生化實驗2總糖的水解、提取和測量

南京大學醫(yī)學系實驗報告題目：酵母RNA的提取姓名：彭睿學號：L 日期：2019年3月29日（一） 實驗?zāi)康模赫莆障A法提取酵母RNA的原理和方法。（二） 實驗材料：市售酵母粉、冰醋酸、無水乙醚、95%乙醇溶液、氫氧化鈉溶液（%）（三） 實驗原理：電子天平、水浴鍋、冷凍離心機、離心管、玻璃棒、抽濾瓶、砂芯漏斗、燒杯、量筒、廣泛pH試紙（四） 實驗原理：各種單糖和麥芽糖是還原糖，蔗糖和淀粉是非還原糖。利用溶解度不同，可將植物樣品中的單糖、雙糖和多糖分別提取出來，再用酸水解法使沒有還原性的雙糖和多糖徹底水解成有還原性的單糖。在堿性條件下，還原糖將3,5-二硝基水楊酸還原為3-氨基-5-硝基水楊酸（棕紅色物質(zhì)），還原糖則被氧化成糖酸及其它產(chǎn)物，在一定范圍內(nèi)，還原糖的量與棕紅色物質(zhì)深淺的程度呈一定的比例關(guān)系，在540nm波長下測定棕紅色物質(zhì)的消光值，查對標準曲線并計算，便可分別求出樣品中還原糖和總糖的含量。此外，多糖水解時，在單糖殘基上加了一分子水，因而在計算中須扣除已加入的水量，測定所得的總糖量乘以即為實際的總糖量。（五） 實驗步驟：樣品中總糖的水解、提?。悍Q取g山芋粉，加蒸餾水約3ml，在研缽中磨成勻漿，轉(zhuǎn)入錐形瓶，并用約12ml蒸餾水沖洗，轉(zhuǎn)入錐形瓶中。加入鹽酸溶液（6mol/L）約10ml，用沸水浴水解。取1-2滴用碘-碘化鉀溶液檢測是否已水解完全，如不顯藍色，則冷卻到室溫用氫氧化鈉溶液中和至中性，全部轉(zhuǎn)移至100ml容量瓶中。用蒸餾水定容至100ml，過濾，取濾液15ml，再定容至100ml。如果取出1ml總糖水解液，則含量稀釋667倍。葡萄糖標準曲線的制作與樣品總糖的測定：此時取9只干凈的試管，如表所示進行操作。管號試劑012345678標準葡萄糖溶液/ml00.20.40.60.81待測總糖水解液/ml110.5蒸餾水/ml10.80.60.40.20000.5DNS試劑/ml222222222沸水浴中準確煮沸5min，取出，用自來水冷卻到室溫。蒸餾水/ml999999999葡萄糖含量/mg00.20.40.60.81

表1：標準曲線的制作其中，0號管為比色時的參照，1-5號管用于制作葡萄糖標準曲線，6-8號管

用于總糖水解液的測量。（六） 實驗數(shù)據(jù)：--.管號試劑0--.管號試劑012345678標準葡萄糖溶液/ml00.20.40.60.81待測總糖水解液/ml110.5蒸餾水/ml10.80.60.40.20000.5DNS試劑/ml222222222沸水浴中準確煮沸5min，取出，用自來水冷卻到室溫。蒸餾水/ml999999999葡萄糖含量/mg00.20.40.60.81 540nm00.0830.1940.3070.4650.5960.2840.2830.12表2：540nm處實驗數(shù)據(jù)系實驗報告圖1：數(shù)據(jù)原表葡萄糖標準曲線圖2：擬合曲線根據(jù)計算，6、7號管的葡萄糖含量為，8號管為。根據(jù)…I. ?，計算得本次山芋粉的總糖含量為％。（七）實驗結(jié)果與討論：在實際操作的時候，部分組獲得的6-8號管顯色太淺。本組調(diào)整了稀釋倍數(shù)進行測量，在初次定容后取了15ml水解液，并獲得了良好的結(jié)果。為什么顯色時，要準確煮沸五分鐘：因為反應(yīng)程度不同可能影響顯色深淺，所以所有試管的加熱時間要保持相同。關(guān)于移液槍的使用，要注意容量在最大量程時是最準的，不同的移液槍，因為損耗原因，可能精度不同，對于槍頭液體的量和自己想要量取