流式細(xì)胞術(shù)在白血病中的應(yīng)用

流式細(xì)胞術(shù)在白血病/淋巴瘤分型和監(jiān)測中應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)在白血病中的應(yīng)用第1頁1世界衛(wèi)生組織血液腫瘤分類方案（1999年）“新分類方案基本標(biāo)準(zhǔn)是：結(jié)合形態(tài)學(xué)、免疫表型、遺傳改變和臨床特征來判定疾病‘真實’本質(zhì)”?！斑@為世界各國腫瘤學(xué)家和病理學(xué)家提供了一個全新與令人興奮合作交流新篇章，必將極大促進(jìn)人們對血液腫瘤治療與認(rèn)識?！保绹R床腫瘤協(xié)會，臨床腫瘤雜志17卷3835-3849頁，1999年）更主要是提供了疾病分類與治療選擇和預(yù)后判斷較明確關(guān)聯(lián)性，開啟了血液腫瘤靶向性治療和個性化方案新時代。流式細(xì)胞術(shù)在白血病中的應(yīng)用第2頁2白血病分子診療意義系統(tǒng)診療白血病初發(fā)異常標(biāo)識準(zhǔn)確診療準(zhǔn)確預(yù)后指導(dǎo)治療科研資料殘留監(jiān)測靶向治療免疫/遺傳學(xué)靶標(biāo)MICM診療流式細(xì)胞術(shù)在白血病中的應(yīng)用第3頁3WHO血液腫瘤新分類試驗技術(shù)平臺實施WHO血液腫瘤新分類方案高度依賴流式細(xì)胞、細(xì)胞遺傳和分子生物學(xué)試驗技術(shù)平臺以及掌握這類試驗技能并含有專業(yè)知識人員。流式細(xì)胞術(shù)在白血病中的應(yīng)用第4頁4流式細(xì)胞術(shù)在白血病中的應(yīng)用第5頁5InvestigativeToolsforMMdiagnosisandManagement(ASHEducationProgramBookp298)

PatientEvaluation

診療

單克隆蛋白數(shù)量和特征

血清蛋白電泳和免疫球蛋白定量 24小時尿蛋白；總蛋白；本周蛋白

尿和血清免疫固定

血清自由輕鏈和百分比

骨髓檢驗和骨髓活檢Bonemarrowaspirationandbiopsy

組化

免疫分型-克隆檢定，及經(jīng)過CD38/CD56/CD19/CD45抗體組合能從90余例患者正常漿細(xì)胞中找到檢測殘留MM細(xì)胞

終末器官損害評價

全血細(xì)胞計數(shù)；生化檢驗:血清肌酐和骨鈣測定

預(yù)后評定

球蛋白，betta-2微球蛋白,LDH,CRP

骨髓細(xì)胞遺傳學(xué)和FISHt(4;14),t(14;16),del17p

針對一些特定患者特殊研究

流式細(xì)胞術(shù)在白血病中的應(yīng)用第6頁6傳統(tǒng)流式細(xì)胞術(shù)臨床應(yīng)用細(xì)胞計數(shù)：CD4、CD34DNA含量：多倍數(shù)、S期結(jié)果是數(shù)據(jù)、準(zhǔn)確性依賴于良好質(zhì)控傳統(tǒng)流式細(xì)胞術(shù)在白血病免疫表型中應(yīng)用單參“白血病表型”，陽性比率大多數(shù)細(xì)胞為腫瘤細(xì)胞多為形態(tài)學(xué)/細(xì)胞化學(xué)后確實認(rèn)數(shù)據(jù)由臨床醫(yī)師判斷高分辨流式細(xì)胞優(yōu)點以多參數(shù)正?？乖硎緸榛A(chǔ)結(jié)果類似病理匯報用于原發(fā)性診療與判別診療用于疾病分期，治療選擇療效監(jiān)測，預(yù)后判斷流式細(xì)胞術(shù)流式細(xì)胞術(shù)在白血病中的應(yīng)用第7頁7骨髓-異質(zhì)性系統(tǒng)中應(yīng)用多系列Lymphocyte(T,B,NK)MonocyteNeutrophilEosinophilBasophilErythrocyte骨髓中各系列細(xì)胞處于連續(xù)性成熟階段必須能涵蓋全部細(xì)胞流式細(xì)胞術(shù)在白血病中的應(yīng)用第8頁8應(yīng)該使用何種抗體？全部抗體必須為標(biāo)準(zhǔn)商業(yè)化試劑沒有什么“秘密武器”或者專門特異抗體抗體聯(lián)合應(yīng)用能使你從有限標(biāo)本中得到最大化信息量對正?？乖硎菊_認(rèn)識能幫助你有效地判別疾病狀態(tài)相關(guān)改變流式細(xì)胞術(shù)在白血病中的應(yīng)用第9頁9高分辨流式細(xì)胞術(shù)能夠鑒別和分類所有骨髓細(xì)胞可以對每一個細(xì)胞進(jìn)行多特征性檢測并對其相應(yīng)系列和成熟階段進(jìn)行分類至少檢測一萬個細(xì)胞，分辨率達(dá)到0.5%流式細(xì)胞術(shù)在白血病中的應(yīng)用第10頁10流式細(xì)胞術(shù)在白血病中的應(yīng)用第11頁11CD45/SSWood()MethodsCellBiology75:559-576流式細(xì)胞術(shù)在白血病中的應(yīng)用第12頁12正常粒系成熟模式流式細(xì)胞術(shù)在白血病中的應(yīng)用第13頁正常B系成熟Wood()MethodsCellBiology75:559-576流式細(xì)胞術(shù)在白血病中的應(yīng)用第14頁14表示交叉系列抗原非同時抗原共表示：CD34與CD15、CD11b、CD56、CD14抗原過分表示：早前B-ALL中CD10抗原表示缺失：泛T抗原易位抗原表示：CSF中TdT+淋巴細(xì)胞，骨髓中胸腺發(fā)育階段T淋巴細(xì)胞光散射異常：FSC和SSC白血病相關(guān)免疫表型特點流式細(xì)胞術(shù)在白血病中的應(yīng)用第15頁15AML-M0流式細(xì)胞術(shù)在白血病中的應(yīng)用第16頁16AML-M2流式細(xì)胞術(shù)在白血病中的應(yīng)用第17頁17AML-M3流式細(xì)胞術(shù)在白血病中的應(yīng)用第18頁18AML-M4流式細(xì)胞術(shù)在白血病中的應(yīng)用第19頁19AML-M5流式細(xì)胞術(shù)在白血病中的應(yīng)用第20頁20B-ALL流式細(xì)胞術(shù)在白血病中的應(yīng)用第21頁21Burkitt淋巴瘤/白血病

成熟B-ALL流式細(xì)胞術(shù)在白血病中的應(yīng)用第22頁22MALT+GMALT+B流式細(xì)胞術(shù)在白血病中的應(yīng)用第23頁23AUL流式細(xì)胞術(shù)在白血病中的應(yīng)用第24頁24B-CLL/SLL流式細(xì)胞術(shù)在白血病中的應(yīng)用第25頁25HCL流式細(xì)胞術(shù)在白血病中的應(yīng)用第26頁26大B細(xì)胞淋巴瘤流式細(xì)胞術(shù)在白血病中的應(yīng)用第27頁27MM流式細(xì)胞術(shù)在白血病中的應(yīng)用第28頁28T-ALL流式細(xì)胞術(shù)在白血病中的應(yīng)用第29頁29NK-LGL流式細(xì)胞術(shù)在白血病中的應(yīng)用第30頁30匯報包含出現(xiàn)或缺乏異常細(xì)胞群異常免疫表型相比正常細(xì)胞群抗原強度增強，減弱，缺失定量層面判斷相對于全部CD45陽性細(xì)胞(WBCs)出現(xiàn)其它細(xì)胞群流式細(xì)胞術(shù)在白血病中的應(yīng)用第31頁31流式細(xì)胞術(shù)在白血病中的應(yīng)用第32頁32TCRVβ克隆流式細(xì)胞術(shù)在白血病中的應(yīng)用第33頁33小結(jié)流式細(xì)胞術(shù)有利于血液系統(tǒng)異常疾病診療愈加確定診療排除其它疾病有利于細(xì)分亞型更準(zhǔn)確原始細(xì)胞區(qū)分和定量有利于預(yù)后判斷治療后監(jiān)測快速流式細(xì)胞術(shù)在白血病中的應(yīng)用第34頁34免疫表型分析與FAB分型基于不一樣參數(shù)對白血病進(jìn)行分型，二者結(jié)果可一致或不一致；對有些病例，尤其是髓系白血病亞型，免疫表型分析并非特異；對于復(fù)雜病例，需結(jié)合各種檢驗，如特異性染色體核型分析或融合基因綜合判斷。流式細(xì)胞術(shù)在白血病中的應(yīng)用第35頁35MRD背景當(dāng)前因為各種化療藥聯(lián)合應(yīng)用，使多數(shù)白血病患者能夠取得形態(tài)學(xué)完全緩解（CR）。但多數(shù)患者不能維持長久緩解，仍有相當(dāng)多患者再次復(fù)發(fā)。復(fù)發(fā)主要原因是患者體內(nèi)存在少許形態(tài)學(xué)難以識別殘余白血病細(xì)胞。假如能夠準(zhǔn)確檢測患者體內(nèi)殘余白血病狀態(tài)，能夠有放矢地進(jìn)行治療，使患者防止許多無須要痛苦。流式細(xì)胞術(shù)在白血病中的應(yīng)用第36頁36MRDOutlineofLeukemicDiagnosisMorphology:1-5%,Cytogenetics:1-5%,Flowcytometry:0.1-0.01%,RT-PCR:0.01-0.001%CRPrimaryleukemiaOSChemotherapiesAutoSCTAlloSCTInductionLeukemiccells1012 1010109108107≤106100% 1% 0.1%0.010.001 流式細(xì)胞術(shù)在白血病中的應(yīng)用第37頁37流式細(xì)胞術(shù)在白血病中的應(yīng)用第38頁38MolecularMeasurementsofTreatmentResponse—ClinicalApplication(ASHEducationProgramBookp367)

Application Action

檢測治療早期反應(yīng)佳 加強治療檢測治療早期反應(yīng)差

無需加強治療

檢測復(fù)發(fā) 加強治療，準(zhǔn)備HSCT

HSCT前MRD評定 優(yōu)化HSCT時間HSCT后MRD評定 調(diào)整免疫抑制治療時間，等

臨床試驗結(jié)束時MRD評定 評價新抗ALL藥品或治療結(jié)果

流式細(xì)胞術(shù)在白血病中的應(yīng)用第39頁39MRD與預(yù)后當(dāng)殘余白血病細(xì)胞>10-2，3年復(fù)發(fā)率為76-94%10-3<殘余白血病細(xì)胞<10-2,3年復(fù)發(fā)率為37-53%殘余白血病細(xì)胞<10-3,3年復(fù)發(fā)率為8-20%殘余白血病細(xì)胞<10-4,3年無復(fù)發(fā)流式細(xì)胞術(shù)在白血病中的應(yīng)用第40頁40各種MRD檢測方法檢測殘余白血病細(xì)胞主要依據(jù)是在患者發(fā)病時找到患者特殊表現(xiàn)，包含遺傳學(xué)、分子生物學(xué)以及免疫學(xué)特征。這些特征往往是正常血細(xì)胞所沒有，所以可利用這些標(biāo)志判別正常細(xì)胞與異常細(xì)胞，特異地檢測殘余白血病細(xì)胞。評價這些方法有效性及應(yīng)用性主要依據(jù)該方法特異性、敏感性、簡單性、重復(fù)性和速度。FCM免疫表型、FCMDNA倍體、PCR、FISH是很好方法。流式細(xì)胞術(shù)在白血病中的應(yīng)用第41頁41MRD流式分析標(biāo)準(zhǔn)違反正常分化模式診療時區(qū)分出背離正常發(fā)育階段免疫表型相對特異抗原組合隨訪區(qū)分出不一樣于正常免疫表型不連續(xù)群體以診療免疫表型作為出發(fā)點流式細(xì)胞術(shù)在白血病中的應(yīng)用第42頁42免疫表型異常適合MRD檢測ALL>95%兒童ALL>90-95%成人ALLAML85%兒童AML80-95%成人AML流式細(xì)胞術(shù)在白血病中的應(yīng)用第43頁43匯報模板流式細(xì)胞術(shù)在白血病中的應(yīng)用第44頁44病例一AML病例資料：女，3歲，.6初發(fā)FCM印象：在CD45/SSC點圖上設(shè)門分析，原始細(xì)胞分布區(qū)域可見異常細(xì)胞群體，約占有核細(xì)胞26%，主要表示HLA-DR、CD13、CD15、CD33、CD34、CD38、CD117，（CD19+2.27%）。淋巴細(xì)胞百分比降低。提醒：急性髓系細(xì)胞白血病（AML-M2可能）?；颍篈ML1/ETO陽性。流式細(xì)胞術(shù)在白血病中的應(yīng)用第45頁45病例一（續(xù)1）.7化療D33：FCM：可見殘留，CD33+CD19+細(xì)胞約占0.04%?；颍篈ML1/ETO陽性。流式細(xì)胞術(shù)在白血病中的應(yīng)用第46頁46.9D70：FCM：未做?；颍篈ML1/ETO陰性。.3D245：FCM：未見免疫表型顯著異常細(xì)胞?；颍篈ML1/ETO陰性。病例一（續(xù)2）流式細(xì)胞術(shù)在白血病中的應(yīng)用第47頁47病例二B-ALL病例資料：男，3歲，.3初發(fā)FCM印象：在CD45/SSC點圖上設(shè)門分析，CD45弱表示分布區(qū)域可見異常細(xì)胞群體，約占有核細(xì)胞45%，表示HLA-DR、CD10、CD19、CD22、CD34、CD38、Gly-A、cCD79a、TdT。提醒：急性B淋巴細(xì)胞白血?。ㄆ胀ㄐ虰-ALL）?；颍築CR/ABL陰性。流式細(xì)胞術(shù)在白血病中的應(yīng)用第48頁48.11化療第20個月：FCM：未見顯著表型異常殘留白血病細(xì)胞。（未附圖）基因：未做。.09化療第30個月：FCM：可見殘留，在CD45dim/-區(qū)域可見約1.87%CD10+CD19+CD20-細(xì)胞和約1.55%HLA-DR+CD19+CD34+細(xì)胞，考慮為殘留白血病細(xì)胞。（見右圖）基因：未做。病例二（續(xù)1）流式細(xì)胞術(shù)在白血病中的應(yīng)用第49頁49病例二（續(xù)2）.03化療+DC-CIK第36個月：FCM印象：在CD45/SSC點圖上設(shè)門分析，CD45陰性略向原始延伸分