月季花藥專業(yè)知識專家講座

月季花藥培養(yǎng)月季花藥專業(yè)知識專家講座第1頁1、被子植物定義：凡是種子有果皮包被著，胚珠有子房壁包被著植物，就叫做被子植物一、被子植物和裸子植物2、裸子植物定義：凡是胚珠裸露，外面沒有子房壁包被，種子外面沒有果皮包被植物稱為裸子植物實(shí)例：玉米、大豆、梨、杏實(shí)例：松、杉、柏月季花藥專業(yè)知識專家講座第2頁月季花藥專業(yè)知識專家講座第3頁月季花藥專業(yè)知識專家講座第4頁月季花藥專業(yè)知識專家講座第5頁3、花結(jié)構(gòu)月季花藥專業(yè)知識專家講座第6頁花結(jié)構(gòu)：花梗、花托、萼片、花瓣、雌蕊和雄蕊月季花藥專業(yè)知識專家講座第7頁4、花作用被子植物有性生殖是在花里進(jìn)行，雌蕊和雄蕊是進(jìn)行有性生殖主要部分二、被子植物花粉粒形成花絲花藥：囊狀結(jié)構(gòu)，內(nèi)有很多花粉粒1、雄蕊結(jié)構(gòu)雄蕊：月季花藥專業(yè)知識專家講座第8頁藥隔：花藥中部，由薄壁細(xì)胞組成，內(nèi)有維管束花藥花粉囊（4或2）囊壁花粉粒表皮纖維層2、花藥結(jié)構(gòu)月季花藥專業(yè)知識專家講座第9頁月季花藥專業(yè)知識專家講座第10頁3、花藥發(fā)育周緣細(xì)胞（初生壁細(xì)胞）外：體積較大藥室內(nèi)壁中：一層或幾層細(xì)胞內(nèi)：絨氈層分裂孢原細(xì)胞造孢細(xì)胞花粉母細(xì)胞（小孢子母細(xì)胞）有絲分裂絨氈層：為花粉粒發(fā)育提供營養(yǎng)，最終消失藥室內(nèi)壁：多量淀粉，發(fā)育成纖維層中層：早期分解，吸收，消失月季花藥專業(yè)知識專家講座第11頁花粉是小孢子母細(xì)胞經(jīng)過減數(shù)分裂而形成，所以，花粉是單倍體生殖細(xì)胞4、被子植物花粉發(fā)育②花粉粒形成花粉母細(xì)胞（小孢子母細(xì)胞）減數(shù)分裂①經(jīng)歷時(shí)期：四分體時(shí)期、單核期、雙核期月季花藥專業(yè)知識專家講座第12頁四分體時(shí)期（進(jìn)入單核期）有絲分裂單核靠邊期(小孢子)單核居中期(小孢子)小孢子（單核花粉粒）月季花藥專業(yè)知識專家講座第13頁精子精子有絲分裂花粉管細(xì)胞核生殖細(xì)胞核生殖細(xì)胞營養(yǎng)細(xì)胞雙核期兩個(gè)精子和一個(gè)營養(yǎng)核基因型相同月季花藥專業(yè)知識專家講座第14頁1花粉母細(xì)胞4個(gè)小孢子減分有分4個(gè)花粉管細(xì)胞核4個(gè)生殖細(xì)胞核有分8個(gè)精子月季花藥專業(yè)知識專家講座第15頁月季花藥專業(yè)知識專家講座第16頁③花粉粒類型一個(gè)成熟花粉粒即為雄配子體，有兩種情況：二核花粉粒:成熟花粉粒中，只含花粉管細(xì)胞核和生殖細(xì)胞核。（精子在花粉管中形成）三核花粉粒:有些植物花粉，在成熟前，生殖細(xì)胞進(jìn)行一次有絲分裂，形成兩個(gè)精子，這么花粉在成熟時(shí)，含有一個(gè)營養(yǎng)核和兩個(gè)精子。月季花藥專業(yè)知識專家講座第17頁三、被子植物胚囊形成1、雌蕊組成柱頭、花柱、子房2、子房結(jié)構(gòu)月季花藥專業(yè)知識專家講座第18頁被子植物子房結(jié)構(gòu)胚珠結(jié)構(gòu)花粉管精子卵細(xì)胞極核子房壁珠被珠孔月季花藥專業(yè)知識專家講座第19頁胚珠外層是珠被，里面是胚囊。胚囊是由胚珠內(nèi)胚囊母細(xì)胞（大孢子母細(xì)胞）發(fā)育而成。胚囊母細(xì)胞經(jīng)過減數(shù)分裂，產(chǎn)生四個(gè)細(xì)胞，稱為大孢子，每個(gè)大孢子內(nèi)染色體數(shù)目都比胚囊母細(xì)胞降低二分之一。這4個(gè)細(xì)胞排成一行，其中靠近珠孔3個(gè)細(xì)胞退化，最里面發(fā)育為胚囊細(xì)胞，胚囊細(xì)胞核連續(xù)進(jìn)行三次有絲分裂，不過每次核分裂后，并不接著進(jìn)行細(xì)胞質(zhì)分裂，就形成了8個(gè)細(xì)胞核胚囊。開始，這8個(gè)細(xì)胞核分別位于胚囊兩端，每端4個(gè)，接著，每端各有1個(gè)細(xì)胞核移到胚囊中央，這就是極核，所以再胚囊中8個(gè)核中遺傳物質(zhì)是一樣。3、卵細(xì)胞形成月季花藥專業(yè)知識專家講座第20頁以后靠近珠孔端3個(gè)細(xì)胞核發(fā)育成3個(gè)細(xì)胞，其中最大一個(gè)是卵細(xì)胞，其余是2個(gè)助細(xì)胞，另一端3個(gè)細(xì)胞核也發(fā)育成3個(gè)細(xì)胞，成為反足細(xì)胞月季花藥專業(yè)知識專家講座第21頁月季花藥專業(yè)知識專家講座第22頁花粉落到雌蕊柱頭上以后，在柱頭上黏液刺激下，花粉開始萌發(fā)并形成花粉管，花粉管沿著花柱向胚珠方向生長，抵達(dá)胚珠后從珠孔繞過卵細(xì)胞進(jìn)入胚囊，抵達(dá)胚囊中卵細(xì)胞和極核之間，這時(shí)花粉管前端破裂，兩個(gè)精子釋放出來，其中一個(gè)精子與兩個(gè)極核結(jié)合形成受精極核，另一個(gè)精子與卵細(xì)胞結(jié)合形成受精卵，這是被子植物特有雙受精現(xiàn)象4、受精過程月季花藥專業(yè)知識專家講座第23頁月季花藥專業(yè)知識專家講座第24頁月季花藥專業(yè)知識專家講座第25頁花雄蕊雌蕊花藥花粉粒精子精子子房胚珠胚囊子房壁珠被卵細(xì)胞兩個(gè)極核受精卵受精極核胚胚乳種皮種子果皮果實(shí)有絲分裂有絲分裂1n1n2n1n3n2n2n2n2n胚是一個(gè)新個(gè)體幼體5、發(fā)育結(jié)果月季花藥專業(yè)知識專家講座第26頁月季花藥專業(yè)知識專家講座第27頁四、產(chǎn)生花粉植株兩條路徑五、影響花藥培養(yǎng)原因1、材料選擇接種花藥時(shí)期月季花藥專業(yè)知識專家講座第28頁不一樣植物誘導(dǎo)成功率很不相同，就同一個(gè)植物來說親本生理情況對誘導(dǎo)成功率也有直接影響②選擇適當(dāng)花粉發(fā)育時(shí)期是提升誘導(dǎo)成功率主要原因因?yàn)椴⒉皇侨魏螘r(shí)期花粉都能夠經(jīng)過培養(yǎng)產(chǎn)生愈傷組織或胚狀體，花粉發(fā)育過程中，只有某一個(gè)時(shí)期對離體刺激敏感。選材是否成功是花藥培養(yǎng)成功關(guān)鍵①選材月季花藥專業(yè)知識專家講座第29頁普通來說，在單核期，細(xì)胞核由中央移向細(xì)胞一側(cè)時(shí)期，花藥培養(yǎng)成功率最高。即：最適合花藥培養(yǎng)小孢子發(fā)育時(shí)期為單核靠邊期選擇單核期以前花藥接種，質(zhì)地幼嫩，極易破碎；選擇單核期之后花藥接種，花瓣已經(jīng)有些松動(dòng)，又給材料消毒帶來困難，且難以挑選到單核期花藥。③花藥培養(yǎng)時(shí)期選擇④其它時(shí)期選擇缺點(diǎn)月季花藥專業(yè)知識專家講座第30頁⑦花藥培養(yǎng)時(shí)間為了挑選到單核期花藥，通常選擇完全未開放花蕾。盛開或略微開放花，都不宜選作試驗(yàn)材料。⑥選擇完全未開放花蕾原因完全未開放花蕾，可挑選到單核期花藥，菌少、易消毒⑤單核期花藥挑選普通月季花藥培養(yǎng)時(shí)間選在五月初到五月中旬，即月季初花期。初花期花蕾營養(yǎng)狀態(tài)及生理狀態(tài)會(huì)比很好，可能提升花粉誘導(dǎo)成功率月季花藥專業(yè)知識專家講座第31頁月季花藥培養(yǎng)時(shí)花粉粒最好是（）A、四分體時(shí)期B、單核居中期C、單核靠邊期D、二核或三核花粉粒C2、培養(yǎng)基：花藥培養(yǎng)基所采取培養(yǎng)基可能因植物不一樣而有所改變小麥中為N6，馬鈴薯、月季中為MS，油菜中為B5培養(yǎng)基月季花藥專業(yè)知識專家講座第32頁3、其它原因親本植株生長條件、材料低溫預(yù)處理以及接種密度等對誘導(dǎo)成功都有一定影響六、試驗(yàn)操作（一）材料選?、谝恍┲参锘ǚ奂?xì)胞核不易著色，需采取焙花青-鉻礬法，這種方法能將花粉細(xì)胞核染成藍(lán)黑色。①最慣用方法有醋酸洋紅法1、方法月季花藥專業(yè)知識專家講座第33頁①醋酸洋紅法染色機(jī)理醋酸洋紅為堿性染色劑，而花粉細(xì)胞內(nèi)有染色體，染色體主要成份是DNA和蛋白質(zhì),易被堿性染料著色染成紅色

。將體積分?jǐn)?shù)45％醋酸100ml煮沸，緩緩加入1g洋紅，在加熱回流8h，冷卻至50℃，過濾即可。②醋酸洋紅配置2、醋酸洋紅法月季花藥專業(yè)知識專家講座第34頁月季花藥專業(yè)知識專家講座第35頁將花藥放在載玻片上，加一滴質(zhì)量分?jǐn)?shù)1％醋酸洋紅，用鑷柄將花藥搗碎，蓋上蓋玻片在顯微鏡下檢驗(yàn)。③染色操作3、焙花青—鉻釩法將無水酒精與冰醋酸按體積比為3：1百分比混勻①卡諾氏固定液配制方法月季花藥專業(yè)知識專家講座第36頁花藥應(yīng)該在卡諾氏固定液中固定20min，然后取出放在載玻片上，加焙花青—鉻釩溶液染色，蓋上蓋玻片后在顯微鏡下檢驗(yàn)。將5g鉻明礬[K2SO4Cr2(SO4)·24H2O]加入90ml蒸餾水中，溶解后加入0.1g焙花青，混勻并加熱至沸騰，煮沸5分鐘后冷卻至室溫，過濾，加蒸餾水定容至100ml。②焙花青—鉻釩溶液配制方法③染色操作月季花藥專業(yè)知識專家講座第37頁（二）材料消毒1、酒精處理①花蕾用體積分?jǐn)?shù)為70%酒精浸泡30秒，馬上取出。②無菌水清洗③無菌吸水紙吸干花蕾表面水分月季花藥專業(yè)知識專家講座第38頁2、消毒液處理（三）接種和培養(yǎng)①放入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.1%氯化汞溶液中2~4分鐘（也可質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1%次氯酸鈣溶液或飽和漂白粉溶液）②無菌水沖洗3~5次用于培養(yǎng)花藥，實(shí)際上多數(shù)未熟，因?yàn)樗饷嬗谢ㄝ?、花瓣或穎片保護(hù)，通常處于無菌狀態(tài)，所以只要將整個(gè)花蕾或幼穗消毒即可。月季花藥專業(yè)知識專家講座第39頁在無菌條件下除去萼片和花瓣用鑷子取出花藥②要徹底去除花絲，因?yàn)榕c花絲相連花藥不利于愈傷組織或胚狀體形成馬上將花藥接種于培養(yǎng)基上，通常每瓶接種花藥7-10個(gè)。1、剝?nèi)』ㄋ帰傥饟p傷花藥，以免誘導(dǎo)出非花粉愈傷組織2、接種注意：月季花藥專業(yè)知識專家講座第40頁①培養(yǎng)條件：溫度控制在25℃左右，不需要光照。幼小植株形成后才需要光照。

3、培養(yǎng)②培養(yǎng)：普通經(jīng)過20-30天培養(yǎng)后，會(huì)發(fā)覺花藥開裂，長出愈傷組織或釋放出胚狀體長出愈傷組織則將愈傷組織及時(shí)轉(zhuǎn)移到分化培養(yǎng)基上，方便深入分化出再生植株③注意：假如花藥開裂釋放出胚狀體，則一個(gè)花藥內(nèi)就會(huì)產(chǎn)生大量幼小植株，必須在花藥開裂后盡快將幼小植株分開，分別移植到新培養(yǎng)基上，不然這些植株將極難分開。月季花藥專業(yè)知識專家講座第41頁在花藥培養(yǎng)中，尤其是經(jīng)過愈傷組織形成花粉植株，經(jīng)常會(huì)出現(xiàn)染色體倍性改變（主要原因是營養(yǎng)核和生殖核融合造成）