SDS-PAGE分離膠-濃縮膠配方

SDS分離膠-濃縮膠配方

-1、-:聚丙烯酰***凝膠電泳2、:丙烯酰***;配膠時用30%質量比:=29:13、:甲叉雙丙烯酰***4、:超輕水5、:十二烷基硫酸磺酸鈉,陰離子去污劑配膠時用10%6、:過硫酸銨424配膠時用10%7、:四***乙二***,促凝劑8、-:3羥基氨基甲烷鹽酸緩沖液,配膠時分別膠=,濃縮膠=9、:二硫蘇糖醇,也經(jīng)常被用于蛋白質中二硫鍵的還原,可用于阻擋蛋白質中的半胱氨酸之間所形成的蛋白質分子內或分子間二硫鍵。

10、:碘乙酰***,碘代乙酰***用于有機合成,在蛋白組學中組氨酸和半胱氨酸的烷基化試劑,用于多肽測序以及酶抑制劑等,蛋白組學級試劑。

22,是和碘乙酸一樣,可通過下列反應不行逆地抑制酶類的物質。

5酣2030祝4506%%-,^%過謙酸霰501015**%%^15-￡.^194,-5^■￡**%2$=￡--3751001^5^**%*甌1123344-6376.9%-%^依據(jù)目的蛋白的分子量大小選擇合適的凝膠濃度,再根據(jù)下面的表格配制-的分別膠即下層膠:時爭尸。

山加血血-^1勺鈾12^*4*嚀嗎叩叩1廳□『5::—、蛋白質相內分子重范圉:1^104話用的凝膠總濃度:2肥宀3謝二、蛋白質相對分子里范圉:岡『71臚適用的凝膠總濃度:1弭宀2宓三、蛋白質相對分子里范圍;加適用的凝臉總濃度:1吩一巧聰四蛋白質相對分子重范圉:1和滬予材適用的凝臉總濃度;刖卄10%五、蛋白質相對分子重范圉:^10^適用的凝膠總濃度:2^3%-分別膠濃度最佳分別范圍6%膠50-1508%膠30-9010%膠20-8012%膠12-6015%膠10-40成安排制不同體積-分別膠所需各成分的體積毫升6%%-29:,%%-分別膠所需各成分的體積毫升8%%-29:1,%%-分別膠所需各成分的體積毫升10%%-29:1,%%-分別膠所需各成分的體積毫升12%%-29:1,%%-分別膠所需各成分的體積毫升15%%-29:1,%%:假如配制非變性膠,參考上述配方,不加10%即可配制成非變性膠。

1根據(jù)如下表格配制-的濃縮膠也稱積累膠、積層膠或上層膠:成安排制不同體積-濃縮膠所需各成分的體積毫升5%%-29:1,%%:1抗體去除液每50抗體去除液中含:%10-!*陰機瞬膠硝戰(zhàn)纖堆索濾膜0峯扎性捲片3企:按■3濾紙陽極爭孔性華片-電泳的基本原理:-聚丙烯酰***凝膠電泳,是在聚丙烯酰***凝膠系統(tǒng)中引進十二烷基硫酸鈉,會與變性的多肽,并使蛋白帶負電荷,由于多肽結合的量幾乎總是與多肽的分子量成正比而與其序列無關,因此多肽復合物在丙稀酰***凝膠電泳中的遷移率只與多肽的大小有關,在達到飽和的狀態(tài)下,。

當分子量在15到200之間時,蛋白質的遷移率和分子量的對數(shù)呈線性關系,符合下式:=-,式中:為分子量,為遷移率,、均為常數(shù),若將已知分子量的標準蛋白質的遷移率對分子量對數(shù)作圖,可獲得一條標準曲線,未知蛋白質在相同條件下進行電泳,依據(jù)它的電泳遷移率即可在標準曲線上求得分子量。

聚丙烯酰***的作用:丙烯酰***與為蛋白質電泳供應載體,其凝固的好壞直接關系到電泳勝利與否,與促凝劑及環(huán)境親密相關;制膠緩沖液:,,選擇—系統(tǒng),詳細作用后面介紹;與:促凝作用,加速聚丙烯酰***的凝固;中含有29的丙烯酰***和1的甲叉基聚丙烯酰***,能產(chǎn)生自由氧基,使丙烯酰