免疫組化-基本原理

免疫組織化學(xué)技術(shù)抗原＋抗體（特異性）＋標(biāo)記物，原位顯示組織或細胞內(nèi)抗原的一門技術(shù)。根據(jù)抗體標(biāo)記物不同：酶---免疫酶組織化學(xué)熒光素---免疫熒光組化膠體金---免疫膠體金組化高親和力物質(zhì)---親和免疫組化其中，免疫酶組織化學(xué)應(yīng)用廣泛以其為例，掌握免疫組化基本原理免疫酶組化特點：信號定位準(zhǔn)確標(biāo)本可長期保存陽性標(biāo)記與病變關(guān)系方法簡便，易推廣酶選擇標(biāo)準(zhǔn)：★該酶用細胞化學(xué)易于被檢出，能被光鏡或電鏡觀察?！锩阜磻?yīng)產(chǎn)物須穩(wěn)定，不擴散，具有良好定位。

★酶易于純化，獲得純制品?！锩概c免疫球蛋白結(jié)合后，不喪失其活性?！锩冈赑H中性液內(nèi)較穩(wěn)定?！锝M織中不應(yīng)存在與底物作用的內(nèi)源性酶。符合上述條件：

辣根過氧化物酶---HRP

鹼性磷酸酶---AKP

葡萄糖氧化酶---GOD（一）辣根過氧化物酶（HRP）★分子量（40000），不會遮蓋抗原的結(jié)合部位★穩(wěn)定，易獲得較高純度酶★具有較高活性及特異性★可溶性佳，生成的產(chǎn)物不擴散★組織中內(nèi)源性酶較少★可作用于多種底物，產(chǎn)生不同顏色★HRP穿透力強，易進入細胞內(nèi)HRP的底物：低濃度的H2O2，供氫體為胺類及酚類化合物。HRP顯色反應(yīng)：

HRP＋H2O2HRP＋H2O＋電子供體（氧化型）電子供體電子供體被氧化后，迅速改變顏色，通過聚合等反應(yīng)，生成不溶性有色顆粒，并就地原位沉淀。HRP常用的電子供體：●3.3-二氨基聯(lián)苯胺(DAB)～棕色●氨乙基卡巴唑(AEC)～紅色，易溶于有機溶劑，易擴散，用水溶性封固劑。●4-氯-1-茶酚（4CN）～藍色，易彌散，不能久保存●3.3，5.5-四甲基聯(lián)苯胺(TMB)～黃色

（二）鹼性磷酸酶（AKP）

從小牛腸粘膜或大腸桿菌中提取●組織穿透能力較弱●內(nèi)源性AKP較高●左旋咪唑具有抑制作用AKP底物：AKP常用的底物為α-萘酚AS-B1磷酸鹽

偶聯(lián)試劑：固蘭BB～藍色固紅TR～紅色

（三）葡萄糖氧化酶（GOD）

底物為葡萄糖，終產(chǎn)物穩(wěn)定●體內(nèi)無內(nèi)源性GOD●分子量大，穿透力較弱

第一節(jié)基本原理

酶標(biāo)記抗體法（EnzaymeLabelledantibody）是將酶通過共價鍵結(jié)合在抗體分子上，制備成酶標(biāo)記抗體，通過抗體去尋找相應(yīng)抗原。一、酶標(biāo)記抗體法組織抗原第一抗體過氧化物酶直接法（一）直接法原理：HRP標(biāo)記在特異性抗體（第一抗體）上，抗原---抗體●HRP復(fù)合物步驟：一步完成優(yōu)點：簡便、省時特異性強，非特異染色輕缺點：敏感性差一種標(biāo)記抗體只能檢測一種抗原組織抗原第一抗原第二抗體過氧化物酶間接法（二）間接法原理：HRP標(biāo)記在第二抗體上，抗原---特異性抗體---第二抗體●HRP復(fù)合物優(yōu)點：較直接法敏感性高

一種標(biāo)記抗體能用于相應(yīng)動物制備的多種特異性抗體，檢測多種抗原缺點：

較直接法費時非特異性染色稍重

步驟：二步法●制備抗酶抗體●制備PAP復(fù)合物酶橋法組織抗原第一抗體第二抗體第三抗體（抗酶抗體）HRP二、酶橋法原理：HRP標(biāo)記在抗酶抗體（三抗）上，抗原---特異性抗體---第二抗體---第三抗體●HRP復(fù)合物一抗、三抗有何關(guān)系？優(yōu)點：與酶標(biāo)記抗體法相比，敏感性高（酶與三抗通過抗原-抗體反應(yīng)結(jié)合，避免直接標(biāo)記引起兩者活性降低）缺點：

較費時

步驟：四步法一、PAP法原理：抗原---特異性抗體---第二抗體（橋抗體）---PAP復(fù)合物組織抗原第一抗原第二抗體PAP復(fù)合物HRP三、PAP法（過氧化物酶抗過氧化物酶復(fù)合物法）原理：與酶橋法相似，不同之處是將酶與三抗制備成PAP復(fù)合物。抗原---特異性抗體---第二抗體（橋抗）---PAP復(fù)合物優(yōu)點：敏感性較高背景染色較輕局限：特異性抗體與PAP必須為同一種屬動物

步驟：三步法APAAP法（堿性磷酸酶抗堿性磷酸酶復(fù)合物法）原理：抗原---特異抗體---二抗---APAAP復(fù)合物優(yōu)點：非特異背景較輕，不受內(nèi)源性酶的干擾

缺點：產(chǎn)物易溶于有機溶劑步驟：三步法組織抗原第一抗原第二抗體PAP復(fù)合物HRP四、雙PAP法原理：在PAP的基礎(chǔ)上再重復(fù)第二抗體和PAP復(fù)合物抗原---特異性抗體---二抗（橋抗）---PAP---二抗---PAP復(fù)合物步驟：五步法

優(yōu)點：敏感性較高缺點：步驟多，費時

非特異性背景重Avidin---一種鹼性糖蛋白，由四個相同亞基組成Biotin---小分子維生素Avidin和Biotin具有較高親和力，比普通抗原抗體親和力高百萬倍以上五、親和免疫組化組織抗原第一抗體第二抗體HRP生物素親和素原理：酶標(biāo)記Biotin形成酶素化Biotin（一）ABC法(Avidin-Biotin–peroxidase-Complexmethod)酶素化Biotin＋Avidin---ABC復(fù)合物抗原---特異抗體---Biotin標(biāo)記二抗---Avidin●Biotin●HRP步驟：三步法優(yōu)點：敏感性較高特異性強應(yīng)用范圍廣缺點：某些臟器存在內(nèi)源性生物素干擾

Avidin與糖基、纖維組織、核酸及細胞膜中磷脂有非特異反應(yīng)

（二）SABC法（StreptavidinbiotinPeroxidaseComplex）

比較親和素，鏈霉親和素造成的背景著色淺SABC法已代替ABC法

（三）LSAB法（LabelledStreptavidinBiotinMethod）---又稱鏈霉親和素-過氧化物酶法（SP法）原理：

●Biotin標(biāo)記第二抗體●HRP標(biāo)記Avidin抗原---特異性抗體---Biotin標(biāo)記第二抗體---Avidin●HRP復(fù)合物步驟：三步法優(yōu)點：敏感性高特異性強，背景淺淡方法簡便

六、多聚合物酶法組織抗原一抗HRP多聚骨架（一）Epos法（Enhancedpolymerone-stepstaining）原理：采用一種具有惰性的多聚化合物作為骨架，將特異性抗體和HRP，同時標(biāo)記在多聚合物分子上，形成HRP---多聚合物---特異性抗體。步驟：一步法優(yōu)點：快速，簡便，特異性強，敏感性高缺點：商品化種類不全，

價格昂貴組織抗原一抗二抗酶多聚骨架第一步第二步（二）EnVision法（EnhancedLabelledPolymerSystem）原理：HRP---多聚合物---第二抗體步驟：二步法優(yōu)點：敏感性高（1mole復(fù)合物中含70moleHRP和10mole第二抗體）

特異性強（復(fù)合物內(nèi)無內(nèi)源性Avidin和Biotin的干擾）

第一節(jié)活塞式空壓機的工作原理第二節(jié)活塞式空壓機的結(jié)構(gòu)和自動控制第三節(jié)活塞式空壓機的管理復(fù)習(xí)思考題單擊此處輸入你的副標(biāo)題，文字是您思想的提煉，為了最終演示發(fā)布的良好效果，請盡量言簡意賅的闡述觀點。第六章活塞式空氣壓縮機

piston-aircompressor壓縮空氣在船舶上的應(yīng)用：

1.主機的啟動、換向；

2.輔機的啟動；

3.為氣動裝置提供氣源；

4.為氣動工具提供氣源；

5.吹洗零部件和濾器。

排氣量:單位時間內(nèi)所排送的相當(dāng)?shù)谝患壩鼩鉅顟B(tài)的空氣體積。單位：m3/s、m3/min、m3/h第六章活塞式空氣壓縮機

piston-aircompressor空壓機分類：按排氣壓力分：低壓0.2～1.0MPa；中壓1～10MPa；高壓10～100MPa。按排氣量分：微型<1m3/min；小型1～10m3/min；中型10～100m3/min；大型>100m3/min。第六章活塞式空氣壓縮機

piston-aircompressor第一節(jié)活塞式空壓機的工作原理容積式壓縮機按結(jié)構(gòu)分為兩大類：往復(fù)式與旋轉(zhuǎn)式兩級活塞式壓縮機單級活塞壓縮機活塞式壓縮機膜片式壓縮機旋轉(zhuǎn)葉片式壓縮機最長的使用壽命-

----低轉(zhuǎn)速（1460RPM），動件少（軸承與滑片），潤滑油在機件間形成保護膜，防止磨損及泄漏，使空壓機能夠安靜有效運作；平時有按規(guī)定做例行保養(yǎng)的JAGUAR滑片式空壓機，至今使用十萬小時以上，依然完好如初，按十萬小時相當(dāng)于每日以十小時運作計算，可長達33年之久。因此，將滑片式空壓機比喻為一部終身機器實不為過?；?葉)片式空壓機可以365天連續(xù)運轉(zhuǎn)并保證60000小時以上安全運轉(zhuǎn)的空氣壓縮機1.進氣2.開始壓縮3.壓縮中4.排氣1.轉(zhuǎn)子及機殼間成為壓縮空間，當(dāng)轉(zhuǎn)子開始轉(zhuǎn)動時，空氣由機體進氣端進入。2.轉(zhuǎn)子轉(zhuǎn)動使被吸入的空氣轉(zhuǎn)至機殼與轉(zhuǎn)子間氣密范圍，同時停止進氣。3.轉(zhuǎn)子不斷轉(zhuǎn)動，氣密范圍變小，空氣被壓縮。4.被壓縮的空氣壓力升高達到額定的壓力后由排氣端排出進入油氣分離器內(nèi)。4.被壓縮的空氣壓力升高達到額定的壓力后由排氣端排出進入油氣分離器內(nèi)。1.進氣2.開始壓縮3.壓縮中4.排氣1.凸凹轉(zhuǎn)子及機殼間成為壓縮空間，當(dāng)轉(zhuǎn)子開始轉(zhuǎn)動時，空氣由機體進氣端進入。2.轉(zhuǎn)子轉(zhuǎn)動使被吸入的空氣轉(zhuǎn)至機殼與轉(zhuǎn)子間氣密范圍，同時停止進氣。3.轉(zhuǎn)子不斷轉(zhuǎn)動，氣密范圍變小，空氣被壓縮。螺桿式氣體壓縮機是世界上最先進、緊湊型、堅實、運行平穩(wěn)，噪音低，是值得信賴的氣體壓縮機。螺桿式壓縮機氣路系統(tǒng)：

A

進氣過濾器

B

空氣進氣閥

C

壓縮機主機

D

單向閥

E

空氣/油分離器

F

最小壓力閥

G

后冷卻器

H

帶自動疏水器的水分離器油路系統(tǒng)：

J

油箱

K

恒溫旁通閥

L

油冷卻器

M

油過濾器

N

回油閥

O

斷油閥冷凍系統(tǒng)：

P

冷凍壓縮機

Q

冷凝器

R

熱交換器

S

旁通系統(tǒng)

T

空氣出口過濾器螺桿式壓縮機渦旋式壓縮機

渦旋式壓縮機是20世紀(jì)90年代末期開發(fā)并問世的高科技壓縮機，由于結(jié)構(gòu)簡單、零件少、效率高、可靠性好，尤其是其低噪聲、長壽命等諸方面大大優(yōu)于其它型式的壓縮機，已經(jīng)得到壓縮機行業(yè)的關(guān)注和公認。被譽為“環(huán)保型壓縮機”。由于渦旋式壓縮機的獨特設(shè)計，使其成為當(dāng)今世界最節(jié)能壓縮機。渦旋式壓縮機主要運動件渦卷付，只有磨合沒有磨損，因而壽命更長，被譽為免維修壓縮機。

由于渦旋式壓縮機運行平穩(wěn)、振動小、工作環(huán)境安靜，又被譽為“超靜壓縮機”。

渦旋式壓縮機零部件少，只有四個運動部件,壓縮機工作腔由相運動渦卷付形成多個相互封閉的鐮形工作腔，當(dāng)動渦卷作平動運動時，使鐮形工作腔由大變小而達到壓縮和排出壓縮空氣的目的?；钊娇諝鈮嚎s機的外形第一節(jié)活塞式空壓機的工作原理一、理論工作循環(huán)（單級壓縮）工作循環(huán)：4—1—2—34—1吸氣過程

1—2壓縮過程

2—3排氣過程第一節(jié)活塞式空壓機的工作原理一、理論工作循環(huán)（單級壓縮）

壓縮分類：絕熱壓縮：1—2耗功最大等溫壓縮：1—2''耗功最小多變壓縮：1—2'耗功居中功＝P×V（PV圖上的面積）加強對氣缸的冷卻，省功、對氣缸潤滑有益。二、實際工作循環(huán)（單級壓縮）1.不存在假設(shè)條件2.與理論循環(huán)不同的原因：1）余隙容積Vc的影響Vc不利的影響—殘存的氣體在活塞回行時，發(fā)生膨脹，使實際吸氣行程（容積）減小。Vc有利的好處—

（1）形成氣墊，利于活塞回行；（2）避免“液擊”（空氣結(jié)露）；（3）避免活塞、連桿熱膨脹，松動發(fā)生相撞。第一節(jié)活塞式空壓機的工作原理表征Vc的參數(shù)—相對容積C、容積系數(shù)λv合適的C：低壓0.07-0.12

中壓0.09-0.14

高壓0.11-0.16

λv＝0.65—0.901）余隙容積Vc的影響C越大或壓力比越高，則λv越小。保證Vc正常的措施：余隙高度見表6-1壓鉛法—保證要求的氣缸墊厚度2.與理論循環(huán)不同的原因：二、實際工作循環(huán)（單級壓縮）第一節(jié)活塞式空壓機的工作原理2）進排氣閥及流道阻力的影響吸氣過程壓力損失使排氣量減少程度，用壓力系數(shù)λp表示：保證措施：合適的氣閥升程及彈簧彈力、管路圓滑暢通、濾器干凈。λp

（0.90-0.98）2.與理論循環(huán)不同的原因：二、實際工作循環(huán)（單級壓縮）第一節(jié)活塞式空壓機的工作原理3）吸氣預(yù)熱的影響由于壓縮過程中機件吸熱，所以在吸氣過程中，機件放熱使吸入的氣體溫度升高，使吸氣的比容減小，造成吸氣量下降。預(yù)熱損失用溫度系數(shù)λt來衡量（0.90-0.95）。保證措施：加強對氣缸、氣缸蓋的冷卻，防止水垢和油污的形成。2.與理論循環(huán)不同的原因：二、實際工作循環(huán)（單級壓縮）第一節(jié)活塞式空壓機的工作原理4）漏泄的影響內(nèi)漏：排氣閥（回漏）；外漏：吸氣閥、活塞環(huán)、氣缸墊。漏泄損失用氣密系數(shù)λl來衡量（0.90-0.98）。保證措施：氣閥的嚴密閉合，氣缸與活塞、氣缸與缸蓋等部件的嚴密配合。5）氣體流動慣性的影響當(dāng)吸氣管中的氣流慣性方向與活塞吸氣行程相反時，造成氣缸壓力較低，氣體比容增大，吸氣量下降。保證措施：合理的設(shè)計進氣管長度，不得隨意增減進氣管的長度，保證濾器的清潔。2.與理論循環(huán)不同的原因：二、實際工作循環(huán)（單級壓縮）第一節(jié)活塞式空壓機的工作原理上述五條原因使實際與理論循環(huán)不同。4）漏泄的影響5）氣體流動慣性的影響1）余隙容積Vc的影響2）進排氣閥及流道阻力的影響3）吸氣預(yù)熱的影響2.與理論循環(huán)不同的原因：二、實際工作循環(huán)（單級壓縮）第一節(jié)活塞式空壓機的工作原理3.排氣量和輸氣系數(shù)理論排氣量Vt----單位時間內(nèi)活塞所掃過的氣缸容積。實際排氣量Q：Q=Vt

λ輸氣系數(shù)λ

：λ＝λtλv

λ

pλl漏泄的影響余隙容積Vc的影響進排氣閥及流道阻力的影響吸氣預(yù)熱的影響二、實際工作循環(huán)（單級壓縮）第一節(jié)活塞式空壓機的工作原理指示功率pi

：按示功圖計算的功率理論功率Ps、PT：按理論循環(huán)