗證 753754.診斷與治療 9318124.1治療 9140694.2治療效果 996245.討論與小結 9279025.1做好環(huán)境消毒 9201055.2加強飼養(yǎng)管理 10280645.3免疫接種 1017514參考文獻 11一例新城疫的診斷與治療摘要：目前，中國進入經(jīng)濟飛速發(fā)展的時代，畜牧業(yè)也進入了飛速發(fā)展的時代，畜牧業(yè)向著集約化、規(guī)?；同F(xiàn)代化的方向發(fā)展，人們對畜牧產(chǎn)品的數(shù)量和質(zhì)量的需求都發(fā)生了非常大的變化。在當前規(guī)?；⒓s化、規(guī)范化的畜牧生產(chǎn)中，在飼料禁抗、替抗的國際大背景下，用新的方法提高畜禽免疫力、促進生產(chǎn)性能的提高至關重要。NDV（Newcastlediseasevirus，新城疫病毒）新城疫病毒是日常生活中的一種常見病毒，其對家禽、野鳥等有著較高的感染性，被認為是危害中國乃至全世界養(yǎng)禽業(yè)最重要的流行病毒之一。某肉雞養(yǎng)殖場突然出現(xiàn)雛雞精神不佳、產(chǎn)蛋量下降等癥狀，通過診斷發(fā)現(xiàn)是爆發(fā)新城疫。本文就針對新城疫的診斷與治療進行探究，通過對一起新城疫的診斷與治療分析探究，以期對于新城疫的診斷與治療提供參考，減少新城疫的發(fā)生，并且降低養(yǎng)殖戶或養(yǎng)殖企業(yè)的經(jīng)濟損失。關鍵詞：新城疫；雞；養(yǎng)殖業(yè)文獻綜述1.新城疫概述新城疫（Newcastledisease）是禽類的一種急性、敗血性和高度接觸性傳染病[1]，由新城疫病毒（Newcastlediseasevirus,NDV）引起，是世界公認的禽類傳染病之一[2-3]，為單股負鏈RNA病毒，其基因組結構3'-leader-NP-P-M-F-HN-L-trailer-5'[4-5]。其中融合蛋白是構成NDV小的表面纖突，使病毒與宿主細胞膜融合，介導病毒進入細胞，與病毒的毒力相關；凝集素神經(jīng)氨酸酶蛋白具有血凝素和神經(jīng)氨酸酶活性，能與腫瘤表面的唾液酸受體結合，介導病毒吸附細胞膜；大聚合酶蛋白具有RNA依賴的RNA聚合酶活性[5,8-10]。NDV基因組長度約為15kb,分子量約為51-57kDa，直徑約為100-250nm，因囊膜破損而病毒粒子形態(tài)不規(guī)則[11-12]。病毒粒子核心由螺旋卷曲對稱的核衣殼組成，直徑為17nm，外面有雙層脂質(zhì)囊膜，表面覆蓋8nm長的纖突。2.新城疫病毒的結構NDV的基因組編碼多種蛋白質(zhì)，這些蛋白在其復制、傳播、感染、致病等方面起著決定性作用[13]。先來說說6種結構蛋白。NDV的包膜含有兩種跨膜糖蛋白，HN蛋白參與宿主細胞受體的附著和病毒的釋放，F(xiàn)蛋白則介導病毒與宿主細胞膜融合，并在NDV毒株的毒力中起主要作用，HN蛋白則輔助F蛋白的功能[14-15]。F蛋白由無活性的前體蛋白F0被蛋白水解切割活化成兩個二硫鍵連接的亞基F1和F2生成[16]。F蛋白切割位點處的氨基酸序列決定了不同類型細胞蛋白酶的底物特異性。F蛋白裂解位點序列已被證明是NDV毒力的主要決定因素[17]。同樣，F(xiàn)蛋白也是NDV疫苗研究中的主要抗原，由F蛋白引發(fā)的抗體可以保護雞免受致命的NDV攻擊[18]。NDV基因組RNA與NP、P和L蛋白一起形成RNP復合物，作為病毒基因組轉(zhuǎn)錄和復制的活性模板，在病毒的復制和傳播過程中起著重要作用[19]。其中，NP蛋白作為病毒顆粒中存在最豐富的蛋白質(zhì)，它與基因組RNA形成核-衣殼核心，P和L蛋白則依附其中，形成人字形構造，以此來形成RNP復合物[20]。P蛋白則主要用于穩(wěn)定P-L復合物中的L蛋白，然后作為病毒RNA依賴性RNA聚合酶起作用。L蛋白作為NDV基因組中最大的蛋白質(zhì)，有助于基因組RNA復制，并且對新形成的mRNA進行5'加帽，甲基化和polyA聚合酶活性[21]。再來簡單看一下幾種非結構蛋白。M蛋白作為一種基質(zhì)蛋白，主要參與控制病毒RNA合成，其次它與肌動蛋白相互作用，有助于在宿主細胞膜上組裝病毒[22]。V和W蛋白是附屬的，僅存在于病毒感染的細胞中。V蛋白是干擾素拮抗劑，可以決定NDV的毒力大小[23]。3.新城疫的流行病學雞新城疫一年四季均可發(fā)生，尤其以春秋季節(jié)以及寒冷和氣候多變的時節(jié)發(fā)病率更高。各種日齡和免疫水平的家禽均可感染，以20~60日齡的雞最為易感，兩年以上的老齡雞不易感[24]。該病主要危害患病雞的呼吸系統(tǒng)、消化系統(tǒng)和神經(jīng)系統(tǒng)，發(fā)病特點為高熱，腹瀉，呼吸困難，黏膜和漿膜出血、壞死，神經(jīng)系統(tǒng)功能紊亂。發(fā)病雞是主要傳染源，病毒可以經(jīng)過呼吸道、消化道、眼結膜、泄殖腔黏膜和皮膚傷口侵入機體。由于其發(fā)病急、傳染性強、傳播速度快和致死率高等特點，是危害禽類養(yǎng)殖業(yè)的重大流行性疾病。新城疫最早發(fā)現(xiàn)于1926年，在印尼的爪哇島和英國的濱海小鎮(zhèn)新城，由于基本同時在兩不同地點發(fā)現(xiàn)該病，不符合首次發(fā)病的流行病學規(guī)律，故新城疫的起源仍存在爭議[25]。但自1926年起，在世界范圍內(nèi)，有三次大規(guī)模的流行爆發(fā)是公認的：第一次是在1926年時，自東南亞地區(qū)起爆發(fā)了大規(guī)模的疾病,新城疫經(jīng)過亞洲緩慢地傳播到了歐洲,歷經(jīng)三十年逐漸傳播到世界各地；第二次大流行爆發(fā)于上世紀60年代末，自中東地區(qū)開始爆發(fā)以來，至1973年就已傳播至許多國家,給世界禽類養(yǎng)殖業(yè)帶來了不可估量的損失和沉重的打擊[26]。上世紀七十年代末，又爆發(fā)了一次大流行，仍起源于中東地區(qū)，由中東地區(qū)傳播至歐洲后迅速遍布全世界各地，發(fā)病禽類主要表現(xiàn)為神經(jīng)系統(tǒng)癥狀。自第三次大流行結束之后，自上世紀90年代開始,新城疫時常在局部地區(qū)出現(xiàn)流行與發(fā)病，但在世界范圍內(nèi)，未再造成大流行爆發(fā)。且在局部流行時，均發(fā)病于免疫雞群中,致死率不高,但會嚴重降低禽類的生產(chǎn)性能，從而引起嚴重的經(jīng)濟損失[27]。雞作為NDV的主要感染者，被感染后可以誘發(fā)自身多種疾病。4.新城疫的臨床癥狀NDV感染后潛伏期為2.15天，平均為5.6天。人工授精感染的潛伏期為2-5天。感染后，雞的臨床癥狀和死亡率主要取決于感染強度、途徑、劑量、易感動物品系、耐藥性和免疫狀態(tài)是否存在其他致病因素，如生長的外部環(huán)境條件和營養(yǎng)管理水平。感染雞的主要臨床癥狀為呼吸困難、呼吸困難和腹瀉。此外，排泄物呈綠色，食欲不振，產(chǎn)蛋量會顯著減少，蛋殼和雞蛋異常[28]。一些感染雞在長期患病后會出現(xiàn)頭頸偏斜、單側或背部畸形、星狀神經(jīng)麻痹等癥狀。一例新城疫的診斷與治療1發(fā)病情況調(diào)查與臨床癥狀2019年3月在某養(yǎng)殖場進行實踐調(diào)研，該養(yǎng)殖場采用密閉式雞舍飼養(yǎng)，一日發(fā)現(xiàn)肉雞在20日齡時開始發(fā)病，出現(xiàn)幾只病雞迅速死亡。期間與技術人員進行了病雞的診斷與處理，現(xiàn)將一例報告如下。病雞表現(xiàn)的癥狀是食欲下降、張口呼吸、拉黃綠色糞便、部分出現(xiàn)神經(jīng)癥狀,有部分病雞未表現(xiàn)明顯癥.狀但迅速死亡。病雞的體溫升高。2檢查方法2.1整體診斷根據(jù)病雞的行為狀態(tài)、排泄情況、以及呼吸情況做出初步診斷。2.2解剖診斷解剖可見病雞氣管和嗉囊中有粘液,腸道粘膜出血2.3細菌檢查取病雞的肝臟組織，對菌落進行涂片，嚴格無菌操作，將樣本接種于普通營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基上，37℃培養(yǎng)24h，觀察培養(yǎng)物生長情況和菌落形態(tài)特征，并進行記錄。對菌落進行涂片，革蘭氏染色后鏡檢，根據(jù)培養(yǎng)物鏡檢結果，選擇特征性菌落接種伊紅-美藍瓊脂培養(yǎng)基和普通瓊脂、麥康凱瓊脂平板培養(yǎng)基，置恒溫箱72h重新培養(yǎng)，用于細菌鑒定。血凝抑制試驗:NDV衣殼表面具有血凝素，從而能使雞血紅細胞發(fā)生凝集現(xiàn)象。因此，利用此反應現(xiàn)象可以進行NDV的定性和半定量檢測。從雞群中發(fā)病和未發(fā)病的雞中采血分離血清進行血凝抑制試驗(HI),主要檢測流感(H5,H9)和新城疫的效價。3.結果3.1初步診斷病雞出現(xiàn)腹瀉癥狀，精神不振、食欲下降，排出白色粥狀稀便，根據(jù)這些特點，可做出初步診斷為病菌感染。3.2解剖診斷病雞氣管和嗉囊中有大量，粘液病雞氣管有輕微的出血現(xiàn)象;腺胃乳頭有出血點、腸道粘膜出血嚴重、胰腺輕微出血、盲腸扁桃體腫大出血，其他部位沒有明顯的病變。3.3細菌檢查發(fā)現(xiàn)未發(fā)病雞新無菌采取肝臟組織進行涂片染色鏡檢,沒有發(fā)現(xiàn)細菌。城疫的HI抗體效價平均值為5lg2~6lg2,而病雞中的效價則高達9lg2~10lg2,禽流感效價為5lg2~6lg2。3.4病毒的分離（1）在血凝板中，從左向右每孔分別加入50μL的PBS緩沖液備用。（2）從4℃展示柜中取出冷藏時間≥4h的雞胚消毒后放入超凈臺中，用鑷子將上方氣室地蛋殼敲碎，沿著接種線將雞胚殼揭開，并露出雞胚氣室（切勿弄破內(nèi)卵殼膜以免漏出尿囊液），用100μL量程的移液槍戳破卵殼膜吸取50μL雞胚尿囊液（盡量避免吸入組織結構或者變性的蛋白等多余的雜質(zhì)成分），加入至血凝板最左邊第一個孔內(nèi)吹吸混勻，自左到右倍比稀釋至最后一個孔，棄去最后多余的50μL混合液，確保血凝板中每一個孔中都只有50μL的混合液。（3）每次都應分別設置一個病毒陽性對照組和一個PBS緩沖液陰性對照組，陽性對照病毒稀釋操作方法如上步驟，陰性對照組不需要加入病毒。（4）在血凝板中，從左向右每孔依次加入50μL的1%濃度的雞血紅細胞懸液，混勻，水平靜置20min，觀察雞血紅細胞凝集現(xiàn)象。（5）觀察結果：待陽性對照組中雞血紅細胞已發(fā)生沉淀后即可進行實驗結果觀察。將血凝板豎直，雞血紅細胞全部鋪于板底部呈薄膜狀，沉于孔底部時，為100%凝集，雞血紅細胞由于重力作用出現(xiàn)“流淚現(xiàn)象”，則為不凝集。以100%凝集的尿囊液最大稀釋度為該重組病毒的凝血效價，此為一個凝血單位。（6）收集HA試驗結果為陽性的雞胚尿囊液，于-80℃保存?zhèn)溆谩?.5病毒RT-PCR驗證（1）取高壓滅菌的1.5mLEP管，向其中加入200μL上述融化的尿囊液、350μL的BufferRLT（已1：100加入β-巰基乙醇）、550μL的70%的乙醇，移液槍吹打混勻。（2）將混合液移入RNeasy紅色離心柱中11000rpm離心15s，棄濾過液，直到將所有的混合液全部通過離心柱。（3）將700μL的BufferRW1加入離心柱中，11000rpm離心15s，棄濾過液。（4）將500μL的BufferRPE加入離心柱中，11000rpm離心15s，棄濾過液。（5）重復步驟（4）一次。（6）12000rpm空離2min。（7）將過濾柱移入新的無菌EP管中，向其中加入35μLRNasewater，室溫靜置2min，11000rpm離心1min。（8）將洗脫后的液體再次加入過濾柱中，室溫靜置2min，11000rpm離心1min。（9）使用TranscriptOne-stepRFPCRsupermix試劑盒在冰上進行操作，配置40μL的RT-PCR反應體系如表1所示。表1RT-PCR反應體系試劑體積La-PF0.8μLLa-PR0.8μLRNA模板(步驟8的洗脫液)18μL2×one-stepReactionmix20μLTransscript-Ⅱone-stepEnzymemix0.8μL（10）進行PCR，反應條件如表2所示。表2PCR驗證反應條件溫度時間循環(huán)數(shù)50°C22min94°C3min94°C30s55°C30s3072°C1-2kb/min72°C10min反應結束后用1%的瓊脂糖凝膠電泳對PCR產(chǎn)物進行鑒定。擴增出一條362bp的強毒株特異性目的片段,生理鹽水對照組則為陰性。4.診斷與治療4.1治療隔離患雞，用LaSota弱毒疫苗4倍劑量進行全群緊急免疫，并在白天溫度較高的時候多開門窗，加強雞舍的通風換氣。病雞飲食添加電解質(zhì)，連續(xù)飲用3d，對于腹瀉嚴重的病雞，注意補充水分，并使用5％的葡萄糖鹽水。用5％碳酸氫鈉，每次20mL；干擾素每次20mg，腹腔注射的防疫效果更好。在此基礎上，增加中藥治療，中藥服用白頭翁35克；加熱后，每天服用一次黃柏黃湯75克，每天一次，持續(xù)3-4天。或者，使用烏木20克；橙皮20克;黃連35克;甘草15g，研末，拌食。4.2治療效果采取上述措施后，疫情得到控制，病雞愈合情況良好，一周后再未發(fā)現(xiàn)雞只死亡。5.討論與小結本次針對一例新城疫的病雞進行診斷與防治，發(fā)現(xiàn)導致雞感染新城疫的原因有很多:新城疫毒株不斷的發(fā)生變異是一方面，免疫失敗即疫苗使用不當、免疫程序不科學、免疫操作失誤等都是造成新城疫發(fā)生的重要原因。因此,預防新城疫是養(yǎng)雞工作中的關鍵,主要是靠綜合性防控措施,消毒、免疫、檢測和飼養(yǎng)管理等環(huán)節(jié)缺一不可。因此，對雞新城疫的防治提出以下建議：5.1做好環(huán)境消毒為了避免雛雞的疫情傳播，在雛雞繁殖過程中應做好消毒工作。即合理設置產(chǎn)房，做好產(chǎn)房的消毒工作，及時清理產(chǎn)房，保證產(chǎn)房的清潔衛(wèi)生。建立并完善養(yǎng)雞場生物安全體系，以衛(wèi)生清掃及消毒為中心，將消毒衛(wèi)生工作貫穿于養(yǎng)雞場生產(chǎn)的各個環(huán)節(jié)。確保生物安全體系發(fā)揮應有的作用，最大限度地控制場內(nèi)外病原的擴散傳播。養(yǎng)殖戶還要建立嚴格的衛(wèi)生防疫制度，并認真監(jiān)督執(zhí)行。除按免疫程序做好雞群的免疫接種工作外，還要搞好雞舍與附近的環(huán)境清潔衛(wèi)生，例如在雞場的進出口配備消毒池，進出人員務必要進行消毒操作。養(yǎng)殖人員在進出雞舍應當換工作服與工作鞋，防止病原體進入雞舍，而這些服裝應當定時進行消毒，如此就能夠為防疫工作提供一定的保障。5.2加強飼養(yǎng)管理為避免因避免雞飼養(yǎng)管理不善引起新城疫的發(fā)生，必須加強飼養(yǎng)管理，增強抗病能力，預防疾病的發(fā)生。保證雞舍環(huán)境、食具、食物和飲水的清潔衛(wèi)生，并保持干燥和通風，雞舍要經(jīng)常打掃，定期消毒，飼養(yǎng)管理用具也定期消毒，消滅傳染源;及時清理糞便，做發(fā)酵處理，防止感染其他雞。健康雞要與患雞隔離飼養(yǎng);可以在滿足蛋白質(zhì)和能量的基礎上特別注意礦物質(zhì)和維生素的供給，提高機體的免疫力。一些常見的藥物以及維生素能夠增強土雜雞的免疫力，例如維生素A、維生素K以及鹽霉素等等，不僅能夠?qū)τ陔u的腸道進行保護還改善雞的生產(chǎn)性能，提高飼料的轉(zhuǎn)化率，減少新城疫的發(fā)生。5.3免疫接種接種疫苗對預防新城疫有重要作用。左旋咪哇作為一種有效的免疫調(diào)節(jié)劑，目前認為從以下三方面調(diào)節(jié)免疫應答首先左旋咪哇具備擬膽堿能樣活性，可作用于CAMP，促進其水解，而對CGMP的水解效果不佳，所以可促進淋巴細胞增殖；另有大量研究顯示，左旋咪哇還可以誘導個體低下的免疫功能恢復到正常水平，在腫瘤治療、慢性感染性疾病治愈、過敏性疾病及自身免疫系統(tǒng)異常病的治療產(chǎn)生良好的臨床效果[23]。因此可以對雞群做好免疫工作。參考文獻楊濤,李守剛,方桂明.一例蛋鴿新城疫診斷與治療[J].畜禽業(yè),2018,29(5):2.YoonSS,NakamuraH,CarrollNM,etal.Anoncolyticherpessimplexvirustype1selectivelydestroysdiffuselivermetastasesfromcoloncarcinoma[J].FasebJournal,2000,14(2):301-302.Cheow,Pheik-Sheen,etal.AnimprovedmethodfortherescueofrecombinantNewcastlediseasevirus[J].Biotechniques,2020,68:96-100.El-TholothM,BranavanM,NaveenathayalanA,etal.Recombinasepolymeraseamplification-nucleicacidlateralflowimmunoassaysforNewcastlediseasevirusandinfectiousbronchitisvirusdetection[J].MolBiolRep,2019,46:6391-6397.[5]魏星,楊靜,魏冬梅.一例土雞非典型新城疫的診斷與治療[J].吉林畜牧獸醫(yī),2020,41(5):1.[6]王永磊.一例非典型新城疫的診斷與防治[J].江西飼料,2019(4):3.[7]HwangSY,SunHY,LeeKH,etal.5'-Triphosphate-RNA-independentactivationofRIG-IviaRNAaptamerwithenhancedantiviralactivity[J].NucleicAcidsRes,2012,40:2724-2733.[8]HoqueMA,BurgessGW,Karo-KaroD,etal.MonitoringofwildbirdsforNewcastlediseasevirusinnorthQueensland,Australia[J].PrevVetMed,2012,103:49-62.[9]FerreiraHL,TaylorTL,AbsalonAE,etal.PresenceofNewcastlediseasevirusesofsub-genotypesVcandVIninbackyardchickensandinapparentlyhealthywildbirdsfromMexicoin2017[J].VirusGenes,2019,55:479-489.[10]EdrisS,AnandanP,ManoharanVK,etal.ARecombinantNewcastleDiseaseVirus(NDV)ExpressingSProteinofInfectiousBronchitisVirus(IBV)ProtectsChickensagainstIBVandNDV[J].ScientificReports,2018,8(1):11951-11964.[11]韓艷杰,付媛媛.一例鴨新城疫與傳染性漿膜炎混合感染的診斷與治療[J].獸醫(yī)導刊,2020(18):1.[12]尹俊,楊艷明.一例雞新城疫與球蟲病混合感染的診治[J].中國畜禽種業(yè),2020,16(1):1.[13]FournierP,WildenH,SchirrmacherV.Importanceofretinoicacid-induciblegeneIandofreceptorfortypeIinterferonforcellularresistancetoinfectionbyNewcastlediseasevirus[J].IntJOncol,2012,40:287-298.[14]HuZ,HuS,MengC,etal.GenerationofagenotypeVIINewcastlediseasevirusvaccinecandidatewithhighyieldinembryonatedchickeneggs[J].AvianDis,2011,55:391-397.[15]JiangK,SongC,KongL,etal.RecombinantoncolyticNewcastlediseasevirusdisplaysantitumoractivitiesinanaplasticthyroidcancercells[J].BMCCancer,2018,18:746.[16]劉英吉.一起非典型新城疫的診斷與防治[J].山東畜牧獸醫(yī),2019.[17]劉獻軍.一例青年蛋雞非典型新城疫與禽霍亂混合感染診治[J].畜牧獸醫(yī)科學：電子版,2020(4):2.[18]陳立華,白憲華.新城疫診斷與防治[J].畜禽業(yè),2019(3):2.[19]張日欣.一例莊河大骨雞滑液囊支原體與非典型新城疫混合感染的診治[J].現(xiàn)代畜牧獸醫(yī),2018,000(010):37-39.[20]LiuH,deAlmeidaRS,GilP,etal.CangenotypemismatchreallyaffectthelevelofprotectionconferredbyNewcast